Objem: 100 ml
Skladovanie: ≤ –15 °C
Sterilita: Sterilne filtrované
Stabilný glutamínový roztok (L-alanil-L-glutamín, 200 mM) je vysoko stabilná dipeptidová forma L-glutamínu navrhnutá ako priama náhrada za bežný L-glutamín v kultivačných médiách. L-glutamín je esenciálna aminokyselina a hlavný zdroj energie pre kultivované bunky, ktorý zohráva kľúčovú úlohu v raste buniek, metabolizme a syntéze bielkovín.
Použitie a výhody
V štandardných tekutých médiách sa L-glutamín pri teplote 37 °C relatívne rýchlo rozkladá, čo vedie k tvorbe toxických vedľajších produktov, ako sú amónne ióny, ktoré môžu negatívne ovplyvniť životaschopnosť buniek a výsledky experimentov. Stabilný glutamín prekonáva toto obmedzenie tým, že poskytuje nerozkladateľnú dipeptidovú formu, ktorá zostáva v kultivačných podmienkach nezmenená.
Bunky enzymaticky štiepia dipeptidovú väzbu, aby uvoľnili L-glutamín podľa potreby, čím zabezpečujú nepretržitý prísun čerstvého glutamínu a zároveň zabraňujú hromadeniu škodlivých odpadových produktov. Vďaka tomu je tento roztok obzvlášť výhodný pre dlhodobé kultivácie buniek a systémy rastu s vysokou hustotou.
Zloženie a použitie
Roztok L-alanyl-L-glutamínu sa pripravuje vo vode určenej na kultiváciu buniek v koncentrácii 200 mM a je sterilizovaný filtrovaním pre aplikácie citlivé na kontamináciu. Môže sa priamo riediť do kompletných médií podľa experimentálnych požiadaviek. Skladujte pri teplote ≤ –15 °C a vyhnite sa opakovaným cyklom zmrazovania a rozmrazovania, aby sa zachovala stabilita produktu.
Iba na výskumné účely. Nie je určené na použitie v diagnostických alebo terapeutických postupoch. Nie je určené na použitie u ľudí alebo zvierat.
Objem: 100 ml
Skladovanie: +2 °C až +8 °C
Sterilita: Sterilne filtrované
HEPES pufrový roztok (1 M), známy aj ako kyselina N-2-hydroxyetylpiperazín-N-2-etánsulfonová, je zwitteriónové organické pufrovacie činidlo široko používané v kultivačných médiách buniek. Je navrhnuté na udržanie stabilných podmienok pH v fyziologickom rozmedzí 6,7 až 8,6, čím podporuje optimálnu funkciu buniek počas in vitro aplikácií.
Aplikácia a výhody
HEPES poskytuje spoľahlivú pufrovaciu kapacitu v systémoch bunkových kultúr, najmä keď sa s bunkami manipuluje mimo CO₂ inkubátora. Pridanie 10–25 mM HEPES do kultivačných médií ponúka zvýšenú stabilitu pH počas dlhších manipulačných období, čo pomáha udržiavať konzistentné experimentálne podmienky.
Tento pufrovací prostriedok je neprepustný pre membrány, má minimálny vplyv na biochemické reakcie a vykazuje silnú chemickú a enzymatickú stabilitu. Vďaka týmto vlastnostiam je vhodný pre širokú škálu aplikácií v oblasti kultivácie buniek a biochemických aplikácií.
Zloženie a použitie
Roztok sa dodáva ako 1 M koncentrát pripravený vo vode vhodnej pre kultiváciu buniek a je sterilizovaný filtrovaním pre použitie v prostrediach citlivých na kontamináciu. V závislosti od požiadaviek aplikácie ho možno zriediť na požadovanú pracovnú koncentráciu. Skladujte pri teplote +2 °C až +8 °C a manipulujte za aseptických podmienok, aby sa zachovala integrita produktu.
Iba na výskumné účely. Nie je určené na použitie v diagnostických alebo terapeutických postupoch. Nie je určené na použitie u ľudí alebo zvierat.
Objem: 50 ml
Skladovanie: +2 °C až +8 °C
Sterilita: Sterilne filtrované
Roztok D-(+)-glukózy (roztok dextrózy) je sterilný, pripravený na použitie doplnok obsahujúci prirodzene sa vyskytujúci cukor D-(+)-glukózu, hlavnú zložku bunkového metabolizmu. Glukóza sa podieľa na základných biologických procesoch, ako je produkcia energie, glykozylácia a tvorba glykánov, ktoré prispievajú k bunkovej štruktúre a funkcii.
Použitie a výhody
Tento roztok glukózy sa široko používa ako doplnok v kultivačných médiách a v mnohých aplikáciách bunkovej a molekulárnej biológie. Ako primárny zdroj uhlíka a energie glukóza podporuje rast buniek, proliferáciu a metabolickú aktivitu. Vďaka svojej úlohe v biosyntetických dráhach je tiež dôležitá pre udržanie normálnej bunkovej fyziológie a konzistencie experimentov.
Zloženie a použitie
Roztok sa dodáva vo vysokej koncentrácii 250 g/l glukózy, čo umožňuje flexibilné riedenie do kultivačných médií podľa experimentálnych požiadaviek. Je sterilizovaný filtrovaním, aby bola zaručená vhodnosť pre aplikácie citlivé na kontamináciu. Skladujte pri teplote +2 °C až +8 °C a manipulujte s ním asepticky, aby sa zachovala kvalita a stabilita produktu.
Iba na výskumné účely. Nie je určené na použitie v diagnostických alebo terapeutických postupoch. Nie je určené na použitie u ľudí alebo zvierat.
Objem: 10 ml
Skladovanie: +2 °C až +8 °C
Sterilita: Sterilne filtrované
Roztok inzulínu-transferínu-selénu (ITS) (100x) je chemicky definovaný doplnok určený pre širokú škálu aplikácií v bunkových kultúrach. Najčastejšie sa používa ako prísada do bazálnych kultivačných médií na podporu rastu buniek v podmienkach so zníženým obsahom séra alebo bez séra.
Použitie a výhody
Náš doplnok ITS poskytuje esenciálne zložky potrebné na optimálnu výkonnosť bezsérumových médií. Dopĺňaním konvenčných živných médií o ITS je možné výrazne znížiť potrebu fetálneho bovinného séra (FBS) na rutinnú údržbu mnohých bunkových línií. To pomáha minimalizovať variabilitu spojenú s použitím séra a zároveň udržiavať konzistentný rast a životaschopnosť buniek.
Inzulín podporuje bunkovú absorpciu a metabolizmus kľúčových živín, transferín uľahčuje transport železa a selén prispieva k antioxidačnej obrane a enzýmovej aktivite. Spolu tieto zložky podporujú vyvážený bunkový metabolizmus a zlepšujú reprodukovateľnosť v definovaných kultivačných systémoch.
Zloženie a použitie
Inzulín-transferín-selén (ITS) sa dodáva ako 100-násobne koncentrovaný roztok v Earleho vyváženom soľnom roztoku (EBSS) bez fenolovej červenej. Pre štandardné použitie zrieďte v pomere 1:100 do vhodného bazálneho média, aby ste dosiahli odporúčanú pracovnú koncentráciu. Skladujte pri teplote +2 °C až +8 °C a manipulujte v aseptických podmienkach, aby ste zachovali stabilitu a sterilitu produktu.
Iba na výskumné účely. Nie je určený na použitie v diagnostických alebo terapeutických postupoch. Nie je určený na použitie u ľudí ani zvierat.
Objem: 5 ml
Skladovanie: +2 °C až +8 °C
Sterilita: Sterilne filtrované
Roztok rekombinantného ľudského inzulínu je chemicky definovaný doplnok bežne používaný na kultiváciu bunkových línií cicavcov, vrátane buniek vaječníkov čínskeho škrečka (CHO). Tento roztok určený na kultiváciu buniek obsahuje rekombinantný ľudský inzulín exprimovaný v Saccharomyces cerevisiae, čo zaručuje vysokú čistotu a konzistentný výkon vo výskumných aplikáciách.
Použitie a výhody
Inzulín sa bežne pridáva do bezsérumových a chemicky definovaných médií na podporu rastu a produktivity buniek. Ako kľúčový regulačný hormón podporuje inzulín bunkovú absorpciu, využitie a ukladanie glukózy, aminokyselín a mastných kyselín. Takisto inhibuje rozpad glykogénu, bielkovín a lipidov, čím prispieva k zlepšeniu životaschopnosti buniek a metabolickej stability v kultivačných systémoch. Chemicky definovaná formulácia podporuje reprodukovateľnosť a minimalizuje variabilitu v citlivých pracovných postupoch bunkovej kultúry.
Biologické vlastnosti a použitie
Inzulín je dvojreťazcový polypeptidový hormón prirodzene produkovaný β-bunkami pankreatických ostrovčekov. Má molekulovú hmotnosť približne 5 800 Da. α
- a β-reťazce sú spojené dvoma medzireťazcovými disulfidovými väzbami a α-reťazec obsahuje jednu vnútornú disulfidovú väzbu. Pri aplikáciách v bunkových kultúrach by sa s roztokom malo zaobchádzať za aseptických podmienok a skladovať pri teplote +2 °C až +8 °C, aby sa zachovala stabilita a výkonnosť.
Iba na výskumné účely. Nie je určený na použitie v diagnostických alebo terapeutických postupoch. Nie je určený na použitie u ľudí ani zvierat.
Objem: 100 ml
Skladovanie: +2 °C až +8 °C
Sterilita: Sterilne filtrované
Roztok pyruvátu sodného (100 mM) je sterilný, pripravený na použitie doplnok určený na poskytovanie dodatočného, ľahko dostupného zdroja energie pre kultivačné médiá buniek. Pyruvát sodný hrá kľúčovú úlohu v bunkovom energetickom metabolizme a podporuje rast metabolicky aktívnych a rýchlo sa množiace bunky, ako sú napríklad nádorové bunky. Doplnok môže zvýšiť životaschopnosť buniek a pomôcť udržiavať metabolickú stabilitu v kultivačných systémoch.
Použitie a výhody
Tento roztok sa široko používa v bežnej bunkovej kultúre na obohatenie médií pyruvátom a podporu optimálnych podmienok rastu. Podporuje produkciu ATP, môže pomáhať znižovať oxidačný stres a prispieva k zlepšeniu metabolického výkonu kultivovaných buniek. Výrobok je vyrábaný vo vode vhodnej pre bunkové kultúry a sterilizovaný filtrovaním, čím zabezpečuje konzistentnú kvalitu a reprodukovateľnosť vo výskumných pracovných postupoch.
Použitie a kompatibilita
Odporúčaná konečná koncentrácia pre väčšinu aplikácií bunkových kultúr je 1 mM pyruvát sodný, ktorý sa dosiahne zriedením 100 mM zásobného roztoku v pomere 1:100 do kompletného kultivačného média. Roztok je kompatibilný s širokou škálou bazálnych médií a bunkových línií cicavcov. Skladujte pri teplote +2 °C až +8 °C a chráňte pred kontamináciou, aby sa zachovala stabilita produktu.
Iba na výskumné účely. Nie je určené na použitie v diagnostických alebo terapeutických postupoch. Nie je určené na použitie u ľudí alebo zvierat.
Objem: 100 ml Skladovanie: ≤-15 °C Sterilita: Sterilná filtrácia
Roztok antibiotík/antimykotík (100x ) je sterilný koncentrát pripravený na použitie určený na zníženie rizika mikrobiálnej kontaminácie v bunkových kultúrach a súvisiacich laboratórnych aplikáciách. Tento 100x roztok obsahuje osvedčenú kombináciu penicilínu, streptomycínu a amfotericínu B, ktorá poskytuje široké spektrum antimikrobiálnej aktivity proti grampozitívnym a gramnegatívnym baktériám, kvasinkám a vláknitým hubám. Prípravok je vhodný na použitie v kultúrach eukaryotických buniek, bakteriálnych médiách a iných systémoch citlivých na kontamináciu, čím podporuje čistú a konzistentnú laboratórnu prevádzku.
Použitie a výhody Tento roztok optimalizovaný pre bežné výskumné protokoly sa široko používa na udržiavanie aseptických podmienok v pracovných postupoch bunkových kultúr. Ponúka spoľahlivý výkon v prostrediach citlivých na kontamináciu, čím pomáha výskumníkom znížiť riziko nadmerného rastu mikroorganizmov bez toho, aby bolo ohrozené zdravie buniek alebo reprodukovateľnosť experimentov. Sterilne filtrované zloženie eliminuje potrebu ďalších krokov solubilizácie, čím podporuje zjednodušenú prípravu médií a znižuje variabilitu každodenných laboratórnych postupov.
Použitie a kompatibilita Na dosiahnutie štandardných pracovných koncentrácií roztok zrieďte v pomere 1:100 do kompletného kultivačného média. Produkt je kompatibilný so širokou škálou bunkových línií cicavcov a základných médií. Vďaka stálej dostupnosti zásob môžu výskumní pracovníci využívať výhody spoľahlivej kontinuity dodávok a zjednodušeného plánovania logistiky. Roztok by sa mal skladovať pri teplote ≤ -15 °C a chrániť pred opakovanými cyklami zmrazovania a rozmrazovania, aby sa zachovala jeho stabilita. Len na výskumné účely. Nie je určený na použitie pri diagnostických alebo terapeutických postupoch. Nie je určený na použitie u ľudí alebo zvierat.
Objem: 100 ml Skladovanie: sterilita: +2°C až +8°C Sterilná filtrácia
MEM Non-Essential Amino Acids (100x ) je sterilný doplnok určený na zvýšenie rastu a životaschopnosti buniek v systémoch bunkových kultúr cicavcov. Zloženie zodpovedá 100-násobnému koncentrátu neesenciálnych aminokyselín nachádzajúcich sa v štandardnom minimálnom esenciálnom médiu (MEM), čo umožňuje priame doplnenie základného média s minimálnou prípravou.
Použitie a výhody Tento doplnok poskytuje dodatočnú zásobu aminokyselín pre rýchlo sa množiace bunky alebo pre bunkové línie, ktoré stratili schopnosť syntetizovať neesenciálne aminokyseliny de novo. Zmiernením metabolickej záťaže biosyntézy podporuje lepšiu kinetiku rastu, predĺženú životaschopnosť a väčšiu experimentálnu konzistenciu
- najmä v kultúrach citlivých na živiny alebo s vysokou hustotou.
Zloženie a použitie Roztok obsahuje glycín, L-alanín, L-asparagín, kyselinu L-asparagovú, kyselinu L-glutámovú, L-prolín a L-serín. Je kompatibilný s MEM a väčšinou ostatných štandardných médií. Na použitie ho zrieďte v pomere 1:100 do konečného kultivačného média. Tento produkt je sterilne filtrovaný a pripravený na použitie bez ďalších manipulačných krokov. Len na výskumné účely. Nie je určený na použitie pri diagnostických alebo terapeutických postupoch. Nie je určený na použitie u ľudí alebo zvierat.
- šetrná alternatíva trypsínu
Accutase je roztok na oddeľovanie buniek, ktorý spôsobuje revolúciu v odvetví bunkových kultúr. Je to zmes proteolytických a kolagenolických enzýmov, ktorá napodobňuje účinok trypsínu a kolagenázy. Na rozdiel od trypsínu Accutase neobsahuje žiadne cicavčie ani bakteriálne zložky a je oveľa šetrnejší k bunkám, čo z neho robí ideálny roztok na rutinné oddeľovanie buniek od štandardného plastového riadu na kultiváciu tkanív a plastového riadu s adhéznym povlakom. V tomto príspevku na blogu sa budeme venovať výhodám a použitiu Accutase a tomu, ako mení pravidlá hry v oblasti bunkových kultúr.
Výhody Accutase
Accutase má oproti tradičným roztokom trypsínu niekoľko výhod. Po prvé, možno ju použiť vždy, keď je potrebné jemné a účinné oddelenie akejkoľvek adherentnej bunkovej línie, čím priamo nahrádza trypsín. Po druhé, Accutase funguje veľmi dobre na embryonálnych a neurónových kmeňových bunkách a bolo preukázané, že zachováva životaschopnosť týchto buniek po pasážovaní. Po tretie, Accutase zachováva väčšinu epitopov pre následnú analýzu prietokovou cytometriou, takže je ideálna na analýzu markerov bunkového povrchu.
Okrem toho sa Accutase nemusí neutralizovať pri pasážovaní adherentných buniek. Pridaním väčšieho množstva média po rozdelení buniek sa Accutase zriedi, takže už nie je schopná oddeliť bunky. Tým sa eliminuje potreba inaktivácie a šetrí sa čas technikov bunkových kultúr. A nakoniec, Accutase sa nemusí alikvótovať a fľaša je stabilná v chladničke 2 mesiace.
Aplikácie Accutase
Accutase je priamou náhradou roztoku trypsínu a môže sa použiť na pasážovanie bunkových línií. Okrem toho sa Accutase dobre osvedčuje pri oddeľovaní buniek na analýzu mnohých povrchových markerov buniek pomocou prietokovej cytometrie a na triedenie buniek. Medzi ďalšie následné aplikácie ošetrenia Accutase patrí analýza povrchových markerov buniek, test rastu vírusov, proliferácia buniek, testy migrácie nádorových buniek, rutinné pasážovanie buniek, zväčšovanie výroby (bioreaktor) a prietoková cytometria.
Zloženie Accutase
Accutase neobsahuje žiadne cicavčie ani bakteriálne zložky a je zmesou prírodných enzýmov s proteolytickou a kolagenolytickou enzýmovou aktivitou. Je formulovaná v oveľa nižšej koncentrácii ako trypsín a kolagenáza, takže je menej toxická a šetrnejšia, ale rovnako účinná.
Účinnosť Accutase
Ukázalo sa, že Accutase je účinná pri oddeľovaní primárnych a kmeňových buniek a udržiavaní vysokej životaschopnosti buniek v porovnaní s enzýmami živočíšneho pôvodu, ako je trypsín. po 10 minútach sa obnoví 100 % buniek a vďaka autodigescii Accutase nie je na škodu ponechať bunky v Accutase až 45 minút.
Zhrnutie
Na záver možno povedať, že Accutase je výkonné riešenie, ktoré mení pravidlá hry v oblasti bunkových kultúr. Vďaka svojej šetrnosti, účinnosti a všestrannosti je Accutase ideálnou alternatívou trypsínu. Ak hľadáte spoľahlivé a účinné riešenie na oddeľovanie buniek, Accutase je riešenie pre vás.
Čo obsahuje EMEM?
EMEM je upravená verzia Eagleovho minimálneho esenciálneho média, ktorá obsahuje Earleov vyvážený roztok soli, neesenciálne aminokyseliny, L-glutamín, pyruvát sodný a hydrogenuhličitan sodný. Je dôležité poznamenať, že táto úroveň hydrogenuhličitanu sodného je určená na použitie v prostredí s 5 % CO2 na vzduchu. Na zachovanie jeho účinnosti sa odporúča uchovávať médium pri teplote 2 °C až 8 °C v tme, keď sa nepoužíva.
Na čo sa EMEM používa?
Eagle's minimal essential medium (EMEM) je médium na kultiváciu buniek, ktoré dokáže udržať bunky v tkanivovej kultúre. Toto médium obsahuje vyššie koncentrácie aminokyselín, čo umožňuje presnejšie priblíženie zloženia bielkovín kultivovaných buniek cicavcov. EMEM sa môže používať na kultiváciu rôznych buniek vrátane fibroblastov, bunkovej línie rakoviny ľudskej pečene (HepG2) a buniek astrocytov odvodených od progenitorov ľudského plodu (PDA). Zvyčajne sa používa v prítomnosti fetálneho hovädzieho séra (FBS), teľacieho alebo konského séra.
Čím sa EMEM líši od iných médií na kultiváciu buniek?
EMEM a Dulbeccovo modifikované médium Eagle (DMEM) majú síce niektoré spoločné črty, ale zároveň sa aj líšia. V oboch médiách chýbajú bielkoviny a obsahujú aminokyseliny, soli, glukózu a vitamíny potrebné na dodanie energie bunkám a ich udržanie v tkanivovej kultúre. Zloženie DMEM je však upravené tak, aby obsahovalo až štyrikrát viac vitamínov a aminokyselín a dva až štyrikrát viac glukózy ako EMEM. Stojí za zmienku, že EMEM sa tiež líši od pôvodného zloženia MEM.
Kontrola kvality
Sterilne filtrovaná
Skladovanie a trvanlivosť
Skladujte pri teplote +2 °C až +8 °C, chránené pred svetlom.
Po otvorení skladujte pri teplote 4 °C a použite do 6 až 8 týždňov.
Podmienky prepravy
Okolitá teplota
Údržba
Uchovávajte v chlade pri teplote +2°C až +8°C v tme. Vyhnite sa zmrazovaniu a častému zohrievaniu na +37 °C, pretože sa tým znižuje kvalita výrobku.
Neohrievajte médium na teplotu vyššiu ako 37 °C ani nepoužívajte nekontrolované zdroje tepla, napríklad mikrovlnné zariadenia.
Ak sa má použiť len časť média, odoberte požadované množstvo a pred použitím ho zohrejte na izbovú teplotu.
Zloženie
Kategória
Zložky
Koncentrácia (mg/l)
Aminokyseliny
L-arginín HCl
126.00
L-cystín 2 HCl
31.30
L-Glutamín
292.00
L-histidín HClH2O
42.00
L-izoleucín
52.00
L-leucín
52.00
L-Lyzín HCl
72.50
L-metionín
15.00
L-fenylalanín
32.00
L-Treonín
48.00
L-tryptofán
10.00
L-Tyrozín 2 Na 2H2O
51.90
L-Valín
46.00
Vitamíny
Cholín chlorid
1.00
Vitamíny
D-pantotenát vápenatý
1.00
Kyselina listová
1.00
myo-Inozitol
2.00
Nikotínamid
1.00
Pyridoxal HCl
1.00
Riboflavín
0.10
Tiamín HCl
1.00
Anorganické soli
CaCl2 2H2O
265.00
Anorganické soli
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Ostatné zložky
D-glukóza
1000.00
Ostatné zložky
Fenolová červená sodná soľ
11.00
Kľúčové vlastnosti Freeze Medium CM-1 zahŕňajú:
Široká kompatibilita: Účinné pre širokú škálu typov buniek vrátane primárnych buniek, kmeňových buniek a zavedených bunkových línií.
Vysoká životaschopnosť: Optimalizované na maximalizáciu obnovy a životaschopnosti buniek po rozmrazení, čo zaručuje spoľahlivé výsledky experimentov.
Pripravené na použitie: Pohodlne pripravené a sterilizované na okamžité použitie, čo skracuje čas prípravy a znižuje riziko kontaminácie.
Zvýšená stabilita: Zachováva konzistentný výkon za štandardných podmienok kryokonzervácie, čím zabezpečuje reprodukovateľné výsledky.
Dlhá skladovateľnosť: CM-1 je médium na kryokonzerváciu s obsahom séra, pripravené na použitie, ktoré sa môže skladovať v chladničke až jeden rok.
Používanie CM-1 na zmrazovanie buniek
Ak chcete použiť CM-1 na zmrazovanie adherentných aj suspenzných buniek, postupujte podľa nasledujúcich krokov
V prípade adherentných buniek ich umyte a oddeľte od kultivačného substrátu. V prípade suspenzných buniek prejdite priamo na ďalší krok.
Spočítajte bunky, aby ste sa uistili, že majú správnu koncentráciu.
Odstreďte bunky, aby sa z nich vytvorili pelety, a potom ich znovu rozpusťte v zmrazovacom médiu CM-1.
Resuspendované bunky preneste do kryovínií.
Pred prenosom buniek na dlhodobé uskladnenie použite metódu pomalého zmrazovania
Metóda
Popis
Kroky
❄️
Manuálne zmrazenie
Postupná metóda zahŕňajúca postupné znižovanie teploty na zabezpečenie životaschopnosti buniek
1️⃣ Umiestnite bunky do zmrazovacieho média do mrazničky s teplotou 4 °C na 40 minút.
2️⃣ Preneste do mrazničky s teplotou -80 °C na 24 hodín.
3️⃣ Uskladnite bunky v tekutom dusíku na dlhodobé uchovanie
❄️
Používanie pána Frostyho
Praktické zariadenie, ktoré umožňuje kontrolovanú rýchlosť zmrazovania bez elektrickej energie
1️⃣ Pripravte bunky v kryovíniách s mraziacim médiom.
2️⃣ Umiestnite kryovílie do nádoby Mr. Frosty.
3️⃣ Pred prenesením do tekutého dusíka uchovávajte pri teplote -80 °C po dobu 24 hodín
❄️
Mraznička s riadenou rýchlosťou
Vysoko presná mraznička od spoločnosti Thermo Fisher alebo iných výrobcov určená na riadené znižovanie teploty
1️⃣ Naprogramujte zariadenie na postupné znižovanie teploty.
2️⃣ Umiestnite pripravené bunky do mrazničky.
3️⃣ Po skončení zmrazovacieho cyklu preneste bunky do tekutého dusíka
Kryovílie skladujte pri teplote nižšej ako -130 °C alebo v tekutom dusíku na dlhodobé uchovávanie.
Zloženie
Obsahuje FBS, DMSO, glukózu, soli
Pufrovacia kapacita: pH = 7,2 až 7,6
Mraziace médium CM-1 spoločnosti Cytion ponúka spoľahlivé riešenie na kryokonzerváciu, ktoré zabezpečuje vysokú životaschopnosť a funkčnosť buniek po rozmrazení pre širokú škálu výskumných aplikácií.
Médium Ham's F-12K (Kaighn's) je starostlivo vyvinuté na optimalizáciu podmienok kultivácie buniek. Má obohatené zloženie, ktoré poskytuje zvýšené hladiny základných zložiek, ako sú aminokyseliny a pyruvát sodný, ako aj ďalšie prvky vrátane putrescínu, tymidínu, hypoxantínu a zinku. Tieto prídavky umožňujú výskumníkom doplniť médium minimálnym množstvom séra alebo definovaných zložiek pre špecifické typy buniek, čo uľahčuje presné experimentálne podmienky.
Je pozoruhodné, že Hamovo médium F-12K (Kaighnovo) neobsahuje proteíny ani rastové faktory. V dôsledku toho je často potrebné doplnenie rastových faktorov a fetálneho hovädzieho séra (FBS), čo umožňuje výskumníkom prispôsobiť médium požiadavkám ich špecifických bunkových línií. Na dosiahnutie optimálneho výkonu sa musí koncentrácia FBS starostlivo optimalizovať pre každú bunkovú líniu, čím sa zabezpečí optimálny rast a funkčnosť.
Na udržanie fyziologického pH sa v médiu Ham's F-12K (Kaighn's) používa systém hydrogenuhličitanového tlmivého roztoku sodíka (2,5 g/l), čo si vyžaduje kontrolované prostredie s 5
- 10 % CO2 počas kultivácie. Tým sa zabezpečí, že pH média zostane v ideálnom rozsahu pre rast a životaschopnosť buniek
Kontrola kvality
pH = 7,2 +/
- 0,02 pri 20
- 25 °C.
Každá šarža bola testovaná na sterilitu a neprítomnosť mykoplazmy a baktérií.
Údržba
Uchovávajte v chladničke pri teplote +2 °C až +8 °C v tme. Mrazenie, ako aj zahrievanie do +37 °C minimalizujú kvalitu výrobku.
Neohrievajte médium na viac ako 37 °C ani nepoužívajte nekontrolovateľné zdroje tepla (napr. mikrovlnné zariadenia).
Ak sa má použiť len časť média, odoberte toto množstvo z fľaše a ohrejte ho pri izbovej teplote.
Trvanlivosť akéhokoľvek média okrem základného média je 8 týždňov od dátumu výroby.
Zloženie
Zložky
mg/l
Anorganické soli
Chlorid vápenatý x 2H2O
135,24
Síran meďnatý(II) x 5H2O
0,00
Síran železnatý (II) x 7H2O
0,83
Chlorid horečnatý x 6H2O
105,72
Síran horečnatý x 7H2O
394,49
Chlorid draselný
283,29
Dihydrogénfosforečnan draselný
58,52
Chlorid sodný
7597,20
hydrogenfosforečnan sodnýbezvodý
115,02
Síran zinočnatý x 7H2O
0,14
Ostatné zložky
D(+)-glukóza bezvodá
1260,00
Hypoxantín
4,08
Kyselina DL-α-lipoová
0,21
Červený fenol
3,00
Putrescín x 2HCl
0,32
Pyruvát sodný
220,00
NaHCO3
2500,00
Tymidín
0,73
Aminokyseliny
L-alanín
17,82
L-arginín x HCl
421,40
L-Asparagín x H2O
30,02
Kyselina L-aspartová
26,62
L-cysteín x HCl x H2O
70,24
L-glutamín
292,20
Kyselina L-glutámová
29,42
Glycín
15,01
L-histidín x HCl x H2O
41,92
L-izoleucín
7,87
L-leucín
26,24
L-Lyzín x HCl
73,04
L-metionín
8,95
L-fenylalanín
9,91
L-Prolín
69,06
L-serín
21,02
L-treonín
23,82
L-tryptofán
4,08
L-tyrozín
10,87
L-Valín
23,42
Vitamíny
D(+)-biotín
0,07
D-pantotenát vápenatý
0,48
Cholín chlorid
13,96
Kyselina listová
1,32
myo-izozitol
18,02
Nikotínamid
0,04
Pyridoxín x HCl
0,06
Riboflavín
0,04
Tiamín x HCl
0,34
Vitamín B12
1,36
Fyziologický roztok s fosfátovým pufrom (PBS) je široko používaný tlmivý roztok v biologickom a chemickom výskume. Zohráva kľúčovú úlohu pri udržiavaní rovnováhy pH a osmolarity počas rôznych experimentálnych postupov vrátane spracovania tkanív a bunkových kultúr. Náš roztok PBS je starostlivo pripravený z vysoko čistých zložiek, aby sa zabezpečila stabilita a spoľahlivosť pri každom experimente. Osmolarita a koncentrácie iónov nášho roztoku PBS presne kopírujú koncentrácie v ľudskom tele, takže je izotonický a netoxický pre väčšinu buniek.
Zloženie nášho roztoku PBS
Náš roztok PBS je zmesou fosfátových pufrov a fyziologických roztokov ultračistej kvality s upraveným pH. V 1X pracovnej koncentrácii obsahuje:
8000 mg/l chloridu sodného (NaCl)
200 mg/L chlorid draselný (KCl)
1150 mg/L fosforečnan sodný dvojzložkový bezvodý (Na2HPO4)
200 mg/L Fosforečnan draselný jednozložkový bezvodý (KH2PO4)
Toto zloženie zabezpečuje optimálne pH a iónovú rovnováhu, vhodné pre širokú škálu biologických aplikácií.
Aplikácie nášho roztoku PBS
Náš roztok PBS je ideálny na rôzne aplikácie v biologickom výskume. Vďaka svojim izotonickým a netoxickým vlastnostiam je vhodný na riedenie látok a oplachovanie bunkových nádob. Roztoky PBS obsahujúce EDTA sú účinné na uvoľnenie prichytených a zhlukovaných buniek. Do PBS by sa však nemali pridávať dvojmocné kovy, ako napríklad zinok, pretože môžu spôsobiť zrážanie. V takýchto prípadoch sa odporúčajú Goodove pufre. Okrem toho je náš roztok PBS prijateľnou alternatívou vírusového transportného média na transport a skladovanie RNA vírusov vrátane SARS-CoV-2.
Kontrola kvality
Sterilne filtrované
Skladovanie a trvanlivosť
Skladujte pri teplote +2 °C až +25 °C, chránené pred svetlom.
Po otvorení skladujte pri teplote 2 °C až 25 °C a spotrebujte do 24 mesiacov.
Podmienky prepravy
Okolitá teplota
Údržba
Uchovávajte v chlade pri teplote +2°C až +8°C v tme. Vyhnite sa zmrazovaniu a častému zohrievaniu na +37 °C, pretože sa tým znižuje kvalita výrobku.
Neohrievajte médium na teplotu vyššiu ako 37 °C ani nepoužívajte nekontrolované zdroje tepla, napríklad mikrovlnné zariadenia.
Ak sa má použiť len časť média, odoberte požadované množstvo a pred použitím ho zohrejte na izbovú teplotu.
Zloženie
Kategória
Zložky
Koncentrácia (mg/l)
Soli
Chlorid draselný
200
Fosforečnan draselný monobázický bezvodý
200
Chlorid sodný
8000
Fosforečnan sodný dvojzložkový bezvodý
1150
Médium RPMI 1640, ktoré bolo pôvodne navrhnuté na podporu rastu ľudských leukemických buniek v suspenzných aj monovrstvových kultúrach, sa modifikáciami výskumníkov a komerčných dodávateľov vyvinulo tak, aby bolo vhodné pre rôzne druhy buniek cicavcov. Je výnimočne kompatibilné s bunkovými líniami, ako sú HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocyty a karcinómy.
Médium RPMI 1640 sa odlišuje od ostatných médií na kultiváciu buniek vďaka svojmu jedinečnému zloženiu. Obsahuje značné množstvo fosfátov, aminokyselín a vitamínov. Najmä obsahuje biotín, vitamín B12 a PABA, ktoré sa v Eagle's Minimal Essential Medium alebo Dulbecco's Modified Eagle Medium nenachádzajú. Okrem toho RPMI 1640 Medium vykazuje výrazne zvýšené koncentrácie vitamínov inozitolu a cholínu. Neobsahuje však proteíny, lipidy ani rastové faktory. V dôsledku toho sa na zabezpečenie optimálnych podmienok pre rast buniek bežne vyžaduje doplnenie 10 % fetálneho hovädzieho séra (FBS).
Pufrovací systém média RPMI 1640 sa spolieha na hydrogenuhličitan sodný a na udržanie fyziologicky vhodného pH si vyžaduje 5
- 10 % CO2. Zahrnutie redukčného činidla glutatiónu ďalej odlišuje toto médium od ostatných.
Kontrola kvality
Sterilne filtrované
Skladovanie a trvanlivosť
Skladujte pri teplote +2 °C až +8 °C, chránené pred svetlom.
Po otvorení skladujte pri teplote 4 °C a spotrebujte do 6 až 8 týždňov.
Podmienky prepravy
Okolitá teplota
Údržba
Uchovávajte v chlade pri teplote +2°C až +8°C v tme. Vyhnite sa zmrazovaniu a častému zahrievaniu na +37 °C, pretože sa tým znižuje kvalita výrobku.
Neohrievajte médium na teplotu vyššiu ako 37 °C a nepoužívajte nekontrolované zdroje tepla, ako sú mikrovlnné zariadenia.
Ak sa má použiť len časť média, odoberte požadované množstvo a pred použitím ho zohrejte na izbovú teplotu.
Zloženie
Kategória
Zložky
Koncentrácia (mg/l)
Aminokyseliny
Glycín
10.00
L-alanyl-L-glutamín
434.40
L-arginín
200.00
L-asparagínH2O
56.82
Kyselina L-aspartová
20.00
L-cystín 2HCl
65.20
Kyselina L-glutámová
20.00
L-histidín HClH2O
20.27
L-Hydroxy-L-Prolín
20.00
L-izoleucín
50.00
L-leucín
50.00
L-Lyzín HCl
40.00
L-metionín
15.00
L-fenylalanín
15.00
L-Prolín
20.00
L-serín
30.00
L-Treonín
20.00
L-tryptofán
5.00
L-Tyrozín 2Na 2H2O
28.83
L-Valín
20.00
Vitamíny
kyselina p-aminobenzoová
1.00
D-Biotín
0.20
Cholín chlorid
3.00
D-pantotenát vápenatý
0.25
Kyselina listová
1.00
myo-Inozitol
35.00
Nikotínamid
1.00
Pyridoxín HCl
1.00
Riboflavín
0.20
Tiamín HCl
1.00
Vitamín B12
0.005
Anorganické soli
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Ostatné zložky
D-glukóza
2000.00
L-Glutatión redukovaný
1.00
Fenolová červená sodná soľ
5.30
Toto jedinečné zloženie kombinuje Dulbeccovo modifikované orlie médium (DMEM) a Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) v presnom pomere 1:1. Prídavok L-glutamínu ďalej zlepšuje jeho zloženie.
DMEM, odvodený od Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), ponúka zvýšenú koncentráciu aminokyselín a vitamínov v porovnaní so svojím predchodcom. Naproti tomu Ham's F-12 je založené na médiu Ham's F-10 a poskytuje doplnkový súbor základných zložiek.
Na podporu optimálneho rastu buniek sa DMEM:Ham's F12 bežne dopĺňa FBS v typickej koncentrácii 5
- 10 %. Toto pridanie je potrebné, pretože v médiu chýbajú rastové hormóny, lipidy a proteíny, ktoré sú kľúčové pre vývoj buniek.
DMEM:Ham's F12 obsahuje systém pH pufra a často sa dopĺňa fenolovou červenou, indikátorom pH. Kultivácia buniek v DMEM:Ham's F12 alebo v akomkoľvek médiu využívajúcom hydrogénuhličitanový tlmivý systém si vyžaduje kontrolované prostredie s 5
- 10 % CO2, aby sa udržala vhodná úroveň pH.
Kontrola kvality
Sterilne filtrované
Skladovanie a trvanlivosť
Skladujte pri teplote +2 °C až +8 °C, chránené pred svetlom.
Po otvorení skladujte pri teplote 4 °C a použite do 6 až 8 týždňov.
Podmienky prepravy
Okolitá teplota
Údržba
Uchovávajte v chlade pri teplote +2°C až +8°C v tme. Vyhnite sa zmrazovaniu a častému zohrievaniu na +37 °C, pretože sa tým znižuje kvalita výrobku.
Neohrievajte médium na teplotu vyššiu ako 37 °C ani nepoužívajte nekontrolované zdroje tepla, napríklad mikrovlnné zariadenia.
Ak sa má použiť len časť média, odoberte požadované množstvo a pred použitím ho zohrejte na izbovú teplotu.
Zloženie
Kategória
Zložky
Koncentrácia (mg/l)
Aminokyseliny
Glycín
18.75
L-alanín
4.45
L-arginín HCl
147.50
L-Asparagín H₂O
7.50
Kyselina L-aspartová
6.65
L-cysteín HCl H₂O
17.56
L-Cystín 2 HCl
31.29
Kyselina L-glutámová
7.35
L-glutamín
365.00
L-histidín HCl H₂O
31.48
L-izoleucín
54.47
L-leucín
59.05
L-Lyzín HCl
91.25
L-metionín
17.24
L-fenylalanín
35.48
L-Prolín
17.25
L-serín
26.25
L-Treonín
53.45
L-tryptofán
9.02
L-tyrozín disodná soľ
48.10
L-Valín
52.85
Vitamíny
D-biotín
0.0035
Cholín chlorid
8.98
D-pantotenát vápenatý
2.24
Kyselina listová
2.66
myo-izozitol
12.60
Nikotínamid
2.02
Pyridoxín HCl
0.031
Pyridoxal HCl
2.00
Riboflavín
0.219
Tiamín HCl
2.17
Vitamín B12
0.68
Anorganické soli
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Ostatné zložky
D-glukóza
3151.00
Hypoxantín
2.40
HEPES
3574.50
Kyselina linolová
0.042
Kyselina lipoová
0.105
Fenolová červená sodná soľ
8.63
Putrescín 2 HCl
0.081
Pyruvát sodný
55.00
Tymidín
0.365
- 0,02 pri 20-25 °C. Každá šarža bola testovaná na sterilitu a neprítomnosť mykoplazmy a baktérií. Skladovanie Skladujte v chladničke pri teplote +2 °C až +8 °C v tme. Zmrazenie a oteplenie na +37 °C znižuje kvalitu produktu. Nezohrievajte médium na viac ako 37 °C a nepoužívajte nekontrolovateľné zdroje tepla (napr. mikrovlnné rúry). Ak sa má použiť len časť média, odoberte toto množstvo z fľaše a zohrejte ho na izbovú teplotu. Skladovateľnosť všetkých médií okrem základného média je 6 až 8 týždňov od dátumu otvorenia. Zloženie Zložky mg/L Anorganické soliChlorid vápenatý x 2H2O132,00 Síran horečnatý97,67 Chlorid draselný400 Chlorid sodný6 460,00 Hydrogénfosforečnan sodný (bezvodý)504,00 Ostatné zložkyD(+)-glukóza (bezvodá)3 000,00 Glutatión (redukovaný)0 Mäsový peptón600,00 Fenolová červená sodná soľ11 AminokyselinyL-alanín13,36 L-arginín x HCl42,14 L-asparagín x H2O45,03 Kyselina L-asparagová19,97 L-cysteín x HCl x H2O31,75 L-glutamín (stabilný)219,15 Kyselina L-glutámová22,07 Glycín7,51 L-histidín x HCl x H2O20,96 L-hydroxyprolín19,67 L-izoleucín39,36 L-leucín39,36 L-lyzín x HCl36,54 L-metionín14,92 L-fenylalanín16,52 L-prolín17,27 L-serín26,28 L-treonín17,87 L-tryptofán3,06 L-tyrozín disodná soľ26,10 L-valín17,57 Vitamínyp-Aminobenzoová kyselina1,0 Kyselina askorbová0,56 D(+)-biotín0,20 D-pantotenát vápenatý0,2 Cholinchlorid5,0 Kyselina listová10 Myo-inositol36 Nikotínamid0,5 Kyselina nikotínová0,5 Pyridoxal HCl0,50 Pyridoxín HCl0,50 Riboflavín0,2 Tiamín HCl0,2 Vitamín B122,0
Médium 199 ponúka celý rad aplikácií v tejto oblasti. Dokáže účinne udržiavať komplex kumulus-oocyt (COC) a podporovať dozrievanie oocytov in vitro. Okrem toho sa používa pri oplachovaní aspiračných línií počas odberu vajíčok od nemeckých holštajnských kráv. Okrem toho médium 199 slúži ako vynikajúce médium na kultiváciu srdcových endotelových buniek získaných z potkanov. Tieto aplikácie dokazujú všestrannosť a prispôsobivosť média 199 rôznym experimentálnym potrebám.
História
Vývoj média 199 v 50. rokoch 20. storočia znamenal významný pokrok v oblasti médií na kultiváciu tkanív. Pred jeho zavedením sa mnohé kultivačné médiá spoliehali na produkty živočíšneho pôvodu a tkanivové extrakty. Morgan a jeho kolegovia však spôsobili revolúciu v tejto oblasti tým, že vytvorili úplne definovaný zdroj výživy pre bunkové kultúry. Prostredníctvom experimentov s rôznymi kombináciami vitamínov, aminokyselín a iných faktorov objavili výnimočné vlastnosti média 199 podporujúce rast.
Kontrola kvality
pH = 7,2 +/
- 0,02 pri 20
- 25 °C.
Každá šarža bola testovaná na sterilitu a neprítomnosť mykoplazmy a baktérií.
Údržba
Uchovávajte v chladničke pri teplote +2 °C až +8 °C v tme. Mrazenie a zahrievanie do +37 °C minimalizuje kvalitu výrobku.
Neohrievajte médium na viac ako 37 °C ani nepoužívajte nekontrolovateľné zdroje tepla (napr. mikrovlnné zariadenia).
Ak sa má použiť len časť média, odoberte toto množstvo z fľaše a zohrejte ho pri izbovej teplote.
Trvanlivosť akéhokoľvek média okrem základného média je 8 týždňov od dátumu výroby.
Zloženie
Zložky
mg/l
Anorganické soli
Chlorid vápenatý x 2H2O
264,92
Dusičnan železitý (III) x 9H2O
0,72
Síran horečnatý
97,67
Chlorid draselný
400,00
Octan sodný x 3H2O
82,95
Chlorid sodný
6,800.00
Dihydrogénfosforečnan sodný x H2O
140,00
Ostatné zložky
Adenín sulfát
10,00
AMP
0,20
ATP
1,00
Cholesterol
0,20
2'-deoxyribóza
0,50
D(+)-glukóza bezvodá
1,000.00
Glutatión (červený)
0,05
Guanín x HCl
0,30
Hypoxantín
0,30
Fenolová červená
10,00
D-ribóza
0,50
Tymín
0,30
Tween 80
4,90
Uracil
0,30
Xantín
0,30
NaHCO3
2,200.00
Aminokyseliny
L-alanín
25,00
L-Arginín x HCl
70,00
Kyselina L-aspartová
30,00
L-cysteín x HCl x H2O
0,10
L-Cystín
20,00
L-Glutamín stabilný
149,00
Kyselina L-glutámová
67,00
Glycín
50,00
L-histidín x HCl x H2O
21,88
L-hydroxyprolín
10,00
L-izoleucín
20,00
L-leucín
60,00
L-Lyzín x HCl
70,00
L-metionín
15,00
L-fenylalanín
25,00
L-Prolín
40,00
L-serín
25,00
L-Treonín
30,00
L-tryptofán
10,00
L-Tyrozín
40,00
L-Valín
25,00
Vitamíny
kyselina 4-amino-benzoová
0,05
Kyselina askorbová
0,05
D(+)-Biotín
0,01
Kalciferol
0,10
D-pantotenát vápenatý
0,01
Cholín chlorid
0,50
Kyselina listová
0,01
myo-izozitol
0,05
Menadion
0,01
Kyselina nikotínová
0.025
Nikotínamid
0.025
Pyridoxal x HCl
0.025
Pyridoxol x HCl
0.025
Riboflavín
0,01
DL-α-tokoferolfosforečnan disodná soľ
0,01
Tiamín x HCl
0,01
Vitamín A acetát
0,14
- 10 % CO2.
IMDM je vhodný pre rýchlo sa množiace bunkové kultúry s vysokou hustotou vrátane buniek Jurkat, COS-7 a makrofágov. Rôzne modifikácie IMDM, ktoré sú k dispozícii pre rôzne aplikácie bunkových kultúr, nájdete pomocou nástroja na výber médií. Tekuté médiá poskytujú základné živiny pre všetky aplikácie bunkových kultúr. Každé z našich vysokokvalitných médií na kultiváciu buniek sa vyrába podľa pôvodne uverejneného vzorca alebo modifikácií potrebných na konzistentný výkon a stabilitu kultivačného média.
IMDM vs. DMEM
IMDM obsahuje dusičnan draselný namiesto dusičnanu železitého a HEPES a pyruvát sodný. Vďaka ďalším zložkám v IMDM je vhodnejšie pre špecializované typy buniek a špecifické aplikácie ako DMEM.
IMDM vs. RPMI
IMDM a RPMI majú odlišné zloženie, ktoré môže byť dôležité pre stimuláciu PMA/ionomycínom. Jedným z významných rozdielov je koncentrácia Ca2+. Zatiaľ čo RPMI obsahuje 0,42 mM Ca2+, IMDM obsahuje 1,49 mM.
Kontrola kvality
pH = 7,2 +/
- 0,02 pri 20
- 25 °C.
Každá šarža bola testovaná na sterilitu a neprítomnosť mykoplazmy a baktérií.
Údržba
Uchovávajte v chladničke pri teplote +2 °C až +8 °C v tme. Mrazenie a zahrievanie do +37 °C minimalizuje kvalitu výrobku.
Neohrievajte médium na viac ako 37 °C ani nepoužívajte nekontrolovateľné zdroje tepla (napr. mikrovlnné zariadenia).
Ak sa má použiť len časť média, odoberte toto množstvo z fľaše a zohrejte ho pri izbovej teplote.
Trvanlivosť akéhokoľvek média okrem základného média je 8 týždňov od dátumu výroby.
Zloženie
Zložky
mg/l
Anorganické soli
Chlorid vápenatý x 2 H2O
219,00
Chlorid draselný
330,00
Dusičnan draselný
0.076
Síran horečnatý bezvodý
97,73
Chlorid sodný
4,505.00
Dihydrogénfosforečnan sodný bezvodý
109,00
Seleničitan sodný
0,02
Ostatné zložky
D(+)-glukóza bezvodá
4,500.00
HEPES
5,958.00
Pyruvát sodný
110,00
Fenolová červeň
15,00
Aminokyseliny
L-alanín
25,00
L-arginín x HCl
84,00
L-Asparagín x H2O
25,00
Kyselina L-aspartová
30,00
L-Cystín x 2HCl
91,24
L-Glutamín
584,00
Kyselina L-glutámová
75,00
Glycín
30,00
L-histidín x HCl x H2O
42,00
L-izoleucín
104,80
L-leucín
104,80
L-Lyzín x HCl
146,20
L-metionín
30,00
L-fenylalanín
66,00
L-Prolín
40,00
L-serín
42,00
L-Treonín
95,20
L-tryptofán
16,00
L-Tyrozín x 2Na
104,20
L-Valín
93,60
Vitamíny
D(+)-biotín
0.013
D-pantotenát vápenatý
4,00
Cholín chlorid
4,00
Kyselina listová
4,00
myo-Inozitol
7,20
Médiá na kultiváciu buniek: Prehľad
V oblasti prírodných vied je jednou z najdôležitejších metodík kultivácia buniek. Pod slovným spojením "bunková kultúra" sa rozumie odobratie buniek, tkanív alebo orgánov zo zvierat alebo rastlín a následná implantácia týchto buniek, tkanív alebo orgánov do umelého prostredia, ktoré je priaznivé pre ich prežitie a/alebo rast Základné potreby prostredia pre optimálny vývoj buniek sú kontrolovaná teplota, substrát na prichytenie buniek, vhodné rastové médium a inkubátor, ktorý udržiava optimálne pH a osmolalitu. Bunky musia mať tieto podmienky, aby mohli naplno rásť.
Výber vhodného rastového média na kultiváciu in vitro je fáza bunkovej kultúry, ktorá je najkritickejšia a zároveň najdôležitejšia. Rastové médium, známe aj ako kultivačné médium, je kvapalina alebo gél vytvorený na podporu vývoja organizmov v mikroskopickom, bunkovom alebo rastlinnom meradle. Médium používané na kultiváciu buniek často obsahuje primeraný prísun energie a látok, ktoré riadia bunkový cyklus. Medzi hlavné zložky kultivačného média patria aminokyseliny, vitamíny, anorganické soli, glukóza a sérum. Sérum sa pridáva do média, pretože pôsobí ako zdroj rastových faktorov, hormónov a faktorov priľnavosti. Okrem poskytovania živín prispieva médium aj k udržiavaniu úrovne pH a osmolality.
Typy médií používaných v bunkových kultúrach
Ľudské aj živočíšne bunky sa môžu pestovať buď v umelom alebo syntetickom médiu, alebo v úplne prírodnom médiu, ktoré je doplnené prírodnými prvkami. V nasledujúcom texte vám poskytneme prehľad rôznych v súčasnosti dostupných typov médií.
Prírodné médiá
V prírodných médiách sa môžu nachádzať len biologické tekutiny, ktoré existujú v prirodzenom stave. Prírodné médiá sú veľmi užitočné a jednoduché na kultiváciu širokej škály typov živočíšnych buniek. Nedostatočné pochopenie presných zložiek, ktoré tvoria prírodné médiá, je hlavným faktorom, ktorý prispieva k nízkej opakovateľnosti výsledkov získaných pomocou prírodných médií.
Umelé médiá
Príprava umelých alebo syntetických médií zahŕňa pridávanie živín (organických aj anorganických), sérových proteínov, sacharidov, kofaktorov, vitamínov a solí, ako aj plynných fáz O2 a CO2 [1].
Boli vyvinuté rôzne typy umelých médií s cieľom plniť jednu alebo viacero z nasledujúcich funkcií: 1) Okamžité prežitie (vyvážený roztok soli s presným pH a osmotickým tlakom). 2) Dlhodobé prežívanie (vyvážený soľný roztok doplnený rôznymi zložkami organických chemikálií a/alebo séra). 3) Neurčitý vývoj. 4) Špecializované funkcie.
Existujú štyri odlišné klasifikácie umelých médií:
Médiá obsahujúce sérum
Najčastejším druhom doplnku, ktorý sa nachádza v médiu používanom na pestovanie živočíšnych buniek, je fetálne hovädzie sérum. Pridáva sa do kultivačného média ako lacný doplnok s cieľom dosiahnuť čo najlepšie podmienky rastu. Okrem toho, že sérum pôsobí ako transportér alebo chelátor pre živiny, ktoré sú nestabilné alebo nerozpustné vo vode, hormóny a rastové faktory, inhibítory proteáz a iné látky, viaže a neutralizuje aj škodlivé molekuly.
Médium bez séra
Prítomnosť séra v médiu má množstvo nevýhod a môže spôsobiť veľké chyby v interpretácii pri imunologickom výskume [2, 3]. Bolo vytvorených množstvo rôznych bezsérových médií [4, 5]. Tieto médiá sú vo všeobecnosti špeciálne vytvorené na podporu kultivácie jedného typu buniek, napríklad Knockout Serum Replacement a Knockout DMEM od spoločnosti Thermo Fisher Scientific a mTESR médium od Stem Cell Technologies [6], určené pre kmeňové bunky [7].
Okrem toho tieto médiá obsahujú definované množstvá purifikovaných rastových faktorov, lipoproteínov a iných proteínov, ktoré inak zvyčajne poskytuje sérum [8]. Tieto médiá sa často označujú ako "definované kultivačné médiá", pretože zložky, z ktorých sa tieto médiá skladajú, sú dobre známe.
Chemicky definované médiá
Tieto médiá obsahujú ultračisté anorganické a organické zložky, ktoré neboli kontaminované žiadnym druhom znečistenia. Môžu obsahovať aj čisté proteínové prídavky, ako sú rastové faktory.
genetická modifikácia baktérií alebo kvasiniek spolu s prídavkom konkrétnych mastných kyselín, vitamínov, cholesterolu a aminokyselín vedie k výrobe ich zložiek [9].
Médiá bez bielkovín
Bezbielkovinové médiá sú také, ktoré neobsahujú vôbec žiadne bielkoviny a namiesto toho obsahujú len nebielkovinové prvky. V porovnaní s médiami s pridaným sérom použitie médií bez pridaných bielkovín podporuje väčšiu proliferáciu buniek a expresiu bielkovín a uľahčuje purifikáciu akéhokoľvek produktu vytvoreného v následnom procese [10 - 12]. Proteín nie je súčasťou takých prípravkov, ako sú MEM a RPMI-1640. V prípade potreby sa však môže podávať proteínový doplnok.
Kultivačné médiá a ich základné zložky
Komerčné kultivačné médium možno zakúpiť ako prášok alebo tekutinu a často obsahuje rôzne živiny, ako sú aminokyseliny, glukóza, soli, vitamíny a iné výživové doplnky.
Potreby týchto zložiek sú pre každú bunkovú líniu odlišné a tieto rozdiely sú príčinou veľkého počtu rôznych zložení médií. Každá zložka je zodpovedná za určitú funkciu, ktorá bude uvedená v nasledujúcich odsekoch:
Pufrovacie systémy
Na udržanie optimálnych podmienok pestovania sa musí kontrolovať pH, čo sa často vykonáva jedným z dvoch pufrovacích systémov:
Prírodný pufrovací systém
Pomer CO2/H2CO3 v atmosfére sa rovná pomeru v médiu, čím sa vytvára prirodzený pufrovací mechanizmus. Aby sa zachoval ich prirodzený pufrovací mechanizmus, kultúry sa musia udržiavať vo vzdušnom prostredí s 5 - 10 % CO2, čo sa často dosahuje použitím inkubátora s CO2. Jednou z najlepších vecí na používaní prirodzeného pufru je to, aký je lacný a bezpečný.
HEPES
Chemické pufrovanie pomocou zwitteriónu HEPES má väčšiu pufrovaciu schopnosť v rozsahu pH 7,2 - 7,4 a nepotrebuje regulované plynné prostredie. Pre určité typy buniek môže byť väčšia dávka HEPES škodlivá. Médiá obsahujúce HEPES sú takisto oveľa náchylnejšie na fototoxické účinky fluorescenčného svetla [13].
Fenolová červeň
Indikátor pH fenolová červeň je často súčasťou komerčne dostupného kultivačného média, čo umožňuje priebežné monitorovanie pH. Rozširovaním buniek spôsobujú metabolity produkované týmito bunkami zmenu pH, a tým aj zmenu farby média. Fenolová červeň má dvojaký účinok na farbu média, pričom pri kyslom pH sa mení na žltú a pri zásaditom pH na fialovú. pH 7,4, čo je optimálna hodnota pre bunkové kultúry, spôsobuje, že médium sa javí ako fluorescenčné červené.
Fenolová červeň má však niekoľko nevýhod: Po prvé, fenolová červeň dokáže simulovať pôsobenie viacerých steroidných hormónov, predovšetkým estrogénu [14]. Preto sa pri štúdiu buniek citlivých na estrogény, ako je tkanivo prsníka, odporúča médium bez fenolovej červene. Rovnováha sodíka a draslíka je narušená prítomnosťou fenolovej červene vo viacerých prípravkoch bez séra. Pridanie séra alebo hovädzieho hypofyzárneho hormónu do média môže tento účinok potlačiť [15]. Po tretie, prítomnosť fenolovej červene bráni detekcii pri prietokových cytometrických experimentoch.
Anorganické soli
Médiá obsahujúce anorganické soli, ako sú ióny sodíka, draslíka a vápnika, pomáhajú udržiavať osmotickú rovnováhu a regulovať membránový potenciál.
Aminokyseliny
Keďže aminokyseliny sú základnými zložkami bielkovín, sú základnou zložkou každého bunkového rastového média, ktoré bolo kedy vytvorené. Keďže bunky nie sú schopné samy produkovať určité aminokyseliny, je dôležité, aby kultivačné médium obsahovalo esenciálne aminokyseliny. Sú potrebné na rozmnožovanie buniek a ich koncentrácia určuje maximálnu hustotu buniek, ktorú možno dosiahnuť. Obzvlášť dôležitý je L-glutamín, esenciálna aminokyselina.
L-glutamín funguje ako sekundárny zdroj energie pre metabolizmus a prispieva dusíkom k produkcii NAD, NADPH a nukleotidov. Vzhľadom na to, že L-glutamín je nestabilná aminokyselina, ktorá sa časom mení na formu, ktorú bunky nie sú schopné využiť, musí sa podávať do média.
Okrem toho sa do média môžu dodávať neesenciálne aminokyseliny, aby sa doplnili tie, ktoré sa spotrebovali počas procesu rastu. Rast buniek sa zrýchľuje a ich životaschopnosť sa zvyšuje, keď sa do rastového média pridávajú neesenciálne aminokyseliny.
Sacharidy
Sacharidy vo forme cukrov sú hlavným zdrojom energie. Mnohé médiá obsahujú okrem bežnejších cukrov glukózy a galaktózy aj maltózu a fruktózu.
Bielkoviny a peptidy
Najčastejšie používanými proteínmi a peptidmi sú albumín, transferín a fibronektín. Sú obzvlášť významné v médiách, ktoré neobsahujú sérum. Albumín, transferín, aprotinín, fetuín a fibronektín sú niektoré z bielkovín, ktoré sa môžu nachádzať v sére, ktoré je bohatou zásobou bielkovín.
Albumín je hlavnou bielkovinou, ktorá sa nachádza v krvi, a jeho funkciou je viazať a prenášať rôzne látky vrátane vody, solí, voľných mastných kyselín, hormónov a vitamínov medzi rôznymi orgánmi a bunkami. Schopnosť albumínu viazať sa na chemické látky z neho robí účinného kandidáta na odstraňovanie škodlivých zlúčenín z prostredia, v ktorom sa kultivujú bunky.
Aprotinín je ochranným prostriedkom v systémoch bunkových kultúr, pretože je stabilný pri neutrálnom a kyslom pH, ako aj odolný voči vysokým teplotám a deštrukcii, ktorú môžu spôsobiť proteolytické enzýmy. Okrem iného je schopný inhibovať množstvo serínových proteáz vrátane trypsínu.
Fetuín je glykoproteín, ktorý možno zistiť vo väčšom množstve v sére plodu a novorodencov v porovnaní so sérom dospelých zvierat. Okrem toho pôsobí ako inhibítor serínových proteáz. Proteín fibronektín je základnou zložkou v procese adhézie buniek. Transferín je bielkovina, ktorá prenáša železo a je zodpovedná za dodávanie železa do membrán buniek.
Mastné kyseliny a lipidy
Hrajú kľúčovú úlohu v bezsérovom médiu, keď sérum chýba.
Vitamíny
Mnohé vitamíny sú potrebné pre vývoj a rozmnožovanie buniek. Vitamíny si bunky nedokážu vytvoriť v dostatočnom množstve, a preto sú v tkanivových kultúrach nevyhnutné ako potravinové doplnky.
V bunkových kultúrach je primárnym zdrojom vitamínov sérum; médiá sa však tiež upravujú rôznymi vitamínmi, aby boli vhodné pre konkrétny typ buniek. Najčastejšie sa na stimuláciu rastu používajú vitamíny skupiny B.
Stopové prvky
Chemické prvky ako meď, zinok, selén a medziprodukty kyseliny trikarboxylovej sú známe ako stopové prvky. Stopové prvky sa často pridávajú do médií, ktoré neobsahujú sérum, aby nahradili tie, ktoré sú zvyčajne prítomné v sére. Tieto prvky sú dôležité chemické zložky, ktoré sú potrebné pre zdravý vývoj buniek. Mnohé biochemické reakcie závisia od určitých mikroživín, napríklad aktivita enzýmov.
Doplnky média
Plnohodnotné rastové médium navrhované pre určité bunkové línie potrebuje ďalšie zložky, ktoré v základnom médiu a sére chýbajú. Tieto výživové doplnky podporujú rast buniek a vhodné metabolické funkcie.
Hoci sú hormóny, rastové faktory a signálne molekuly nevyhnutné pre primeranú proliferáciu konkrétnych bunkových línií, vždy by sa mali dodržiavať nasledujúce bezpečnostné opatrenia: Keďže pridanie doplnkov môže zmeniť osmolalitu kompletného rastového média, čo môže inhibovať vývoj buniek, odporúča sa vždy overiť osmolalitu po pridaní doplnkov. Pre väčšinu bunkových línií sa optimálna osmolalita pohybuje medzi 260 a 320 mOSM/kg.
Antibiotiká
Antibiotiká sa často používajú na inhibíciu rozvoja bakteriálnych a hubových škodlivín [16], hoci nie sú nevyhnutné pre rast buniek. Keďže antibiotiká by mohli zakrývať kontamináciu mykoplazmami a rezistentnými baktériami, ich rutinné používanie sa pre bunkové kultúry neodporúča [17, 18].
Okrem toho môžu antibiotiká narušiť metabolizmus hypersenzitívnych buniek. Často sa používajú kombinácie penicilínu a treptomycínu vyrábané spoločnosťami MilliporeSigma a Life Technologies. Plasmocín sa využíval pri kultivácii gliómových bunkových línií TS603, TS516 a BT260 [19] a ukázalo sa, že je účinný pri odstraňovaní kontaminácie mykoplazmami [20].
Sérum
V sére sú prítomné albumíny, rastové faktory a inhibítory rastu. Sérum je jednou z najvýznamnejších zložiek média bunkových kultúr, pretože poskytuje aminokyseliny, bielkoviny, vitamíny (najmä vitamíny rozpustné v tukoch, ako sú A, D, E a K), sacharidy, lipidy, hormóny, rastové faktory, minerály a stopové prvky.
Na podporu vývoja kultivovaných buniek sa často používa sérum z fetálnych a teľacích hovädzích zdrojov. Fetálne sérum je bohatým zdrojom rastových faktorov a je vhodné na klonovanie buniek a vývoj citlivých buniek. Teľacie sérum sa vzhľadom na jeho menšie schopnosti podporovať rast používa pri pokusoch s kontaktnou inhibíciou. Bežné rastové médiá často obsahujú 2 % až 10 % séra. Pridanie séra do kultivačného média slúži na tieto účely [21]:
-
Sérum dodáva bunkám základné živiny (v roztoku aj naviazané na bielkoviny).
-
V sére je obsiahnutých niekoľko rastových faktorov a hormónov, ktoré sa podieľajú na podpore rastu a špecializovanej činnosti buniek.
-
Ponúka mnoho väzbových proteínov, ako je albumín a transferín, ktoré transportujú ďalšie chemické látky do bunky. Napríklad albumín dopravuje do buniek tuky, vitamíny, hormóny atď.
-
Poskytuje aj proteíny, ako je fibronektín, ktoré zvyšujú priľnavosť buniek k substrátu. Okrem toho produkuje rozširujúce prvky, ktoré pomáhajú pri expanzii buniek pred delením.
-
Dodáva inhibítory proteáz, ktoré zabraňujú proteolýze v bunkách.
-
Obsahuje aj minerálne látky, ako sú Na+, K+, Zn2+ a Fe2+.
-
Zvyšuje viskozitu média, takže chráni bunky pred mechanickým poškodením počas miešania suspenznej kultúry.
-
Je to tiež pufr.
Odkazy
[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Výživa živočíšnych buniek v tkanivových kultúrach; počiatočné štúdie syntetického média. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8
[2] Kerbel R, Blakeslee D. Rapid adsorption of a fetal calf serum component by mammalian cells in culture (Rýchla adsorpcia zložky fetálneho teľacieho séra cicavčími bunkami v kultúre). Potenciálny zdroj artefaktov v štúdiách antisér na bunkovo špecifické antigény. Imunológia. 1976;31:881-91
[3] Sula K, Draber P, Nouza K. Prídavok séra do média používaného na prípravu bunkových suspenzií ako možný zdroj artefaktov v reakciách sprostredkovaných bunkami študovaných pomocou testu popliteálnej lymfatickej uzliny. J Immunogenet. 1980;7:483-9
[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Komerčné médiá bez séra: rast hybridómov a produkcia monoklonálnych protilátok. J Immunol Methods. 1991;145:175-83
[5] Barnes D, Sato G. Metódy rastu kultivovaných buniek v bezsérovom médiu. Anal Biochem. 1980;102:255-70
[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O,et al. HSP70 chaperones RNA-free TDP-43 into anisotropic intranuclear liquid spherical shells. Science. 2021;371:
[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J,et al. Down-syndrómom indukovaná senescencia narúša jadrovú architektúru neurálnych progenitorov. Cell Stem Cell. 2022;29:116-130.e7
[8] Iscove N, Melchers F. Úplná náhrada séra albumínom, transferínom a sójovým lipidom v kultúrach B lymfocytov reagujúcich na lipopolysacharid. J Exp Med. 1978;147:923-33
[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Systematic improvement of a chemically-defined protein-free medium for hybridoma growth and monoclonal antibody production. J Biotechnol. 1996;45:111-23
[10] Darfler F. A protein-free medium for the growth of hybridomas and other cells of the immune system (Bezbielkovinové médium na rast hybridómov a iných buniek imunitného systému). In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769-78
[11] Barnes D, Sato G. Bezsérové bunkové kultúry: zjednocujúci prístup. Cell. 1980;22:649-55
[12] Hamilton W, Ham R. Clonal growth of chinese hamster cell lines in protein-free media (Klonálny rast bunkových línií čínskeho škrečka v bezbielkovinových médiách). In Vitro. 1977;13:537-47
[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Analysis of the cytotoxic effects of light-exposed HEPES-containing culture medium. In Vitro Cell Dev Biol. 1985;21:282-7
[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. Phenol red in tissue culture media is a weak estrogen: implications concerning the study of estrogen-responsive cells in culture. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496-500
[15] Karmiol S. Development of serum free media (Vývoj bezsérových médií). In: Master JRW, editor. Animal Cell culture, 3. vydanie. Oxford:Oxford University Press; 2000.
[16] Perlman D. Use of antibiotics in cell culture media (Použitie antibiotík v médiách na kultiváciu buniek). Methods Enzymol. 1979;58:110-6
[17] McGarrity G. Šírenie a kontrola mykoplazmovej infekcie bunkových kultúr. In Vitro. 1976;12:643-8
[18] Masters J, Stacey G. Zmena média a pasážovanie bunkových línií. Nat Protoc. 2007;2:2276-84
[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M,et al. Histone demethylase KDM6A directly senses oxygen to control chromatin and cell fate. Science. 2019;363:1217-1222
[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M,et al. Efficiency of Plasmocin™ on various mammalian cell lines infected by mollicutes in comparison with commonly used antibiotics in cell culture: a local experience. Cytotechnológia. 2011;63:609-20
[21] Kragh Hansen U. Molekulárne aspekty väzby ligandov na sérový albumín. Pharmacol Rev. 1981;33:17-53