EB3-Zellen

Name: CLS Cell Lines Service GmbH
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Produktnummer: 300373

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Product sheet

Beschreibung	Die EB3-Zelllinie ist eine embryonale Stammzelllinie (ES-Zelllinie) der Maus, die ausgiebig auf ihre Reaktion auf Zell-Zell-Kontakt untersucht wurde. Eines der Hauptmerkmale der EB3-Linie ist die Expression von Connexin30.3 (Cx30.3), einer Connexin-Isoform, die speziell im undifferenzierten Zustand dieser Zellen exprimiert wird. Die Expression von Cx30.3 reagiert stark auf den Zell-Zell-Kontakt, wie in Experimenten gezeigt wurde, bei denen die Kultur mit hängenden Tropfen, die die Zell-Zell-Interaktion erhöht, zu einem signifikanten Anstieg der Cx30.3-Expression um das 1,73-fache im Vergleich zu Einzelzellkulturen führte. Diese kontaktabhängige Hochregulierung von Cx30.3 wird durch den E-Cadherin-Signalweg vermittelt, und Knockdown-Experimente mit ß-Catenin, einem nachgeschalteten Faktor des Cadherin-Signalwegs, haben dessen Beteiligung bestätigt. Die Hemmung von E-Cadherin oder β-Catenin führte zu einer Verringerung der Cx30.3-Expression, was darauf hindeutet, dass die Zell-Zell-Kontaktaktivierung von Cx30.3 zumindest teilweise durch diesen Signalweg reguliert wird. Interessanterweise ist diese Zellkontaktreaktion spezifisch für Connexin30.3, da die Expression von Connexin43 (Cx43), einer anderen Connexin-Isoform, in diesen Experimenten nicht das gleiche Maß an Empfindlichkeit gegenüber Zellkontakt zeigte. Die EB3-Zelllinie ist ein nützliches Modell für die Untersuchung der Mechanismen der Zell-Zell-Kommunikation und der Rolle der Gap Junctions in der frühen Embryonalentwicklung. Das einzigartige Expressionsmuster von Cx30.3 als Reaktion auf Kontakt deutet darauf hin, dass es eine Rolle als Signalvermittler während der Gewebemorphogenese und -differenzierung im undifferenzierten Stammzellzustand spielen könnte.
Organismus	Menschen
Gewebe	Knochen
Krankheit	Burkitt-Lymphom
Metastasierender Ort	Knochen
Anwendungen	3D-Zellkultur, Immunologie
Synonyme	EB-3, Epstein-Barr-3, GM04679

Alter	3 Jahre
Geschlecht	Männlich
Ethnizität	Afrika
Morphologie	Lymphoblasten
Zelltyp	B-Lymphozyt
Wachstumseigenschaften	Aufhängung

Zitat	EB3 (Cytion Katalognummer 300373)
Biosicherheitsstufe	2

Oberflächenantigene	HLA A3, Aw32, Cw2
Isoenzyme	G6PD, A
Viren	EBV (EBNA positiv)

Nährboden	RPMI 1640, w: 2,1 mM stabiles Glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820700a)
Mittlere Supplemente	Supplemente des Mediums mit 10% FBS
Subkultivierung	Die Zellsuspension im Kolben durch Auf- und Abpipettieren vorsichtig homogenisieren, dann eine repräsentative Probe zur Bestimmung der Zelldichte pro ml entnehmen. Die Suspension mit frischem Kulturmedium auf eine Zellkonzentration von 1 x 10^5 Zellen/ml verdünnen und die eingestellte Suspension zur weiteren Kultivierung in neue Kolben aliquotieren.
Einfriermedium	CM-1 (Cytion Katalognummer 800100) oder CM-ACF (Cytion Katalognummer 806100)
Handhabung von kryokonservierten Kulturen	Vergewissern Sie sich, dass das Fläschchen bei der Lieferung tiefgefroren ist, da die Zellen auf Trockeneis versandt werden, um während des Transports optimale Temperaturen zu erhalten. Lagern Sie das Kryofläschchen nach Erhalt entweder sofort bei Temperaturen unter -150 °C, um die Unversehrtheit der Zellen zu gewährleisten, oder fahren Sie mit Schritt 3 fort, wenn eine sofortige Kultivierung erforderlich ist. Für eine sofortige Kultivierung tauen Sie das Fläschchen schnell auf, indem Sie es in ein 37°C warmes Wasserbad mit sauberem Wasser und einem antimikrobiellen Mittel eintauchen und 40-60 Sekunden lang vorsichtig schütteln, bis ein kleiner Eisklumpen zurückbleibt. Führen Sie alle nachfolgenden Schritte unter sterilen Bedingungen in einer Abzugshaube durch und desinfizieren Sie das Kryo-Fläschchen vor dem Öffnen mit 70%igem Ethanol. Das desinfizierte Fläschchen vorsichtig öffnen und die Zellsuspension unter vorsichtigem Mischen in ein 15-ml-Zentrifugenröhrchen mit 8 ml Kulturmedium bei Raumtemperatur überführen. Zentrifugieren Sie das Gemisch 3 Minuten lang bei 300 x g, um die Zellen abzutrennen, und verwerfen Sie den Überstand mit dem restlichen Gefriermedium vorsichtig. Sie können die Zentrifugation auch überspringen, aber das restliche Gefriermedium nach 24 Stunden entfernen. Das Zellpellet vorsichtig in 10 ml frischem Kulturmedium resuspendieren. Bei adhärenten Zellen die Suspension auf zwei T25-Kulturflaschen aufteilen; bei Suspensionskulturen das gesamte Medium in eine T25-Flasche überführen, um eine effektive Zellinteraktion und ein effektives Wachstum zu fördern. Halten Sie sich an die festgelegten Subkulturprotokolle, um ein kontinuierliches Wachstum und die Aufrechterhaltung der Zelllinie zu gewährleisten und zuverlässige Versuchsergebnisse zu erzielen.

Sterilität	Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.
STR profile	Amelogenin: x,y CSF1PO: 12,15 D13S317: 12,14 D16S539: 10,12 D5S818: 9,10 D7S820: 11 TH01: 7 TPOX: 6,9 vWA: 17,19 D3S1358: 15,16 D21S11: 29 D18S51: 15,17 Penta E: 14,16 Penta D: 10,11 D8S1179: 14 FGA: 22 D6S1043: 11,13 D2S1338: 17,22 D12S391: 15 D19S433: 12.2,16.2

EB3-Zellen

Allgemeine Informationen

Merkmale

Identifikatoren / Biologische Schutzstufe / Zitation

Expression / Mutation

Handhabung

Qualitätskontrolle / Genetisches Profil / HLA