Bảo quản lạnh tế bào phát quang

Bảo quản tế bào phát huỳnh quang đòi hỏi phải cân nhắc kỹ lưỡng cả quy trình bảo quản đông lạnh và việc duy trì độ ổn định của protein phát huỳnh quang. Tại Cytion, chúng tôi đã phát triển các quy trình tối ưu hóa để đảm bảo rằng các tế bào được đánh dấu huỳnh quang của bạn duy trì cả khả năng sống sót và cường độ phát huỳnh quang sau khi rã đông.

Ổn định của protein huỳnh quang trong quá trình bảo quản lạnh

Protein huỳnh quang, đặc biệt là GFP và các biến thể của nó, thể hiện độ ổn định đáng kể trong quá trình bảo quản đông lạnh đúng cách. Nghiên cứu của chúng tôi tại Cytion, đặc biệt với các dòng tế bào như HK EGFP-alpha-tubulin/H2B-mCherry Cells và HK EGFP-H2B Cells, cho thấy protein huỳnh quang duy trì cấu trúc nguyên vẹn khi được đông lạnh trong điều kiện tối ưu. Yếu tố quan trọng để bảo quản thành công là sử dụng chất bảo vệ đông lạnh phù hợp và tuân thủ các quy trình tiêu chuẩn. Chúng tôi khuyến nghị sử dụng dung dịch đông lạnh CM-1, được thiết kế đặc biệt để bảo vệ cấu trúc tế bào và duy trì độ ổn định của protein trong quá trình đông lạnh. Khi áp dụng các kỹ thuật bảo quản đông lạnh đúng cách, biểu hiện của protein huỳnh quang thường duy trì trên 90% so với mức trước khi đông lạnh sau khi rã đông.

Tầm quan trọng của thành phần dung dịch đông lạnh đối với việc bảo quản độ phát quang

Thành phần của dung dịch đông lạnh đóng vai trò quan trọng trong việc bảo tồn cả khả năng sống sót của tế bào và cường độ huỳnh quang. Tại Cytion, chúng tôi đã phát triển các dung dịch đông lạnh chuyên dụng để giải quyết những thách thức đặc thù trong việc bảo tồn tế bào huỳnh quang. Dung dịch đông lạnh CM-ACF, không chứa huyết thanh của chúng tôi đã được tối ưu hóa đặc biệt để bảo vệ protein huỳnh quang trong quá trình đông lạnh. Đối với các dòng tế bào huỳnh quang nhạy cảm như HK EGFP-Cap-D2 Cells, chúng tôi khuyến nghị sử dụng môi trường đông lạnh CM-1 - 100 ml, chứa nồng độ tối ưu của các chất bảo vệ đông lạnh giúp ngăn chặn sự hình thành tinh thể băng đồng thời duy trì tính ổn định của fluorophore. Độ thẩm thấu cân bằng và các chất bảo vệ trong môi trường đảm bảo rằng các protein huỳnh quang duy trì cấu trúc tự nhiên của chúng trong suốt quá trình đông lạnh và rã đông, dẫn đến tín hiệu huỳnh quang nhất quán sau khi rã đông.

Đông lạnh tốc độ kiểm soát: Yếu tố quan trọng để duy trì độ phát quang

Quá trình đông lạnh có kiểm soát là yếu tố quan trọng để duy trì tính toàn vẹn của protein huỳnh quang trong quá trình bảo quản đông lạnh. Tại Cytion, nghiên cứu của chúng tôi trên các dòng tế bào huỳnh quang như NRK-EGFP-H2B Cells và U2OS-CRISPR-NUP96-SNAP clone no.33 Cells cho thấy tốc độ làm lạnh -1°C mỗi phút là tối ưu để bảo tồn cường độ huỳnh quang. Phương pháp kiểm soát này, kết hợp với môi trường đông lạnh CM-ACF - không chứa huyết thanh - 100 ml của chúng tôi, giúp giảm thiểu sự hình thành các tinh thể băng gây hại có thể ảnh hưởng đến cấu trúc protein. Chúng tôi khuyến nghị sử dụng hộp đông lạnh isopropanol hoặc tủ đông lập trình để đạt được tốc độ làm lạnh nhất quán. Phương pháp này đã chứng minh hiệu quả đặc biệt trong việc bảo tồn các cấu trúc protein huỳnh quang phức tạp, như những cấu trúc có trong dòng tế bào HK EGFP-LaminA/H2B-mCherry của chúng tôi.

Các lưu ý đặc biệt khi xử lý tế bào biểu hiện GFP và RFP

Các protein huỳnh quang khác nhau yêu cầu các phương pháp xử lý cụ thể để bảo quản tối ưu. Dựa trên kinh nghiệm của chúng tôi tại Cytion với các tế bào như HK EGFP-LaminB1/H2B-mCherry Cells, các biến thể GFP thường ổn định hơn trong quá trình đông lạnh so với các biến thể RFP. Đối với tế bào biểu hiện GFP, chúng tôi khuyến nghị sử dụng môi trường đông lạnh CM-ACF - không chứa huyết thanh - 100 ml, cung cấp bảo vệ vượt trội cho cấu trúc fluorophore. Tế bào biểu hiện RFP, như tế bào HK-CRISPR-Pom121-mCherry #32 của chúng tôi, được hưởng lợi từ việc bổ sung chất chống oxy hóa trong môi trường đông lạnh để ngăn ngừa sự phân hủy fluorophore. Các điểm khác biệt chính trong xử lý bao gồm:

• Tế bào biểu hiện GFP: Tốc độ làm lạnh tiêu chuẩn (-1°C/phút) với môi trường không chứa huyết thanh
• Tế bào biểu hiện RFP: Tốc độ làm lạnh nhanh hơn một chút (-1,5°C/phút) với môi trường bổ sung chất chống oxy hóa
• Cả hai loại: Hạn chế tiếp xúc với ánh sáng trong quá trình xử lý
• Bảo vệ khỏi sự biến động pH trong quá trình đông lạnh

Thời gian phục hồi sau khi rã đông và đánh giá độ phát quang

Sau khi bảo quản đông lạnh, các tế bào phát huỳnh quang cần có thời gian phục hồi cụ thể để khôi phục cường độ phát huỳnh quang tối ưu. Các nghiên cứu của chúng tôi trên tế bào HEK293 biểu hiện protein phát huỳnh quang cho thấy thời gian phục hồi từ 24-48 giờ là rất quan trọng. Trong thời gian này, các tế bào nên được duy trì trong môi trường nuôi cấy hoàn chỉnh bổ sung kháng sinh tiêu chuẩn. Chúng tôi đã quan sát thấy cường độ phát huỳnh quang thường đạt đỉnh điểm vào khoảng 72 giờ sau khi rã đông, đặc biệt là ở các dòng tế bào như HEK293T biểu hiện các biến thể GFP.

Tối ưu hóa chiến lược bảo quản tế bào phát huỳnh quang

Thành công trong việc bảo quản tế bào phát huỳnh quang phụ thuộc vào một phương pháp bảo quản đông lạnh toàn diện. Tại Cytion, chúng tôi khuyến nghị sử dụng môi trường đông lạnh CM-1 kết hợp với các quy trình đông lạnh có kiểm soát tốc độ. Việc kiểm tra định kỳ độ giữ huỳnh quang thông qua cytometry dòng chảy hoặc kính hiển vi huỳnh quang đảm bảo kết quả nhất quán. Đối với các ứng dụng chuyên biệt, đội ngũ hỗ trợ kỹ thuật của chúng tôi có thể cung cấp các quy trình tùy chỉnh phù hợp với dòng tế bào phát huỳnh quang cụ thể của bạn. Hãy nhớ rằng việc xử lý đúng cách trong toàn bộ quá trình - từ chuẩn bị trước khi đông lạnh đến phục hồi sau khi rã đông - là yếu tố quan trọng để duy trì cả độ sống của tế bào và cường độ huỳnh quang. Hãy tin tưởng vào chuyên môn và sản phẩm của Cytion để giúp bạn đạt được kết quả tối ưu trong nhu cầu bảo quản tế bào huỳnh quang của mình.