Hướng dẫn toàn diện về đông lạnh tế bào: Đảm bảo khả năng sống sót và vô trùng

Chuẩn bị môi trường đông lạnh

Chuẩn bị môi trường đông lạnh bảo vệ tế bào theo loại tế bào:

• Môi trường nuôi cấy có chứa FBS: 90% FBS + 10% DMSO hoặc 70% môi trường tăng trưởng, 20% FBS và 10% DMSO
• Tế bào cần glycerol: 90% FBS + 10% glycerol

Hãy cân nhắc mua môi trường đông lạnh được pha chế sẵn của chúng tôi:

• Dung dịch đông lạnh CM-1: Dành cho các quy trình yêu cầu dung dịch chứa huyết thanh bò thai (FBS)
• Môi trường đông lạnh CM-ACF - không chứa huyết thanh: Dành cho các phương pháp thay thế không sử dụng FBS

Ghi nhãn và tài liệu

Ghi nhãn ống đông lạnh với các thông tin sau:

• Ngày
• Tên nhà nghiên cứu
• Số tế bào
• Số lần nhân
• Loại tế bào
• Thông tin bổ sung (ví dụ: biến đổi gen)

Chuẩn bị tế bào

Đối với tế bào bám dính:

• Theo dõi tế bào cho đến khi đạt mật độ phủ 85–95%
• Hút bỏ môi trường nuôi cấy cũ
• Rửa lớp tế bào đơn lớp bằng PBS không chứa canxi và magiê
• Tách tế bào bằng Accutase, trypsin hoặc trypsin-EDTA và trung hòa bằng môi trường nuôi cấy nếu cần
• Chuyển hỗn hợp tế bào vào ống Falcon 50 mL

Đối với tế bào dạng huyền phù:

• Kiểm tra mật độ và tình trạng sức khỏe của tế bào dưới kính hiển vi
• Chuyển huyền phù tế bào trực tiếp vào ống Falcon 50 mL

Đếm tế bào và ly tâm

• Đếm tế bào bằng kính đếm tế bào hoặc máy đếm tế bào tự động
• Ly tâm ở 300g trong 3-5 phút ở nhiệt độ phòng để tạo cặn tế bào
• Hút cẩn thận phần dịch nổi, tránh làm xáo trộn cặn tế bào
• Làm ấm môi trường đông lạnh đã chuẩn bị đến 37°C trước khi sử dụng

Bảo quản lạnh

• Hòa tan cặn tế bào trong môi trường đông lạnh đến nồng độ 2,0 triệu tế bào/mL đối với tế bào bám dính và 5 triệu tế bào/mL đối với tế bào lơ lửng, hoặc nồng độ mong muốn
• Chia 1,0 mL (hoặc nhiều hơn nếu cần) hỗn hợp tế bào vào các ống đông lạnh đã dán nhãn
• Sử dụng phương pháp đông lạnh chậm trước khi chuyển tế bào sang bảo quản dài hạn