PK-15-Zellen












Erforschung der Interaktion des Schweinepestvirus mit PK-15-Zellen
Beschreibung | Die PK(15)-Zelllinie, die von PK-2A abgeleitet ist, einer 1955 aus der Niere eines erwachsenen Schweins hergestellten Zelllinie, ist mit dem porzinen Onkovirus vom Typ C (früher bekannt als porzines endogenes Retrovirus, PERV) infiziert, das als Erreger der Risikogruppe 2 eingestuft ist. Das Genom der Wirtszelle enthält 62 Kopien des *pol*-Gens, das für die reverse Transkriptase und andere Proteine codiert. Ursprünglich wurden die von der PK(15)-Zelllinie produzierten Viruspartikel als defekt und nicht infektiös für eine Vielzahl von Säugetierzelllinien, einschließlich einer menschlichen Zelllinie, beschrieben, was zu ihrer Einstufung als Zelllinie der Risikogruppe 1 führte. Spätere Studien zeigten jedoch, dass menschliche 293-Zellen durch den zellfreien Überstand von PK(15)-Zellen produktiv infiziert werden können. Dieser Befund führte im November 2018 zu einer Neueinstufung der PK(15)-Zelllinie durch die Zentrale Kommission für Biologische Sicherheit (ZKBS). PCR-Analysen ergaben, dass die übertragenen Viren zu den polytropen Subtypen PERV-A und PERV-B gehörten. Zudem wurde beobachtet, dass die von den 293-Zellen produzierten Viruspartikel resistent gegen die Inaktivierung durch das menschliche Komplementsystem waren. Zusätzlich zu ihrer virologischen Bedeutung dient die PK(15)-Zelllinie auch als geeigneter Wirt für Transfektionsanwendungen. Aufgrund ihrer adhärenten Wachstumseigenschaften ist sie in verschiedenen Forschungs- und Versuchsumgebungen von großem Wert. |
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Organismus | Schwein |
Gewebe | Niere |
Synonyme | PK(15), PK (15), PK 15, PK15, Schweineniere-15 |
Einzelheiten zu den Zellen des porzinen Circovirus PK-15
Alter | Erwachsener |
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Geschlecht | Männlich |
Morphologie | Epithelähnlich |
Wachstumseigenschaften | Monolayer, anhaftend |
Dokumentation
Zitat | PK-15 (Cytion-Katalognummer 607426) |
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Biosicherheitsstufe | Biosicherheitsstufe 1. Die Zelllinie beherbergt Sequenzen des Porcinen Onkovirus Typ C (PCOV) und deren Transkripte, und es kann nicht ausgeschlossen werden, dass es zu einer Virussekretion kommt. In Deutschland sind diese Viren in BSL 1 für Menschen und BSL 2 für Tiere eingestuft (TRBA 462). Die deutsche Zentralkommission für Biologische Sicherheit (ZKBS) stuft diese Viren und infizierten Zelllinien jedoch in BSL 2 ein, wenn sie für gentechnische Veränderungen verwendet werden. |
Genomisches Profil der PK15-Zelllinie
Viren | PCV1 (Porcines Circovirus 1) positiv, PCV2 negativ, PCV3 negativ |
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Virusanfälligkeit | Schweinecholera, Afrikanische Schweinepest, vesikuläres Exanthem der Schweine, Maul- und Klauenseuche (FMDV), vesikuläre Stomatitis (Indiana), Vacciniose, Reovirus 2, 3, Adenovirus 4, 5, Coxsackievirus B2, B3, B4, B5, B6 |
Virusresistenz | Polio-Virus 2 |
Reverse Transkriptase | Positiv |
Handhabung
Nährboden | EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion-Artikelnummer 820100a) |
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Mittlere Supplemente | Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS und 1% NEAA |
Passage-Lösung | Accutase |
Subkultivierung | Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten. |
Splitverhältnis | Empfohlen wird ein Verhältnis von 1:2 bis 1:4 |
Aussaatdichte | 2 x 10^4 Zellen/cm^2 |
Medienwechsel | 2 bis 3 Mal pro Woche |
Wiederherstellung durch Einfrieren | Lassen Sie die Zellen mindestens 24 bis 48 Stunden nach dem Einfrieren ruhen. |
Einfriermedium | Verwenden Sie als Kryokonservierungsmedium ein komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion-Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren. |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen |
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Qualitätskontrolle
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
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STR profile |
Amelogenin: x,x
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Erforderliche Produkte
Was ist in EMEM enthalten?
EMEM ist eine modifizierte Version von Eagle's Minimum Essential Medium und enthält Earle's Balanced Salt Solution, nicht-essentielle Aminosäuren, L-Glutamin, Natriumpyruvat und Natriumbicarbonat. Es ist wichtig zu beachten, dass diese Menge an Natriumbicarbonat für die Verwendung bei 5 % CO2 in der Luft bestimmt ist. Um seine Wirksamkeit zu erhalten, wird empfohlen, das Medium bei 2°C bis 8°C im Dunkeln zu lagern, wenn es nicht verwendet wird.
Wozu wird EMEM verwendet?
Eagle's minimal essential medium (EMEM) ist ein Zellkulturmedium, das Zellen in Gewebekulturen erhalten kann. Das Medium enthält höhere Konzentrationen von Aminosäuren, die eine genauere Annäherung an die Proteinzusammensetzung von kultivierten Säugetierzellen ermöglichen. EMEM kann für die Kultivierung verschiedener Zellen verwendet werden, darunter Fibroblasten, menschliche Leberkrebszellen (HepG2) und Astrozytenzellen aus fötalen Hirnvorläuferzellen (PDA). Es wird in der Regel in Gegenwart von fötalem Rinderserum (FBS), Kalbs
- oder Pferdeserum verwendet.
Wie unterscheidet sich EMEM von anderen Zellkulturmedien?
EMEM und Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) haben zwar einige Gemeinsamkeiten, unterscheiden sich aber auch. Beide Medien sind proteinarm und enthalten die Aminosäuren, Salze, Glukose und Vitamine, die erforderlich sind, um eine Zelle mit Energie zu versorgen und sie in der Gewebekultur zu erhalten. Die DMEM-Formulierung ist jedoch so modifiziert, dass sie bis zu viermal mehr Vitamine und Aminosäuren und zwei
- bis viermal mehr Glukose enthält als EMEM. Es sei darauf hingewiesen, dass sich EMEM auch von der ursprünglichen MEM-Formulierung unterscheidet.
Qualitätskontrolle
Steril gefiltert
Lagerung und Haltbarkeit
Vor Licht geschützt bei +2°C bis +8°C lagern.
Nach dem Öffnen bei 4°C lagern und innerhalb von 6-8 Wochen aufbrauchen.
Versandbedingungen
Umgebungstemperatur
Pflege
Gekühlt bei +2°C bis +8°C im Dunkeln aufbewahren. Vermeiden Sie Einfrieren und häufiges Erwärmen auf +37°C, da dies die Produktqualität beeinträchtigt.
Erwärmen Sie das Medium nicht über 37°C und verwenden Sie keine unkontrollierten Wärmequellen wie Mikrowellengeräte.
Wenn nur ein Teil des Mediums verwendet werden soll, entnehmen Sie die erforderliche Menge und erwärmen Sie sie vor der Verwendung auf Raumtemperatur.
Zusammensetzung
Kategorie
Bestandteile
Konzentration (mg/L)
Aminosäuren
L-Arginin HCl
126.00
L-Cystin 2 HCl
31.30
L-Glutamin
292.00
L-Histidin HClH2O
42.00
L-Isoleucin
52.00
L-Leucin
52.00
L-Lysin HCl
72.50
L-Methionin
15.00
L-Phenylalanin
32.00
L-Threonin
48.00
L-Tryptophan
10.00
L-Tyrosin 2 Na 2H2O
51.90
L-Valin
46.00
Vitamine
Cholinchlorid
1.00
Vitamine
D-Calciumpantothenat
1.00
Folsäure
1.00
myo-Inositol
2.00
Nicotinamid
1.00
Pyridoxal-HCl
1.00
Riboflavin
0.10
Thiamin HCl
1.00
Anorganische Salze
CaCl2 2H2O
265.00
Anorganische Salze
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Andere Bestandteile
D-Glucose
1000.00
Andere Bestandteile
Phenolrot-Natriumsalz
11.00
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) ist eine weit verbreitete Pufferlösung in der biologischen und chemischen Forschung. Sie spielt eine entscheidende Rolle bei der Aufrechterhaltung des pH-Gleichgewichts und der Osmolarität während verschiedener experimenteller Verfahren, einschließlich Gewebeverarbeitung und Zellkultur. Unsere PBS-Lösung wird sorgfältig mit hochreinen Inhaltsstoffen formuliert, um Stabilität und Zuverlässigkeit bei jedem Experiment zu gewährleisten. Die Osmolarität und die Ionenkonzentration unserer PBS-Lösung sind denen des menschlichen Körpers sehr ähnlich, so dass sie isotonisch und für die meisten Zellen ungiftig ist.
Zusammensetzung unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist eine pH-angepasste Mischung aus hochreinen Phosphatpuffern und Kochsalzlösungen. Bei einer 1fachen Arbeitskonzentration enthält sie:
8000 mg/L Natriumchlorid (NaCl)
200 mg/L Kaliumchlorid (KCl)
1150 mg/L Natriumphosphat dibasisch wasserfrei (Na2HPO4)
200 mg/L Kaliumphosphat einbasig wasserfrei (KH2PO4)
Diese Zusammensetzung gewährleistet ein optimales pH
- und Ionengleichgewicht und eignet sich für eine breite Palette biologischer Anwendungen.
Anwendungen unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist ideal für verschiedene Anwendungen in der biologischen Forschung. Aufgrund ihrer isotonischen und ungiftigen Eigenschaften eignet sie sich für die Verdünnung von Substanzen und die Spülung von Zellbehältern. PBS-Lösungen, die EDTA enthalten, sind wirksam, um anhaftende und verklumpte Zellen abzulösen. Zweiwertige Metalle wie Zink sollten jedoch nicht zu PBS hinzugefügt werden, da dies zu Ausfällungen führen kann. In solchen Fällen werden Good's Puffer empfohlen. Außerdem ist unsere PBS-Lösung eine akzeptable Alternative zu viralen Transportmedien für den Transport und die Lagerung von RNA-Viren, einschließlich SARS-CoV-2.
Qualitätskontrolle
Steril gefiltert
Lagerung und Haltbarkeit
Vor Licht geschützt bei +2°C bis +25°C lagern.
Nach dem Öffnen bei 2°C bis 25°C lagern und innerhalb von 24 Monaten verbrauchen.
Versandbedingungen
Umgebungstemperatur
Pflege
Gekühlt bei +2°C bis +8°C im Dunkeln aufbewahren. Vermeiden Sie Einfrieren und häufiges Erwärmen auf +37°C, da dies die Produktqualität beeinträchtigt.
Erwärmen Sie das Medium nicht über 37°C und verwenden Sie keine unkontrollierten Wärmequellen wie Mikrowellengeräte.
Wenn nur ein Teil des Mediums verwendet werden soll, entnehmen Sie die erforderliche Menge und erwärmen Sie sie vor der Verwendung auf Raumtemperatur.
Zusammensetzung
Kategorie
Bestandteile
Konzentration (mg/L)
Salze
Kaliumchlorid
200
Kaliumphosphat monobasisch wasserfrei
200
Natriumchlorid
8000
Natriumphosphat zweibasisch wasserfrei
1150