imWilms1 Zellen




















Allgemeine Informationen
Beschreibung | Die Wilms1-Zelllinie stammt ursprünglich von einem primären Wilms-Tumor, der bei einem Patienten mit großen beidseitigen Nierentumoren diagnostiziert wurde, einer charakteristischen Form des Wilms-Tumors (Nephroblastom). Diese Zelllinie weist eine homozygote Nonsense-Mutation im WT1-Gen auf (c.149 C>A, p.S50X), die zur Bildung eines verkürzten, nicht funktionsfähigen WT1-Proteins führt. WT1 ist ein entscheidendes Gen für die Nierenentwicklung, und seine Mutation steht in engem Zusammenhang mit der Pathogenese des Wilms-Tumors, insbesondere bei Tumoren, die eine stromale Differenzierung aufweisen. Wilms1-Zellen weisen einen stabilen Karyotyp ohne signifikante Chromosomenanomalien auf. Sie sind durch einen mesenchymalen Phänotyp gekennzeichnet, der Vimentin exprimiert, während epitheliale Marker wie Zytokeratin fehlen. Die Linie zeigt eine begrenzte, aber signifikante Fähigkeit zur mesenchymalen Differenzierung, einschließlich der Fähigkeit, sich unter bestimmten Bedingungen in muskelähnliche Zellen zu differenzieren, was sie zu einem wichtigen Modell für die Untersuchung der molekularen Folgen von WT1-Mutationen macht. Um die begrenzte Lebensdauer der primären Wilms1-Zellen zu überwinden, wurde die imWilms1-Zelllinie durch die Einführung eines dreifach mutierten SV40 large T-Antigens (U19dl89-97tsA58) in die ursprünglichen Tumorzellen etabliert, was ihre Immortalisierung erleichtert. Dank dieser Modifikation können sich imWilms1-Zellen unbegrenzt vermehren und gleichzeitig die Chromosomenstabilität beibehalten, so dass sie ein zuverlässiges Modell für Langzeitstudien darstellen. Die immortalisierten imWilms1-Zellen weisen weiterhin die gleiche WT1-Mutation auf und behalten die mesenchymalen Eigenschaften der Wilms1-Elternlinie. Zusätzlich zu ihren genetischen und phänotypischen Merkmalen wurde die imWilms1-Zelllinie umfassend auf ihre Signalwegaktivität untersucht. Proteomische Untersuchungen haben die Phosphorylierung und Aktivierung mehrerer Rezeptortyrosinkinasen (RTKs), einschließlich EGFR, PDGFRβ und AXL, mit nachgeschalteter Aktivierung der MAPK-Signalwege ergeben. Die konsequente Aktivierung dieser Signalwege in imWilms1-Zellen unterstreicht ihre Bedeutung für die Erforschung gezielter therapeutischer Strategien bei Wilms-Tumoren. Insgesamt dient imWilms1 als robustes und langfristiges Modell für die Untersuchung der molekularen Mechanismen, die der Entwicklung und dem Fortschreiten des Wilms-Tumors zugrunde liegen, insbesondere derjenigen, die durch WT1-Mutationen und abweichende Signalwege angetrieben werden. |
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Organismus | Menschen |
Gewebe | Niere |
Krankheit | Wilms-Tumor |
Synonyme | IM-WT-1 |
Merkmale
Alter | 10 Monate |
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Geschlecht | Weiblich |
Ethnizität | Kaukasisch |
Morphologie | Spindelförmig |
Zelltyp | Wilms-Zellen |
Wachstumseigenschaften | Adhärent |
Identifikatoren / Biologische Schutzstufe / Zitation
Zitat | imWilms1 (Cytion Katalognummer 300412) |
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Biosicherheitsstufe | 1 |
Hinterleger | B. Royer-Pokora |
Expression / Mutation
Mutationsprofil | WT1-Mutationsstatus: homozygot c. 149 C>A, p.S50x, LOH: 11p11-11pter, CTNNB1-Mutationsstatus: heterozygot TCT>TTT, p.S45F |
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Handhabung
Nährboden | MSCGM-Kit (von Lonza) |
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Passage-Lösung | Accutase |
Subkultivierung | Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten. |
Medienwechsel | 1 bis 2 Mal pro Woche |
Einfriermedium | Verwenden Sie als Kryokonservierungsmedium ein komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion-Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren. |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen |
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Qualitätskontrolle / Genetisches Profil / HLA
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
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STR profile |
Amelogenin: x,x
CSF1PO: 10,12
D13S317: 11,13
D16S539: 11,14
D5S818: 12,13,14
D7S820: 9,14
TH01: 9.3
TPOX: 8,9
vWA: 14,19
D3S1358: 14,17,18
D21S11: 30,31
D18S51: 15,18
Penta E: 5,14
Penta D: 13
D8S1179: 12,14
FGA: 22,25
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HLA-Allele |
A*: '03:01:01, '24:02:01
B*: '35:03:01, '38:01:01
C*: '12:03:01
DRB1*: '07:01:01, '14:54:01
DQA1*: '01:04:01, '02:01:01
DQB1*: '02:02:01, '05:03:01
DPB1*: '02:01:02G, '04:02:01G
E: '01:03:01, '01:03:02
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Erforderliche Produkte
- eine schonende Alternative zu Trypsin
Accutase ist eine Zellablösungslösung, die die Zellkulturindustrie revolutioniert. Es ist eine Mischung aus proteolytischen und kollagenolytischen Enzymen, die die Wirkung von Trypsin und Kollagenase nachahmt. Im Gegensatz zu Trypsin enthält Accutase keine Säugetier
- oder Bakterienbestandteile und ist sehr viel schonender für die Zellen, was es zu einer idealen Lösung für die routinemäßige Ablösung von Zellen von Standardplastikgefäßen für die Gewebekultur und adhäsionsbeschichteten Plastikgefäßen macht. In diesem Blogbeitrag gehen wir auf die Vorteile und Einsatzmöglichkeiten von Accutase ein und zeigen, wie es die Zellkultur verändert.
Vorteile von Accutase
Accutase hat mehrere Vorteile gegenüber herkömmlichen Trypsinlösungen. Erstens kann es immer dann eingesetzt werden, wenn eine sanfte und effiziente Ablösung von adhärenten Zelllinien erforderlich ist, und ist somit ein direkter Ersatz für Trypsin. Zweitens funktioniert Accutase sehr gut bei embryonalen und neuronalen Stammzellen, und es hat sich gezeigt, dass die Lebensfähigkeit dieser Zellen nach der Passage erhalten bleibt. Drittens bewahrt Accutase die meisten Epitope für die anschließende durchflusszytometrische Analyse, was es ideal für die Analyse von Zelloberflächenmarkern macht.
Außerdem muss Accutase bei der Passage von adhärenten Zellen nicht neutralisiert werden. Durch die Zugabe weiterer Medien nach der Zellteilung wird die Accutase verdünnt, so dass sie nicht mehr in der Lage ist, Zellen abzulösen. Dadurch entfällt der Schritt der Inaktivierung, und die Zellkulturtechniker sparen Zeit. Schließlich muss Accutase nicht aliquotiert werden, und eine Flasche ist im Kühlschrank 2 Monate lang haltbar.
Anwendungen von Accutase
Accutase ist ein direkter Ersatz für Trypsinlösung und kann für die Passage von Zelllinien verwendet werden. Darüber hinaus eignet sich Accutase gut zum Ablösen von Zellen für die Analyse vieler Zelloberflächenmarker mittels Durchflusszytometrie und für die Zellsortierung. Andere nachgeschaltete Anwendungen der Accutase-Behandlung umfassen die Analyse von Zelloberflächenmarkern, Viruswachstumstests, Zellproliferation, Tumorzellmigrationsassays, routinemäßige Zellpassage, Produktionsskalierung (Bioreaktor) und Durchflusszytometrie.
Zusammensetzung von Accutase
Accutase enthält keine Bestandteile von Säugetieren oder Bakterien und ist eine natürliche Enzymmischung mit proteolytischer und kollagenolytischer Enzymaktivität. Es ist in einer viel niedrigeren Konzentration als Trypsin und Kollagenase formuliert, wodurch es weniger toxisch und sanfter, aber genauso wirksam ist.
Wirksamkeit von Accutase
Accutase ist nachweislich effizient bei der Ablösung von Primär
- und Stammzellen und erhält die hohe Lebensfähigkeit der Zellen im Vergleich zu Enzymen tierischen Ursprungs wie Trypsin. 100 % der Zellen werden nach 10 Minuten zurückgewonnen, und dank der Selbstverdauung von Accutase ist es unbedenklich, Zellen bis zu 45 Minuten in Accutase zu belassen.
Zusammenfassung
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Accutase eine leistungsstarke Lösung ist, die das Spiel in der Zellkultur verändert. Mit seiner sanften Natur, Effizienz und Vielseitigkeit ist Accutase die ideale Alternative zu Trypsin. Wenn Sie nach einer zuverlässigen und effizienten Lösung für die Zellablösung suchen, ist Accutase die richtige Lösung für Sie.