HEK293 EBNA-Zellen
Allgemeine Informationen
Beschreibung | Die Transfektion von Säugetierzellen in großem Maßstab hat sich zu einer unverzichtbaren Technologie in der wissenschaftlichen Gemeinschaft entwickelt. Sie ermöglicht die effiziente Produktion von r-Proteinen im Milligramm-zu-Gramm-Bereich innerhalb eines kurzen Zeitrahmens, nur wenige Tage nach der Klonierung von cDNAs in den geeigneten Expressionsvektor. Unter den verschiedenen verfügbaren Zelllinien sticht die HEK293-Zelllinie, die das Epstein-Barr-Virus-Kernantigen-1 stabil exprimiert (HEK293-EBNA1 oder 293E), als die am häufigsten verwendete Zelllinie für Transfektionsexperimente im großen Maßstab hervor. Einer der entscheidenden Vorteile der Verwendung von HEK293-EBNA1-Zellen ist ihre Kompatibilität mit Expressionsvektoren, die den Epstein-Barr-Virus-Replikationsursprung (oriP) tragen, wie z. B. der pTT-Vektor. Diese Kompatibilität führt zu einer erheblichen Verbesserung der Ausbeute an r-Proteinen um das Dreifache im Vergleich zur Verwendung eines Nicht-oriP-Vektors. Durch die Nutzung dieses Potenzials können Forscher nun eine höhere Ausbeute ihrer gewünschten r-Proteine erzielen und so ihren Forschungs- und Entwicklungszielen näher kommen. |
---|---|
Organismus | Menschen |
Gewebe | Embryonale Niere |
Synonyme | HEK293-EBNA, 293 c18, 293c18, HEK 293 c18, HEK-293 c18, HEK293-EBNA1, HEK-293-EBNA, HEK 293-EBNA, HEK 293 EBNA, HEK293EBNA, 293 EBNA, 293-EBNA1, 293-EBNA, 293/EBNA, 293EBNA, EBNA-293, EBNA293, HEK293E, HEK/EBNA, HEK-EBNA, HEK.EBNA, 293/EBNA-1 |
Merkmale
Alter | Fötus |
---|---|
Geschlecht | Weiblich |
Morphologie | Epithelial |
Wachstumseigenschaften | Adhärent |
Identifikatoren / Biologische Schutzstufe / Zitation
Zitat | HEK293 EBNA (Cytion Katalognummer 300264) |
---|---|
Biosicherheitsstufe | 2 |
Expression / Mutation
Antigenexpression | EBNA1 |
---|---|
Viren | Adenovirus 5 (Transformant), EBV (exprimiert EBNA1) |
Handhabung
Nährboden | DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 1,5 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat (Cytion-Artikelnummer 820300a) |
---|---|
Mittlere Supplemente | Supplemente des Mediums mit 10% FBS |
Passage-Lösung | Accutase |
Subkultivierung | Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten. |
Einfriermedium | CM-1 (Cytion Katalognummer 800100) oder CM-ACF (Cytion Katalognummer 806100) |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen |
|
Qualitätskontrolle / Genetisches Profil / HLA
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
---|