U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2細胞

€800.00*

製品はドライアイスで凍結保存された状態でクライオチューブにて出荷されます。各クライオチューブには通常、付着性細胞株の場合3×10⁶細胞、浮遊性細胞株の場合5×10^⁶ 細胞が含まれます（詳細はバッチごとのCoAを参照）。

税抜き価格＋送料

cryovial

製品番号 300663

安全データシート

製品シート

第三者協定

説明	U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2は、U2OS細胞由来のゲノム編集ヒト骨肉腫細胞株であり、内因性RANBP2（別名NUP358）遺伝子座がCRISPR/Cas9により改変され、天然タンパク質とフレームを合わせた位置にSNAPfタグをコードするようにされている。 Nup358/RanBP2は核孔複合体（NPC）の細胞質側フィラメントに局在する大型ヌクレオポリンであり、核細胞質輸送、SUMO化、有糸分裂過程において重要な役割を果たす。内因性タグ付けにより、SNAPf-Nup358は生理的なプロモーター制御下で発現され、天然の発現レベルを維持するとともに、過剰発現システムに伴うアーティファクトを最小限に抑える。 SNAPfタグはSNAPタグの高速標識変異体であり、ベンジルグアニン結合基を有する基質と共有結合し、生細胞または固定細胞におけるNup358の選択的かつ安定な蛍光標識を可能にします。 U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2細胞では、融合タンパク質は細胞質NPCフィラメントに特徴的な点状分布で核膜に局在します。この構造は、NPCの構造と動態を研究するための高解像度蛍光イメージング、超解像顕微鏡、パルスチェイス標識、単一分子追跡アプローチをサポートします。 U2OS細胞の平坦な形態と大きな核は、核膜構造の定量的イメージングをさらに容易にする。本モデル系は、Nup358がCRM1/エクスポーチン依存性核輸出、Ran GTPaseサイクル制御、細胞質輸送プラットフォームの空間的組織化において担う特異的役割の解明を可能とする。Nup358が有糸分裂紡錘体形成及び動原体機能に関与することを踏まえ、本細胞株は核孔タンパク質の細胞周期依存的再分布や有糸分裂中の核孔複合体解離・再構築の研究にも適している。 U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2は、ヒト細胞における核孔複合体の細胞質側の構造的・機能的側面を解明するための生理学的に関連性の高いプラットフォームを提供する。
生物	人間
組織	骨
病気	骨肉腫

年齢	15年
性別	女性
エスニシティ	白人
形態学	上皮様
成長特性	信者

引用	U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2（Cytionカタログ番号300663）
バイオセーフティレベル	1
NCBI_TaxID	9606
預金者	エレンバーグ・ラボ（EMBL）
GMOステータス	GMO-S1：このヒト骨肉腫細胞株（U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2）は、核膜孔細胞質線維の正確な標識を可能にするCRISPR改変SNAPf-Nup358/RanBP2融合体を含む。この修飾は安定的に組み込まれている。この分類はドイツ国内でのみ適用され、他の国では異なる場合があります。

タンパク質発現	Nup358/RanBP2、SNAPfタグ

培地	McCoys 5a、w：3.0g/L グルコース、w：安定グルタミン、w：2.0mM ピルビン酸ナトリウム、w：2.2g/L NaHCO3 (Cytion article number 820200a)
サプリメント	培地に10% FBS、3.0 g/Lグルコース、安定グルタミン、2.0 mMピルビン酸ナトリウム、2.2 g/L NaHCO3、1% NEAAを添加する。
解離試薬	アキュターゼ
サブカルチャー	接着した細胞から古いメデュームを取り除き、カルシウムとマグネシウムを除いたPBSで洗浄する。T25フラスコでは3-5ml、T75フラスコでは5-10mlのPBSを使用する。次に、T25フラスコでは1-2ml、T75フラスコでは2.5mlのアキュターゼで細胞を完全に覆う。室温で8-10分間インキュベートし、細胞を剥離させる。インキュベーション後、細胞を10mlの培地と静かに混合して再懸濁し、300xgで3分間遠心する。上清を捨て、細胞を新しいメデュームに懸濁し、新しいメデュームの入った新しいフラスコに移す。
フリーズ・ミディアム	凍結保存培地としては、融解後の生存率を十分に高めるために完全増殖培地（FBSを含む）＋10％DMSO、または回復を促進し凍結によるストレスを軽減するために最適化された浸透保護剤と代謝安定剤を含むCM-1（Cytionカタログ番号800100）を使用している。
細胞の解凍と培養	輸送中の最適温度を維持するため、細胞はドライアイスで輸送される。凍結バイアルを受け取ったら、細胞の完全性を保つために-150℃以下で直ちに保存するか、直ちに培養が必要な場合はステップ3に進む。直ちに培養する場合は、バイアルを清浄な水と抗菌剤を入れた37℃のウォーターバスに浸し、小さな氷の塊が残るまで40～60秒間静かに攪拌して速やかに融解する。凍結バイアルを開封する前に70％エタノールで消毒する。消毒したバイアルを注意深く開け、細胞懸濁液を8mlの室温培養液を入れた15ml遠心チューブに移し、穏やかに混ぜる。混合物を300 x gで3分間遠心して細胞を分離し、残留凍結培地を含む上清を注意深く捨てる。細胞ペレットを10mlの新しい培養液に静かに懸濁する。接着細胞の場合は、懸濁液を2つのT25培養フラスコに分け、懸濁培養の場合は、細胞の相互作用と増殖を効果的に促進するために、全ての培地を1つのT25培養フラスコに移す。細胞株の継続的な増殖と維持のため、確立された継代培養プロトコールに従い、信頼できる実験結果を確保する。
インキュベーションの雰囲気	37℃、5%_CO2、加湿雰囲気。
フラスコ・コーティング	解凍後の最適な接着と生存率を得るためには、コラーゲンコートフラスコまたはプレートの使用を推奨する。
凍結手順	凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。
配送条件	凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。
保管条件	長期保存の場合、バイアルを-150～-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

不妊症	マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査を受けている。

この細胞株は、第三者との契約が必要であるため、標準的なサイシオンのMTAでは入手できないことにご注意ください。

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2細胞

一般情報

特徴

規制データ

生体分子データ

ハンドリング

品質管理／遺伝子プロファイル／HLA

第三者協定