Các biện pháp an toàn khi sử dụng nitơ lỏng để bảo quản tế bào an toàn

Trong các phòng thí nghiệm nuôi cấy tế bào, nitơ lỏng là yếu tố thiết yếu cho việc lưu trữ và bảo quản lâu dài các dòng tế bào quý giá. Tại Cytion, chúng tôi ưu tiên cả chất lượng của các dòng tế bào và an toàn cho nhân viên phòng thí nghiệm khi xử lý các vật liệu cryogenic. Hướng dẫn toàn diện này trình bày các biện pháp an toàn quan trọng và các thực hành tốt nhất khi làm việc với nitơ lỏng trong các ứng dụng lưu trữ tế bào.

Trang thiết bị bảo hộ cá nhân (PPE) cần thiết khi xử lý nitơ lỏng

Khi làm việc với nitơ lỏng để bảo quản các dòng tế bào như HeLa hoặc MCF-7, việc sử dụng PPE đúng cách là bắt buộc. Mặt nạ che toàn mặt là bắt buộc để bảo vệ khỏi các vết bắn và hơi nitơ lỏng có thể gây tổn thương nghiêm trọng cho mắt và mô mặt. Găng tay cách nhiệt cryogenic phải kéo dài lên đến cẳng tay, vì găng tay phòng thí nghiệm thông thường không cung cấp đủ bảo vệ chống lại nhiệt độ cực lạnh. Áo blouse phòng thí nghiệm nên được mặc làm lớp bảo vệ ngoài, lý tưởng nhất là kết hợp với tạp dề nhựa chống bắn để cung cấp thêm bảo vệ chống lại các vết bắn vô tình. Khi chuyển tế bào từ môi trường đông lạnh CM-1 vào kho lưu trữ nitơ lỏng, hãy đảm bảo PPE của bạn ở trạng thái tốt, không có dấu hiệu hư hỏng hoặc mòn. Hãy nhớ rằng, ngay cả tiếp xúc nhỏ với nitơ lỏng cũng có thể gây tổn thương mô ngay lập tức, khiến PPE toàn diện trở thành yếu tố thiết yếu cho mọi tương tác với hệ thống lưu trữ LN2.

Yêu cầu thông gió và giám sát oxy

Thông gió đúng cách là yếu tố quan trọng khi lưu trữ các vật liệu nghiên cứu quý giá như tế bào U937 và tế bào RAJI trong nitơ lỏng. Khi nitơ lỏng (LN2) bay hơi, nó giãn nở nhanh chóng - một lít nitơ lỏng tạo ra khoảng 700 lít khí nitơ, có thể nhanh chóng đẩy lùi oxy trong không gian kín. Khu vực lưu trữ nitơ lỏng của bạn phải được trang bị hệ thống thông gió cơ học và thiết bị giám sát oxy. Đối với các cơ sở lưu trữ nhiều dòng tế bào và lượng lớn dung dịch đông lạnh CM-1 - 500 ml, chúng tôi khuyến nghị lắp đặt các thiết bị theo dõi nồng độ oxy cố định có còi báo động được cài đặt để kích hoạt khi nồng độ oxy đạt 18%. Khu vực lưu trữ nên có các điểm thông gió cấp cao vì khí nitơ nhẹ hơn không khí khi được làm ấm. Không bao giờ dựa vào thông gió tự nhiên mà không có hệ thống thông gió cơ học - các hệ thống thông gió cơ học phải được kiểm tra định kỳ và bảo trì theo hướng dẫn của nhà sản xuất để đảm bảo tỷ lệ trao đổi không khí ổn định.

Quy trình an toàn cho hai người

Khi xử lý nitơ lỏng để bảo quản lạnh các dòng tế bào nhạy cảm như tế bào HUVEC hoặc Tế bào gốc trung mô người - Tủy xương, luôn làm việc theo cặp. Hệ thống làm việc theo cặp này đặc biệt quan trọng trong các thao tác quan trọng như chuyển mẫu vào kho lưu trữ, nạp lại bình chứa nitơ lỏng hoặc xử lý lượng lớn dung dịch đông lạnh CM-1. Người thứ hai đóng vai trò quan sát an toàn và có thể phản ứng ngay lập tức trong trường hợp khẩn cấp như rò rỉ, thiếu oxy hoặc chấn thương cá nhân. Họ nên đứng gần cửa ra vào phòng thí nghiệm, duy trì tầm nhìn nhưng tránh xa khu vực làm việc trực tiếp. Cả hai thành viên trong nhóm phải được đào tạo đầy đủ về các quy trình khẩn cấp và biết vị trí của thiết bị an toàn. Lên lịch các hoạt động xử lý nitơ lỏng trong giờ làm việc bình thường khi có nhân viên hỗ trợ, và tuyệt đối không thực hiện các hoạt động cryogenic vào giờ ngoài giờ làm việc hoặc cuối tuần.

Yêu cầu đào tạo bắt buộc về việc xử lý nitơ lỏng (LN2)

Trước khi xử lý hệ thống lưu trữ nitơ lỏng chứa các mẫu quý giá như tế bào HeLa hoặc sử dụng môi trường đông lạnh CM-ACF không chứa huyết thanh, việc đào tạo toàn diện là bắt buộc. Đào tạo này phải bao gồm các kỹ thuật xử lý đúng cách, hiểu biết về nguy cơ cryogenic và các quy trình ứng phó khẩn cấp. Nhân viên làm việc với các dòng tế bào của chúng tôi phải chứng minh khả năng thực hiện các quy trình đổ đầy an toàn, sử dụng đúng cách trang thiết bị bảo hộ cá nhân (PPE) và hiểu rõ về nguy cơ thiếu oxy. Đào tạo nên bao gồm thực hành thực tế với các thể tích nhỏ dưới sự giám sát trước khi xử lý các lượng lớn hơn. Tài liệu chứng nhận hoàn thành đào tạo phải được lưu giữ, và các buổi đào tạo bổ sung định kỳ phải được lên lịch. Nhân viên mới phải theo dõi nhân viên có kinh nghiệm trong ít nhất ba quy trình xử lý LN2 đầy đủ trước khi làm việc độc lập trong một nhóm. Hãy nhớ rằng, ngay cả nhân viên có kinh nghiệm cũng cần đào tạo lại định kỳ để đảm bảo các quy trình an toàn luôn được cập nhật và hiện hành.

Hệ thống giám sát và cảnh báo oxy

Khi lưu trữ các vật liệu nghiên cứu quan trọng như Tế bào gốc trung mô người - Mô mỡ và Tế bào gốc trung mô người - Chất nhầy Wharton trong nitơ lỏng, hệ thống giám sát oxy đáng tin cậy là điều không thể thiếu. Các thiết bị giám sát oxy cố định phải được lắp đặt với còi báo động được cài đặt để kích hoạt tại nồng độ oxy 18% (v/v). Các hệ thống này yêu cầu vị trí lắp đặt chiến lược: gần mặt sàn nơi các khí nặng hơn không khí ban đầu tích tụ, ở độ cao làm việc và gần các bình chứa nitơ lỏng. Khi bảo quản mẫu trong môi trường đông lạnh CM-ACF - không chứa huyết thanh - 500 ml, đảm bảo khu vực lưu trữ được trang bị cả báo động âm thanh và hình ảnh có thể nhận biết được trong môi trường tiếng ồn của phòng thí nghiệm. Thực hiện lịch kiểm tra hàng tháng cho tất cả hệ thống giám sát oxy, duy trì hồ sơ hiệu chuẩn và thiết lập quy trình sơ tán rõ ràng khi báo động kích hoạt. Nhân viên tuyệt đối không được cố gắng vô hiệu hóa hoặc tắt các hệ thống an toàn này, bất kể thời gian làm việc với nitơ lỏng dự kiến là bao lâu.