HEK293A-Zellen
Allgemeine Informationen
| Beschreibung | Die HEK293A-Zelllinie, ein Derivat der humanen embryonalen Nierenzellen 293 (HEK293), ist ein spezielles Werkzeug für die virologische und gentherapeutische Forschung, insbesondere für die Produktion, Amplifikation und Titration replikationsinkompetenter Adenoviren. Diese Zellen weisen eine flache Morphologie auf, was die mikroskopische Untersuchung und Titration erheblich erleichtert und die Zählung und Bewertung der Viruspartikel vereinfacht. Ein entscheidendes Merkmal der HEK293A-Zelllinie ist die stabile Integration des Adenovirus-E1-Gens in ihr Genom. Diese Integration ist entscheidend, da sie die notwendige Transkriptionsmaschinerie für die Expression der E1-Proteine, insbesondere E1a und E1b, bereitstellt. Das Vorhandensein dieser Proteine ist für die Replikation der adenoviralen Vektoren in der Zelle unerlässlich. Das E1a-Protein dient in erster Linie der Aktivierung der Transkription des Adenovirus-Genoms, während die E1b-Proteine an der viralen Replikation und der Unterbrechung des Zellzyklus beteiligt sind. Der Nutzen von HEK293A-Zellen geht über die bloße Unterstützung der viralen Replikation hinaus. Diese Zellen ermöglichen die effiziente Herstellung von hochtitrigen, qualitativ hochwertigen Viruspräparaten, die sowohl für die Grundlagenforschung als auch für therapeutische Anwendungen unerlässlich sind. Die robuste Replikationskapazität und die einfache Handhabung der Zelllinie ermöglichen es den Forschern, adenovirale Konstrukte mit bisher unerreichter Präzision und Effizienz zu screenen und zu entwickeln. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die HEK293A-Zelllinie eine unverzichtbare Ressource auf dem Gebiet der Virologie und Gentherapie darstellt. Ihre Fähigkeit, E1-Proteine stabil zu exprimieren und die Replikation von Adenoviren zu unterstützen, macht sie zu einem wertvollen Werkzeug für Forscher, die adenovirale Vektoren herstellen und manipulieren wollen. Die Eigenschaften der Zelllinie ermöglichen die effiziente Generierung viraler Vektoren, die für die Weiterentwicklung der Forschung und potenzieller therapeutischer Interventionen von entscheidender Bedeutung sind. |
|---|---|
| Organismus | Menschen |
| Gewebe | Embryonale Niere |
| Synonyme | HEK-293A, HEK293A, HEK 293A, HEK293-A, QBI-HEK 293A, QBI-293A |
Merkmale
| Alter | Fötus |
|---|---|
| Geschlecht | Weiblich |
| Morphologie | Epithelial |
| Wachstumseigenschaften | Adhärent |
Regulatorische Daten
| Zitat | HEK293A (Cytion-Katalognummer 305070) |
|---|---|
| Biosicherheitsstufe | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| CellosaurusAccession | CVCL_6910 |
Biomolekulare Daten
Handhabung
| Nährboden | EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion-Artikelnummer 820100a) |
|---|---|
| Supplemente | Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS und 1% NEAA |
| Dissoziationsreagenz | Accutase |
| Subkultivierung | Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten. |
| Splitverhältnis | 1:3 bis 1:5 |
| Medienwechsel | 2 bis 3 Mal pro Woche |
| Einfriermedium | Verwenden Sie als Kryokonservierungsmedium ein komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion-Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren. |
| Auftauen und Kultivierung von Zellen |
|
| Versandbedingungen | Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager. |
| Lagerungsbedingungen | Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel. |
Qualitätskontrolle / Genetisches Profil / HLA
| Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
|---|---|
| STR-Profil |
Amelogenin: x,x
CSF1PO: 12,12
D13S317: 12,14
D16S539: 9,13
D5S818: 8,8
D7S820: 11,12
TH01: 7,9.3
TPOX: 11,11
vWA: 16,19
D3S1358: 15,17
D21S11: 28,30.2
D18S51: 17,18
Penta E: 7,15
Penta D: 9,10
D8S1179: 12,12
FGA: 23,23
D6S1043: 11,11
D2S1338: 19,19
D12S391: 19,21
D19S433: 15,18
|
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Erforderliche Produkte
Erforderliche Produkte
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSSEines der am häufigsten verwendeten synthetischen Zellkulturmedien ist das Minimum Essential Medium Eagle (MEM). Dieses von Harry Eagle entwickelte Medium wurde erstmals 1959 eingeführt und ist seitdem eine beliebte Wahl für verschiedene Zelltypen, die in Monolayern und adhärenten Zelllinien gezüchtet werden.
Was ist in EMEM enthalten?
EMEM ist eine modifizierte Version von Eagle's Minimum Essential Medium und enthält Earle's Balanced Salt Solution, nicht-essentielle Aminosäuren, L-Glutamin, Natriumpyruvat und Natriumbicarbonat. Es ist wichtig zu beachten, dass diese Menge an Natriumbicarbonat für die Verwendung bei 5 % CO2 in der Luft bestimmt ist. Um seine Wirksamkeit zu erhalten, wird empfohlen, das Medium bei 2°C bis 8°C im Dunkeln zu lagern, wenn es nicht verwendet wird.
Wozu wird EMEM verwendet?
Eagle's minimal essential medium (EMEM) ist ein Zellkulturmedium, das Zellen in Gewebekulturen erhalten kann. Das Medium enthält höhere Konzentrationen von Aminosäuren, die eine genauere Annäherung an die Proteinzusammensetzung von kultivierten Säugetierzellen ermöglichen. EMEM kann für die Kultivierung verschiedener Zellen verwendet werden, darunter Fibroblasten, menschliche Leberkrebszellen (HepG2) und Astrozytenzellen aus fötalen Hirnvorläuferzellen (PDA). Es wird in der Regel in Gegenwart von fötalem Rinderserum (FBS), Kalbs
- oder Pferdeserum verwendet.
Wie unterscheidet sich EMEM von anderen Zellkulturmedien?
EMEM und Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) haben zwar einige Gemeinsamkeiten, unterscheiden sich aber auch. Beide Medien sind proteinarm und enthalten die Aminosäuren, Salze, Glukose und Vitamine, die erforderlich sind, um eine Zelle mit Energie zu versorgen und sie in der Gewebekultur zu erhalten. Die DMEM-Formulierung ist jedoch so modifiziert, dass sie bis zu viermal mehr Vitamine und Aminosäuren und zwei
- bis viermal mehr Glukose enthält als EMEM. Es sei darauf hingewiesen, dass sich EMEM auch von der ursprünglichen MEM-Formulierung unterscheidet.
Qualitätskontrolle
Steril gefiltert
Lagerung und Haltbarkeit
Vor Licht geschützt bei +2°C bis +8°C lagern.
Nach dem Öffnen bei 4°C lagern und innerhalb von 6-8 Wochen aufbrauchen.
Versandbedingungen
Umgebungstemperatur
Pflege
Gekühlt bei +2°C bis +8°C im Dunkeln aufbewahren. Vermeiden Sie Einfrieren und häufiges Erwärmen auf +37°C, da dies die Produktqualität beeinträchtigt.
Erwärmen Sie das Medium nicht über 37°C und verwenden Sie keine unkontrollierten Wärmequellen wie Mikrowellengeräte.
Wenn nur ein Teil des Mediums verwendet werden soll, entnehmen Sie die erforderliche Menge und erwärmen Sie sie vor der Verwendung auf Raumtemperatur.
Zusammensetzung
Kategorie
Bestandteile
Konzentration (mg/L)
Aminosäuren
L-Arginin HCl
126.00
L-Cystin 2 HCl
31.30
L-Glutamin
292.00
L-Histidin HClH2O
42.00
L-Isoleucin
52.00
L-Leucin
52.00
L-Lysin HCl
72.50
L-Methionin
15.00
L-Phenylalanin
32.00
L-Threonin
48.00
L-Tryptophan
10.00
L-Tyrosin 2 Na 2H2O
51.90
L-Valin
46.00
Vitamine
Cholinchlorid
1.00
Vitamine
D-Calciumpantothenat
1.00
Folsäure
1.00
myo-Inositol
2.00
Nicotinamid
1.00
Pyridoxal-HCl
1.00
Riboflavin
0.10
Thiamin HCl
1.00
Anorganische Salze
CaCl2 2H2O
265.00
Anorganische Salze
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Andere Bestandteile
D-Glucose
1000.00
Andere Bestandteile
Phenolrot-Natriumsalz
11.0025,00 €*AccutaseVarianten: 100 mlAccutase Zelldissoziationsreagenz
- eine schonende Alternative zu Trypsin
Accutase ist eine Zellablösungslösung, die die Zellkulturindustrie revolutioniert. Es ist eine Mischung aus proteolytischen und kollagenolytischen Enzymen, die die Wirkung von Trypsin und Kollagenase nachahmt. Im Gegensatz zu Trypsin enthält Accutase keine Säugetier
- oder Bakterienbestandteile und ist sehr viel schonender für die Zellen, was es zu einer idealen Lösung für die routinemäßige Ablösung von Zellen von Standardplastikgefäßen für die Gewebekultur und adhäsionsbeschichteten Plastikgefäßen macht. In diesem Blogbeitrag gehen wir auf die Vorteile und Einsatzmöglichkeiten von Accutase ein und zeigen, wie es die Zellkultur verändert.
Vorteile von Accutase
Accutase hat mehrere Vorteile gegenüber herkömmlichen Trypsinlösungen. Erstens kann es immer dann eingesetzt werden, wenn eine sanfte und effiziente Ablösung von adhärenten Zelllinien erforderlich ist, und ist somit ein direkter Ersatz für Trypsin. Zweitens funktioniert Accutase sehr gut bei embryonalen und neuronalen Stammzellen, und es hat sich gezeigt, dass die Lebensfähigkeit dieser Zellen nach der Passage erhalten bleibt. Drittens bewahrt Accutase die meisten Epitope für die anschließende durchflusszytometrische Analyse, was es ideal für die Analyse von Zelloberflächenmarkern macht.
Außerdem muss Accutase bei der Passage von adhärenten Zellen nicht neutralisiert werden. Durch die Zugabe weiterer Medien nach der Zellteilung wird die Accutase verdünnt, so dass sie nicht mehr in der Lage ist, Zellen abzulösen. Dadurch entfällt der Schritt der Inaktivierung, und die Zellkulturtechniker sparen Zeit. Schließlich muss Accutase nicht aliquotiert werden, und eine Flasche ist im Kühlschrank 2 Monate lang haltbar.
Anwendungen von Accutase
Accutase ist ein direkter Ersatz für Trypsinlösung und kann für die Passage von Zelllinien verwendet werden. Darüber hinaus eignet sich Accutase gut zum Ablösen von Zellen für die Analyse vieler Zelloberflächenmarker mittels Durchflusszytometrie und für die Zellsortierung. Andere nachgeschaltete Anwendungen der Accutase-Behandlung umfassen die Analyse von Zelloberflächenmarkern, Viruswachstumstests, Zellproliferation, Tumorzellmigrationsassays, routinemäßige Zellpassage, Produktionsskalierung (Bioreaktor) und Durchflusszytometrie.
Zusammensetzung von Accutase
Accutase enthält keine Bestandteile von Säugetieren oder Bakterien und ist eine natürliche Enzymmischung mit proteolytischer und kollagenolytischer Enzymaktivität. Es ist in einer viel niedrigeren Konzentration als Trypsin und Kollagenase formuliert, wodurch es weniger toxisch und sanfter, aber genauso wirksam ist.
Wirksamkeit von Accutase
Accutase ist nachweislich effizient bei der Ablösung von Primär
- und Stammzellen und erhält die hohe Lebensfähigkeit der Zellen im Vergleich zu Enzymen tierischen Ursprungs wie Trypsin. 100 % der Zellen werden nach 10 Minuten zurückgewonnen, und dank der Selbstverdauung von Accutase ist es unbedenklich, Zellen bis zu 45 Minuten in Accutase zu belassen.
Zusammenfassung
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Accutase eine leistungsstarke Lösung ist, die das Spiel in der Zellkultur verändert. Mit seiner sanften Natur, Effizienz und Vielseitigkeit ist Accutase die ideale Alternative zu Trypsin. Wenn Sie nach einer zuverlässigen und effizienten Lösung für die Zellablösung suchen, ist Accutase die richtige Lösung für Sie.75,00 €*PBSPhosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) ist eine weit verbreitete Pufferlösung in der biologischen und chemischen Forschung. Sie spielt eine entscheidende Rolle bei der Aufrechterhaltung des pH-Gleichgewichts und der Osmolarität während verschiedener experimenteller Verfahren, einschließlich Gewebeverarbeitung und Zellkultur. Unsere PBS-Lösung wird sorgfältig mit hochreinen Inhaltsstoffen formuliert, um Stabilität und Zuverlässigkeit bei jedem Experiment zu gewährleisten. Die Osmolarität und die Ionenkonzentration unserer PBS-Lösung sind denen des menschlichen Körpers sehr ähnlich, so dass sie isotonisch und für die meisten Zellen ungiftig ist.
Zusammensetzung unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist eine pH-angepasste Mischung aus hochreinen Phosphatpuffern und Kochsalzlösungen. Bei einer 1fachen Arbeitskonzentration enthält sie:
8000 mg/L Natriumchlorid (NaCl)
200 mg/L Kaliumchlorid (KCl)
1150 mg/L Natriumphosphat dibasisch wasserfrei (Na2HPO4)
200 mg/L Kaliumphosphat einbasig wasserfrei (KH2PO4)
Diese Zusammensetzung gewährleistet ein optimales pH
- und Ionengleichgewicht und eignet sich für eine breite Palette biologischer Anwendungen.
Anwendungen unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist ideal für verschiedene Anwendungen in der biologischen Forschung. Aufgrund ihrer isotonischen und ungiftigen Eigenschaften eignet sie sich für die Verdünnung von Substanzen und die Spülung von Zellbehältern. PBS-Lösungen, die EDTA enthalten, sind wirksam, um anhaftende und verklumpte Zellen abzulösen. Zweiwertige Metalle wie Zink sollten jedoch nicht zu PBS hinzugefügt werden, da dies zu Ausfällungen führen kann. In solchen Fällen werden Good's Puffer empfohlen. Außerdem ist unsere PBS-Lösung eine akzeptable Alternative zu viralen Transportmedien für den Transport und die Lagerung von RNA-Viren, einschließlich SARS-CoV-2.
Qualitätskontrolle
Steril gefiltert
Lagerung und Haltbarkeit
Vor Licht geschützt bei +2°C bis +25°C lagern.
Nach dem Öffnen bei 2°C bis 25°C lagern und innerhalb von 24 Monaten verbrauchen.
Versandbedingungen
Umgebungstemperatur
Pflege
Gekühlt bei +2°C bis +8°C im Dunkeln aufbewahren. Vermeiden Sie Einfrieren und häufiges Erwärmen auf +37°C, da dies die Produktqualität beeinträchtigt.
Erwärmen Sie das Medium nicht über 37°C und verwenden Sie keine unkontrollierten Wärmequellen wie Mikrowellengeräte.
Wenn nur ein Teil des Mediums verwendet werden soll, entnehmen Sie die erforderliche Menge und erwärmen Sie sie vor der Verwendung auf Raumtemperatur.
Zusammensetzung
Kategorie
Bestandteile
Konzentration (mg/L)
Salze
Kaliumchlorid
200
Kaliumphosphat monobasisch wasserfrei
200
Natriumchlorid
8000
Natriumphosphat zweibasisch wasserfrei
115020,00 €* -
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Analysezertifikat (CoA)
| Losnummer | Zertifikat Typ | Date | Katalognummer |
|---|---|---|---|
| 305070-180524 | Analysezertifikat | 23. May. 2025 | 305070 |
| 305070-220524 | Analysezertifikat | 23. May. 2025 | 305070 |
| 305070-070623 | Analysezertifikat | 23. May. 2025 | 305070 |
Materialübertragungsvertrag
Wenn Sie beabsichtigen, Cytion-Zelllinien ausschließlich für die interne Forschung an einem einzigen Forschungsstandort zu verwenden, füllen Sie bitte unsere Materialtransfervereinbarung (MTA) aus, unterzeichnen Sie diese und reichen Sie sie zusammen mit Ihrer Bestellung ein.
Für kommerzielle Anwendungen - einschließlich, aber nicht beschränkt auf Dienstleistungen, Qualitätskontrolltests, Produktfreigabe, diagnostische Anwendungen oder behördliche Studien - füllen Sie bitte das Formular "Verwendungszweck" aus, damit wir eine auf Ihr Projekt zugeschnittene Vereinbarung vorbereiten können.
Bitte beachten Sie: Das MTA gilt nur für bestimmte Zelllinien. Wenn dieser Hinweis und das MTA-Dokument auf einer Produktseite erscheinen, ist die Vereinbarung anwendbar. Für Zelllinien, die nicht unter das MTA fallen, wird kein Hinweis auf die Vereinbarung angezeigt. Das MTA gilt nicht für Kunden in Nord- und Südamerika, China oder Taiwan. Bitte wenden Sie sich an unsere US-Niederlassung, um die entsprechende Vereinbarung zu erhalten.