Volum: 100 ml
Oppbevaring: ≤ –15 °C
Sterilitet: Sterilfiltrert
Stabil glutaminløsning (L-alanyl-L-glutamin, 200 mM) er en svært stabil dipeptidform av L-glutamin som er utviklet som en direkte erstatning for konvensjonell L-glutamin i cellekulturmedier. L-glutamin er en essensiell aminosyre og en viktig energikilde for dyrkede celler, og spiller en avgjørende rolle i cellevekst, metabolisme og proteinsyntese.
Anvendelse og fordeler
I standard flytende medier brytes L-glutamin relativt raskt ned ved 37 °C, noe som fører til dannelse av giftige biprodukter som ammoniumioner, som kan påvirke cellenes levedyktighet og eksperimentelle resultater negativt. Stabil glutamin overvinner denne begrensningen ved å tilby en ikke-nedbrytbar dipeptidform som forblir intakt under dyrkningsforhold.
Cellene spalter dipeptidbindingen enzymatisk for å frigjøre L-glutamin etter behov, noe som sikrer en kontinuerlig tilførsel av fersk glutamin samtidig som det forhindrer opphopning av skadelige avfallsprodukter. Dette gjør løsningen spesielt fordelaktig for langvarige cellekulturer og vekstsystemer med høy tetthet.
Formulering og bruk
L-Alanyl-L-Glutamin-løsningen tilberedes i vann av cellekulturkvalitet i en konsentrasjon på 200 mM og er sterilt filtrert for kontamineringsfølsomme anvendelser. Den kan fortynnes direkte i komplette medier i henhold til eksperimentelle krav. Oppbevares ved ≤ –15 °C og unngå gjentatte fryse-tine-sykluser for å opprettholde produktets stabilitet.
Kun til forskningsbruk. Ikke til bruk i diagnostiske eller terapeutiske prosedyrer. Ikke til bruk på mennesker eller dyr.
Volum: 100 ml
Oppbevaring: +2 °C til +8 °C
Sterilitet: Sterilfiltrert
HEPES-bufferløsning (1 M), også kjent som N-2-hydroksyetylpiperazin-N-2-etansulfonsyre, er et zwitterionisk organisk buffermiddel som er mye brukt i cellekulturmedier. Det er utviklet for å opprettholde stabile pH-forhold i det fysiologiske området 6,7 til 8,6, og støtter optimal cellefunksjon under in vitro-applikasjoner.
Anvendelse og fordeler
HEPES gir pålitelig bufferkapasitet i cellekultursystemer, spesielt når celler håndteres utenfor en CO₂-inkubator. Tilsetning av 10–25 mM HEPES til dyrkningsmedier gir forbedret pH-stabilitet under lengre manipulasjonsperioder, noe som bidrar til å opprettholde konsistente eksperimentelle forhold.
Denne bufferen er membranimpermeabel, har minimal innvirkning på biokjemiske reaksjoner og viser sterk kjemisk og enzymatisk stabilitet. Disse egenskapene gjør den egnet for et bredt spekter av cellekultur
- og biokjemiske anvendelser.
Formulering og bruk
Løsningen leveres som et 1 M konsentrat tilberedt i vann av cellekulturkvalitet og er sterilt filtrert for bruk i kontamineringsfølsomme miljøer. Den kan fortynnes til ønsket arbeidskonsentrasjon avhengig av bruksområdet. Oppbevares ved +2 °C til +8 °C og håndteres under aseptiske forhold for å bevare produktets integritet.
Kun til forskningsbruk. Ikke til bruk i diagnostiske eller terapeutiske prosedyrer. Ikke til bruk på mennesker eller dyr.
Volum: 50 ml
Oppbevaring: +2 °C til +8 °C
Sterilitet: Sterilfiltrert
D-(+)-glukoseoppløsning (dekstroseoppløsning) er et sterilt, bruksklart kosttilskudd som inneholder det naturlig forekommende sukkeret D-(+)-glukose, en sentral komponent i cellemetabolismen. Glukose er involvert i viktige biologiske prosesser som energiproduksjon, glykosylering og dannelse av glykaner som bidrar til cellestruktur og -funksjon.
Anvendelse og fordeler
Denne glukoseoppløsningen er mye brukt som tilskudd i cellekulturmedier og i en rekke celle
- og molekylærbiologiske anvendelser. Som primær karbon
- og energikilde støtter glukose cellevekst, proliferasjon og metabolsk aktivitet. Dens involvering i biosyntetiske veier gjør den også avgjørende for å opprettholde normal cellefysiologi og eksperimentell konsistens.
Formulering og bruk
Løsningen leveres i en høy konsentrasjon på 250 g/l glukose, noe som gjør det mulig å fortynne den fleksibelt i dyrkningsmedier i henhold til eksperimentelle krav. Den er sterilt filtrert for å sikre at den er egnet for kontamineringsfølsomme anvendelser. Oppbevares ved +2 °C til +8 °C og håndteres aseptisk for å opprettholde produktkvaliteten og stabiliteten.
Kun til forskningsbruk. Ikke til bruk i diagnostiske eller terapeutiske prosedyrer. Ikke til bruk på mennesker eller dyr.
Volum: 10 ml
Oppbevaring: +2 °C til +8 °C
Sterilitet: Sterilfiltrert
Insulin-Transferrin-Selenium (ITS) Solution (100x) er et kjemisk definert supplement utviklet for et bredt spekter av cellekulturapplikasjoner. Det brukes oftest som et tilsetningsstoff til basale cellekulturmedier for å støtte cellevekst under reduserte serum
- eller serumfrie forhold.
Anvendelse og fordeler
Vårt ITS-tilskudd gir essensielle komponenter som kreves for optimal ytelse av serumfrie medier. Ved å supplere konvensjonelle næringsmedier med ITS kan behovet for føtalt bovint serum (FBS) for rutinemessig vedlikehold av mange cellelinjer reduseres betydelig. Dette bidrar til å minimere variasjon knyttet til bruk av serum, samtidig som man opprettholder konsistent cellevekst og levedyktighet.
Insulin støtter cellulær opptak og metabolisme av viktige næringsstoffer, transferrin letter jerntransport, og selen bidrar til antioksidantforsvar og enzymatisk aktivitet. Sammen fremmer disse komponentene balansert cellemetabolisme og forbedret reproduserbarhet i definerte kultursystemer.
Sammensetning og bruk
Insulin-Transferrin-Selenium (ITS) leveres som en 100 ganger konsentrert løsning i Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) uten fenolrødt. For standardanvendelser fortynnes det 1:100 i det aktuelle basismediet for å oppnå den anbefalte arbeidskonsentrasjonen. Oppbevares ved +2 °C til +8 °C og håndteres under aseptiske forhold for å opprettholde produktets stabilitet og sterilitet.
Kun til forskningsbruk. Ikke til bruk i diagnostiske eller terapeutiske prosedyrer. Ikke til bruk på mennesker eller dyr.
Volum: 5 ml
Oppbevaring: +2 °C til +8 °C
Sterilitet: Sterilfiltrert
Insulin Human Recombinant Solution er et kjemisk definert tilskudd som ofte brukes til dyrking av pattedyrcellelinjer, inkludert Chinese Hamster Ovary (CHO)-celler. Denne løsningen av cellekulturkvalitet inneholder rekombinant humant insulin uttrykt i Saccharomyces cerevisiae, noe som sikrer høy renhet og jevn ytelse i forskningsapplikasjoner.
Anvendelse og fordeler
Insulin tilsettes rutinemessig i serumfrie og kjemisk definerte medier for å fremme cellevekst og produktivitet. Som et viktig regulerende hormon støtter insulin cellulær opptak, utnyttelse og lagring av glukose, aminosyrer og fettsyrer. Det hemmer også nedbrytningen av glykogen, proteiner og lipider, og bidrar dermed til forbedret cellelevbarhet og metabolsk stabilitet i dyrkningssystemer. Den kjemisk definerte formuleringen støtter reproduserbarhet og minimerer variasjon i sensitive cellekulturarbeidsflyter.
Biologiske egenskaper og bruk
Insulin er et to-kjede polypeptidhormon som produseres naturlig av β-cellene i bukspyttkjertelens øyer. Det har en molekylvekt på omtrent 5 800 Da. α
- og β-kjedene er koblet sammen av to disulfidbindinger mellom kjedene, og α-kjeden inneholder én disulfidbinding innenfor kjeden. For cellekulturformål bør løsningen håndteres under aseptiske forhold og oppbevares ved +2 °C til +8 °C for å opprettholde stabilitet og ytelse.
Kun til forskningsbruk. Ikke til bruk i diagnostiske eller terapeutiske prosedyrer. Ikke til bruk på mennesker eller dyr.
Volum: 100 ml
Oppbevaring: +2 °C til +8 °C
Sterilitet: Sterilfiltrert
Natriumpyruvatløsning (100 mM) er et sterilt, bruksklart tilskudd som er utviklet for å gi en ekstra, lett tilgjengelig energikilde for cellekulturmedier. Natriumpyruvat spiller en viktig rolle i cellenes energimetabolisme og støtter veksten av metabolsk aktive og raskt prolifererende celler, for eksempel tumorceller. Tilskudd kan forbedre cellenes levedyktighet og bidra til å opprettholde metabolsk stabilitet i kultursystemer.
Anvendelse og fordeler
Denne løsningen er mye brukt i rutinemessig cellekultur for å berike medier med pyruvat og fremme optimale vekstforhold. Den støtter ATP-produksjon, kan bidra til å redusere oksidativt stress og bidrar til forbedret metabolsk ytelse hos dyrkede celler. Produktet er produsert i vann av cellekulturkvalitet og sterilt filtrert, og sikrer jevn kvalitet og reproduserbarhet i forskningsarbeidsflyter.
Bruk og kompatibilitet
Den anbefalte sluttkonsentrasjonen for de fleste cellekulturformål er 1 mM natriumpyruvat, oppnådd ved å fortynne 100 mM stamløsningen 1:100 i komplett dyrkningsmedium. Løsningen er kompatibel med et bredt spekter av basale medier og pattedyrcellelinjer. Oppbevares ved +2 °C til +8 °C og beskyttes mot forurensning for å opprettholde produktets stabilitet.
Kun til forskningsbruk. Ikke til bruk i diagnostiske eller terapeutiske prosedyrer. Ikke til bruk på mennesker eller dyr.
Volum: 100 ml Oppbevaring: ≤-15 °C Sterilitet: Sterilfiltrert
Antibiotic/Antimycotic Solution (100x) er et sterilt, bruksklart konsentrat som er utviklet for å redusere risikoen for mikrobiell kontaminering i cellekulturer og relaterte laboratorieapplikasjoner. Denne 100x-løsningen inneholder en veletablert kombinasjon av penicillin, streptomycin og amfotericin B, som gir bredspektret antimikrobiell aktivitet mot grampositive og gramnegative bakterier, gjærsopp og filamentøse sopper. Formuleringen er egnet for bruk i eukaryote cellekulturer, bakteriemedier og andre systemer som er følsomme for kontaminering, og støtter rene og konsekvente laboratorieoperasjoner.
Anvendelse og fordeler Denne løsningen er optimalisert for rutinemessige forskningsprotokoller og brukes i stor utstrekning for å opprettholde aseptiske forhold i arbeidsflyter for cellekulturer. Den gir pålitelig ytelse i kontamineringssensitive miljøer, og hjelper forskere med å redusere risikoen for mikrobiell overvekst uten at det går på bekostning av cellenes helse eller eksperimentell reproduserbarhet. Den sterilfiltrerte formuleringen eliminerer behovet for ytterligere solubiliseringstrinn, noe som bidrar til strømlinjeformet tilberedning av medier og reduserer variabiliteten i daglige laboratorieprosedyrer.
Bruk og kompatibilitet For å oppnå standard arbeidskonsentrasjoner fortynner du løsningen 1:100 i ditt komplette dyrkingsmedium. Produktet er kompatibelt med et bredt spekter av pattedyrcellelinjer og basalmedier. Med konsekvent lagertilgjengelighet kan forskere dra nytte av pålitelig forsyningskontinuitet og forenklet logistikkplanlegging. Løsningen skal oppbevares ved ≤ -15 °C og beskyttes mot gjentatte fryse-tine-sykluser for å opprettholde stabiliteten. Kun til forskningsbruk. Ikke til bruk i diagnostiske eller terapeutiske prosedyrer. Ikke til bruk på mennesker eller dyr.
Volum: 100 ml Oppbevaring: +2 °C til +8 °C Sterilitet: Sterilfiltrert
MEM Non-Essential Amino Acids (100x) er et sterilt tilskudd som er utviklet for å forbedre cellevekst og levedyktighet i cellekultursystemer fra pattedyr. Formuleringen tilsvarer et 100x konsentrat av de ikke-essensielle aminosyrene som finnes i standard Minimum Essential Medium (MEM), noe som muliggjør direkte tilskudd til basalmedier med minimal forberedelse.
Anvendelse og fordeler Dette tilskuddet gir en ekstra aminosyrepool for celler som prolifererer raskt, eller for cellelinjer som har mistet evnen til å syntetisere ikke-essensielle aminosyrer de novo. Ved å lette den metabolske byrden ved biosyntesen bidrar det til forbedret vekstkinetikk, forlenget levedyktighet og større eksperimentell konsistens
- spesielt i næringssensitive kulturer eller kulturer med høy tetthet.
Sammensetning og bruk Løsningen inneholder glycin, L-alanin, L-asparagin, L-asparaginsyre, L-glutaminsyre, L-prolin og L-serin. Den er kompatibel med MEM og de fleste andre standardmedier. Fortynnes 1:100 i det endelige dyrkingsmediet. Dette produktet er sterilfiltrert og klart til bruk uten ytterligere håndteringstrinn. Kun til forskningsbruk. Ikke til bruk i diagnostiske eller terapeutiske prosedyrer. Ikke til bruk på mennesker eller dyr.
- et skånsomt alternativ til Trypsin
Accutase er en celledissosiasjonsløsning som revolusjonerer cellekulturindustrien. Det er en blanding av proteolytiske og kollagenolytiske enzymer som etterligner virkningen av trypsin og kollagenase. I motsetning til trypsin inneholder Accutase ingen pattedyr
- eller bakteriekomponenter og er mye mer skånsom mot cellene, noe som gjør den til en ideell løsning for rutinemessig løsgjøring av celler fra standard vevskulturplast og adhesjonsbelagt plast. I dette blogginnlegget skal vi se nærmere på fordelene og bruksområdene til Accutase, og hvordan det endrer spillet innen cellekultur.
Fordeler med Accutase
Accutase har flere fordeler sammenlignet med tradisjonelle trypsinløsninger. For det første kan den brukes når det er behov for skånsom og effektiv løsgjøring av en hvilken som helst adherente cellelinje, noe som gjør den til en direkte erstatning for trypsin. For det andre fungerer Accutase svært godt på embryonale og nevronale stamceller, og det har vist seg at den opprettholder levedyktigheten til disse cellene etter passering. For det tredje bevarer Accutase de fleste epitoper for påfølgende flowcytometrianalyse, noe som gjør den ideell for analyse av celleoverflatemarkører.
I tillegg trenger ikke Accutase å nøytraliseres ved passering av adherente celler. Ved å tilsette mer media etter at cellene er delt, fortynnes Accutase slik at den ikke lenger er i stand til å løsrive celler. Dette eliminerer behovet for et inaktiveringstrinn og sparer tid for cellekulturteknikerne. Accutase trenger heller ikke å alikvoteres, og en flaske er stabil i kjøleskapet i to måneder.
Bruksområder for Accutase
Accutase er en direkte erstatning for trypsinløsning og kan brukes til passering av cellelinjer. I tillegg fungerer Accutase godt når celler skal løsnes for analyse av mange celleoverflatemarkører ved hjelp av flowcytometri og for cellesortering. Andre nedstrøms bruksområder for Accutase-behandling omfatter analyse av celleoverflatemarkører, virusvekstanalyse, celleproliferasjon, tumorcellemigrasjonsanalyser, rutinemessig cellepassasje, produksjonsoppskalering (bioreaktor) og strømningscytometri.
Sammensetning av Accutase
Accutase inneholder ingen pattedyr
- eller bakteriekomponenter og er en naturlig enzymblanding med proteolytisk og kollagenolytisk enzymaktivitet. Den er formulert i en mye lavere konsentrasjon enn trypsin og kollagenase, noe som gjør den mindre giftig og mer skånsom, men like effektiv.
Effektiviteten til Accutase
Accutase har vist seg å være effektivt når det gjelder å løsrive primær
- og stamceller og opprettholde høy cellelevedyktighet sammenlignet med enzymer av animalsk opprinnelse, som trypsin. 100 % av cellene gjenvinnes etter 10 minutter, og det er ikke farlig å la cellene ligge i Accutase i opptil 45 minutter, takket være Accutases autodigestion.
Oppsummering
Konklusjonen er at Accutase er en kraftfull løsning som er i ferd med å endre spillereglene for cellekultur. Med sin skånsomme natur, effektivitet og allsidighet er Accutase det ideelle alternativet til trypsin. Hvis du er på utkikk etter en pålitelig og effektiv løsning for celledelingen, er Accutase løsningen for deg.
Hva er det i EMEM?
EMEM er en modifisert versjon av Eagles minimum essential medium, som inneholder Earle's Balanced Salt Solution, ikke-essensielle aminosyrer, L-glutamin, natriumpyruvat og natriumbikarbonat. Det er viktig å merke seg at dette nivået av natriumbikarbonat er beregnet for bruk i 5 % CO2 i luften. For å opprettholde effektiviteten anbefales det å oppbevare mediet ved 2 °C til 8 °C i mørket når det ikke er i bruk.
Hva brukes EMEM til?
Eagle's minimal essential medium (EMEM) er et celledyrkningsmedium som kan opprettholde celler i vevskultur. Mediet inneholder høyere konsentrasjoner av aminosyrer, noe som gir en mer nøyaktig tilnærming til proteinsammensetningen i dyrkede pattedyrceller. EMEM kan brukes til å dyrke ulike celler, blant annet fibroblaster, humane leverkreftceller (HepG2) og humane føtale hjerneprogenitor-deriverte astrocyttceller (PDA). Det brukes vanligvis i nærvær av føtalt bovint serum (FBS), kalve
- eller hestesera.
Hvordan skiller EMEM seg fra andre cellekulturmedier?
EMEM og Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) har noen likhetstrekk, men de er også forskjellige. Begge mediene mangler protein og inneholder de aminosyrene, saltene, glukosen og vitaminene som er nødvendige for å forsyne en celle med energi og opprettholde den i vevskultur. DMEM er imidlertid modifisert slik at det inneholder opptil fire ganger mer vitaminer og aminosyrer og to til fire ganger mer glukose enn EMEM. Det er verdt å merke seg at EMEM også er forskjellig fra den opprinnelige MEM-formuleringen.
Kvalitetskontroll
Sterilfiltrert
Oppbevaring og holdbarhet
Oppbevares ved +2 °C til +8 °C, beskyttet mot lys.
Etter åpning, oppbevares ved 4 °C og brukes innen 6-8 uker.
Transportforhold
Omgivelsestemperatur
Vedlikehold
Oppbevares i kjøleskap ved +2 °C til +8 °C i mørke. Unngå frysing og hyppig oppvarming til +37 °C, da det reduserer produktkvaliteten.
Ikke varm opp mediet til mer enn 37 °C eller bruk ukontrollerte varmekilder som mikrobølgeovner.
Hvis bare en del av mediet skal brukes, ta ut den nødvendige mengden og varm den opp til romtemperatur før bruk.
Sammensetning
Kategori
Komponenter
Konsentrasjon (mg/L)
Aminosyrer
L-arginin HCl
126.00
L-Cystin 2 HCl
31.30
L-glutamin
292.00
L-Histidin HClH2O
42.00
L-isoleucin
52.00
L-Leucin
52.00
L-Lysin HCl
72.50
L-metionin
15.00
L-fenylalanin
32.00
L-treonin
48.00
L-Tryptofan
10.00
L-Tyrosin 2 Na 2H2O
51.90
L-Valin
46.00
Vitaminer
Kolinklorid
1.00
Vitaminer
D-kalsiumpantotenat
1.00
Folsyre
1.00
myo-Inositol
2.00
Nikotinamid
1.00
Pyridoksal HCl
1.00
Riboflavin
0.10
Tiamin HCl
1.00
Uorganiske salter
CaCl2 2H2O
265.00
Uorganiske salter
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Andre komponenter
D-Glukose
1000.00
Andre komponenter
Fenolrødt natriumsalt
11.00
De viktigste egenskapene til Freeze Medium CM-1 inkluderer
Bred kompatibilitet: Effektivt for et bredt spekter av celletyper, inkludert primærceller, stamceller og etablerte cellelinjer.
Høy levedyktighet: Optimalisert for å maksimere cellegjenvinning og levedyktighet etter opptining, noe som sikrer pålitelige eksperimentelle resultater.
Klar til bruk: Praktisk tilberedt og sterilisert for umiddelbar bruk, noe som reduserer forberedelsestiden og risikoen for kontaminering.
Forbedret stabilitet: Opprettholder konsistent ytelse under standard kryopreserveringsforhold, noe som sikrer reproduserbare resultater.
Lang holdbarhet: CM-1 er et serumholdig kryopreserveringsmedium som er klart til bruk, og som kan oppbevares i kjøleskapet i opptil ett år.
Bruk av CM-1 til nedfrysing av celler
Følg disse trinnene for å bruke CM-1 til nedfrysing av både adherente celler og suspensjonsceller
For adherente celler, vask og dissosier dem fra kultursubstratet. For suspensjonsceller går du direkte til neste trinn.
Tell cellene for å sikre at de har riktig konsentrasjon.
Sentrifuger cellene for å pelleter dem, og resuspender dem deretter i CM-1-frysemedium.
Overfør de resuspenderte cellene til kryovialer.
Bruk en langsom nedfrysingsmetode før du overfører cellene til langtidslagring
Metode
Beskrivelse
Trinn
❄️
Manuell frysing
En trinnvis metode som innebærer gradvis reduksjon av temperaturen for å sikre cellenes levedyktighet
1️⃣ Plasser celler i frysemedium i en fryser på 4 °C i 40 minutter.
2️⃣ Overfør til en fryser på -80 °C i 24 timer.
3️⃣ Oppbevar cellene i flytende nitrogen for langtidsoppbevaring
❄️
Bruk av Mr. Frosty
Et praktisk apparat som gjør det mulig å kontrollere frysehastigheten uten elektrisk strøm
1️⃣ Klargjør celler i kryovialer med frysemedium.
2️⃣ Plasser kryovialene i Mr. Frosty-beholderen.
3️⃣ Oppbevares ved -80 °C i 24 timer før de overføres til flytende nitrogen
❄️
Fryser med kontrollert hastighet
En høypresisjonsfryser fra Thermo Fisher eller andre produsenter som er utviklet for kontrollert temperaturreduksjon
1️⃣ Programmer enheten til å senke temperaturen gradvis.
2️⃣ Plasser de forberedte cellene i fryseren.
3️⃣ Etter frysesyklusen overføres cellene til flytende nitrogen
Oppbevar kryovialene ved temperaturer under -130 °C eller i flytende nitrogen for langtidsoppbevaring.
Ingredienser
Inneholder FBS, DMSO, glukose, salter
Bufferkapasitet: pH = 7,2 til 7,6
Cytions frysemedium CM-1 er en pålitelig løsning for kryopreservering som sikrer høy cellelevedyktighet og funksjonalitet etter opptining for et bredt spekter av forskningsapplikasjoner.
- og kyllingleverceller, spesielt under forhold med redusert serum.
Ham's F-12K (Kaighn's) Medium er nøye sammensatt for å optimalisere forholdene for celledyrking. Det har en beriket sammensetning som gir forhøyede nivåer av essensielle komponenter som aminosyrer og natriumpyruvat, samt tilleggselementer som putrescin, tymidin, hypoksantin og sink. Disse tilsetningene gjør det mulig for forskere å supplere mediet med minimalt med serum eller definerte komponenter for spesifikke celletyper, noe som forenkler presise eksperimentelle forhold.
Ham's F-12K (Kaighn's) Medium inneholder ikke proteiner eller vekstfaktorer. Derfor er det ofte nødvendig å supplere med vekstfaktorer og føtalt bovint serum (FBS), slik at forskerne kan skreddersy mediet etter kravene til sine spesifikke cellelinjer. For å oppnå optimal ytelse må konsentrasjonen av FBS optimaliseres nøye for hver enkelt cellelinje, slik at optimal vekst og funksjonalitet sikres.
For å opprettholde en fysiologisk pH benytter Ham's F-12K (Kaighn's) Medium et natriumbikarbonatbuffersystem (2,5 g/L), noe som krever et kontrollert CO2-miljø på 5-10 % under dyrkingen. Dette sikrer at pH-verdien i mediet holder seg innenfor det ideelle området for cellevekst og levedyktighet
Kvalitetskontroll
pH = 7,2 +/
- 0,02 ved 20-25 °C.
Hvert parti er testet for sterilitet og fravær av mykoplasma og bakterier.
Vedlikehold
Oppbevares i kjøleskap ved +2 °C til +8 °C i mørke. Frysing og oppvarming opp til +37 °C reduserer produktets kvalitet.
Ikke varm opp mediet til mer enn 37 °C eller bruk ukontrollerbare varmekilder (f.eks. mikrobølgeovner).
Hvis bare en del av mediet skal brukes, tar du denne mengden ut av flasken og varmer den opp i romtemperatur.
Holdbarhetstiden for alle medier unntatt basismediet er 8 uker fra produksjonsdato.
Sammensetning
Komponenter
mg/L
Uorganiske salter
Kalsiumklorid x 2H2O
135,24
Kobber(II)sulfat x 5H2O
0,00
Jern(II)sulfat x 7H2O
0,83
Magnesiumklorid x 6H2O
105,72
Magnesiumsulfat x 7H2O
394,49
Kaliumklorid
283,29
Kaliumdihydrogenfosfat
58,52
Natriumklorid
7597,20
di-Natriumhydrogenfosfatvannfritt
115,02
Sink sulfat x 7H2O
0,14
Andre komponenter
D(+)-Glukose vannfri
1260,00
Hypoksantin
4,08
DL-α-Liponsyre
0,21
Fenolrød
3,00
Putrescin x 2HCl
0,32
Natriumpyruvat
220,00
NaHCO3
2500,00
Tymidin
0,73
Aminosyrer
L-Alanin
17,82
L-arginin x HCl
421,40
L-asparagin x H2O
30,02
L-asparaginsyre
26,62
L-Cystein x HCl x H2O
70,24
L-glutamin
292,20
L-glutaminsyre
29,42
Glysin
15,01
L-Histidin x HCl x H2O
41,92
L-isoleucin
7,87
L-Leucin
26,24
L-Lysin x HCl
73,04
L-metionin
8,95
L-fenylalanin
9,91
L-prolin
69,06
L-Serin
21,02
L-Threonin
23,82
L-Tryptofan
4,08
L-Tyrosin
10,87
L-Valin
23,42
Vitaminer
D(+)-Biotin
0,07
D-kalsiumpantotenat
0,48
Kolinklorid
13,96
Folsyre
1,32
myo-Inositol
18,02
Nikotinamid
0,04
Pyridoksin x HCl
0,06
Riboflavin
0,04
Tiamin x HCl
0,34
Vitamin B12
1,36
Fosfatbufret saltvann (PBS) er en mye brukt bufferløsning i biologisk og kjemisk forskning. Den spiller en avgjørende rolle når det gjelder å opprettholde pH-balansen og osmolariteten under ulike eksperimentelle prosedyrer, inkludert vevsprosessering og cellekultur. Vår PBS-løsning er omhyggelig formulert med ingredienser av høy renhet for å sikre stabilitet og pålitelighet i hvert eneste eksperiment. Osmolariteten og ionekonsentrasjonene i PBS-løsningen vår etterligner i stor grad de som finnes i menneskekroppen, noe som gjør den isotonisk og ugiftig for de fleste celler.
Sammensetningen av vår PBS-løsning
Vår PBS-løsning er en pH-justert blanding av ultrarene fosfatbuffere og saltvannsløsninger. Ved en 1X arbeidskonsentrasjon inneholder den
8000 mg/L natriumklorid (NaCl)
200 mg/L kaliumklorid (KCl)
1150 mg/L vannfritt dibasisk natriumfosfat (Na2HPO4)
200 mg/L Vannfritt kaliumfosfat monobasisk (KH2PO4)
Denne sammensetningen sikrer en optimal pH
- og ionebalanse, og er egnet for et bredt spekter av biologiske anvendelser.
Bruksområder for vår PBS-løsning
Vår PBS-løsning er ideell for ulike bruksområder innen biologisk forskning. De isotone og giftfrie egenskapene gjør den egnet til fortynning av substanser og skylling av cellebeholdere. PBS-løsninger som inneholder EDTA, er effektive for å løsne celler som sitter fast og klumper seg sammen. PBS bør imidlertid ikke tilsettes toverdige metaller som sink, da dette kan føre til utfelling. I slike tilfeller anbefales Good's buffere. I tillegg er vår PBS-løsning et akseptabelt alternativ til viralt transportmedium for transport og lagring av RNA-virus, inkludert SARS-CoV-2.
Kvalitetskontroll
Sterilfiltrert
Oppbevaring og holdbarhet
Oppbevares ved +2 °C til +25 °C, beskyttet mot lys.
Etter åpning, oppbevares ved 2 °C til 25 °C og brukes innen 24 måneder.
Transportforhold
Omgivelsestemperatur
Vedlikehold
Oppbevares i kjøleskap ved +2 °C til +8 °C i mørke. Unngå frysing og hyppig oppvarming til +37 °C, da det reduserer produktkvaliteten.
Ikke varm opp mediet til mer enn 37 °C eller bruk ukontrollerte varmekilder som mikrobølgeovner.
Hvis bare en del av mediet skal brukes, ta ut den nødvendige mengden og varm den opp til romtemperatur før bruk.
Sammensetning
Kategori
Komponenter
Konsentrasjon (mg/L)
Salter
Kaliumklorid
200
Kaliumfosfat, vannfritt, monobasisk
200
Natriumklorid
8000
Natriumfosfat, vannfritt, dibasisk
1150
RPMI 1640 Medium ble opprinnelig utviklet for å støtte veksten av humane leukemiceller i både suspensjons
- og monolagskulturer, men har gjennom modifikasjoner fra forskere og kommersielle leverandører utviklet seg til å bli egnet for et bredt spekter av pattedyrceller. Det er eksepsjonelt kompatibelt med cellelinjer som HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocytter og karsinomer.
RPMI 1640 Medium skiller seg ut fra andre cellekulturmedier på grunn av sin unike sammensetning. Det inneholder en betydelig mengde fosfat, aminosyrer og vitaminer. Det inneholder blant annet biotin, vitamin B12 og PABA, som ikke finnes i Eagle's Minimal Essential Medium eller Dulbecco's Modified Eagle Medium. RPMI 1640 Medium har dessuten betydelig høyere konsentrasjoner av vitaminene inositol og kolin. Det inneholder imidlertid ikke proteiner, lipider eller vekstfaktorer. Derfor er det ofte nødvendig å tilsette 10 % føtalt bovint serum (FBS) for å skape optimale forhold for cellevekst.
Buffersystemet i RPMI 1640 Medium er basert på natriumbikarbonat og krever et 5-10 % CO2-miljø for å opprettholde en fysiologisk passende pH. Inkluderingen av reduksjonsmidlet glutation skiller dette mediet ytterligere fra andre.
Kvalitetskontroll
Sterilfiltrert
Oppbevaring og holdbarhet
Oppbevares ved +2 °C til +8 °C, beskyttet mot lys.
Etter åpning, oppbevar ved 4 °C og bruk innen 6-8 uker.
Transportforhold
Omgivelsestemperatur
Vedlikehold
Oppbevares i kjøleskap ved +2 °C til +8 °C i mørke. Unngå frysing og hyppig oppvarming til +37 °C, da det reduserer produktkvaliteten.
Ikke varm opp mediet til mer enn 37 °C eller bruk ukontrollerte varmekilder som mikrobølgeovner.
Hvis bare en del av mediet skal brukes, ta ut den nødvendige mengden og varm den opp til romtemperatur før bruk.
Sammensetning
Kategori
Komponenter
Konsentrasjon (mg/L)
Aminosyrer
Glysin
10.00
L-Alanyl-L-glutamin
434.40
L-arginin
200.00
L-asparaginH2O
56.82
L-asparaginsyre
20.00
L-Cystin 2HCl
65.20
L-glutaminsyre
20.00
L-Histidin HClH2O
20.27
L-hydroksy-L-prolin
20.00
L-isoleucin
50.00
L-Leucin
50.00
L-Lysin HCl
40.00
L-metionin
15.00
L-fenylalanin
15.00
L-prolin
20.00
L-Serin
30.00
L-Threonin
20.00
L-Tryptofan
5.00
L-Tyrosin 2Na 2H2O
28.83
L-Valin
20.00
Vitaminer
p-aminobensoesyre
1.00
D-Biotin
0.20
Kolinklorid
3.00
D-kalsiumpantotenat
0.25
Folsyre
1.00
myo-Inositol
35.00
Nikotinamid
1.00
Pyridoksin HCl
1.00
Riboflavin
0.20
Tiamin HCl
1.00
Vitamin B12
0.005
Uorganiske salter
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Andre komponenter
D-Glukose
2000.00
L-glutation redusert
1.00
Fenolrødt natriumsalt
5.30
Denne unike formuleringen kombinerer Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) og Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) i et nøyaktig 1:1-forhold. Sammensetningen er ytterligere forbedret ved tilsetning av L-glutamin.
DMEM, som er avledet fra Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), har en høyere konsentrasjon av aminosyrer og vitaminer enn forgjengeren. Ham's F-12 er derimot basert på Ham's F-10 medium, og gir et komplementært sett med essensielle komponenter.
For å støtte optimal cellevekst er det vanlig praksis å supplere DMEM:Ham's F12 med FBS i en typisk konsentrasjon på 5-10 %. Dette er nødvendig fordi mediet mangler veksthormoner, lipider og proteiner som er avgjørende for cellenes utvikling.
DMEM:Ham's F12 inneholder et pH-buffersystem og tilsettes ofte fenolrødt, som er en pH-indikator. Celler som dyrkes i DMEM:Ham's F12, eller i et hvilket som helst medium som bruker bikarbonatbuffersystemet, krever et kontrollert CO2-miljø på 5-10 % for å opprettholde passende pH-nivåer.
Kvalitetskontroll
Sterilfiltrert
Oppbevaring og holdbarhet
Oppbevares ved +2 °C til +8 °C, beskyttet mot lys.
Etter åpning, oppbevares ved 4 °C og brukes innen 6-8 uker.
Transportforhold
Omgivelsestemperatur
Vedlikehold
Oppbevares i kjøleskap ved +2 °C til +8 °C i mørke. Unngå frysing og hyppig oppvarming til +37 °C, da det reduserer produktkvaliteten.
Ikke varm opp mediet til mer enn 37 °C eller bruk ukontrollerte varmekilder som mikrobølgeovner.
Hvis bare en del av mediet skal brukes, ta ut den nødvendige mengden og varm den opp til romtemperatur før bruk.
Sammensetning
Kategori
Komponenter
Konsentrasjon (mg/L)
Aminosyrer
Glysin
18.75
L-Alanin
4.45
L-arginin HCl
147.50
L-asparagin H₂O
7.50
L-asparaginsyre
6.65
L-cystein HCl H₂O
17.56
L-Cystin 2 HCl
31.29
L-glutaminsyre
7.35
L-glutamin
365.00
L-Histidin HCl H₂O
31.48
L-isoleucin
54.47
L-Leucin
59.05
L-Lysin HCl
91.25
L-metionin
17.24
L-fenylalanin
35.48
L-prolin
17.25
L-Serin
26.25
L-Threonin
53.45
L-Tryptofan
9.02
L-Tyrosin Dinatriumsalt
48.10
L-Valin
52.85
Vitaminer
D-Biotin
0.0035
Kolinklorid
8.98
D-kalsiumpantotenat
2.24
Folsyre
2.66
myo-Inositol
12.60
Nikotinamid
2.02
Pyridoksin HCl
0.031
Pyridoksal HCl
2.00
Riboflavin
0.219
Tiamin HCl
2.17
Vitamin B12
0.68
Uorganiske salter
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Andre komponenter
D-Glukose
3151.00
Hypoksantin
2.40
HEPES
3574.50
Linolsyre
0.042
Liposyre
0.105
Fenolrødt natriumsalt
8.63
Putrescin 2 HCl
0.081
Natriumpyruvat
55.00
Tymidin
0.365
- 0,02 ved 20-25 °C. Hvert parti er testet for sterilitet og fravær av mykoplasma og bakterier. Oppbevaring Oppbevares i kjøleskap ved +2 °C til +8 °C i mørket. Frysing og oppvarming til +37 °C reduserer produktets kvalitet. Ikke varm opp mediet til over 37 °C og ikke bruk ukontrollerbare varmekilder (f.eks. mikrobølgeovn). Hvis bare en del av mediet skal brukes, fjern denne mengden fra flasken og varm den opp til romtemperatur. Holdbarheten for alle medier unntatt basismediet er 6 til 8 uker fra åpningsdatoen. Sammensetning Komponenter mg/L Uorganiske salterKalsiumklorid x 2H2O132,00 Magnesiumsulfat97,67 Kaliumklorid400 Natriumklorid6 460,00 Dinatriumhydrogenfosfat (vannfritt)504,00 Andre komponenterD(+)-glukose (vannfri)3 000 Glutathion (redusert)0,5 Kjøttpeptone600 Fenolrødt natriumsalt11 AminosyrerL-alanin13,36 L-arginin x HCl42,14 L-asparagin x H2O45,03 L-asparaginsyre19,97 L-Cystein x HCl x H2O31,75 L-glutamin (stabil)219,15 L-glutaminsyre22,07 Glysin7,51 L-histidin x HCl x H2O20,96 L-hydroksyprolin19,67 L-isoleucin39,36 L-leucin39,36 L-lysin x HCl36,54 L-metionin14,92 L-fenylalanin16,52 L-prolin17,27 L-serin26,28 L-treonin17,87 L-tryptofan3,06 L-tyrosin dinatriumsalt26,1 L-valin17,57 Vitaminerp-Aminobensoesyre1,0 Askorbinsyre0,56 D(+)-biotin0,2 D-kalsiumpantotenat0,2 Kolin klorid5 Folsyre10 Myo-inositol36 Nikotinamid0,5 Nikotinsyre0,5 Pyridoksal-HCl0,5 Pyridoksin HCl0,5 Riboflavin0,2 Tiamin HCl0,2 Vitamin B122,0
Medium 199 har en rekke bruksområder innen feltet. Det kan effektivt opprettholde kumulus-oocytt-komplekset (COC) og støtte in vitro-modning av oocytter. I tillegg brukes det til skylling av aspirasjonslinjer under egginnsamling fra tyske Holstein-kyr. Medium 199 er dessuten et utmerket medium for dyrking av hjerteendotelceller fra rotter. Disse bruksområdene viser hvor allsidig og tilpasningsdyktig Medium 199 er til ulike eksperimentelle behov.
Historikk
Utviklingen av Medium 199 på 1950-tallet markerte et betydelig fremskritt innen vevskulturmedier. Før det ble introdusert, var mange dyrkingsmedier basert på produkter og vevsekstrakter fra dyr. Morgan og hans kolleger revolusjonerte imidlertid feltet ved å formulere en fullstendig definert næringskilde for cellekulturer. Gjennom eksperimenter med ulike kombinasjoner av vitaminer, aminosyrer og andre faktorer oppdaget de de eksepsjonelle vekstfremmende egenskapene til Medium 199.
Kvalitetskontroll
pH = 7,2 +/
- 0,02 ved 20-25 °C.
Hvert parti er testet for sterilitet og fravær av mykoplasma og bakterier.
Vedlikehold
Oppbevares i kjøleskap ved +2 °C til +8 °C i mørke. Frysing og oppvarming opp til +37 °C minimerer produktets kvalitet.
Ikke varm opp mediet til mer enn 37 °C eller bruk ukontrollerbare varmekilder (f.eks. mikrobølgeovner).
Hvis bare en del av mediet skal brukes, tar du denne mengden ut av flasken og varmer den opp i romtemperatur.
Holdbarheten for alle medier unntatt basismediet er 8 uker fra produksjonsdatoen.
Sammensetning
Komponenter
mg/L
Uorganiske salter
Kalsiumklorid x 2H2O
264,92
Jern(III)nitrat x 9H2O
0,72
Magnesiumsulfat
97,67
Kaliumklorid
400,00
Natriumacetat x 3H2O
82,95
Natriumklorid
6,800.00
Natriumdihydrogenfosfat x H2O
140,00
Andre komponenter
Adeninsulfat
10,00
AMP
0,20
ATP
1,00
Kolesterol
0,20
2'-Deoksyribose
0,50
D(+)-Glukose vannfri
1,000.00
Glutation (rød)
0,05
Guanin x HCl
0,30
Hypoksantin
0,30
Fenol rød
10,00
D-Ribose
0,50
Tymin
0,30
Tween 80
4,90
Uracil
0,30
Xantin
0,30
NaHCO3
2,200.00
Aminosyrer
L-Alanin
25,00
L-arginin x HCl
70,00
L-asparaginsyre
30,00
L-Cystein x HCl x H2O
0,10
L-Cystin
20,00
L-glutamin stabil
149,00
L-glutaminsyre
67,00
Glysin
50,00
L-Histidin x HCl x H2O
21,88
L-Hydroksyprolin
10,00
L-isoleucin
20,00
L-Leucin
60,00
L-Lysin x HCl
70,00
L-metionin
15,00
L-fenylalanin
25,00
L-prolin
40,00
L-Serin
25,00
L-Threonin
30,00
L-Tryptofan
10,00
L-Tyrosin
40,00
L-Valin
25,00
Vitaminer
4-Amino benzosyre
0,05
Askorbinsyre
0,05
D(+)-Biotin
0,01
Calciferol
0,10
D-kalsiumpantotenat
0,01
Kolinklorid
0,50
Folsyre
0,01
myo-Inositol
0,05
Menadion
0,01
Nikotinsyre
0.025
Nikotinamid
0.025
Pyridoksal x HCl
0.025
Pyridoksol x HCl
0.025
Riboflavin
0,01
DL-α-tokoferolfosfat dinatriumsalt
0,01
Tiamin x HCl
0,01
Vitamin A-acetat
0,14
IMDM egner seg godt til raskt prolifererende cellekulturer med høy tetthet, inkludert Jurkat-, COS-7
- og makrofagceller. De ulike modifikasjonene av IMDM som er tilgjengelige for en rekke ulike cellekulturapplikasjoner, finner du ved hjelp av medievælgerverktøyet. Flytende medier gir viktige næringsstoffer til alle celledyrkingsapplikasjoner. Alle våre høykvalitetsmedier for celledyrking produseres i henhold til den opprinnelig publiserte formelen eller de modifikasjonene som er nødvendige for å sikre konsekvent ytelse og stabilitet for dyrkingsmediet.
IMDM vs. DMEM
IMDM inneholder kaliumnitrat i stedet for jernnitrat og HEPES og natriumpyruvat. De ekstra komponentene i IMDM gjør det mer egnet for spesialiserte celletyper og spesifikke bruksområder enn DMEM.
IMDM vs. RPMI
IMDM og RPMI har forskjellige formuleringer som kan være relevante for PMA/ionomycin-stimulering. En vesentlig forskjell er konsentrasjonen av Ca2+. Mens RPMI inneholder 0,42 mM Ca2+, inneholder IMDM 1,49 mM.
Kvalitetskontroll
pH = 7,2 +/
- 0,02 ved 20-25 °C.
Hvert parti er testet for sterilitet og fravær av mykoplasma og bakterier.
Vedlikehold
Oppbevares i kjøleskap ved +2 °C til +8 °C i mørke. Frysing og oppvarming opp til +37 °C minimerer produktets kvalitet.
Ikke varm opp mediet til mer enn 37 °C eller bruk ukontrollerbare varmekilder (f.eks. mikrobølgeovner).
Hvis bare en del av mediet skal brukes, tar du denne mengden ut av flasken og varmer den opp i romtemperatur.
Holdbarheten for alle medier unntatt basismediet er 8 uker fra produksjonsdatoen.
Sammensetning
Komponenter
mg/L
Uorganiske salter
Kalsiumklorid x 2 H2O
219,00
Kaliumklorid
330,00
Kaliumnitrat
0.076
Magnesiumsulfat vannfritt
97,73
Natriumklorid
4,505.00
Natriumdihydrogenfosfat vannfritt
109,00
Natriumselenitt
0,02
Andre komponenter
D(+)-Glukose vannfri
4,500.00
HEPES
5,958.00
Natriumpyruvat
110,00
Fenolrød
15,00
Aminosyrer
L-Alanin
25,00
L-arginin x HCl
84,00
L-asparagin x H2O
25,00
L-asparaginsyre
30,00
L-Cystin x 2HCl
91,24
L-glutamin
584,00
L-glutaminsyre
75,00
Glysin
30,00
L-Histidin x HCl x H2O
42,00
L-isoleucin
104,80
L-Leucin
104,80
L-Lysin x HCl
146,20
L-metionin
30,00
L-fenylalanin
66,00
L-prolin
40,00
L-Serin
42,00
L-Threonin
95,20
L-Tryptofan
16,00
L-Tyrosin x 2Na
104,20
L-Valin
93,60
Vitaminer
D(+)-Biotin
0.013
D-kalsiumpantotenat
4,00
Kolinklorid
4,00
Folsyre
4,00
myo-Inositol
7,20
Medier for cellekulturer: En oversikt
En av de viktigste metodene innen biovitenskap er cellekultur. Uttrykket "cellekultur" betyr at celler, vev eller organer fjernes fra et dyr eller en plante og deretter implanteres i et kunstig miljø som er gunstig for deres overlevelse og/eller vekst De grunnleggende miljøbehovene for optimal celleutvikling er kontrollert temperatur, et substrat for cellefeste, et tilstrekkelig vekstmedium og en inkubator som opprettholder optimal pH og osmolalitet. Cellene må ha disse forholdene for å kunne vokse til sitt fulle potensial.
Valget av et egnet vekstmedium for in vitro-dyrking er både det mest kritiske og det mest avgjørende stadiet i celledyrking. Et vekstmedium, også kjent som dyrkingsmedium, er en væske eller gel som er sammensatt for å fremme organismers utvikling i mikroskopisk, cellulær eller plantelignende skala. Mediet som brukes til dyrking av celler, inneholder ofte tilstrekkelig tilførsel av energi og stoffer som kontrollerer cellesyklusen. Hovedkomponentene i et dyrkingsmedium er aminosyrer, vitaminer, uorganiske salter, glukose og serum. Serum tilsettes mediet fordi det fungerer som en kilde til vekstfaktorer, hormoner og festefaktorer. I tillegg til å tilføre næringsstoffer bidrar mediet også til å opprettholde pH- og osmolalitetsnivået.
Typer medium som brukes i cellekultur
Både humane og animalske celler kan dyrkes i enten et kunstig eller syntetisk medium eller i et helt naturlig medium som er supplert med naturlige elementer. I det følgende vil vi gi deg en oversikt over de ulike medietypene som er tilgjengelige i dag.
Naturlige medier
Bare biologiske væsker som finnes i sin naturlige tilstand, kan finnes i naturlige medier. Naturlige medier er svært nyttige og enkle for dyrking av et bredt utvalg av dyrecelletyper. Mangelen på kunnskap om de nøyaktige komponentene som inngår i naturlige medier, er den viktigste faktoren som bidrar til den lave repeterbarheten av resultatene som oppnås ved bruk av naturlige medier.
Kunstige medier
Fremstilling av kunstige eller syntetiske medier innebærer tilsetning av næringsstoffer (både organiske og uorganiske), serumproteiner, karbohydrater, kofaktorer, vitaminer og salter, samt O2- og CO2-gassfaser [1].
Det er utviklet ulike typer kunstige medier for å oppfylle én eller flere av følgende funksjoner 1) Umiddelbar overlevelse (en balansert saltløsning med en presis pH-verdi og osmotisk trykk). 2) Langvarig overlevelse (en balansert saltløsning supplert med ulike formuleringer av organiske kjemikalier og/eller serum). 3) Ubegrenset utvikling. 4) Spesialiserte funksjoner.
Det finnes fire forskjellige klassifiseringer for kunstige medier:
Serumholdige medier
Den vanligste typen tilskudd som finnes i medier som brukes til dyrking av dyreceller, er føtalt bovint serum. Det tilsettes dyrkingsmediet som et billig supplement for å oppnå best mulige vekstbetingelser. I tillegg til å fungere som en transportør eller kelator for ustabile eller vannuløselige næringsstoffer, hormoner og vekstfaktorer, proteasehemmere og andre stoffer, binder og nøytraliserer serumet også skadelige molekyler.
Serumfritt medium
Tilstedeværelsen av serum i mediet har en rekke ulemper og kan potensielt føre til store tolkningsfeil i immunologisk forskning [2, 3]. Det har blitt utviklet en rekke forskjellige serumfrie medier [4, 5]. Disse mediene er vanligvis spesifikt formulert for å støtte dyrking av en enkelt celletype, for eksempel Knockout Serum Replacement og Knockout DMEM fra Thermo Fisher Scientific, og mTESR medium fra Stem Cell Technologies [6], for stamceller [7].
I tillegg inneholder disse mediene definerte mengder av rensede vekstfaktorer, lipoproteiner og andre proteiner, som ellers vanligvis tilføres fra serumet [8]. Disse mediene omtales ofte som "definerte kulturmedier", siden komponentene som inngår i disse mediene, er godt kjent.
Kjemisk definerte medier
Disse mediene inneholder ultrarene uorganiske og organiske komponenter som ikke har blitt forurenset av noen form for kontaminering. De kan også inneholde rene proteintilsetninger, for eksempel vekstfaktorer.
genetisk modifisering av bakterier eller gjær, sammen med tilsetning av bestemte fettsyrer, vitaminer, kolesterol og aminosyrer, resulterer i produksjon av deres bestanddeler [9].
Proteinfrie medier
Proteinfrie medier er medier som ikke inneholder noe protein i det hele tatt, men kun ikke-proteinholdige elementer. Sammenlignet med medier tilsatt serum fremmer bruken av medier uten tilsatt protein større celleproliferasjon og proteinuttrykk, og gjør det enklere å rense et eventuelt produkt som genereres i en nedstrømsprosess [10-12]. Protein er ikke inkludert i formuleringer som MEM og RPMI-1640. Et proteintilskudd kan imidlertid gis hvis det er nødvendig.
Kulturmedier og deres grunnleggende komponenter
Kommersielle dyrkingsmedier kan kjøpes som pulver eller væske og inneholder ofte en rekke næringsstoffer som aminosyrer, glukose, salter, vitaminer og andre kosttilskudd.
Behovene for disse komponentene er forskjellige for hver enkelt cellelinje, og disse variasjonene er årsaken til det store antallet ulike formuleringer av medier. Hver komponent er ansvarlig for en bestemt funksjon, som vil bli beskrevet i de følgende avsnittene:
Buffersystemer
For å opprettholde optimale vekstforhold må pH-verdien kontrolleres, noe som ofte gjøres ved hjelp av ett av to buffersystemer:
Naturlig buffersystem
CO2/H2CO3-forholdet i atmosfæren er det samme som i mediet, noe som skaper en naturlig buffermekanisme. For å bevare den naturlige buffermekanismen må kulturene holdes i et luftmiljø med 5-10 % CO2, noe som ofte oppnås ved å bruke en CO2-inkubator. Noe av det beste med å bruke en naturlig buffer er at den er billig og trygg.
HEPES
Kjemisk bufring ved hjelp av zwitterionet HEPES har en større bufferkapasitet i pH-området 7,2-7,4 og trenger ikke et regulert gassmiljø. For visse celletyper kan en større dose HEPES være skadelig. Medier som inneholder HEPES, er også mye mer utsatt for de fototoksiske effektene av fluorescerende lys [13].
Fenolrødt
PH-indikatoren fenolrødt er ofte inkludert i kommersielt tilgjengelige dyrkingsmedier, noe som muliggjør kontinuerlig overvåking av pH. Når cellene ekspanderer, vil metabolittene som produseres av disse cellene, føre til en endring i pH-verdien og dermed en fargeendring i mediet. Fenolrødt har en dobbel effekt på mediets farge, og gjør det gult ved sur pH og lilla ved basisk pH. pH 7,4, som er den optimale verdien for celledyrking, får mediet til å se fluorescerende rødt ut.
Men fenolrødt har noen ulemper: For det første kan fenolrødt simulere effekten av en rekke steroidhormoner, først og fremst østrogen [14]. Når man studerer østrogenfølsomme celler som brystvev, anbefales det derfor å bruke et medium uten fenolrødt. Natrium-kaliumbalansen forstyrres av tilstedeværelsen av fenolrødt i flere serumfrie formuleringer. Tilsetning av serum eller bovint hypofysehormon til mediet kan motvirke denne effekten [15]. For det tredje vanskeliggjøres deteksjon i flowcytometriske eksperimenter av tilstedeværelsen av fenolrødt.
Uorganiske salter
Medier som inneholder uorganiske salter, for eksempel natrium-, kalium- og kalsiumioner, bidrar til å opprettholde osmotisk likevekt og regulere membranpotensialet.
Aminosyrer
Siden aminosyrer er de grunnleggende bestanddelene i protein, er de en essensiell komponent i hvert eneste cellevekstmedium som noen gang har blitt utviklet. Fordi cellene ikke er i stand til å produsere visse aminosyrer på egen hånd, er det viktig at dyrkingsmediet inneholder essensielle aminosyrer. De er nødvendige for at cellene skal kunne formere seg, og konsentrasjonen av disse aminosyrene er avgjørende for den maksimale celletettheten som kan oppnås. Spesielt L-glutamin, en essensiell aminosyre, er spesielt viktig.
L-glutamin fungerer som en sekundær energikilde for stoffskiftet og bidrar med nitrogen til produksjonen av NAD, NADPH og nukleotider. På grunn av at L-glutamin er en ustabil aminosyre som med tiden går over i en form som cellene ikke kan nyttiggjøre seg, må den tilføres mediet.
I tillegg kan mediet tilføres ikke-essensielle aminosyrer for å fylle på med aminosyrer som har blitt brukt opp i løpet av vekstprosessen. Når vekstmediet tilføres ikke-essensielle aminosyrer, øker cellenes vekst og levedyktighet.
Karbohydrater
Karbohydrater i form av sukkerarter er den viktigste energikilden. Mange av vekstmediene inneholder også maltose og fruktose i tillegg til de mer vanlige sukkerartene glukose og galaktose.
Proteiner og peptider
Albumin, transferrin og fibronektin er de mest brukte proteinene og peptidene. De er spesielt viktige i medier som ikke inneholder serum. Albumin, transferrin, aprotinin, fetuin og fibronektin er noen av proteinene som finnes i serum, som er en rik kilde til protein.
Albumin er det viktigste proteinet i blodet, og dets funksjon er å binde og transportere ulike stoffer, blant annet vann, salter, frie fettsyrer, hormoner og vitaminer, mellom ulike organer og celler. Albuminets evne til å binde seg til kjemikalier gjør det til en effektiv kandidat for å fjerne skadelige forbindelser fra mediet som celler dyrkes i.
Aprotinin er et beskyttende middel i cellekultursystemer, siden det er stabilt ved nøytral og sur pH, samt motstandsdyktig mot høye temperaturer og ødeleggelser som kan forårsakes av proteolytiske enzymer. Det er i stand til å hemme en rekke serinproteaser, blant annet trypsin.
Fetuin er et glykoprotein som kan påvises i større mengder i serum fra fostre og nyfødte dyr sammenlignet med serum fra voksne. I tillegg fungerer det som en serinproteasehemmer. Proteinet fibronektin er en viktig komponent i prosessen med celleadhesjon. Transferrin er et protein som transporterer jern og er ansvarlig for å levere jern til cellemembranene.
Fettsyrer og lipider
De spiller en avgjørende rolle i serumfritt medium når serum er fraværende.
Vitaminer
En rekke vitaminer er nødvendige for cellenes utvikling og spredning. Vitaminer kan ikke produseres i tilstrekkelige mengder av cellene selv, og er derfor essensielle som kosttilskudd i vevskulturer.
I cellekulturer er serum den primære kilden til vitaminer, men medier behandles også med ulike vitaminer for å gjøre dem egnet for en bestemt celletype. Vanligvis brukes B-vitaminer for å stimulere vekst.
Sporelementer
Kjemiske elementer som kobber, sink, selen og trikarboksylsyreintermediater kalles sporstoffer. Sporstoffer tilsettes ofte til medier som ikke inneholder serum, for å erstatte de elementene som vanligvis finnes i serum. Disse grunnstoffene er viktige kjemiske komponenter som er nødvendige for en sunn celleutvikling. Mange biokjemiske reaksjoner er avhengige av visse mikronæringsstoffer, for eksempel enzymaktivitet.
Medietilskudd
Det fulle vekstmediet som er foreslått for visse cellelinjer, trenger ekstra komponenter som ikke finnes i basismediet og serumet. Disse kosttilskuddene støtter cellevekst og riktig metabolsk funksjon.
Selv om hormoner, vekstfaktorer og signalmolekyler er avgjørende for riktig proliferasjon av bestemte cellelinjer, bør følgende forholdsregler alltid tas: Siden tilsetning av kosttilskudd kan endre osmolaliteten i det komplette vekstmediet, noe som kan hemme celleutviklingen, anbefales det alltid å kontrollere osmolaliteten etter tilsetning av kosttilskudd. For de fleste cellelinjer ligger den optimale osmolaliteten mellom 260 og 320 mOSM/kg.
Antibiotika
Antibiotika brukes ofte for å hemme utviklingen av bakterie- og soppforurensninger [16], selv om de ikke er avgjørende for cellevekst. Siden antibiotika kan skjule kontaminering med mykoplasma og resistente bakterier, anbefales det ikke rutinemessig bruk av antibiotika i cellekulturer [17, 18].
I tillegg kan antibiotika forstyrre metabolismen i overfølsomme celler. Penicillin-streptomycin-kombinasjonene fra MilliporeSigma og Life Technologies brukes ofte. Plasmocin har blitt brukt i dyrking av gliomcellelinjene TS603, TS516 og BT260 (19), og det har vist seg å være effektivt for å fjerne mykoplasmaforurensning (20).
Serum
Albuminer, vekstfaktorer og veksthemmere er alle til stede i serum. Serum er en av de viktigste komponentene i cellekulturmediet fordi det inneholder aminosyrer, proteiner, vitaminer (spesielt fettløselige vitaminer som A, D, E og K), karbohydrater, lipider, hormoner, vekstfaktorer, mineraler og sporstoffer.
Serum fra foster og kalv fra storfe brukes ofte for å fremme utviklingen av dyrkede celler. Fosterserum inneholder rikelig med vekstfaktorer og egner seg godt til kloning av celler og utvikling av sensitive celler. På grunn av de reduserte vekstfremmende egenskapene brukes kalveserum i kontaktinhiberingseksperimenter. Normale vekstmedier inneholder ofte 2 % til 10 % serum. Tilsetning av serum til dyrkningsmedium tjener følgende formål [21]:
-
Serumet tilfører cellene viktige næringsstoffer (både i oppløsning og bundet til proteiner).
-
Serum inneholder flere vekstfaktorer og hormoner som er involvert i vekstfremmende og spesialisert celleaktivitet.
-
Det inneholder mange bindingsproteiner, som albumin og transferrin, som transporterer andre kjemikalier inn i cellen. Albumin transporterer for eksempel fett, vitaminer, hormoner osv. inn i cellene.
-
Det inneholder også proteiner, som fibronektin, som øker cellenes adhesjon til underlaget. I tillegg produserer det spredningselementer som bidrar til celleekspansjon før deling.
-
Det leverer proteasehemmere som forhindrer proteolyse i cellene.
-
Den inneholder også mineraler som Na+, K+, Zn2+ og Fe2+.
-
Det øker viskositeten i mediet, slik at cellene beskyttes mot mekanisk skade under omrøring av suspensjonskulturen.
-
Det er også en buffer.
Referanser
[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Ernæring av dyreceller i vevskultur; innledende studier på et syntetisk medium. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8
[2] Kerbel R, Blakeslee D. Rask adsorpsjon av en føtal kalveserumkomponent av pattedyrceller i kultur. En potensiell kilde til artefakter i studier av antisera mot cellespesifikke antigener. Immunology. 1976;31:881-91
[3] Sula K, Draber P, Nouza K. Tilsetning av serum til mediet som brukes til fremstilling av cellesuspensjoner som en mulig kilde til artefakter i cellemedierte reaksjoner studert ved hjelp av popliteal lymfeknutetest. J Immunogenet. 1980;7:483-9
[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Kommersielle serumfrie medier: hybridomvekst og monoklonal antistoffproduksjon. J Immunol Methods. 1991;145:175-83
[5] Barnes D, Sato G. Metoder for vekst av dyrkede celler i serumfritt medium. Anal Biochem. 1980;102:255-70
[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O,et al. HSP70 chaperoner RNA-fri TDP-43 inn i anisotropiske intranukleære flytende sfæriske skall. Science. 2021;371:
[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J,et al. Down-syndrom-indusert senescens forstyrrer den kjernefysiske arkitekturen til nevrale progenitorer. Cell Stem Cell. 2022;29:116-130.e7
[8] Iscove N, Melchers F. Fullstendig erstatning av serum med albumin, transferrin og soyabønnelipid i kulturer av lipopolysakkaridreaktive B-lymfocytter. J Exp Med. 1978;147:923-33
[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Systematisk forbedring av et kjemisk definert proteinfritt medium for hybridomvekst og produksjon av monoklonale antistoffer. J Biotechnol. 1996;45:111-23
[10] Darfler F. Et proteinfritt medium for vekst av hybridomer og andre celler i immunsystemet. In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769-78
[11] Barnes D, Sato G. Serumfri cellekultur: en samlende tilnærming. Cell. 1980;22:649-55
[12] Hamilton W, Ham R. Klonal vekst av cellelinjer fra kinesisk hamster i proteinfrie medier. In Vitro. 1977;13:537-47
[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Analyse av de cytotoksiske effektene av lyseksponert HEPES-holdig kulturmedium. In Vitro Cell Dev Biol. 1985;21:282-7
[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. Fenolrødt i vevskulturmedier er et svakt østrogen: implikasjoner angående studiet av østrogenresponsive celler i kultur. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496-500
[15] Karmiol S. Utvikling av serumfrie medier. I: Master JRW, redaktør. Animal Cell culture, 3. utg. Oxford: Oxford University Press; 2000.
[16] Perlman D. Bruk av antibiotika i cellekulturmedier. Methods Enzymol. 1979;58:110-6
[17] McGarrity G. Spredning og kontroll av mykoplasmainfeksjon i cellekulturer. In Vitro. 1976;12:643-8
[18] Masters J, Stacey G. Bytte av medium og passering av cellelinjer. Nat Protoc. 2007;2:2276-84
[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M,et al. Histondemetylase KDM6A registrerer oksygen direkte for å kontrollere kromatin og celleskjebne. Science. 2019;363:1217-1222
[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M,et al. Efficiency of Plasmocin™ on various mammalian cell lines infected by mollicutes in comparison with commonly used antibiotics in cell culture: a local experience. Cytotechnology. 2011;63:609-20
[21] Kragh Hansen U. Molekylære aspekter ved ligandbinding til serumalbumin. Pharmacol Rev. 1981;33:17-53