Autentisering av museceller (Short Tandem Repeat (STR))
Med tanke på hvor utbredt krysskontaminering og feilidentifisering er, utgjør ektheten til cellene som brukes i vitenskapelige forskningsprosjekter et stort problem. Det anslås at rundt 15–20 % av all forskning basert på cellelinjer foregår med feilidentifiserte cellelinjer. Derfor er det avgjørende å bestemme en cellelinjes profil ved hjelp av STR-analyse for å kunne gjennomføre pålitelig og repeterbar forskning. I tillegg krever et økende antall tidsskrifter verifisering av cellelinjer før de aksepterer en artikkel.
Vår tjeneste omfatter
- Autentisering av cellelinjer
- Sammenligning med nettbaserte databaser
- Publikasjonsklar analyserapport
Enkel å bruke
- Last ned bestillingsskjemaet for autentisering av cellelinjer, og legg det utfylte og utskrevne skjemaet ved prøveforsendelsen.
- Vennligst send oss prøvene i en polstret konvolutt ved romtemperatur.
- For gDNA må du sende oss ≥ 50 μl av 50 ng/μl gDNA i Tris eller EDTA (10 mM Tris, 0,1 mM EDTA).
- For cellepellets må du sende oss 1,0–5,0 millioner celler som en cellepellet. Vask to ganger med PBS og resuspender i 0,5 ml 70–90 % etanol.
Markører
- Menneskelige celler typebestemmes med PowerPlex-systemet fra Promega ved bruk av 16 STR-markører.
- Museceller typebestemmes med 18 STR-markører.
- Rotte-celler typebestemmes med 14 STR-markører og én kjønnsspesifikk markør.
- Hundeceller typebestemmes med 11 STR-markører.
- Hamsterceller typebestemmes ved hjelp av 10 STR-markører.
Resultater
Du vil motta resultatene innen to uker via e-post. Resultatene inkluderer en sammenligning av dataene med Cellosaurus-databasen. Cellelinjen vil bli klassifisert som autentisert eller feilidentifisert.
Korte tandemrepetisjoner (STR-er)
Et DNA-motiv på 2–13 baser som gjentas opptil flere hundre ganger, utgjør en kort tandemrepetering (STR). Individuell variasjon i antall repetisjoner i en STR fører til variasjoner i lengden på de produserte fragmentene ved bruk av PCR. Cellelinjene profileres ved hjelp av disse variasjonene i fragmentlengder på flere loci.
Påvisning av blandinger av cellelinjer
Det er mulig å identifisere forurensning av én cellelinje med én eller flere andre cellelinjer ned til en frekvens på 10 % av den forurensende cellelinjen. Kombinasjoner av cellelinjer gir typisk STR-profiler med tre eller flere topper for én eller flere lokuser.