Šūnu kultūru barotne

Kultivētām šūnām ir nepieciešama rūpīga vides kontrole, lai tās sekmīgi augtu un saglabātos. Visaptveroša pieeja ietver sterilitātes, barības vielu nodrošināšanas, pH stabilitātes un temperatūras kontroles nodrošināšanu.

Sterili apstākļi un barības vielu piegāde

Lai novērstu piesārņojumu un nodrošinātu šūnu dzīvotspēju, ļoti svarīga ir sterila vide. To parasti panāk, izmantojot aseptiskas metodes un specializētu aprīkojumu, piemēram, laminārās plūsmas pārsegus. Barojošās vielas tiek piegādātas ar barotnēm, kas satur svarīgāko sastāvdaļu maisījumu, tostarp:

  • Neorganiskie sāļi: Sāls: Sāls, kas ir vitāli svarīgas osmotiskā līdzsvara uzturēšanai un šūnu darbībai nepieciešamo jonu nodrošināšanai.
  • Ogļhidrāti: Kalpo kā enerģijas avoti; visbiežāk izmantotais cukurs ir glikoze.
  • Aminoskābes: olbaltumvielu pamatelementi; dažas no tām ir būtiskas, un šūnas tās nevar sintezēt.
  • Vitamīni: Vitamīni: darbojas kā enzīmu reakciju kofaktori; B grupas vitamīni ir būtiski šūnu vielmaiņai.
  • Taukskābes un lipīdi: Svarīgi komponenti šūnu membrānu integritātei un funkcijām.
  • Olbaltumvielas un peptīdi: Bezseruma barotnēs tie aizstāj augšanas faktorus un saistošos proteīnus, ko parasti piegādā serums.
  • Serums: Bieži tiek iekļauti kā augšanas faktoru avots, lai gan arvien populārākas kļūst bezseruma alternatīvas, lai samazinātu mainīgumu un piesārņojuma risku.
  • pH un temperatūras stabilitāte: Šūnām optimālai augšanai parasti nepieciešams pH diapazons 7,2-7,4. To regulē buferēšanas sistēmas, kas var būt vai nu uz CO2/bikarbonāta bāzes, vai ķīmiski, izmantojot tādus līdzekļus kā HEPES. Lai imitētu fizioloģiskos apstākļus, temperatūru uztur aptuveni 37 °C.

Barotņu varianti un optimizācija

Gadu gaitā ir izstrādātas dažādas bāzes barotnes, kas piemērotas konkrētiem šūnu tipiem:

  • Līdzsvaroti sāļu šķīdumi: Sarežģītāki barotņu sastāvi: Sarežģīti sāļu šķīdumi: veido pamatu sarežģītākiem barotņu sastāviem.
  • Bāzes barotnes, piemēram, minimālā pamatviela (MEM), tiek izmantotas primārajām kultūrām un diploīdām šūnām.
  • Kompleksās barotnes: Piemēram, RPMI 1640, tās ir piemērotas plašākam zīdītāju šūnu spektram.
  • Bezseruma barotnes: Pielāgotas konkrētiem lietojumiem, samazinot piesārņojuma risku ar dzīvnieku izcelsmes sastāvdaļām.

Barotņu sagatavošana un kvalitātes kontrole

Barotnes var pagatavot uz vietas no svarīgākajām sastāvdaļām vai iegādāties kā gatavus šķīdumus. Kvalitātes kontrole ietver piesārņotāju neesamības un pareizas sastāvdaļu koncentrācijas nodrošināšanu. Pulverveida barotņu atjaunošanai nepieciešams augstas kvalitātes ūdens, un sagatavotās barotnes jāsterilizē, parasti filtrējot.

Seruma lietošana un drošības apsvērumi

Seruma, jo īpaši fetālā liellopu seruma (FBS), lietošana ir izplatīta, jo tas satur daudz augšanas faktoru. Tomēr, ņemot vērā bažas par tādām slimībām kā GSE, tiek ievēroti stingri testēšanas un ieguves protokoli, lai nodrošinātu drošību.

Regulatīvās pamatnostādnes un tendences

Noteikumi nosaka dzīvnieku izcelsmes materiālu izmantošanu kultūrās, uzsverot ieguves un testēšanas nozīmi. Tendence, kur iespējams, likvidēt šādus materiālus, izpaužas, izstrādājot serumu nesaturošas un no dzīvniekiem nesaturošas barotnes alternatīvas.

Noslēgumā jāsecina, ka šūnu kultūru barotnēm ir būtiska nozīme šūnu augšanā un uzturēšanā in vitro. Katra sastāvdaļa tiek rūpīgi atlasīta un optimizēta, lai imitētu in vivo vidi, nodrošinot šūnām augšanas, izdzīvošanas un funkcionalitātes apstākļus.

DMEM, w: 4,5 g/l glikozes, w: 4 mM L-glutamīna, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM nātrija piruvāta
DMEM (Dulbekko modificētā Eagle barotne) ir ļoti universāla un plaši izmantota bāzes barotne, kas paredzēta dažādu zīdītāju šūnu augšanai bioloģiskajos pētījumos. Tā ir ideāla barotne primāro fibroblastu, neironu, glijas šūnu, HUVEC, gludās muskulatūras šūnu, kā arī tādu populāru šūnu līniju kā HeLa, 293, Cos-7 un PC-12 kultivēšanai.
DMEM atšķiras no citām barotnēm ar unikālu sastāvu. Tā satur iespaidīgu četrkāršu aminoskābju un vitamīnu koncentrācijas palielinājumu, salīdzinot ar oriģinālo Eagle's Minimal Essential Medium. Sākotnēji DMEM tika izstrādāta ar zemu glikozes (1 g/l) un nātrija piruvāta saturu, bet tagad to bieži izmanto ar augstāku glikozes saturu, ar nātrija piruvātu vai bez tā. DMEM nesatur olbaltumvielas, lipīdus vai augšanas faktorus, tāpēc to nepieciešams papildināt. Lai panāktu optimālu augšanu, DMEM parasti papildina ar 10 % liellopu fetālā seruma (FBS). Turklāt DMEM izmanto nātrija bikarbonāta bufera sistēmu, un, lai uzturētu fizioloģisku pH, ir nepieciešama 5-10 % CO2 vide.
Dulbekko modificētā Ērgļa barotne (DMEM) ir augsti novērtēta kā noteikta šūnu un audu kultūru barotne, kas apmierina dažādu adherējošu šūnu fenotipu augšanas vajadzības. Tā pārspēj oriģinālo Ērgļa barotni, kas tika izstrādāta pagājušā gadsimta 50. gados vistas šūnu kultivēšanai, pateicoties uzlabotam papildu sastāvam, kas pazīstams kā Dulbekko modifikācija. Šī modifikācija ievērojami palielina atsevišķu aminoskābju un vitamīnu saturu līdz pat četrām reizēm, salīdzinot ar oriģinālo barotni.
Šūnu kultūru jomā DMEM ir būtiska nozīme kā dažādu šūnu tipu, tostarp primāro šūnu, cilmes šūnu un transformētu šūnu, augšanas barotnei. Pētnieki izmanto modificēto DMEM versiju arī dažādiem pētījumiem, piemēram, zāļu atklāšanai, audu inženierijai un šūnu signalizācijas ceļu izpētei.

Kvalitātes kontrole

Sterili filtrēts


Uzglabāšana un derīguma termiņš

Uzglabāt no gaismas pasargātā +2°C līdz +8°C temperatūrā.
Pēc atvēršanas uzglabāt 4°C temperatūrā un izmantot 6-8 nedēļu laikā.


Pārvadāšanas nosacījumi

Apkārtējā temperatūra


Uzturēšana

Uzglabāt ledusskapī no +2°C līdz +8°C temperatūrā, tumsā. Izvairīties no sasaldēšanas un biežas sasilšanas līdz +37°C, jo tas samazina produkta kvalitāti.
Nesildiet barotni augstāk par 37°C un neizmantojiet nekontrolētus siltuma avotus, piemēram, mikroviļņu krāsnis.
Ja jāizmanto tikai daļa barotnes, pirms lietošanas izņemiet nepieciešamo daudzumu un uzsildiet to līdz istabas temperatūrai.


Sastāvs



Kategorija
Sastāvdaļas
Koncentrācija (mg/l)


Aminoskābes
Glicīns
30.00



L-arginīns HCl
84.00



L-cistīns 2 HCl
62.57



L-glutamīns
584.00



L-Histidīns HClH2O
42.00



L-izoleicīns
105.00



L-leicīns
105.00



L-lizīns HCl
146.00



L-metionīns
30.00



L-fenilalanīns
66.00



L-serīns
42.00



L-treonīns
95.00



L-triptofāns
16.00



L-tirozīns 2 Na 2H2O
103.79



L-valīns
94.00


Vitamīni
Holīna hlorīds
4.00



D-kalcija pantotenāts
4.00



Folijskābe
4.00



mio-Inozitols
7.20



Nikotīnamīds
4.00



Piridoksāls HCl
4.00



Riboflavīns
0.40



Tiamīna HCl
4.00


Neorganiskie sāļi
CaCl2 2H2O
265.00



Fe(NO3)3 9H2O
0.10



KCl
400.00



MgSO4 7H2O
200.10



NaCl
6400.00



NaHCO3
3700.00



NaH2PO4 2H2O
141.73


Citi komponenti
D-glikoze
4500.00



Fenola sarkanais nātrija sāls
15.90



Nātrija piruvāts
110.00

25,00 €*
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-glutamīns, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS
Viena no visplašāk izmantotajām sintētiskajām šūnu kultūru barotnēm ir Minimum Essential Medium Eagle (MEM). Šo barotni 1959. gadā pirmo reizi ieviesa Harijs Ērgls (Harry Eagle), un kopš tā laika tā ir kļuvusi par populāru izvēli dažādiem šūnu tipiem, kas tiek audzēti monoslāņos un adherentās šūnu līnijās.
Kas ir EMEM sastāvā?
EMEM ir modificēta Eagle's minimālās nepieciešamās barotnes versija, kas satur Earle's Balanced Salt Solution Solution, nebūtiskas aminoskābes, L-glutamīnu, nātrija piruvātu un nātrija bikarbonātu. Svarīgi atzīmēt, ka šāds nātrija bikarbonāta līmenis ir paredzēts lietošanai 5 % CO2 gaisā. Lai saglabātu tās efektivitāti, ieteicams barotni uzglabāt 2 °C līdz 8 °C temperatūrā tumsā, kad tā netiek lietota.
Kam izmanto EMEM?
Eagle's minimal essential medium (EMEM) ir šūnu kultūru barotne, kas var uzturēt šūnas audu kultūrā. Šī barotne satur aminoskābju augstāku koncentrāciju, kas ļauj precīzāk tuvināt kultivēto zīdītāju šūnu olbaltumvielu sastāvu. EMEM var izmantot dažādu šūnu, tostarp fibroblastu, cilvēka aknu vēža šūnu līnijas (HepG2) šūnu un cilvēka augļa smadzeņu progenitoru atvasinātu astrocītu šūnu (PDA) kultivēšanai. Parasti to izmanto, pievienojot fetālo liellopu serumu (FBS), teļa vai zirga serumu.
Ar ko EMEM atšķiras no citām šūnu kultūru barotnēm?
Lai gan EMEM un Dulbekko modificētajai Eagle barotnei (DMEM) ir dažas līdzības, tās arī atšķiras. Abās barotnēs trūkst olbaltumvielu, un tās satur aminoskābes, sāļus, glikozi un vitamīnus, kas nepieciešami, lai nodrošinātu šūnu ar enerģiju un uzturētu tās audu kultūrā. Tomēr DMEM sastāvs ir modificēts tā, ka tajā ir līdz četrām reizēm vairāk vitamīnu un aminoskābju un divas līdz četras reizes vairāk glikozes nekā EMEM. Ir vērts atzīmēt, ka EMEM atšķiras arī no oriģinālā MEM sastāva.


Kvalitātes kontrole

Sterili filtrēts


Uzglabāšana un derīguma termiņš

Uzglabāt no gaismas pasargātā +2°C līdz +8°C temperatūrā.
Pēc atvēršanas uzglabāt 4°C temperatūrā un izmantot 6-8 nedēļu laikā.


Pārvadāšanas nosacījumi

Apkārtējā temperatūra


Uzturēšana

Uzglabāt ledusskapī no +2°C līdz +8°C temperatūrā, tumsā. Izvairīties no sasaldēšanas un biežas sasilšanas līdz +37°C, jo tas samazina produkta kvalitāti.
Nesildiet barotni augstāk par 37°C un neizmantojiet nekontrolētus siltuma avotus, piemēram, mikroviļņu krāsnis.
Ja jāizmanto tikai daļa barotnes, pirms lietošanas izņemiet nepieciešamo daudzumu un uzsildiet to līdz istabas temperatūrai.



Sastāvs



Kategorija
Sastāvdaļas
Koncentrācija (mg/l)


Aminoskābes
L-arginīns HCl
126.00


L-cistīns 2 HCl
31.30


L-glutamīns
292.00


L-Histidīns HClH2O
42.00


L-izoleicīns
52.00


L-leicīns
52.00


L-lizīns HCl
72.50


L-metionīns
15.00


L-fenilalanīns
32.00


L-treonīns
48.00


L-triptofāns
10.00


L-tirozīns 2 Na 2H2O
51.90


L-valīns
46.00


Vitamīni
Holīna hlorīds
1.00


Vitamīni
D-kalcija pantotenāts
1.00


Folijskābe
1.00


mio-Inozitols
2.00


Nikotīnamīds
1.00


Piridoksāls HCl
1.00


Riboflavīns
0.10


Tiamīna HCl
1.00


Neorganiskie sāļi
CaCl2 2H2O
265.00


Neorganiskie sāļi
KCl
400.00


MgSO4
97.67


NaCl
6800.00


NaHCO3
2200.00


NaH2PO4
122.00


Citi komponenti
D-glikoze
1000.00


Citi komponenti
Fenola sarkanais nātrija sāls
11.00

25,00 €*
Hama F12 barotne, w: 1,0 mM stabils glutamīns, w: 1,0 mM nātrija piruvāts, w: 1,176 g/L NaHCO3
Hama F-12 barotne, pazīstama arī kā Hama F-12 barības vielu maisījums, ir plaši izmantota bāzes barotne, kas īpaši izstrādāta šūnu kultūrām. Tā ir plaši izmantota Ķīnas kāmja olnīcu (CHO) šūnu, plaušu šūnu un peļu L šūnu bezseruma, vienšūnu platošanai. Turklāt Hama F-12 ir arī barotne, ko izvēlas klonu toksicitātes noteikšanai (CTA).
Viena no tās ievērojamām priekšrocībām ir spēja atbalstīt šūnu augšanu bez seruma papildināšanas. Tas novērš iespējamās seruma sastāvdaļu radītās iejaukšanās, nodrošinot konsekventus un uzticamus eksperimentu rezultātus. Nodrošinot kultūru vidi bez seruma, Hama F-12 barotne pētniekiem nodrošina lielāku kontroli pār saviem pētījumiem.
Vēl viena būtiska Ham's F-12 barotnes īpašība ir tās piemērotība vienšūnu uzslāņošanai. Tāpēc tā ir lieliska izvēle dažādām šūnu līnijām, tostarp CHO šūnām, plaušu šūnām un peļu L šūnām. Barotnes optimizētais barības vielu sastāvs atvieglo atsevišķu šūnu efektīvu piestiprināšanos un augšanu, ļaujot izveidot homogēnas šūnu kultūras ar uzlabotu reproducējamību.
Turklāt Hama F-12 barotne ir atzīta par vēlamo barotni klonu toksicitātes noteikšanai (CTA). Šim testam ir izšķiroša nozīme, novērtējot vielu citotoksisko iedarbību uz šūnām. Izmantojot Hama F-12 barotni CTA, pētnieki var precīzi novērtēt dažādu savienojumu vai apstrādes ietekmi uz atsevišķām šūnām, sniedzot vērtīgu ieskatu par toksikoloģiskajiem profiliem.
Kvalitātes kontrole

pH = 7,2 +/
- 0,02 20-25 °C temperatūrā.
Katra partija ir pārbaudīta attiecībā uz sterilitāti un mikoplazmas un baktēriju neesamību.

Uzturēšana

Uzglabāt ledusskapī +2°C līdz +8°C temperatūrā tumsā. Sasaldēšana un sasilšana līdz +37 °C samazina produkta kvalitāti.
Nesildiet barotni līdz temperatūrai, kas pārsniedz 37° C, un neizmantojiet nekontrolējamus siltuma avotus (piemēram, mikroviļņu krāsnis).
Ja jāizmanto tikai daļa barotnes, izņemiet šo daudzumu no pudeles un uzsildiet to istabas temperatūrā.
Jebkuras barotnes, izņemot pamata barotni, derīguma termiņš ir 8 nedēļas no izgatavošanas datuma.

Sastāvs




Sastāvdaļas
mg/l


Neorganiskie sāļi
Kalcija hlorīds x 2H2O
44,00



Vara(II) sulfāts x 5H2O
0,00



Dzelzs (II) sulfāts x 7H2O
0,83



Magnija hlorīds x 6H2O
122,00



Kālija hlorīds
223,65



Nātrija hlorīds
7599,00



dinātrija hidrogēnfosfātsbezūdens
142,04



Cinka sulfāts x 7H2O
0,86


Citi komponenti
D(+)-glikoze bezūdens
1801,60



Hipoksantīns
4,08



Linolskābe
0,08



DL-α-liposkābe
0,21



Fenola sarkanais
1,20



Putrescīns x 2HCl
0,16



Nātrija piruvāts
110,00



Timidīns
0,73



NaHCO3
1176,00


Aminoskābes
L-alanīns
8,91



L-arginīns x HCl
210,70



L-asparagīns x H2O
15,01



L-asparagīnskābe
13,31



L-cisteīns x HCl x H2O
35,12



L-alanil-L-Glutamīns
217,30



L-glutamīnskābe
14,71



Glicīns
7,51



L-histidīns x HCl x H2O
20,96



L-izoleicīns
3,94



L-leicīns
13,12



L-lizīns x HCl
36,54



L-metionīns
4,48



L-fenilalanīns
4,96



L-Prolīns
34,53



L-serīns
10,51



L-treonīns
11,91



L-triptofāns
2,04



L-tirozīns
5,44



L-valīns
11,71


Vitamīni
D(+)-biotīns
0,01



D-kalcija pantotenāts
0,24



Holīna hlorīds
13,96



Folijskābe
1,32



mio-inositols
18,02



Nikotīnamīds
0,04



Piridoksīns x HCl
0,06



Riboflavīns
0,04



Tiamīns x HCl
0,34



B12 vitamīns
1,36

25,00 €*
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glikozes, w: 2,5 mM L-glutamīna, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM nātrija piruvāta, w: 1,2 g/l NaHCO3
DMEM: Hama F12 ir plaši atzīta un plaši izmantota bāzes barotne šūnu kultūru bioloģiskajos pētījumos. Tā kalpo kā pamata barības vielu avots dažādu zīdītāju šūnu līniju augšanai, jo īpaši, ja to papildina ar liellopu fetālo serumu (FBS).

Šis unikālais preparāts apvieno Dulbekko modificēto Ērgļa barotni (DMEM) un Hama F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) precīzā proporcijā 1:1. Tās sastāvu vēl vairāk uzlabo L-glutamīna pievienošana.

DMEM, kas atvasināts no Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), piedāvā lielāku aminoskābju un vitamīnu koncentrāciju, salīdzinot ar iepriekšējo. Turpretī Ham's F-12 pamatā ir Ham's F-10 barotne, kas nodrošina papildu svarīgāko sastāvdaļu kopumu.

Lai nodrošinātu optimālu šūnu augšanu, DMEM:Ham's F12 parasti papildina ar FBS 5-10 % koncentrācijā. Šī piedeva ir nepieciešama, jo barotnei trūkst augšanas hormonu, lipīdu un olbaltumvielu, kas ir būtiski šūnu attīstībai.

DMEM:Ham's F12 ietver pH buferu sistēmu, un to bieži papildina ar pH indikatoru
- fenola sarkano. Lai uzturētu atbilstošu pH līmeni, šūnām, kas kultivētas DMEM:Ham's F12 vai jebkurā barotnē, kurā izmantota bikarbonāta bufera sistēma, nepieciešama kontrolēta CO2 vide 5-10 % apmērā.


Kvalitātes kontrole

Sterili filtrēts


Uzglabāšana un derīguma termiņš

Uzglabāt no gaismas pasargātā +2 °C līdz +8 °C temperatūrā.
Pēc atvēršanas uzglabāt 4°C temperatūrā un lietot 6-8 nedēļu laikā.


Pārvadāšanas nosacījumi

Apkārtējā temperatūra


Uzturēšana

Uzglabāt ledusskapī no +2°C līdz +8°C temperatūrā, tumsā. Izvairīties no sasaldēšanas un biežas sasilšanas līdz +37°C, jo tas samazina produkta kvalitāti.
Nesildiet barotni augstāk par 37°C un neizmantojiet nekontrolētus siltuma avotus, piemēram, mikroviļņu krāsnis.
Ja jāizmanto tikai daļa barotnes, pirms lietošanas izņemiet nepieciešamo daudzumu un uzsildiet to līdz istabas temperatūrai.


Sastāvs



Kategorija
Sastāvdaļas
Koncentrācija (mg/l)


Aminoskābes
Glicīns
18.75


L-alanīns
4.45


L-arginīns HCl
147.50


L-asparagīns H₂O
7.50


L-asparagīnskābe
6.65


L-cisteīns HCl H₂O
17.56


L-cistīns 2 HCl
31.29


L-glutamīnskābe
7.35


L-glutamīns
365.00


L-Histidīna HCl H₂O
31.48


L-izoleicīns
54.47


L-leicīns
59.05


L-lizīna HCl
91.25


L-metionīns
17.24


L-fenilalanīns
35.48


L-Prolīns
17.25


L-serīns
26.25


L-treonīns
53.45


L-triptofāns
9.02


L-tirozīna dinātrija sāls
48.10


L-valīns
52.85


Vitamīni
D-Biotīns
0.0035


Holīna hlorīds
8.98


D-kalcija pantotenāts
2.24


Folijskābe
2.66


mio-Inozitols
12.60


Nikotīnamīds
2.02


Piridoksīna HCl
0.031


Piridoksāla HCl
2.00


Riboflavīns
0.219


Tiamīna HCl
2.17


B12 vitamīns
0.68


Neorganiskie sāļi
CaCl₂ 2 H₂O
154.50



CuSO₄ 5 H₂O
0.0013



Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05



FeSO₄ 7 H₂O
0.417



KCl
311.80



MgCl₂ 6 H₂O
61.20



MgSO₄
48.84



NaCl
6996.00



NaHCO₃
1200.00



Na₂HPO₄
71.02



NaH₂PO₄
54.30



ZnSO₄ 7 H₂O
0.432


Citi komponenti
D-glikoze
3151.00


Hipoksantīns
2.40


HEPES
3574.50


Linolskābe
0.042


Liposkābe
0.105


Fenola sarkanais nātrija sāls
8.63


Putrescīns 2 HCl
0.081


Nātrija piruvāts
55.00


Timidīns
0.365

25,00 €*
Hama F12K barotne, w: 2,0 mM L-glutamīns, w: 2,0 mM nātrija piruvāts, w: 2,5 g/L NaHCO3
Iepazīstinām ar Ham's F-12K (Kaighn's) barotni
- specializētu Ham's F-12 barotnes modifikāciju, kas izstrādāta, lai atbilstu unikālām bioloģisko pētījumu prasībām. Šī uzlabotā barotne piedāvā īpašas priekšrocības, uzlabojot primāro cilvēka hepatocītu, kā arī žurku un vistu aknu šūnu kultivēšanu, jo īpaši pazemināta seruma apstākļos.

Ham's F-12K (Kaighn's) barotne ir rūpīgi izstrādāta, lai optimizētu šūnu kultūras apstākļus. Tai ir bagātināts sastāvs, kas nodrošina paaugstinātu tādu būtisku sastāvdaļu kā aminoskābju un nātrija piruvāta, kā arī papildu elementu, tostarp putrescīna, timidīna, hipoksantīna un cinka, līmeni. Šie papildinājumi ļauj pētniekiem papildināt barotni ar minimālu seruma daudzumu vai noteiktiem komponentiem konkrētiem šūnu tipiem, tādējādi atvieglojot precīzus eksperimentālos apstākļus.

Hama F-12K (Kaigna) barotne nesatur olbaltumvielas vai augšanas faktorus. Tāpēc bieži vien ir nepieciešama papildināšana ar augšanas faktoriem un Fetal Bovine Serum (FBS), kas ļauj pētniekiem pielāgot barotni savu konkrēto šūnu līniju prasībām. Lai nodrošinātu optimālu veiktspēju, FBS koncentrācija ir rūpīgi jāoptimizē katrai šūnu līnijai, nodrošinot optimālu augšanu un funkcionalitāti.

Lai uzturētu fizioloģisko pH, Hama F-12K (Kaighn's) barotnē izmanto nātrija bikarbonāta buferisko sistēmu (2,5 g/l), tāpēc kultivēšanas laikā ir nepieciešama kontrolēta 5-10 % CO2 vide. Tas nodrošina, ka barotnes pH saglabājas ideālā diapazonā šūnu augšanai un dzīvotspējai
Kvalitātes kontrole

pH = 7,2 +/
- 0,02 20-25 °C temperatūrā.
Katra partija ir pārbaudīta attiecībā uz sterilitāti un mikoplazmas un baktēriju neesamību.

Uzturēšana

Glabāt ledusskapī +2°C līdz +8°C temperatūrā tumsā. Sasaldēšana, kā arī sasilšana līdz +37°C samazina produkta kvalitāti.
Nesildiet barotni līdz temperatūrai, kas pārsniedz 37°C, un neizmantojiet nekontrolējamus siltuma avotus (piemēram, mikroviļņu krāsnis).
Ja jāizmanto tikai daļa barotnes, izņemiet šo daudzumu no pudeles un uzsildiet to istabas temperatūrā.
Jebkuras barotnes, izņemot pamata barotni, derīguma termiņš ir 8 nedēļas no izgatavošanas datuma.

Sastāvs




Sastāvdaļas
mg/l


Neorganiskie sāļi
Kalcija hlorīds x 2H2O
135,24



Vara(II) sulfāts x 5H2O
0,00



Dzelzs (II) sulfāts x 7H2O
0,83



Magnija hlorīds x 6H2O
105,72



Magnija sulfāts x 7H2O
394,49



Kālija hlorīds
283,29



Kālija dihidrogēnfosfāts
58,52



Nātrija hlorīds
7597,20



nātrija hidrogēnfosfātsbezūdens
115,02



Cinka sulfāts x 7H2O
0,14


Citi komponenti
D(+)-glikoze, bezūdens viela
1260,00



Hipoksantīns
4,08



DL-α-liposkābe
0,21



Fenola sarkanais
3,00



Putrescīns x 2HCl
0,32



Nātrija piruvāts
220,00



NaHCO3
2500,00



Timidīns
0,73


Aminoskābes
L-alanīns
17,82



L-arginīns x HCl
421,40



L-asparagīns x H2O
30,02



L-asparagīnskābe
26,62



L-cisteīns x HCl x H2O
70,24



L-glutamīns
292,20



L-glutamīnskābe
29,42



Glicīns
15,01



L-histidīns x HCl x H2O
41,92



L-izoleicīns
7,87



L-leicīns
26,24



L-lizīns x HCl
73,04



L-metionīns
8,95



L-fenilalanīns
9,91



L-Prolīns
69,06



L-serīns
21,02



L-treonīns
23,82



L-triptofāns
4,08



L-tirozīns
10,87



L-valīns
23,42


Vitamīni
D(+)-biotīns
0,07



D-kalcija pantotenāts
0,48



Holīna hlorīds
13,96



Folijskābe
1,32



mio-inositols
18,02



Nikotīnamīds
0,04



Piridoksīns x HCl
0,06



Riboflavīns
0,04



Tiamīns x HCl
0,34



B12 vitamīns
1,36

108,00 €*
McCoys 5A barotne (modificēta), w: 3,0 g/l glikoze, w: stabils glutamīns, w: 2,0 mM nātrija piruvāts, w: 2,2 g/l NaHCO3
McCoy's 5A Medium ir ļoti ieteicams un specializēts barotne, kas izstrādāta, lai veicinātu vīrusu augšanu un replikāciju primārajās šūnu kultūrās. Tā ir ieguvusi ievērojamu atzinību par izcilo sniegumu dažādos bioloģiskajos pētījumos. Viens no izcilākajiem McCoy's 5A Medium pielietojumiem ir tā izmantošana cilvēka resnās zarnas karcinomas šūnu līniju kultivēšanā. Konkrēti, tas ir izmantots leicīna bagāto atkārtojumu saturošā G-proteīna saistītā receptora (LGR5) un tā lomas resnās zarnas vēža metastāzēs pētījumā. Šis barotne ir efektīvi izmantota vairāku kolonoskarcinomas šūnu līniju kultivēšanā, tostarp HCT116, RKO, FET, CBS, HCT116b un TENN, ļaujot pētniekiem padziļināt izpratni par kolonoskarcinomas metastāžu mehānismiem. Papildus tās pielietojumam vēža pētījumos, McCoy's 5A barotne ir pierādījusi savu neaizstājamību osteoblastu pētījumos. Pētnieki, kas pēta kalcija deficīta hidroksilapatīta jonu reaktivitāti standarta šūnu kultūras barotnēs, ir izmantojuši šo barotni osteoblastu kultivēšanai. Šis pielietojums ir veicinājis labāku izpratni par osteoblastu un kalcija deficīta hidroksilapatīta mijiedarbību, veicinot sasniegumus kaulu pētījumu jomā. McCoy's 5A barotne tika rūpīgi izstrādāta, modificējot aminoskābes, kas atrodamas Basal Medium Eagle barotnē, lai nodrošinātu optimālu atbalstu aknu audzēju šūnām. Šī bagātināta formula ļauj to izmantot dažādām izveidotām šūnu līnijām, kā arī primārām šūnām, tādējādi vēl vairāk uzlabojot tās daudzpusību un piemērojamību dažādās pētniecības jomās. McCoy's 5A Medium bioloģiskā un fizioloģiskā iedarbība sniedzas tālāk par aknu audzēju šūnām. Tas ir veiksmīgi izmantots, lai atbalstītu augšanu primārajās kaulu smadzeņu, ādas, smaganu, nieru, omentuma, virsnieru, plaušu, liesas, žurku embriju un citu šūnu kultūrās. Šis plašais pielietojuma spektrs liecina par McCoy's 5A Medium plašo lietderību dažādu šūnu augšanas un uzturēšanas atbalstam visaptverošos bioloģiskos pētījumos. Sastāvs Šis McCoy's 5A barotne (modificēta) satur 3,0 g/l glikozes, stabilu glutamīnu, 2,0 mM nātrija piruvātu un 2,2 g/l NaHCO3. Kvalitātes kontrole pH = 7,2 +/
- 0,02 pie 20-25 °C.  Katra partija ir pārbaudīta uz sterilitāti un mikoplazmas un baktēriju neesamību. Uzglabāšana Uzglabāt ledusskapī +2 °C līdz +8 °C temperatūrā, nošķirti no gaismas. Saldēšana un sildīšana līdz +37 °C pazemina produkta kvalitāti.  Neuzkarsējiet barotni līdz vairāk nekā 37 °C un neizmantojiet nekontrolējamas siltuma avotus (piemēram, mikroviļņu krāsnis).  Ja ir jāizmanto tikai daļa barotnes, izņemiet šo daudzumu no pudeles un sildiet to istabas temperatūrā. Jebkura barotnes, izņemot pamata barotni, glabāšanas termiņš ir 6 līdz 8 nedēļas no atvēršanas brīža. Sastāvs Sastāvdaļas mg/L Neorganiskie sāļiKalcija hlorīds x 2H2O132,00 Magnija sulfāts97,67 Kālija hlorīds400,00 Nātrija hlorīds6460,00 Dinātrija hidrogēnfosfāts (bezūdens)504,00 Citi komponentiD(+)-glikoze (bezūdens)3000 Glutationa (reducēts)0,5 Gaļas peptonis600,00 Fenola sarkanais nātrija sāls11 AminoskābesL-alanīns13,36 L-arginīns x HCl42,14 L-asparagīns x H2O45,03 L-asparagīnskābe19,97 L-cisteīns x HCl x H2O31,75 L-glutamīns (stabils)219,15 L-glutamīnskābe22,07 Glicīns7,51 L-histidīns x HCl x H2O20,96 L-hidroksiprolīns19,67 L-izoleicīns39,36 L-leicīns39,36 L-lizīns x HCl36,54 L-metionīns14,92 L-fenilalanīns16,52 L-prolīns17,27 L-serīns26,28 L-treonīns17,87 L-triptofāns3,06 L-tirozīna dinātrija sāls26,10 L-valīns17,57 Vitamīnip-Aminobenzoīnskābe1,0 Askorbīnskābe0,56 D(+)-biotīns0,20 D-kalcija pantotenāts0,20 Holīna hlorīds5,0 Folijskābe10 mio-inozitols36 Nikotinamīds0,5 Nikotīnskābe0,5 Piridoksāla HCl0,50 Piridoksīna HCl0,50 Riboflavīns0,20 Tiamīna HCl0,20 Vitamīns B122,00

30,00 €*
IMDM, w: 4,5 g/l glikozes, w: 4 mM L-glutamīna, w: 25 mM HEPES, w: 1,0 mM nātrija piruvāta, w: 3,024 g/l NaHCO3
Iskova modificētā Dulbekko barotne (IMDM) ir kompleksa un bagātināta šūnu kultūru augšanas barotne. IMDM ir DMEM modifikācija, kas satur selēnu, un, salīdzinot ar DMEM, tajā ir papildu aminoskābes, vitamīni un neorganiskie sāļi. Tajā trūkst dzelzs, un to nepieciešams papildināt ar Fetal Bovine Serum (FBS). IMDM izmanto nātrija bikarbonāta bufera sistēmu, un, lai uzturētu fizioloģisko pH, tai nepieciešama 5-10 % CO2 vide.
IMDM ir labi piemērots strauji proliferējošām, augsta blīvuma šūnu kultūrām, tostarp Jurkat, COS-7 un makrofāgu šūnām. Dažādas IMDM modifikācijas, kas pieejamas dažādiem šūnu kultūru lietojumiem, var atrast, izmantojot barotņu atlases rīku. Šķidrās barotnes nodrošina būtiskas barības vielas visiem šūnu kultūru lietojumiem. Katra no mūsu augstas kvalitātes šūnu kultūru barotnēm tiek ražota saskaņā ar sākotnēji publicēto formulu vai modifikācijām, kas nepieciešamas, lai nodrošinātu kultūras barotnes nemainīgu veiktspēju un stabilitāti.
IMDM pret DMEM
IMDM dzelzs nitrāta vietā ir kālija nitrāts, kā arī HEPES un nātrija piruvāts. IMDM papildu komponenti padara to piemērotāku specializētiem šūnu tipiem un specifiskiem lietojumiem nekā DMEM.
IMDM pret RPMI
IMDM un RPMI ir atšķirīgi sastāvi, kas var būt svarīgi PMA/jonomicīna stimulācijai. Viena būtiska atšķirība ir Ca2+ koncentrācija. RPMI satur 0,42 mM Ca2+, bet IMDM
- 1,49 mM.
Kvalitātes kontrole

pH = 7,2 +/
- 0,02 20-25 °C temperatūrā.
Katra partija ir pārbaudīta attiecībā uz sterilitāti un mikoplazmas un baktēriju neesamību.

Uzturēšana

Uzglabāt ledusskapī +2°C līdz +8°C temperatūrā tumsā. Sasaldēšana un sasilšana līdz +37 °C samazina produkta kvalitāti.
Nesildiet barotni līdz temperatūrai, kas pārsniedz 37° C, un neizmantojiet nekontrolējamus siltuma avotus (piemēram, mikroviļņu krāsnis).
Ja jāizmanto tikai daļa barotnes, izņemiet šo daudzumu no pudeles un uzsildiet to istabas temperatūrā.
Jebkuras barotnes, izņemot pamata barotni, derīguma termiņš ir 8 nedēļas no izgatavošanas datuma.
Sastāvs




Sastāvdaļas
mg/l


Neorganiskie sāļi
Kalcija hlorīds x 2 H2O
219,00



Kālija hlorīds
330,00



Kālija nitrāts
0.076



Bezūdens magnija sulfāts
97,73



Nātrija hlorīds
4,505.00



Bezūdens nātrija dihidrogēnfosfāts
109,00



Nātrija selenīts
0,02


Citi komponenti
D(+)-glikoze bezūdens
4,500.00



HEPES
5,958.00



Nātrija piruvāts
110,00



Fenola sarkanais
15,00


Aminoskābes
L-alanīns
25,00



L-arginīns x HCl
84,00



L-asparagīns x H2O
25,00



L-asparagīnskābe
30,00



L-cistīns x 2HCl
91,24



L-glutamīns
584,00



L-glutamīnskābe
75,00



Glicīns
30,00



L-histidīns x HCl x H2O
42,00



L-izoleicīns
104,80



L-leicīns
104,80



L-lizīns x HCl
146,20



L-metionīns
30,00



L-fenilalanīns
66,00



L-Prolīns
40,00



L-serīns
42,00



L-treonīns
95,20



L-triptofāns
16,00



L-tirozīns x 2Na
104,20



L-valīns
93,60


Vitamīni
D(+)-biotīns
0.013



D-kalcija pantotenāts
4,00



Holīna hlorīds
4,00



Folijskābe
4,00



mio-inositols
7,20

25,00 €*
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabils glutamīns, w: 2,0 g/L NaHCO3
RPMI 1640 barotne, pazīstama arī kā RPMI barotne, ir ļoti universāla šūnu kultūru barotne, ko plaši izmanto bioloģiskajos pētījumos dažādu zīdītāju šūnu kultivēšanai. Šīs barotnes nosaukums cēlies no tās izcelsmes Roswell Park Memorial Institute (RPMI), ko 1966. gadā slavenajā Roswell Park Comprehensive Cancer Center izstrādāja Džordžs E. Mūrs, Roberts E. Gerners un H. Adisons Franklins.
Sākotnēji izstrādāta cilvēka leikēmisko šūnu augšanai suspensijas un monoslāņa kultūrās, RPMI 1640 barotne, pētniekiem un komerciālajiem piegādātājiem veicot modifikācijas, ir kļuvusi piemērota dažādām zīdītāju šūnām. Tā ir īpaši saderīga ar tādām šūnu līnijām kā HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocīti un karcinomas.
RPMI 1640 barotne atšķiras no citām šūnu kultūru barotnēm ar savu unikālo sastāvu. Tā satur ievērojamu daudzumu fosfātu, aminoskābju un vitamīnu. Īpaši svarīgi, ka tajā ir biotīns, vitamīns B12 un PABA, kas nav iekļauti Eagle's Minimal Essential Medium vai Dulbecco's Modified Eagle Medium. Turklāt RPMI 1640 barotnē ir ievērojami paaugstināta vitamīnu inozitola un holīna koncentrācija. Tomēr tā nesatur olbaltumvielas, lipīdus vai augšanas faktorus. Tāpēc, lai nodrošinātu optimālus apstākļus šūnu augšanai, parasti ir nepieciešama papildināšana ar 10 % Fetal Bovine Serum (FBS).
RPMI 1640 barotnes buferēšanas sistēma balstās uz nātrija bikarbonātu, un, lai uzturētu fizioloģiski piemērotu pH, tai nepieciešama 5-10 % CO2 vide. Reducējošā aģenta glutationa iekļaušana vēl vairāk atšķir šo barotni no citām.
Kvalitātes kontrole

Sterili filtrēts


Uzglabāšana un derīguma termiņš

Uzglabāt no gaismas pasargātā +2 °C līdz +8 °C temperatūrā.
Pēc atvēršanas uzglabāt 4°C temperatūrā un lietot 6-8 nedēļu laikā.


Pārvadāšanas nosacījumi

Apkārtējā temperatūra


Uzturēšana

Uzglabāt ledusskapī no +2°C līdz +8°C temperatūrā, tumsā. Izvairīties no sasaldēšanas un biežas sasilšanas līdz +37°C, jo tas samazina produkta kvalitāti.
Nesildiet barotni augstāk par 37°C un neizmantojiet nekontrolētus siltuma avotus, piemēram, mikroviļņu krāsnis.
Ja jāizmanto tikai daļa barotnes, pirms lietošanas izņemiet nepieciešamo daudzumu un uzsildiet to līdz istabas temperatūrai.



Sastāvs




Kategorija
Sastāvdaļas
Koncentrācija (mg/l)


Aminoskābes
Glicīns
10.00



L-alanil-L-glutamīns
434.40



L-arginīns
200.00



L-asparagīnsH2O
56.82



L-asparagīnskābe
20.00



L-cistīns 2HCl
65.20



L-glutamīnskābe
20.00



L-Histidīns HClH2O
20.27



L-Hidroksi-L-Prolīns
20.00



L-izoleicīns
50.00



L-leicīns
50.00



L-lizīns HCl
40.00



L-metionīns
15.00



L-fenilalanīns
15.00



L-Prolīns
20.00



L-serīns
30.00



L-treonīns
20.00



L-triptofāns
5.00



L-tirozīns 2Na 2H2O
28.83



L-Valīns
20.00


Vitamīni
p-amīnbenzoskābe
1.00



D-Biotīns
0.20



Holīna hlorīds
3.00



D-kalcija pantotenāts
0.25



Folijskābe
1.00



mio-Inozitols
35.00



Nikotīnamīds
1.00



Piridoksīna HCl
1.00



Riboflavīns
0.20



Tiamīna HCl
1.00



B12 vitamīns
0.005


Neorganiskie sāļi
Ca(NO3)2 4H2O
100.00



KCl
400.00



MgSO4 7H2O
100.00



NaCl
6000.00



NaHCO3
2000.00



Na2HPO4
800.00


Citi komponenti
D-glikoze
2000.00



L-Glutationa reducēts
1.00



Fenola sarkanais nātrija sāls
5.30

25,00 €*

Esam konstatējuši, ka atrodaties citā valstī vai izmantojat citu pārlūkprogrammas valodu, kas nav pašlaik izvēlētā. Vai vēlaties pieņemt ieteiktos iestatījumus?

Aizvērt