HMC3-Zellen

Die Zelllinie Mensch Microglial Clone 3 (HMC3) wurde 1995 vom Team von Professor Tardieu durch SV40-abhängige Immortalisierung von Mikrogliazellen aus menschlichem Rückenmarks- und Kortikalisgewebe entwickelt, die von Embryonen im Alter von 8 bis 12 Wochen stammen. Diese primären Zellen, die sich durch langsame Teilung und komplexe Morphologie auszeichnen, wurden vor der Immortalisierung zunächst 10-15 Tage lang kultiviert. Die HMC3-Zellen behielten mehrere wichtige Merkmale primärer Mikroglia bei, wie z. B. eine vielfältige Expression myeloider Marker wie CD68, CD11b und CD14, obwohl die Expressionswerte je nach Wahl des primären Antikörpers, insbesondere für CD68, stark variierten.

Nach der Immortalisierung wiesen die HMC3-Zellen erhöhte Proliferationsraten mit Verdopplungszeiten zwischen 24 und 48 Stunden auf, wobei viele phänotypische und morphologische Merkmale ihrer primären Gegenstücke erhalten blieben. Vor allem war der Anteil der CD68 EBM/11-positiven Zellen höher und die phagozytische Aktivität geringer als bei den primären Zellen. Die Stabilität der Antigenexpression wurde über 35 Passagen hinweg bestätigt, wobei die Zellen unter Ausgangsbedingungen positiv für NSE, CD68 und CD11b, aber negativ für CD14, MHCII und CD4 blieben. Die Exposition gegenüber Interferon-γ (IFNγ) erhöhte jedoch die MHCII-Expression und entsprach damit eher den Reaktionen der Primärkultur auf dieselbe Behandlung.

In funktioneller Hinsicht zeichnete sich die HMC3-Linie dadurch aus, dass sie im Vergleich zu anderen Klonen unter Ausgangsbedingungen höhere Mengen an Interleukin-6 (IL-6) produzierte. Trotzdem bleibt ein direkter Vergleich mit der Zytokinproduktion primärer Mikrogliazellen aufgrund methodischer Unterschiede schwierig. Die Reaktion auf die Stimulierung durch Lipopolysaccharid (LPS) war bei diesen immortalisierten Linien im Vergleich zu Primärkulturen vermindert. Im Einklang mit primären Mikrogliaeigenschaften produzierten die HMC3- und andere klonierte Linien weder spontan noch nach einer entzündungsfördernden Stimulation Tumornekrosefaktor-alpha (TNFα), was ein spezifisches Merkmal der menschlichen embryonalen Mikroglia hervorhebt.