Phương pháp 2: Phục hồi dòng tế bào đông lạnh để đạt được độ sống và khả năng phát triển tối ưu

Việc rã đông và phục hồi đúng cách các dòng tế bào đông lạnh là yếu tố quan trọng để duy trì khả năng sống sót của tế bào và thành công trong thí nghiệm. Hướng dẫn chi tiết này trình bày các bước quan trọng và các yếu tố cần lưu ý khi phục hồi các tế bào được bảo quản đông lạnh từ bộ sưu tập dòng tế bào của Cytion.

Thiết bị và vật liệu cần thiết

Các lưu ý về an toàn

Việc khôi phục dòng tế bào yêu cầu tuân thủ nghiêm ngặt các quy trình an toàn sinh học. Khi làm việc với dòng tế bào đông lạnh, cần lưu ý rằng các ống chứa trong nitơ lỏng có thể nổ khi làm ấm do khí nitơ bị kẹt bên trong. Luôn sử dụng trang thiết bị bảo hộ cá nhân (PPE) phù hợp khi xử lý ống đông lạnh và rã đông trong tủ an toàn sinh học được chứng nhận.

Quy trình từng bước

Thực hiện các bước sau đây một cách cẩn thận để đảm bảo thu hồi và khả năng sống sót tối ưu của tế bào.

1. Chuẩn bị trước khi rã đông

• Kiểm tra bảng dữ liệu dòng tế bào để xác định yêu cầu cụ thể
• Làm ấm môi trường nuôi cấy phù hợp đến 37°C
• Ghi nhãn các bình nuôi cấy với tên dòng tế bào, số lần truyền và ngày
• Chuẩn bị tủ an toàn sinh học vô trùng

2. Lấy ống ampoule an toàn

• Vận chuyển ống ampoule đông lạnh từ kho lưu trữ nitơ lỏng trong container phù hợp
• Đeo mặt nạ bảo hộ và găng tay cách nhiệt
• Giữ ống ampoule bằng khăn giấy thấm cồn
• Nới lỏng nắp một phần tư vòng (giải phóng nitơ bị kẹt) rồi vặn chặt lại

3. Quá trình rã đông

• Rã đông nhanh trong bể nước 37°C (1-2 phút)
• Duy trì sự hiện diện của các tinh thể băng nhỏ
• Giữ nắp ống thuốc cao hơn mực nước
• Khử trùng bề mặt ống tiêm bằng cồn 70%

4. Chuyển tế bào

• Chuyển nội dung vào ống vô trùng
• Thêm từ từ 5ml môi trường đã được làm ấm
• Tùy chọn: Kiểm tra độ sống bằng phương pháp loại trừ trypan blue
• Chuyển sang bình nuôi cấy với mật độ gieo hạt khuyến nghị

5. Chăm sóc sau khi rã đông

Đối với tế bào bám dính:
• Điều chỉnh thể tích môi trường nuôi cấy dựa trên kích thước bình nuôi cấy
• Lần thay môi trường đầu tiên loại bỏ chất bảo vệ đông lạnh còn sót lại
• Kiểm tra độ bám dính sau 4-6 giờ

Đối với tế bào treo lơ lửng:
• Ly tâm ở 150 x g trong 5 phút
• Hòa tan lại trong môi trường tươi
• Duy trì mật độ tế bào theo khuyến nghị

Hướng dẫn khắc phục sự cố

Các bước kiểm soát chất lượng

• Kiểm tra tế bào sau 24 giờ
• Xác minh hình thái tế bào phù hợp với đặc điểm dự kiến
• Ghi chép tỷ lệ thu hồi và độ sống còn
• Thực hiện kiểm tra xác thực nếu cần thiết

Yêu cầu về tài liệu

Bảo quản và tham khảo

Ghi chép chi tiết quá trình hồi sinh trong sổ ghi chép thí nghiệm của bạn. Ghi lại số lô của môi trường nuôi cấy và các chất bổ sung được sử dụng. Để duy trì sự phát triển tối ưu của tế bào, hãy tham khảo hướng dẫn nuôi cấy tế bào cụ thể.

Kết luận

Sự phục hồi thành công của dòng tế bào phụ thuộc vào việc chuẩn bị cẩn thận, thực hiện nhanh chóng và kỹ thuật đúng đắn. Tuân thủ quy trình này đảm bảo độ sống sót tối ưu của tế bào và tính tái hiện của thí nghiệm. Đối với các yêu cầu cụ thể của dòng tế bào, luôn tham khảo Giấy chứng nhận phân tích của bạn.

Để được hỗ trợ kỹ thuật hoặc hỏi đáp về dòng tế bào cụ thể, vui lòng liên hệ với Bộ phận Hỗ trợ Kỹ thuật Cytion.