Roztok na oddelenie buniek Accutase – 100 ml
Roztok na uvoľňovanie buniek Accutase s EDTA a fenolovou červenou – 100 ml
Accutase je pripravený na použitie, sterilne filtrovaný roztok na oddelenie buniek, navrhnutý ako šetrná alternatíva k trypsínu/EDTA na disociáciu adhezívnych cicavčích buniek zo štandardných plastových nádob na tkanivové kultúry a povrchov s adhezívnou vrstvou. Kombinuje proteolytickú a kolagenolytickú enzýmovú aktivitu vo vyváženom soľnom roztoku, aby zabezpečil účinnú, ale kontrolovanú disociáciu, zachoval proteíny na povrchu buniek a podporil vysokú životaschopnosť po pasáži a rýchle opätovné pripojenie.
Zloženie Accutase je založené na Dulbeccovom fosfátovom pufrovanom fyziologickom roztoku (DPBS) s EDTA a fenolovou červenou ako vizuálnym indikátorom pH. Enzýmy sú nemamalského a nebakteriálneho pôvodu, vďaka čomu je Accutase obzvlášť vhodný pre výskum kmeňových buniek, pracovné postupy pri výrobe vakcín a akékoľvek použitie, kde je potrebné minimalizovať kontamináciu pochádzajúcu zo zvierat alebo mikroorganizmov. Roztok sa pri 37 °C automaticky inhibuje, takže po oddelenie nie je potrebné žiadne neutralizačné činidlo ani médium obsahujúce sérum – bunky je možné preniesť priamo do čerstvého média.
Kľúčové vlastnosti
- Pripravená na použitie 1x sterilne filtrovaná kvapalina – nie je potrebné riedenie ani rekonštitúcia
- Kombinovaná proteolytická a kolagenolytická enzýmová aktivita pre šetrnú disociáciu
- Každá šarža je štandardizovaná na definovanú disociačnú aktivitu pre konzistentnosť medzi šaržami
- Enzýmy nepochádzajúce z cicavcov ani z baktérií
- Automatická inhibícia pri 37 °C – nie je potrebný neutralizačný roztok
- Formulované v Dulbeccovom PBS s EDTA
- Obsahuje fenolovú červenú ako vizuálny indikátor pH
- pH 6,8 – 7,8
Typické použitie
Accutase jemne disociuje širokú škálu adhezívnych a citlivých typov buniek, vrátane ľudských embryonálnych kmeňových buniek (hESCs), ľudských indukovaných pluripotentných kmeňových buniek (iPSCs), neurálnych kmeňových buniek, primárnych neurónov a bežne kultivovaných adhezívnych línií, ako sú HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 a A549. Typické prípady použitia zahŕňajú:
- Bežnú subkultiváciu a pasážovanie adhezívnych cicavčích buniek
- Šetrná disociácia jednotlivých buniek hESCs, iPSCs a iných citlivých línií
- Príprava vzoriek pre prietokovú cytometriu a analýzu FACS
- Analýzu markerov na povrchu buniek, kde záleží na integritě epitopu
- Testovanie migrácie, proliferácie a apoptózy buniek
- Testovanie kľudového stavu prostredníctvom štúdií o deprivácii séra a transfekcii onkogénov
- Testovanie migrácie nádorových buniek a buniek neurálnej lišty
- Zvýšenie produkcie v pracovných postupoch s bioreaktormi
Pri bežnej práci naneste približne 10 ml Accutase na 75 cm2 kultivačnej plochy a inkubujte 5–10 minút pri izbovej teplote. Optimálny čas inkubácie by sa mal stanoviť pre každú bunkovú líniu a nemal by presiahnuť jednu hodinu. Pred pridaním opláchnite bunkovú vrstvu roztokom soli bez Ca2+/Mg2+, napríklad DPBS bez vápnika a horčíka, aby ste odstránili zvyšky séra a dvojmocné katióny.
Manipulácia a skladovanie
Neotvorenú fľašu skladujte zmrazenú pri teplote -15 °C alebo nižšej. Rozmrazujte buď pri izbovej teplote, alebo cez noc pri teplote +2 °C až +8 °C. Accutase nerozmrazujte vo vodnom kúpeli pri teplote 37 °C, pretože zvýšené teploty znižujú aktivitu enzýmu. Po rozmrazení sa roztok môže skladovať až 2 mesiace pri teplote +2 °C až +8 °C; neskladujte pri izbovej teplote. Pred použitím nereagent nezahrievajte na 37 °C – pridajte ho priamo do prepláchnutých buniek pri izbovej teplote. Pre dlhodobú skladovateľnosť sa odporúča rozdelenie na jednorazové dávky, aby sa zabránilo opakovaným cyklom rozmrazovania. Vždy pracujte v aseptických podmienkach.
Kvalita
Vyrobené podľa prísnych noriem kvality. Každá šarža Accutase je sterilizovaná filtráciou a testovaná na sterilitu, pH, vzhľad a disociačnú aktivitu, aby sa zabezpečil konzistentný a reprodukovateľný výkon v rámci jednotlivých šarží.
Špecifikácie produktu
| Špecifikácia | Podrobnosti |
|---|---|
| Typ produktu | Reagent na uvoľňovanie/disociáciu buniek |
| Formát | Sterilne filtrovaná kvapalina, pripravená na použitie |
| Objem | 100 ml |
| Pracovná koncentrácia | 1x (pripravené na použitie) |
| Enzymatická aktivita | Kombinovaná proteolytická a kolagenolytická |
| Pôvod enzýmu | Nesavčí a nebakteriálny |
| Pufrový systém | Dulbeccoho PBS s EDTA |
| Indikátor pH | Fenolová červená |
| Rozsah pH | 6,8 – 7,8 |
| Vzhľad | Číry, bledočervený až oranžový roztok |
| Skladovacia teplota | -15 °C alebo nižšia |
| Stabilita po rozmrazení | Až 2 mesiace pri teplote +2 °C až +8 °C |
| Odporúčaný objem použitia | ~10 ml na 75 cm2 kultivačnej plochy |
| Typická doba inkubácie | 5 – 10 minút pri izbovej teplote |
| Prepravné podmienky | Zmrazené v suchom ľade |
| Určené použitie | Iba na výskumné účely a ďalšiu výrobu |
Zloženie (zloženie na liter)
| Zložka | Koncentrácia (mg/l) |
|---|---|
| Anorganické soli | |
| Chlorid sodný (NaCl) | 8000,00 |
| Hydrogénfosforečnan disodný (Na2HPO4) | 1150,00 |
| Chlorid draselný (KCl) | 200,00 |
| Dihydrogénfosforečnan draselný (KH2PO4) | 200,00 |
| Ostatné zložky | |
| EDTA · 4Na (tetrasodný EDTA) | 220,00 |
| Fenolová červená | 3,00 |
| Vlastná zmes enzýmov (proteolytická a kolagenolytická aktivita) | 1x |
Accutase je registrovaná ochranná známka spoločnosti Innovative Cell Technologies, Inc.