Xuất bản: 2023 | Cập nhật lần cuối: Tháng 5 năm 2026

Các kỹ thuật tách tế bào trong nuôi cấy tế bào

Tách tế bào nuôi cấy là một bước quan trọng trong việc duy trì nuôi cấy tế bào. Quá trình này bao gồm việc tách các tế bào khỏi bề mặt sinh trưởng để tạo điều kiện cho việc nuôi cấy lại hoặc thu hoạch. Phần này trình bày tóm tắt hai phương pháp chính: sử dụng dung dịch đệm tách tế bào không chứa enzyme và sử dụng thuốc thử enzym.

Sử dụng dung dịch tách tế bào không chứa enzyme

Phương pháp này rất nhẹ nhàng và duy trì tính toàn vẹn của tế bào mà không cần sử dụng enzyme:

1. Chuẩn bị
   • Đảm bảo tất cả các thuốc thử được làm ấm đến 37°C trước khi sử dụng để tránh gây sốc cho tế bào.
2. Loại bỏ môi trường nuôi cấy:
   • Loại bỏ môi trường nuôi cấy cũ khỏi bình nuôi cấy.
3. Rửa
   • Rửa lớp tế bào đơn lớp bằng 5 ml PBS không chứa canxi và magiê cho mỗi bình T75 hoặc đĩa 100 mm.
   • Lắc nhẹ bình trong 30 đến 60 giây ở nhiệt độ phòng.
   • Hút và loại bỏ dung dịch rửa.
   • Lặp lại bước rửa này một lần nữa.
4. Tách tế bào
   • Thêm khoảng 5 ml Dung dịch Tách tế bào không chứa enzyme vào bình.
   • Lắc nhẹ ở nhiệt độ phòng trong 1 đến 2 phút và kiểm tra sự phân ly dưới kính hiển vi.
   • Gõ nhẹ bình hoặc đĩa vào lòng bàn tay để làm bong các tế bào nếu cần thiết.
   • Nếu tế bào vẫn bám dính, để chúng ở nhiệt độ phòng thêm 2 đến 5 phút, và gõ nhẹ lại nếu cần, sử dụng thêm dung dịch tách tế bào.
   • Khi tế bào đã bong ra, thêm ít nhất 5 ml môi trường nuôi cấy hoàn chỉnh để trung hòa dung dịch tách tế bào và tái phân tán tế bào.
5. Kiểm tra khả năng sống
   • Theo dõi khả năng sống của tế bào trong quá trình nuôi cấy phụ, đảm bảo tỷ lệ này duy trì trên 90%.

Sử dụng các chất phản ứng khác để phân ly

Phương pháp này cho phép sử dụng các chất phân ly khác nhau:

1. Loại bỏ môi trường đã sử dụng
   • Loại bỏ môi trường cũ khỏi bình nuôi cấy.
2. Rửa tế bào
   • Rửa tế bào bằng dung dịch muối cân bằng không chứa canxi và magiê, hoặc sử dụng EDTA.
   • Thêm dung dịch rửa nhẹ nhàng vào phía đối diện với tế bào và lắc bình trong 1 đến 2 phút trước khi loại bỏ dung dịch rửa.
3. Tách tế bào
   • Cho 2 đến 3 ml dung dịch phân ly đã chọn vào mỗi 25 cm² bề mặt nuôi cấy, đảm bảo dung dịch phủ đều lớp tế bào.
   • Ủ bình ở 37°C và lắc nhẹ. Quá trình phân ly thường diễn ra trong vòng 5 đến 15 phút, tùy thuộc vào dòng tế bào.
   • Đối với các tế bào khó tách, việc gõ nhẹ vào bình có thể đẩy nhanh quá trình.
   • Quan sát tế bào cẩn thận để tránh phơi nhiễm quá mức và tổn thương tiềm ẩn.
4. Thu hoạch tế bào
   • Khi tế bào đã tách hoàn toàn, để chúng lắng xuống đáy bình bằng cách đặt bình thẳng đứng.
   • Thêm môi trường nuôi cấy hoàn chỉnh, sau đó phân tán và thu thập tế bào bằng cách hút và thả dung dịch qua lớp tế bào.
   • Đếm và tiến hành nuôi cấy lại.

Trong cả hai phương pháp, điều quan trọng là phải xác định các điều kiện tối ưu cho từng dòng tế bào thông qua quan sát thực nghiệm. Quá trình này phải bảo toàn khả năng sống của tế bào, cần được kiểm tra thường xuyên để đảm bảo tỷ lệ sống vượt quá 90% trong quá trình nuôi cấy lại. Các quy trình này cung cấp nền tảng để các nhà nghiên cứu điều chỉnh dựa trên các yêu cầu và đặc điểm cụ thể của các dòng tế bào của họ.

Tổng quan về các kỹ thuật nuôi cấy lại tế bào bám dính

Việc nuôi cấy lại tế bào bám dính hiệu quả đòi hỏi phải tách chúng ra khỏi bình nuôi cấy. Có nhiều phương pháp khác nhau được sử dụng, mỗi phương pháp phù hợp với các loại tế bào và điều kiện khác nhau. Khi chọn phương pháp tách tế bào, điều quan trọng là phải xem xét nhu cầu cụ thể của dòng tế bào và mục tiêu của thí nghiệm. Việc theo dõi thường xuyên khả năng sống của tế bào, với mục tiêu đạt trên 90% tại thời điểm nuôi cấy lại, là điều cần thiết để duy trì sức khỏe và năng suất của môi trường nuôi cấy. Dưới đây là tổng quan về các quy trình này: