Các kỹ thuật tách tế bào trong nuôi cấy tế bào

Tách tế bào là bước quan trọng trong việc duy trì nuôi cấy tế bào. Quá trình này bao gồm việc tách tế bào khỏi bề mặt nuôi cấy để thực hiện việc nuôi cấy lại hoặc thu hoạch. Phần này trình bày hai phương pháp chính: sử dụng dung dịch tách tế bào không chứa enzyme và sử dụng các chất phản ứng enzyme.

1.       Sử dụng dung dịch phân tách tế bào không chứa enzyme

Phương pháp này nhẹ nhàng và duy trì tính toàn vẹn của tế bào mà không cần sử dụng enzyme:

1. Chuẩn bị
   • Đảm bảo tất cả các chất phản ứng được làm ấm đến 37°C trước khi sử dụng để tránh gây sốc cho tế bào.
2. Loại bỏ môi trường nuôi cấy
   • Loại bỏ môi trường nuôi cấy cũ khỏi bình nuôi cấy.
3. Rửa
   • Rửa lớp tế bào đơn lớp bằng 5 ml dung dịch PBS không chứa canxi và magiê cho mỗi bình T75 hoặc đĩa 100 mm.
   • Lắc nhẹ bình trong 30 đến 60 giây ở nhiệt độ phòng.
   • Hút và loại bỏ dung dịch rửa.
   • Lặp lại bước rửa này một lần nữa.
4. Tách tế bào
   • Thêm khoảng 5 ml dung dịch phân ly tế bào không chứa enzyme vào dụng cụ.
   • Lắc nhẹ ở nhiệt độ phòng trong 1 đến 2 phút và kiểm tra quá trình phân tách dưới kính hiển vi.
   • Nếu cần thiết, gõ nhẹ bình hoặc đĩa vào tay để tách các tế bào.
   • Nếu tế bào bám dính, để chúng ở nhiệt độ phòng thêm 2 đến 5 phút, và gõ lại nếu cần, sử dụng thêm dung dịch phân tách.
   • Khi tế bào đã tách rời, thêm ít nhất 5 ml môi trường nuôi cấy hoàn chỉnh để trung hòa dung dịch tách rời và tái phân tán tế bào.
5. Kiểm tra độ sống sót của tế bào
   • Theo dõi độ sống của tế bào trong quá trình nuôi cấy lại, đảm bảo nó duy trì trên 90%.

2.       Sử dụng các dung dịch phân tách khác

Phương pháp này cho phép sử dụng các loại dung dịch phân tách khác nhau:

1. Loại bỏ môi trường nuôi cấy đã sử dụng
   • Loại bỏ môi trường nuôi cấy cũ khỏi bình nuôi cấy.
2. Rửa tế bào
   • Rửa tế bào bằng dung dịch muối cân bằng không chứa canxi và magiê, hoặc sử dụng EDTA.
   • Thêm dung dịch rửa nhẹ nhàng vào phía đối diện với tế bào và lắc bình trong 1 đến 2 phút trước khi loại bỏ dung dịch rửa.
3. Tách tế bào
   • Áp dụng 2 đến 3 ml dung dịch tách tế bào đã chọn cho mỗi 25 cm² bề mặt tăng trưởng, đảm bảo phủ kín lớp tế bào.
   • Ủ bình ở 37°C và lắc nhẹ. Quá trình phân tách thường diễn ra trong vòng 5 đến 15 phút, tùy thuộc vào dòng tế bào.
   • Đối với các tế bào cứng đầu, gõ nhẹ vào bình có thể đẩy nhanh quá trình.
   • Theo dõi tế bào cẩn thận để tránh tiếp xúc quá mức và tiềm ẩn hư hại.
4. Thu hoạch tế bào
   • Khi tế bào đã tách hoàn toàn, để chúng lắng xuống đáy bình bằng cách đặt bình thẳng đứng.
   • Thêm môi trường nuôi cấy hoàn chỉnh, sau đó phân tán và thu thập tế bào bằng cách hút qua lớp tế bào.
   • Đếm và tiến hành nuôi cấy lại.

Trong cả hai phương pháp, việc xác định điều kiện tối ưu cho từng dòng tế bào thông qua quan sát thực nghiệm là rất quan trọng. Quá trình này cần duy trì độ sống của tế bào, cần được kiểm tra định kỳ để đảm bảo vượt quá 90% trong quá trình nuôi cấy lại. Các quy trình này cung cấp nền tảng cho các nhà nghiên cứu điều chỉnh dựa trên yêu cầu và đặc điểm cụ thể của dòng tế bào của họ.

3.      Tổng quan về các kỹ thuật nuôi cấy lại tế bào bám dính

Việc nuôi cấy lại hiệu quả các tế bào bám dính đòi hỏi phải tách chúng khỏi bình nuôi cấy. Các phương pháp khác nhau được sử dụng, mỗi phương pháp phù hợp với các loại tế bào và điều kiện khác nhau. Khi lựa chọn phương pháp tách tế bào, điều quan trọng là phải xem xét nhu cầu cụ thể của dòng tế bào và mục tiêu của thí nghiệm. Theo dõi thường xuyên độ sống của tế bào, với mục tiêu đạt trên 90% tại thời điểm nuôi cấy lại, là yếu tố quan trọng để duy trì sức khỏe và năng suất của văn hóa. Dưới đây là tổng quan về các quy trình này: