ECV-304-Zellen
Allgemeine Informationen
Beschreibung | Bei der Zelllinie ECV-304 handelt es sich um eine spontan transformierte Zelllinie, die aus menschlichen Nabelvenenendothelzellen (HUVEC) stammt. Ursprünglich wurde sie als Modell für die Biologie von Endothelzellen charakterisiert und verwendet. Weitere genomische Analysen ergaben jedoch, dass die ECV-304-Zellen kontaminiert wurden und genetisch identisch mit der T24-Zelllinie für Blasenkarzinome sind. Diese Enthüllung hat erhebliche Auswirkungen auf die Interpretation von Forschungsdaten, insbesondere von Studien, die unter der Annahme durchgeführt wurden, dass ECV-304 ein echtes Endothelzellmodell sei. Trotz der Fehlcharakterisierung als Endothelzelle wurde ECV-304 in Studien zur Tumorgenese, Zytotoxizität und zum Wirkstoffscreening weithin verwendet, vor allem aufgrund seiner robusten Wachstumseigenschaften und der einfachen Kultivierung. Die Zellen weisen eine epitheliale Morphologie auf und sind in der Lage, in einer Monolage zu wachsen, was sie zu einem geeigneten In-vitro-Modell für die Untersuchung verschiedener Aspekte der Krebsbiologie macht, darunter Zellproliferation, Migration und die zelluläre Reaktion auf therapeutische Wirkstoffe. Bei der Interpretation früherer Studien, in denen ECV-304 als Modell für Endothelzellen verwendet wurde, ist jedoch Vorsicht geboten. Angesichts der genetischen Identifizierung mit der T24-Zelllinie sollten Forscher ECV-304 als Blasenkarzinom-Modell und nicht als Endothelzelllinie betrachten. Dieses Verständnis ist entscheidend für die Gestaltung und Interpretation von Experimenten, die darauf abzielen, zelluläre Verhaltensweisen zu untersuchen, die für die Krebsforschung relevant sind und nicht die Funktion von Endothelzellen. |
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Organismus | Menschen |
Gewebe | Blase |
Krankheit | Karzinom |
Synonyme | ECV 304, ECV304, ECV, E304, T24(ECV304) |
Merkmale
Alter | 82 Jahre |
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Geschlecht | Weiblich |
Morphologie | Epithelähnlich |
Wachstumseigenschaften | Adhärent |
Identifikatoren / Biologische Schutzstufe / Zitation
Zitat | ECV-304 (Cytion Katalognummer 300452) |
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Biosicherheitsstufe | 1 |
Expression / Mutation
Handhabung
Nährboden | Medium 199, w: 2,7 mM stabiles Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion-Artikelnummer 820101a) |
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Mittlere Supplemente | Supplemente des Mediums mit 10% FBS |
Passage-Lösung | Accutase |
Subkultivierung | Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten. |
Einfriermedium | CM-1 (Cytion Katalognummer 800100) oder CM-ACF (Cytion Katalognummer 806100) |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen |
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Qualitätskontrolle / Genetisches Profil / HLA
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
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STR profile |
Amelogenin: x,x
CSF1PO: 12
D13S317: 12
D16S539: 9
D5S818: 10
D7S820: 10,11
TH01: 6
TPOX: 8,11
vWA: 17
D3S1358: 16
D21S11: 29
D18S51: 16,18
D8S1179: 14
FGA: 17,22
D2S1338: 20,23
D12S391: 18
D19S433: 13,14
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Benötigte Produkte
Medium 199 bietet eine Reihe von Anwendungsmöglichkeiten in diesem Bereich. Es kann den Kumulus-Oozyten-Komplex (COC) effektiv erhalten und die In-vitro-Reifung von Eizellen unterstützen. Außerdem wird es bei der Spülung von Aspirationslinien während der Eizellentnahme bei deutschen Holstein-Kühen eingesetzt. Darüber hinaus ist Medium 199 ein hervorragendes Medium für die Kultur von Herzendothelzellen von Ratten. Diese Anwendungen zeigen die Vielseitigkeit und Anpassungsfähigkeit von Medium 199 an verschiedene experimentelle Anforderungen.
Geschichte
Die Entwicklung von Medium 199 in den 1950er Jahren stellte einen bedeutenden Fortschritt bei den Gewebekulturmedien dar. Vor seiner Einführung stützten sich viele Kulturmedien auf Produkte tierischen Ursprungs und Gewebeextrakte. Morgan und Kollegen revolutionierten jedoch das Feld, indem sie eine vollständig definierte Nährstoffquelle für Zellkulturen formulierten. Durch ihre Experimente mit verschiedenen Kombinationen von Vitaminen, Aminosäuren und anderen Faktoren entdeckten sie die außergewöhnlichen wachstumsfördernden Eigenschaften von Medium 199.
Qualitätskontrolle
pH = 7,2 +/
- 0,02 bei 20-25°C.
Jede Charge wurde auf Sterilität und Abwesenheit von Mykoplasmen und Bakterien getestet.
Wartung
Kühl aufbewahren bei +2°C bis +8°C im Dunkeln. Einfrieren und Erwärmen bis zu +37° C mindern die Qualität des Produkts.
Erwärmen Sie das Medium nicht auf mehr als 37° C und verwenden Sie keine unkontrollierbaren Wärmequellen (z.B. Mikrowellengeräte).
Wenn nur ein Teil des Mediums verwendet werden soll, nehmen Sie diese Menge aus der Flasche und erwärmen Sie sie bei Raumtemperatur.
Die Haltbarkeit eines jeden Mediums mit Ausnahme des Basismediums beträgt 8 Wochen ab dem Herstellungsdatum.
Zusammensetzung
Bestandteile
mg/L
Anorganische Salze
Calciumchlorid x 2H2O
264,92
Eisen(III)-nitrat x 9H2O
0,72
Magnesium-Sulfat
97,67
Kaliumchlorid
400,00
Natriumacetat x 3H2O
82,95
Natriumchlorid
6,800.00
Natriumdihydrogenphosphat x H2O
140,00
Andere Komponenten
Adenin-Sulfat
10,00
AMP
0,20
ATP
1,00
Cholesterin
0,20
2'-Deoxyribose
0,50
D(+)-Glucose wasserfrei
1,000.00
Glutathion (red.)
0,05
Guanin x HCl
0,30
Hypoxanthin
0,30
Phenol rot
10,00
D-Ribose
0,50
Thymin
0,30
Tween 80
4,90
Uracil
0,30
Xanthin
0,30
NaHCO3
2,200.00
Aminosäuren
L-Alanin
25,00
L-Arginin x HCl
70,00
L-Asparaginsäure
30,00
L-Cystein x HCl x H2O
0,10
L-Cystein
20,00
L-Glutamin stabil
149,00
L-Glutaminsäure
67,00
Glycin
50,00
L-Histidin x HCl x H2O
21,88
L-Hydroxyprolin
10,00
L-Isoleucin
20,00
L-Leucin
60,00
L-Lysin x HCl
70,00
L-Methionin
15,00
L-Phenylalanin
25,00
L-Prolin
40,00
L-Serin
25,00
L-Threonin
30,00
L-Tryptophan
10,00
L-Tyrosin
40,00
L-Valin
25,00
Vitamine
4-Aminobenzoesäure
0,05
Ascorbinsäure
0,05
D(+)-Biotin
0,01
Calciferol
0,10
D-Calciumpantothenat
0,01
Cholinchlorid
0,50
Folsäure
0,01
myo-Inositol
0,05
Menadion
0,01
Nicotinsäure
0.025
Nicotinamid
0.025
Pyridoxal x HCl
0.025
Pyridoxol x HCl
0.025
Riboflavin
0,01
DL-α-Tocopherolphosphat-Dinatriumsalz
0,01
Thiamin x HCl
0,01
Vitamin A-Acetat
0,14
Zu den wichtigsten Eigenschaften von Freeze Medium CM-1 gehören:
Breite Kompatibilität: Wirksam für eine breite Palette von Zelltypen, einschließlich Primärzellen, Stammzellen und etablierte Zelllinien.
Hohe Lebensfähigkeit: Optimiert, um die Wiederherstellung und Lebensfähigkeit von Zellen nach dem Auftauen zu maximieren und zuverlässige Versuchsergebnisse zu gewährleisten.
Fertig zum Gebrauch: Praktisch vorbereitet und sterilisiert für die sofortige Anwendung, wodurch die Vorbereitungszeit und das Kontaminationsrisiko reduziert werden.
Erhöhte Stabilität: Bewahrt eine gleichbleibende Leistung unter Standard-Kryokonservierungsbedingungen und gewährleistet reproduzierbare Ergebnisse.
Lange Haltbarkeitsdauer: CM-1 ist ein serumhaltiges, gebrauchsfertiges Kryokonservierungsmedium, das bis zu einem Jahr im Kühlschrank aufbewahrt werden kann.
Verwendung von CM-1 zum Einfrieren von Zellen
Gehen Sie wie folgt vor, um CM-1 für das Einfrieren von adhärenten und Suspensionszellen zu verwenden
Bei adhärenten Zellen waschen Sie diese und lösen sie vom Kultursubstrat. Bei Suspensionszellen fahren Sie direkt mit dem nächsten Schritt fort.
Zählen Sie die Zellen, um sicherzustellen, dass sie die richtige Konzentration haben.
Zentrifugieren Sie die Zellen, um sie zu pelletieren, und resuspendieren Sie sie dann in CM-1-Gefriermedium.
Überführen Sie die resuspendierten Zellen in Kryogefäße.
Verwenden Sie eine langsame Gefriermethode, bevor Sie die Zellen in die Langzeitlagerung überführen
🥶 Methode
🔍 Beschreibung
💡 Schritte
❄️
Manuelles Einfrieren
Ein schrittweises Verfahren, bei dem die Temperatur schrittweise gesenkt wird, um die Lebensfähigkeit der Zellen zu gewährleisten
1️⃣ Zellen in Gefriermedium für 40 Minuten bei 4°C einfrieren.
2️⃣ Für 24 Stunden in einen Gefrierschrank mit -80°C transferieren.
3️⃣ Zellen zur Langzeitkonservierung in flüssigem Stickstoff lagern
🧊
Verwendung von Mr. Frosty
Ein praktisches Gerät, das kontrollierte Einfrierraten ohne elektrische Energie ermöglicht
1️⃣ Bereiten Sie die Zellen in Kryoröhrchen mit Gefriermedium vor.
2️⃣ Kryovials in den Mr. Frosty-Behälter stellen.
3️⃣ Vor dem Umfüllen in flüssigen Stickstoff 24 Stunden lang bei -80 °C lagern
🧬
Controlled-Rate Freezer
Ein hochpräziser Gefrierschrank von Thermo Fisher oder anderen Herstellern, der für eine kontrollierte Temperaturabsenkung ausgelegt ist
1️⃣ Programmieren Sie das Gerät so, dass die Temperatur schrittweise gesenkt wird.
2️⃣ Legen Sie die vorbereiteten Zellen in den Gefrierschrank.
3️⃣ Nach dem Einfrierzyklus die Zellen in flüssigen Stickstoff überführen
Lagern Sie die Kryoflaschen bei Temperaturen unter -130°C oder in flüssigem Stickstoff zur langfristigen Aufbewahrung.
Inhaltsstoffe
Enthält FBS, DMSO, Glucose, Salze
Pufferkapazität: pH = 7,2 bis 7,6
Cytion's Freeze Medium CM-1 bietet eine zuverlässige Lösung für die Kryokonservierung, die eine hohe Lebensfähigkeit und Funktionalität der Zellen nach dem Auftauen für eine Vielzahl von Forschungsanwendungen gewährleistet.
- eine schonende Alternative zu Trypsin
Accutase ist eine Zellablösungslösung, die die Zellkulturindustrie revolutioniert. Es ist eine Mischung aus proteolytischen und kollagenolytischen Enzymen, die die Wirkung von Trypsin und Kollagenase nachahmt. Im Gegensatz zu Trypsin enthält Accutase keine Säugetier
- oder Bakterienbestandteile und ist sehr viel schonender für die Zellen, was es zu einer idealen Lösung für die routinemäßige Ablösung von Zellen von Standardplastikgefäßen für die Gewebekultur und adhäsionsbeschichteten Plastikgefäßen macht. In diesem Blogbeitrag gehen wir auf die Vorteile und Einsatzmöglichkeiten von Accutase ein und zeigen, wie es die Zellkultur verändert.
Vorteile von Accutase
Accutase hat mehrere Vorteile gegenüber herkömmlichen Trypsinlösungen. Erstens kann es immer dann eingesetzt werden, wenn eine sanfte und effiziente Ablösung von adhärenten Zelllinien erforderlich ist, und ist somit ein direkter Ersatz für Trypsin. Zweitens funktioniert Accutase sehr gut bei embryonalen und neuronalen Stammzellen, und es hat sich gezeigt, dass die Lebensfähigkeit dieser Zellen nach der Passage erhalten bleibt. Drittens bewahrt Accutase die meisten Epitope für die anschließende durchflusszytometrische Analyse, was es ideal für die Analyse von Zelloberflächenmarkern macht.
Außerdem muss Accutase bei der Passage von adhärenten Zellen nicht neutralisiert werden. Durch die Zugabe weiterer Medien nach der Zellteilung wird die Accutase verdünnt, so dass sie nicht mehr in der Lage ist, Zellen abzulösen. Dadurch entfällt der Schritt der Inaktivierung, und die Zellkulturtechniker sparen Zeit. Schließlich muss Accutase nicht aliquotiert werden, und eine Flasche ist im Kühlschrank 2 Monate lang haltbar.
Anwendungen von Accutase
Accutase ist ein direkter Ersatz für Trypsinlösung und kann für die Passage von Zelllinien verwendet werden. Darüber hinaus eignet sich Accutase gut zum Ablösen von Zellen für die Analyse vieler Zelloberflächenmarker mittels Durchflusszytometrie und für die Zellsortierung. Andere nachgeschaltete Anwendungen der Accutase-Behandlung umfassen die Analyse von Zelloberflächenmarkern, Viruswachstumstests, Zellproliferation, Tumorzellmigrationsassays, routinemäßige Zellpassage, Produktionsskalierung (Bioreaktor) und Durchflusszytometrie.
Zusammensetzung von Accutase
Accutase enthält keine Bestandteile von Säugetieren oder Bakterien und ist eine natürliche Enzymmischung mit proteolytischer und kollagenolytischer Enzymaktivität. Es ist in einer viel niedrigeren Konzentration als Trypsin und Kollagenase formuliert, wodurch es weniger toxisch und sanfter, aber genauso wirksam ist.
Wirksamkeit von Accutase
Accutase ist nachweislich effizient bei der Ablösung von Primär
- und Stammzellen und erhält die hohe Lebensfähigkeit der Zellen im Vergleich zu Enzymen tierischen Ursprungs wie Trypsin. 100 % der Zellen werden nach 10 Minuten zurückgewonnen, und dank der Selbstverdauung von Accutase ist es unbedenklich, Zellen bis zu 45 Minuten in Accutase zu belassen.
Zusammenfassung
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Accutase eine leistungsstarke Lösung ist, die das Spiel in der Zellkultur verändert. Mit seiner sanften Natur, Effizienz und Vielseitigkeit ist Accutase die ideale Alternative zu Trypsin. Wenn Sie nach einer zuverlässigen und effizienten Lösung für die Zellablösung suchen, ist Accutase die richtige Lösung für Sie.
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) ist eine vielseitige Pufferlösung, die in vielen biologischen und chemischen Anwendungen sowie bei der Gewebeverarbeitung eingesetzt wird. Unsere PBS-Lösung ist mit hochwertigen Inhaltsstoffen formuliert, um einen konstanten pH-Wert während der Experimente zu gewährleisten. Die Osmolarität und die Ionenkonzentration unserer PBS-Lösung sind auf die des menschlichen Körpers abgestimmt, so dass sie isotonisch und für die meisten Zellen nicht toxisch ist.
Zusammensetzung unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist eine pH-angepasste Mischung aus hochreinen Phosphatpuffern und Kochsalzlösungen. Bei einer 1fachen Arbeitskonzentration enthält sie 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 8 mM Na2HPO4 und 2 mM KH2PO4. Wir haben diese Zusammensetzung auf der Grundlage von CSHL-Protokollen und der Molekularen Klonierung nach Sambrook gewählt, die in der Forschungsgemeinschaft etablierte Standards sind.
Anwendungen unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist ideal für eine Vielzahl von Anwendungen in der biologischen Forschung. Aufgrund ihrer isotonischen und ungiftigen Eigenschaften eignet sie sich perfekt für die Verdünnung von Substanzen und das Spülen von Zellbehältern. Unsere PBS-Lösung mit EDTA kann auch zum Lösen von angehefteten und verklumpten Zellen verwendet werden. Es ist jedoch wichtig zu beachten, dass zweiwertige Metalle wie Zink nicht zu PBS hinzugefügt werden dürfen, da dies zu Ausfällungen führen kann. In solchen Fällen werden Good's Puffer empfohlen. Darüber hinaus hat sich unsere PBS-Lösung als akzeptable Alternative zu viralen Transportmedien für den Transport und die Lagerung von RNA-Viren, wie z. B. SARS-CoV-2, erwiesen.
Lagerung unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung kann bei Raumtemperatur gelagert werden und ist somit leicht zu verwenden und zugänglich.
Zusammenfassend
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass unsere PBS-Lösung bei vielen biologischen und chemischen Experimenten ein wesentlicher Bestandteil ist. Aufgrund ihrer isotonischen und ungiftigen Eigenschaften eignet sie sich für zahlreiche Anwendungen, von der Zellkultur bis zum Virustransportmedium. Durch die Wahl unserer hochwertigen PBS-Lösung können Forscher ihre Experimente optimieren und genaue und zuverlässige Ergebnisse erzielen.
Zusammensetzung
Bestandteile
mg/L
Anorganische Salze
Kaliumchlorid
200,00
Kaliumdihydrogenphosphat
200,00
Natriumchlorid
8,000.00
di-Natriumhydrogenphosphat wasserfrei
1,150.00