U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133細胞

€800.00*

製品はドライアイスで凍結保存された状態でクライオチューブにて出荷されます。各クライオチューブには通常、付着性細胞株の場合3×10⁶細胞、浮遊性細胞株の場合5×10^⁶ 細胞が含まれます（詳細はバッチごとのCoAを参照）。

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cryovial

製品番号 300666

安全データシート

製品シート

分析証明書（CoA）

第三者協定

説明	U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133は、親株U2OSを背景とする遺伝子改変ヒト骨肉腫細胞株であり、CRISPR/Cas9によるゲノム編集を用いて内因性NUP133遺伝子座を改変し、C末端にSNAPfタグをコードするようにしたものである。 NUP133は核孔複合体（NPC）の組立と維持に不可欠な構造サブコンプレックスであるYコンプレックス（NUP107-160コンプレックス）の中核構成要素である。内因性遺伝子座にSNAPfコード配列をフレーム内に導入することで、融合タンパク質は生体内の調節機構下で発現され、生理的発現レベルと細胞内局在が保持される。 SNAPfタグは、ベンジルグアニン結合基を有する基質と共有結合反応する人工O6-アルキルグアニン-DNAアルキル転移酵素であるSNAPタグの高速標識変異体である。これにより、細胞透過性または非透過性のSNAP基質を用いて、生細胞または固定細胞内のNup133を高度に特異的かつ汎用的に蛍光標識することが可能となる。 U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133細胞では、融合タンパク質は核膜に局在し、核孔複合体（NPC）に特徴的な点状パターンを示す。タグ付けが内因性遺伝子座で発生するため、NPCの化学量論的組成と構造は最小限の擾乱しか受けず、このモデルは定量的超解像顕微鏡法、単一分子追跡、NPCの組み立てと分解の動態解析に適している。この細胞株は、核輸送、核細胞質間輸送のダイナミクス、間期および分裂後核再構築時のNPC生合成、ならびに孔骨格内におけるY複合体の構造的組織化を研究するための堅牢なプラットフォームを提供する。 U2OS細胞株の背景は平坦な形態と大きな核を有し、高解像度イメージングを容易にする。U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133細胞は、パルス・チェイス標識実験、相関光電子顕微鏡法、および追加の内因性タグ付き核孔タンパク質や輸送因子との組み合わせによる多色イメージング手法に特に適している。
生物	人間
組織	骨
病気	骨肉腫

年齢	15年
性別	女性
エスニシティ	白人
形態学	上皮様
成長特性	信者

引用	U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133（Cytionカタログ番号300666）
バイオセーフティレベル	1
NCBI_TaxID	9606
預金者	エレンバーグ・ラボ（EMBL）
GMOステータス	GMO-S1：このヒト骨肉腫細胞株（U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133）は、CRISPR導入SNAPf-Nup133融合体を含み、Nup133ヌクレオポリンの蛍光タギングを可能にする。インサートは安定的に存在する。この分類はドイツ国内でのみ適用され、他の地域では異なる場合がある。

タンパク質発現	Nup133, SNAPfタグ

培地	McCoys 5a、w：3.0g/L グルコース、w：安定グルタミン、w：2.0mM ピルビン酸ナトリウム、w：2.2g/L NaHCO3 (Cytion article number 820200a)
サプリメント	培地に10% FBS、3.0 g/Lグルコース、安定グルタミン、2.0 mMピルビン酸ナトリウム、2.2 g/L NaHCO3、1% NEAAを添加する。
解離試薬	アキュターゼ
サブカルチャー	接着した細胞から古いメデュームを取り除き、カルシウムとマグネシウムを除いたPBSで洗浄する。T25フラスコでは3-5ml、T75フラスコでは5-10mlのPBSを使用する。次に、T25フラスコでは1-2ml、T75フラスコでは2.5mlのアキュターゼで細胞を完全に覆う。室温で8-10分間インキュベートし、細胞を剥離させる。インキュベーション後、細胞を10mlの培地と静かに混合して再懸濁し、300xgで3分間遠心する。上清を捨て、細胞を新しいメデュームに懸濁し、新しいメデュームの入った新しいフラスコに移す。
フリーズ・ミディアム	凍結保存培地としては、融解後の生存率を十分に高めるために完全増殖培地（FBSを含む）＋10％DMSO、または回復を促進し凍結によるストレスを軽減するために最適化された浸透保護剤と代謝安定剤を含むCM-1（Cytionカタログ番号800100）を使用している。
細胞の解凍と培養	輸送中の最適温度を維持するため、細胞はドライアイスで輸送される。凍結バイアルを受け取ったら、細胞の完全性を保つために-150℃以下で直ちに保存するか、直ちに培養が必要な場合はステップ3に進む。直ちに培養する場合は、バイアルを清浄な水と抗菌剤を入れた37℃のウォーターバスに浸し、小さな氷の塊が残るまで40～60秒間静かに攪拌して速やかに融解する。凍結バイアルを開封する前に70％エタノールで消毒する。消毒したバイアルを注意深く開け、細胞懸濁液を8mlの室温培養液を入れた15ml遠心チューブに移し、穏やかに混ぜる。混合物を300 x gで3分間遠心して細胞を分離し、残留凍結培地を含む上清を注意深く捨てる。細胞ペレットを10mlの新しい培養液に静かに懸濁する。接着細胞の場合は、懸濁液を2つのT25培養フラスコに分け、懸濁培養の場合は、細胞の相互作用と増殖を効果的に促進するために、全ての培地を1つのT25培養フラスコに移す。細胞株の継続的な増殖と維持のため、確立された継代培養プロトコールに従い、信頼できる実験結果を確保する。
インキュベーションの雰囲気	37℃、5%_CO2、加湿雰囲気。
フラスコ・コーティング	解凍後の最適な接着と生存率を得るためには、コラーゲンコートフラスコまたはプレートの使用を推奨する。
凍結手順	凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。
配送条件	凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。
保管条件	長期保存の場合、バイアルを-150～-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

不妊症	マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査を受けている。

ロット番号	証明書の種類	日付	カタログ番号
300666-101225	分析証明書	22. Jan. 2026	300666

この細胞株は、第三者との契約が必要であるため、標準的なサイシオンのMTAでは入手できないことにご注意ください。

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133細胞

一般情報

特徴

規制データ

生体分子データ

ハンドリング

品質管理／遺伝子プロファイル／HLA

分析証明書（CoA）

第三者協定