U2OS-CRISPR-TPR-SNAP細胞

€800.00*

製品はドライアイスで凍結保存された状態でクライオチューブにて出荷されます。各クライオチューブには通常、付着性細胞株の場合3×10⁶細胞、浮遊性細胞株の場合5×10^⁶ 細胞が含まれます（詳細はバッチごとのCoAを参照）。

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cryovial

製品番号 300667

安全データシート

製品シート

分析証明書（CoA）

第三者協定

説明	U2OS-CRISPR-TPR-SNAPは、U2OS細胞由来のゲノム編集ヒト骨肉腫細胞株であり、内因性TPR（転座プロモーター領域）遺伝子がCRISPR/Cas9技術を用いて改変され、フレーム内SNAPタグをコードするようにされている。 TPRは核孔複合体（NPC）の核質側にある核小胞体に局在する大型のコイルドコイル構造を持つヌクレオポリンである。TPRの内因性遺伝子座にタグを付加することで、融合タンパク質は生体内の調節機構下で発現し、生理的発現レベルを維持するとともに核小胞体構造への適切な組み込みを保つ。 SNAPタグにより、生細胞または固定細胞においてベンジルグアニン結合型蛍光基質を用いたTPRの共有結合的標識が可能となり、高特異的かつ安定した可視化を実現する。 U2OS-CRISPR-TPR-SNAP細胞において、標識されたTPRは核膜上で特徴的な点状リング状分布を示し、これはNPC関連核バスケット構造に対応する。本システムは、定量的蛍光顕微鏡法、超解像イメージング、パルスチェイス標識法、ならびに核バスケットの組立と分解動態の研究に最適である。U2OS細胞の平坦な形態と大型核は、核膜関連構造の高解像度イメージングを容易にする。 TPRはmRNA輸出、核輸送調節、核周辺部におけるクロマチン組織化、空間的ゲノム組織化において重要な役割を果たす。また核輸送関連サブコンパートメントの形成や、核孔関連領域からのヘテロクロマチン排除にも関与している。 U2OS-CRISPR-TPR-SNAPは、核バスケットの構造と動態の解明、核細胞質間輸送機構の調査、および内因性発現条件下での核膜関連クロマチン相互作用の研究を行うための、生理学的に関連性の高いモデルを提供する。
生物	人間
組織	骨
病気	骨肉腫

年齢	15年
性別	女性
エスニシティ	白人
形態学	上皮様
成長特性	信者

引用	U2OS-CRISPR-TPR-SNAP（Cytionカタログ番号300667）
バイオセーフティレベル	1
NCBI_TaxID	9606
預金者	エレンバーグ・ラボ（EMBL）
GMOステータス	GMO-S1：このヒト骨肉腫細胞株（U2OS-CRISPR-TPR-SNAP）は、TPR核バスケットタンパク質の蛍光および化学標識を可能にするCRISPR改変TPR-SNAP融合体を含む。このコンストラクトは安定的に組み込まれている。この分類はドイツ国内でのみ適用され、他の国では異なる場合がある。

タンパク質発現	TPR、SNAPタグ

培地	McCoys 5a、w：3.0g/L グルコース、w：安定グルタミン、w：2.0mM ピルビン酸ナトリウム、w：2.2g/L NaHCO3 (Cytion article number 820200a)
サプリメント	培地に10% FBS、3.0 g/Lグルコース、安定グルタミン、2.0 mMピルビン酸ナトリウム、2.2 g/L NaHCO3、1% NEAAを添加する。
解離試薬	アキュターゼ
サブカルチャー	接着した細胞から古いメデュームを取り除き、カルシウムとマグネシウムを除いたPBSで洗浄する。T25フラスコでは3-5ml、T75フラスコでは5-10mlのPBSを使用する。次に、T25フラスコでは1-2ml、T75フラスコでは2.5mlのアキュターゼで細胞を完全に覆う。室温で8-10分間インキュベートし、細胞を剥離させる。インキュベーション後、細胞を10mlの培地と静かに混合して再懸濁し、300xgで3分間遠心する。上清を捨て、細胞を新しいメデュームに懸濁し、新しいメデュームの入った新しいフラスコに移す。
フリーズ・ミディアム	凍結保存培地としては、融解後の生存率を十分に高めるために完全増殖培地（FBSを含む）＋10％DMSO、または回復を促進し凍結によるストレスを軽減するために最適化された浸透保護剤と代謝安定剤を含むCM-1（Cytionカタログ番号800100）を使用している。
細胞の解凍と培養	輸送中の最適温度を維持するため、細胞はドライアイスで輸送される。凍結バイアルを受け取ったら、細胞の完全性を保つために-150℃以下で直ちに保存するか、直ちに培養が必要な場合はステップ3に進む。直ちに培養する場合は、バイアルを清浄な水と抗菌剤を入れた37℃のウォーターバスに浸し、小さな氷の塊が残るまで40～60秒間静かに攪拌して速やかに融解する。凍結バイアルを開封する前に70％エタノールで消毒する。消毒したバイアルを注意深く開け、細胞懸濁液を8mlの室温培養液を入れた15ml遠心チューブに移し、穏やかに混ぜる。混合物を300 x gで3分間遠心して細胞を分離し、残留凍結培地を含む上清を注意深く捨てる。細胞ペレットを10mlの新しい培養液に静かに懸濁する。接着細胞の場合は、懸濁液を2つのT25培養フラスコに分け、懸濁培養の場合は、細胞の相互作用と増殖を効果的に促進するために、全ての培地を1つのT25培養フラスコに移す。細胞株の継続的な増殖と維持のため、確立された継代培養プロトコールに従い、信頼できる実験結果を確保する。
インキュベーションの雰囲気	37℃、5%_CO2、加湿雰囲気。
フラスコ・コーティング	解凍後の最適な接着と生存率を得るためには、コラーゲンコートフラスコまたはプレートの使用を推奨する。
凍結手順	凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。
配送条件	凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。
保管条件	長期保存の場合、バイアルを-150～-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

不妊症	マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査を受けている。

ロット番号	証明書の種類	日付	カタログ番号
300667-280923	分析証明書	23. May. 2025	300667

この細胞株は、第三者との契約が必要であるため、標準的なサイシオンのMTAでは入手できないことにご注意ください。

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP細胞

一般情報

特徴

規制データ

生体分子データ

ハンドリング

品質管理／遺伝子プロファイル／HLA

分析証明書（CoA）

第三者協定