Médium na kultiváciu buniek
Kultivované bunky si pre úspešný rast a udržiavanie vyžadujú dôkladnú kontrolu prostredia. Komplexný prístup zahŕňa zabezpečenie sterility, prísunu živín, stability pH a kontroly teploty.
Sterilné podmienky a prísun živín
Na zabránenie kontaminácii a zabezpečenie životaschopnosti buniek je rozhodujúce sterilné prostredie. To sa zvyčajne dosahuje prostredníctvom aseptických techník a špecializovaného vybavenia, ako sú napríklad digestory s laminárnym prúdením. Živiny sa dodávajú prostredníctvom kultivačných médií, ktoré obsahujú zmes základných zložiek vrátane:
- Anorganické soli: Dôležité pre udržanie osmotickej rovnováhy a poskytovanie iónov potrebných pre bunkové aktivity.
- Sacharidy: Slúžia ako zdroj energie; najčastejšie používaným cukrom je glukóza.
- Aminokyseliny: Stavebné prvky bielkovín; niektoré sú nevyhnutné a bunky ich nemôžu syntetizovať.
- Vitamíny: Pôsobia ako kofaktory enzymatických reakcií; vitamíny skupiny B sú nevyhnutné pre metabolizmus buniek.
- Mastné kyseliny a lipidy: Základné zložky pre integritu a funkciu bunkovej membrány.
- Proteíny a peptidy: V bezsérových médiách nahrádzajú rastové faktory a väzbové proteíny, ktoré zvyčajne dodáva sérum.
- Sérum: Často sú zdrojom rastových faktorov, hoci bezsérové alternatívy sú čoraz populárnejšie, aby sa znížila variabilita a riziko kontaminácie.
- pH a teplotná stabilita: Bunky zvyčajne vyžadujú na optimálny rast pH v rozmedzí 7,2 - 7,4. Toto sa reguluje pomocou pufrovacích systémov, ktoré môžu byť buď na báze CO2/dikarbonátu, alebo sa môžu dosiahnuť chemicky pomocou látok, ako je HEPES. Teplota sa udržiava okolo 37 °C, aby sa napodobnili fyziologické podmienky.
Varianty médií a optimalizácia
V priebehu rokov boli vyvinuté rôzne základné médiá, ktoré vyhovujú špecifickým typom buniek:
- Vyvážené soľné roztoky: Tvoria základ zložitejších formulácií médií.
- Základné médiá, ako napríklad minimálne esenciálne médium (MEM), sa používajú pre primárne kultúry a diploidné bunky.
- Komplexné médiá: Ako RPMI 1640, sú vhodné pre širšie spektrum buniek cicavcov.
- Médiá bez séra: Sú prispôsobené na špecifické aplikácie, čím sa znižuje riziko kontaminácie zložkami živočíšneho pôvodu.
Príprava médií a kontrola kvality
Médiá sa môžu pripravovať vo vlastnej réžii zo základných zložiek alebo zakúpiť ako hotové roztoky. Kontrola kvality zahŕňa zabezpečenie neprítomnosti kontaminantov a správnej koncentrácie zložiek. Rekonštitúcia práškových médií si vyžaduje vysokokvalitnú vodu a pripravené médiá sa musia sterilizovať, zvyčajne filtráciou.
Použitie séra a bezpečnostné aspekty
Použitie séra, najmä fetálneho hovädzieho séra (FBS), je bežné vzhľadom na jeho bohatý obsah rastových faktorov. Vzhľadom na obavy z chorôb, ako je BSE, sa však na zaistenie bezpečnosti dodržiavajú prísne protokoly testovania a získavania.
Regulačné usmernenia a trendy
Materiály živočíšneho pôvodu v kultúrach sa riadia predpismi, ktoré zdôrazňujú význam získavania a testovania. Trend eliminovať takéto materiály, ak je to možné, sa odráža vo vývoji alternatívnych médií bez séra a bez zvierat.
Na záver možno konštatovať, že médiá pre bunkové kultúry zohrávajú zásadnú úlohu pri raste a udržiavaní buniek in vitro. Každá zložka sa starostlivo vyberá a optimalizuje tak, aby napodobňovala prostredie in vivo, čím sa zabezpečujú podmienky pre rast, prežitie a funkčnosť buniek.
DMEM sa od ostatných médií odlišuje jedinečným zložením. Obsahuje pôsobivé štvornásobné zvýšenie koncentrácie aminokyselín a vitamínov v porovnaní s pôvodným Eagle's Minimal Essential Medium. DMEM bolo pôvodne vyvinuté s nízkym obsahom glukózy (1 g/l) a pyruvátu sodného, ale často sa používa s vyšším obsahom glukózy, buď s pyruvátom sodným, alebo bez neho. DMEM neobsahuje proteíny, lipidy ani rastové faktory, čo si vyžaduje ich doplnenie. Na dosiahnutie optimálneho rastu je bežným prístupom doplnenie DMEM o 10 % fetálneho hovädzieho séra (FBS). Okrem toho DMEM využíva hydrogenuhličitanový tlmivý systém sodíka, ktorý vyžaduje 5
- 10 % CO2 na udržanie fyziologického pH.
Dulbeccovo modifikované médium Eagle (DMEM) je vysoko cenené medzi definovanými médiami na kultiváciu buniek a tkanív, ktoré uspokojujú rastové potreby rôznych adherentných bunkových fenotypov. Prekonáva pôvodné Eagleovo médium, vyvinuté v 50. rokoch 20. storočia na kultiváciu kuracích buniek, prostredníctvom vylepšeného doplnkového zloženia známeho ako Dulbeccova modifikácia. Táto modifikácia výrazne zvyšuje obsah vybraných aminokyselín a vitamínov až štvornásobne v porovnaní s pôvodným médiom.
V oblasti bunkových kultúr zohráva DMEM dôležitú úlohu ako rastové médium pre rôzne typy buniek vrátane primárnych buniek, kmeňových buniek a transformovaných buniek. Výskumníci používajú modifikovanú verziu DMEM aj na širokú škálu výskumných aplikácií, ako je objavovanie liečiv, tkanivové inžinierstvo a štúdium bunkových signálnych dráh.
Kontrola kvality
Sterilne filtrovaný
Skladovanie a trvanlivosť
Skladujte pri teplote +2 °C až +8 °C, chránené pred svetlom.
Po otvorení skladujte pri teplote 4 °C a spotrebujte do 6 až 8 týždňov.
Podmienky prepravy
Okolitá teplota
Údržba
Uchovávajte v chlade pri teplote +2°C až +8°C v tme. Vyhnite sa zmrazovaniu a častému zohrievaniu na +37 °C, pretože sa tým znižuje kvalita výrobku.
Neohrievajte médium na teplotu vyššiu ako 37 °C ani nepoužívajte nekontrolované zdroje tepla, napríklad mikrovlnné zariadenia.
Ak sa má použiť len časť média, odoberte požadované množstvo a pred použitím ho zohrejte na izbovú teplotu.
Zloženie
Kategória
Zložky
Koncentrácia (mg/l)
Aminokyseliny
Glycín
30.00
L-arginín HCl
84.00
L-cystín 2 HCl
62.57
L-Glutamín
584.00
L-histidín HClH2O
42.00
L-izoleucín
105.00
L-leucín
105.00
L-Lyzín HCl
146.00
L-metionín
30.00
L-fenylalanín
66.00
L-serín
42.00
L-Treonín
95.00
L-tryptofán
16.00
L-Tyrozín 2 Na 2H2O
103.79
L-Valín
94.00
Vitamíny
Cholínchlorid
4.00
D-pantotenát vápenatý
4.00
Kyselina listová
4.00
myo-Inozitol
7.20
Nikotínamid
4.00
Pyridoxal HCl
4.00
Riboflavín
0.40
Tiamín HCl
4.00
Anorganické soli
CaCl2 2H2O
265.00
Fe(NO3)3 9H2O
0.10
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
200.10
NaCl
6400.00
NaHCO3
3700.00
NaH2PO4 2H2O
141.73
Ostatné zložky
D-glukóza
4500.00
Fenolová červená sodná soľ
15.90
Pyruvát sodný
110.00
Čo obsahuje EMEM?
EMEM je upravená verzia Eagleovho minimálneho esenciálneho média, ktorá obsahuje Earleov vyvážený roztok soli, neesenciálne aminokyseliny, L-glutamín, pyruvát sodný a hydrogenuhličitan sodný. Je dôležité poznamenať, že táto úroveň hydrogenuhličitanu sodného je určená na použitie v prostredí s 5 % CO2 na vzduchu. Na zachovanie jeho účinnosti sa odporúča uchovávať médium pri teplote 2 °C až 8 °C v tme, keď sa nepoužíva.
Na čo sa EMEM používa?
Eagle's minimal essential medium (EMEM) je médium na kultiváciu buniek, ktoré dokáže udržať bunky v tkanivovej kultúre. Toto médium obsahuje vyššie koncentrácie aminokyselín, čo umožňuje presnejšie priblíženie zloženia bielkovín kultivovaných buniek cicavcov. EMEM sa môže používať na kultiváciu rôznych buniek vrátane fibroblastov, bunkovej línie rakoviny ľudskej pečene (HepG2) a buniek astrocytov odvodených od progenitorov ľudského plodu (PDA). Zvyčajne sa používa v prítomnosti fetálneho hovädzieho séra (FBS), teľacieho alebo konského séra.
Čím sa EMEM líši od iných médií na kultiváciu buniek?
EMEM a Dulbeccovo modifikované médium Eagle (DMEM) majú síce niektoré spoločné črty, ale zároveň sa aj líšia. V oboch médiách chýbajú bielkoviny a obsahujú aminokyseliny, soli, glukózu a vitamíny potrebné na dodanie energie bunkám a ich udržanie v tkanivovej kultúre. Zloženie DMEM je však upravené tak, aby obsahovalo až štyrikrát viac vitamínov a aminokyselín a dva až štyrikrát viac glukózy ako EMEM. Stojí za zmienku, že EMEM sa tiež líši od pôvodného zloženia MEM.
Kontrola kvality
Sterilne filtrovaná
Skladovanie a trvanlivosť
Skladujte pri teplote +2 °C až +8 °C, chránené pred svetlom.
Po otvorení skladujte pri teplote 4 °C a použite do 6 až 8 týždňov.
Podmienky prepravy
Okolitá teplota
Údržba
Uchovávajte v chlade pri teplote +2°C až +8°C v tme. Vyhnite sa zmrazovaniu a častému zohrievaniu na +37 °C, pretože sa tým znižuje kvalita výrobku.
Neohrievajte médium na teplotu vyššiu ako 37 °C ani nepoužívajte nekontrolované zdroje tepla, napríklad mikrovlnné zariadenia.
Ak sa má použiť len časť média, odoberte požadované množstvo a pred použitím ho zohrejte na izbovú teplotu.
Zloženie
Kategória
Zložky
Koncentrácia (mg/l)
Aminokyseliny
L-arginín HCl
126.00
L-cystín 2 HCl
31.30
L-Glutamín
292.00
L-histidín HClH2O
42.00
L-izoleucín
52.00
L-leucín
52.00
L-Lyzín HCl
72.50
L-metionín
15.00
L-fenylalanín
32.00
L-Treonín
48.00
L-tryptofán
10.00
L-Tyrozín 2 Na 2H2O
51.90
L-Valín
46.00
Vitamíny
Cholín chlorid
1.00
Vitamíny
D-pantotenát vápenatý
1.00
Kyselina listová
1.00
myo-Inozitol
2.00
Nikotínamid
1.00
Pyridoxal HCl
1.00
Riboflavín
0.10
Tiamín HCl
1.00
Anorganické soli
CaCl2 2H2O
265.00
Anorganické soli
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Ostatné zložky
D-glukóza
1000.00
Ostatné zložky
Fenolová červená sodná soľ
11.00
Jednou z jeho významných výhod je schopnosť podporovať rast buniek bez potreby pridávania séra. Tým sa eliminujú potenciálne interferencie spôsobené zložkami séra, čo zabezpečuje konzistentné a spoľahlivé výsledky experimentov. Tým, že poskytuje kultivačné prostredie bez séra, Ham's F-12 Medium ponúka výskumníkom väčšiu kontrolu nad ich výskumami.
Ďalšou kľúčovou vlastnosťou média Ham's F-12 je jeho vhodnosť na nanášanie jednotlivých buniek. Vďaka tomu je vynikajúcou voľbou pre rôzne bunkové línie vrátane buniek CHO, pľúcnych buniek a myších buniek L. Optimalizované zloženie živín v médiu uľahčuje účinné prichytenie a rast jednotlivých buniek, čo umožňuje vytvorenie homogénnych bunkových kultúr s lepšou reprodukovateľnosťou.
Okrem toho si médium Ham's F-12 získalo uznanie ako preferované médium pre test klonálnej toxicity (CTA). Tento test zohráva rozhodujúcu úlohu pri hodnotení cytotoxických účinkov látok na bunky. Použitím média Ham's F-12 v CTA môžu výskumníci presne vyhodnotiť vplyv rôznych zlúčenín alebo liečby na jednotlivé bunky, čo poskytuje cenné informácie o toxikologických profiloch.
Kontrola kvality
pH = 7,2 +/
- 0,02 pri 20
- 25 °C.
Každá šarža bola testovaná na sterilitu a neprítomnosť mykoplazmy a baktérií.
Údržba
Uchovávajte v chladničke pri teplote +2 °C až +8 °C v tme. Mrazenie a zahrievanie do +37 °C minimalizuje kvalitu výrobku.
Neohrievajte médium na viac ako 37 °C ani nepoužívajte nekontrolovateľné zdroje tepla (napr. mikrovlnné zariadenia).
Ak sa má použiť len časť média, odoberte toto množstvo z fľaše a zohrejte ho pri izbovej teplote.
Trvanlivosť akéhokoľvek média okrem základného média je 8 týždňov od dátumu výroby.
Zloženie
Zložky
mg/l
Anorganické soli
Chlorid vápenatý x 2H2O
44,00
Síran meďnatý(II) x 5H2O
0,00
Síran železnatý (II) x 7H2O
0,83
Chlorid horečnatý x 6H2O
122,00
Chlorid draselný
223,65
Chlorid sodný
7599,00
hydrogenfosforečnan sodnýbezvodý
142,04
Síran zinočnatý x 7H2O
0,86
Ostatné zložky
D(+)-glukóza bezvodá
1801,60
Hypoxantín
4,08
Kyselina linolová
0,08
Kyselina DL-α-lipoová
0,21
Červený fenol
1,20
Putrescín x 2HCl
0,16
Pyruvát sodný
110,00
Tymidín
0,73
NaHCO3
1176,00
Aminokyseliny
L-alanín
8,91
L-Arginín x HCl
210,70
L-Asparagín x H2O
15,01
Kyselina L-aspartová
13,31
L-cysteín x HCl x H2O
35,12
L-alanyl-L-Glutamín
217,30
Kyselina L-glutámová
14,71
Glycín
7,51
L-histidín x HCl x H2O
20,96
L-izoleucín
3,94
L-leucín
13,12
L-Lyzín x HCl
36,54
L-metionín
4,48
L-fenylalanín
4,96
L-Prolín
34,53
L-serín
10,51
L-treonín
11,91
L-tryptofán
2,04
L-tyrozín
5,44
L-Valín
11,71
Vitamíny
D(+)-Biotín
0,01
D-pantotenát vápenatý
0,24
Cholín chlorid
13,96
Kyselina listová
1,32
myo-izozitol
18,02
Nikotínamid
0,04
Pyridoxín x HCl
0,06
Riboflavín
0,04
Tiamín x HCl
0,34
Vitamín B12
1,36
Toto jedinečné zloženie kombinuje Dulbeccovo modifikované orlie médium (DMEM) a Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) v presnom pomere 1:1. Prídavok L-glutamínu ďalej zlepšuje jeho zloženie.
DMEM, odvodený od Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), ponúka zvýšenú koncentráciu aminokyselín a vitamínov v porovnaní so svojím predchodcom. Naproti tomu Ham's F-12 je založené na médiu Ham's F-10 a poskytuje doplnkový súbor základných zložiek.
Na podporu optimálneho rastu buniek sa DMEM:Ham's F12 bežne dopĺňa FBS v typickej koncentrácii 5
- 10 %. Toto pridanie je potrebné, pretože v médiu chýbajú rastové hormóny, lipidy a proteíny, ktoré sú kľúčové pre vývoj buniek.
DMEM:Ham's F12 obsahuje systém pH pufra a často sa dopĺňa fenolovou červenou, indikátorom pH. Kultivácia buniek v DMEM:Ham's F12 alebo v akomkoľvek médiu využívajúcom hydrogénuhličitanový tlmivý systém si vyžaduje kontrolované prostredie s 5
- 10 % CO2, aby sa udržala vhodná úroveň pH.
Kontrola kvality
Sterilne filtrované
Skladovanie a trvanlivosť
Skladujte pri teplote +2 °C až +8 °C, chránené pred svetlom.
Po otvorení skladujte pri teplote 4 °C a použite do 6 až 8 týždňov.
Podmienky prepravy
Okolitá teplota
Údržba
Uchovávajte v chlade pri teplote +2°C až +8°C v tme. Vyhnite sa zmrazovaniu a častému zohrievaniu na +37 °C, pretože sa tým znižuje kvalita výrobku.
Neohrievajte médium na teplotu vyššiu ako 37 °C ani nepoužívajte nekontrolované zdroje tepla, napríklad mikrovlnné zariadenia.
Ak sa má použiť len časť média, odoberte požadované množstvo a pred použitím ho zohrejte na izbovú teplotu.
Zloženie
Kategória
Zložky
Koncentrácia (mg/l)
Aminokyseliny
Glycín
18.75
L-alanín
4.45
L-arginín HCl
147.50
L-Asparagín H₂O
7.50
Kyselina L-aspartová
6.65
L-cysteín HCl H₂O
17.56
L-Cystín 2 HCl
31.29
Kyselina L-glutámová
7.35
L-glutamín
365.00
L-histidín HCl H₂O
31.48
L-izoleucín
54.47
L-leucín
59.05
L-Lyzín HCl
91.25
L-metionín
17.24
L-fenylalanín
35.48
L-Prolín
17.25
L-serín
26.25
L-Treonín
53.45
L-tryptofán
9.02
L-tyrozín disodná soľ
48.10
L-Valín
52.85
Vitamíny
D-biotín
0.0035
Cholín chlorid
8.98
D-pantotenát vápenatý
2.24
Kyselina listová
2.66
myo-izozitol
12.60
Nikotínamid
2.02
Pyridoxín HCl
0.031
Pyridoxal HCl
2.00
Riboflavín
0.219
Tiamín HCl
2.17
Vitamín B12
0.68
Anorganické soli
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Ostatné zložky
D-glukóza
3151.00
Hypoxantín
2.40
HEPES
3574.50
Kyselina linolová
0.042
Kyselina lipoová
0.105
Fenolová červená sodná soľ
8.63
Putrescín 2 HCl
0.081
Pyruvát sodný
55.00
Tymidín
0.365
Médium Ham's F-12K (Kaighn's) je starostlivo vyvinuté na optimalizáciu podmienok kultivácie buniek. Má obohatené zloženie, ktoré poskytuje zvýšené hladiny základných zložiek, ako sú aminokyseliny a pyruvát sodný, ako aj ďalšie prvky vrátane putrescínu, tymidínu, hypoxantínu a zinku. Tieto prídavky umožňujú výskumníkom doplniť médium minimálnym množstvom séra alebo definovaných zložiek pre špecifické typy buniek, čo uľahčuje presné experimentálne podmienky.
Je pozoruhodné, že Hamovo médium F-12K (Kaighnovo) neobsahuje proteíny ani rastové faktory. V dôsledku toho je často potrebné doplnenie rastových faktorov a fetálneho hovädzieho séra (FBS), čo umožňuje výskumníkom prispôsobiť médium požiadavkám ich špecifických bunkových línií. Na dosiahnutie optimálneho výkonu sa musí koncentrácia FBS starostlivo optimalizovať pre každú bunkovú líniu, čím sa zabezpečí optimálny rast a funkčnosť.
Na udržanie fyziologického pH sa v médiu Ham's F-12K (Kaighn's) používa systém hydrogenuhličitanového tlmivého roztoku sodíka (2,5 g/l), čo si vyžaduje kontrolované prostredie s 5
- 10 % CO2 počas kultivácie. Tým sa zabezpečí, že pH média zostane v ideálnom rozsahu pre rast a životaschopnosť buniek
Kontrola kvality
pH = 7,2 +/
- 0,02 pri 20
- 25 °C.
Každá šarža bola testovaná na sterilitu a neprítomnosť mykoplazmy a baktérií.
Údržba
Uchovávajte v chladničke pri teplote +2 °C až +8 °C v tme. Mrazenie, ako aj zahrievanie do +37 °C minimalizujú kvalitu výrobku.
Neohrievajte médium na viac ako 37 °C ani nepoužívajte nekontrolovateľné zdroje tepla (napr. mikrovlnné zariadenia).
Ak sa má použiť len časť média, odoberte toto množstvo z fľaše a ohrejte ho pri izbovej teplote.
Trvanlivosť akéhokoľvek média okrem základného média je 8 týždňov od dátumu výroby.
Zloženie
Zložky
mg/l
Anorganické soli
Chlorid vápenatý x 2H2O
135,24
Síran meďnatý(II) x 5H2O
0,00
Síran železnatý (II) x 7H2O
0,83
Chlorid horečnatý x 6H2O
105,72
Síran horečnatý x 7H2O
394,49
Chlorid draselný
283,29
Dihydrogénfosforečnan draselný
58,52
Chlorid sodný
7597,20
hydrogenfosforečnan sodnýbezvodý
115,02
Síran zinočnatý x 7H2O
0,14
Ostatné zložky
D(+)-glukóza bezvodá
1260,00
Hypoxantín
4,08
Kyselina DL-α-lipoová
0,21
Červený fenol
3,00
Putrescín x 2HCl
0,32
Pyruvát sodný
220,00
NaHCO3
2500,00
Tymidín
0,73
Aminokyseliny
L-alanín
17,82
L-arginín x HCl
421,40
L-Asparagín x H2O
30,02
Kyselina L-aspartová
26,62
L-cysteín x HCl x H2O
70,24
L-glutamín
292,20
Kyselina L-glutámová
29,42
Glycín
15,01
L-histidín x HCl x H2O
41,92
L-izoleucín
7,87
L-leucín
26,24
L-Lyzín x HCl
73,04
L-metionín
8,95
L-fenylalanín
9,91
L-Prolín
69,06
L-serín
21,02
L-treonín
23,82
L-tryptofán
4,08
L-tyrozín
10,87
L-Valín
23,42
Vitamíny
D(+)-biotín
0,07
D-pantotenát vápenatý
0,48
Cholín chlorid
13,96
Kyselina listová
1,32
myo-izozitol
18,02
Nikotínamid
0,04
Pyridoxín x HCl
0,06
Riboflavín
0,04
Tiamín x HCl
0,34
Vitamín B12
1,36
- 0,02 pri 20-25 °C. Každá šarža bola testovaná na sterilitu a neprítomnosť mykoplazmy a baktérií. Skladovanie Skladujte v chladničke pri teplote +2 °C až +8 °C v tme. Zmrazenie a oteplenie na +37 °C znižuje kvalitu produktu. Nezohrievajte médium na viac ako 37 °C a nepoužívajte nekontrolovateľné zdroje tepla (napr. mikrovlnné rúry). Ak sa má použiť len časť média, odoberte toto množstvo z fľaše a zohrejte ho na izbovú teplotu. Skladovateľnosť všetkých médií okrem základného média je 6 až 8 týždňov od dátumu otvorenia. Zloženie Zložky mg/L Anorganické soliChlorid vápenatý x 2H2O132,00 Síran horečnatý97,67 Chlorid draselný400 Chlorid sodný6 460,00 Hydrogénfosforečnan sodný (bezvodý)504,00 Ostatné zložkyD(+)-glukóza (bezvodá)3 000,00 Glutatión (redukovaný)0 Mäsový peptón600,00 Fenolová červená sodná soľ11 AminokyselinyL-alanín13,36 L-arginín x HCl42,14 L-asparagín x H2O45,03 Kyselina L-asparagová19,97 L-cysteín x HCl x H2O31,75 L-glutamín (stabilný)219,15 Kyselina L-glutámová22,07 Glycín7,51 L-histidín x HCl x H2O20,96 L-hydroxyprolín19,67 L-izoleucín39,36 L-leucín39,36 L-lyzín x HCl36,54 L-metionín14,92 L-fenylalanín16,52 L-prolín17,27 L-serín26,28 L-treonín17,87 L-tryptofán3,06 L-tyrozín disodná soľ26,10 L-valín17,57 Vitamínyp-Aminobenzoová kyselina1,0 Kyselina askorbová0,56 D(+)-biotín0,20 D-pantotenát vápenatý0,2 Cholinchlorid5,0 Kyselina listová10 Myo-inositol36 Nikotínamid0,5 Kyselina nikotínová0,5 Pyridoxal HCl0,50 Pyridoxín HCl0,50 Riboflavín0,2 Tiamín HCl0,2 Vitamín B122,0
- 10 % CO2.
IMDM je vhodný pre rýchlo sa množiace bunkové kultúry s vysokou hustotou vrátane buniek Jurkat, COS-7 a makrofágov. Rôzne modifikácie IMDM, ktoré sú k dispozícii pre rôzne aplikácie bunkových kultúr, nájdete pomocou nástroja na výber médií. Tekuté médiá poskytujú základné živiny pre všetky aplikácie bunkových kultúr. Každé z našich vysokokvalitných médií na kultiváciu buniek sa vyrába podľa pôvodne uverejneného vzorca alebo modifikácií potrebných na konzistentný výkon a stabilitu kultivačného média.
IMDM vs. DMEM
IMDM obsahuje dusičnan draselný namiesto dusičnanu železitého a HEPES a pyruvát sodný. Vďaka ďalším zložkám v IMDM je vhodnejšie pre špecializované typy buniek a špecifické aplikácie ako DMEM.
IMDM vs. RPMI
IMDM a RPMI majú odlišné zloženie, ktoré môže byť dôležité pre stimuláciu PMA/ionomycínom. Jedným z významných rozdielov je koncentrácia Ca2+. Zatiaľ čo RPMI obsahuje 0,42 mM Ca2+, IMDM obsahuje 1,49 mM.
Kontrola kvality
pH = 7,2 +/
- 0,02 pri 20
- 25 °C.
Každá šarža bola testovaná na sterilitu a neprítomnosť mykoplazmy a baktérií.
Údržba
Uchovávajte v chladničke pri teplote +2 °C až +8 °C v tme. Mrazenie a zahrievanie do +37 °C minimalizuje kvalitu výrobku.
Neohrievajte médium na viac ako 37 °C ani nepoužívajte nekontrolovateľné zdroje tepla (napr. mikrovlnné zariadenia).
Ak sa má použiť len časť média, odoberte toto množstvo z fľaše a zohrejte ho pri izbovej teplote.
Trvanlivosť akéhokoľvek média okrem základného média je 8 týždňov od dátumu výroby.
Zloženie
Zložky
mg/l
Anorganické soli
Chlorid vápenatý x 2 H2O
219,00
Chlorid draselný
330,00
Dusičnan draselný
0.076
Síran horečnatý bezvodý
97,73
Chlorid sodný
4,505.00
Dihydrogénfosforečnan sodný bezvodý
109,00
Seleničitan sodný
0,02
Ostatné zložky
D(+)-glukóza bezvodá
4,500.00
HEPES
5,958.00
Pyruvát sodný
110,00
Fenolová červeň
15,00
Aminokyseliny
L-alanín
25,00
L-arginín x HCl
84,00
L-Asparagín x H2O
25,00
Kyselina L-aspartová
30,00
L-Cystín x 2HCl
91,24
L-Glutamín
584,00
Kyselina L-glutámová
75,00
Glycín
30,00
L-histidín x HCl x H2O
42,00
L-izoleucín
104,80
L-leucín
104,80
L-Lyzín x HCl
146,20
L-metionín
30,00
L-fenylalanín
66,00
L-Prolín
40,00
L-serín
42,00
L-Treonín
95,20
L-tryptofán
16,00
L-Tyrozín x 2Na
104,20
L-Valín
93,60
Vitamíny
D(+)-biotín
0.013
D-pantotenát vápenatý
4,00
Cholín chlorid
4,00
Kyselina listová
4,00
myo-Inozitol
7,20
Médium RPMI 1640, ktoré bolo pôvodne navrhnuté na podporu rastu ľudských leukemických buniek v suspenzných aj monovrstvových kultúrach, sa modifikáciami výskumníkov a komerčných dodávateľov vyvinulo tak, aby bolo vhodné pre rôzne druhy buniek cicavcov. Je výnimočne kompatibilné s bunkovými líniami, ako sú HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocyty a karcinómy.
Médium RPMI 1640 sa odlišuje od ostatných médií na kultiváciu buniek vďaka svojmu jedinečnému zloženiu. Obsahuje značné množstvo fosfátov, aminokyselín a vitamínov. Najmä obsahuje biotín, vitamín B12 a PABA, ktoré sa v Eagle's Minimal Essential Medium alebo Dulbecco's Modified Eagle Medium nenachádzajú. Okrem toho RPMI 1640 Medium vykazuje výrazne zvýšené koncentrácie vitamínov inozitolu a cholínu. Neobsahuje však proteíny, lipidy ani rastové faktory. V dôsledku toho sa na zabezpečenie optimálnych podmienok pre rast buniek bežne vyžaduje doplnenie 10 % fetálneho hovädzieho séra (FBS).
Pufrovací systém média RPMI 1640 sa spolieha na hydrogenuhličitan sodný a na udržanie fyziologicky vhodného pH si vyžaduje 5
- 10 % CO2. Zahrnutie redukčného činidla glutatiónu ďalej odlišuje toto médium od ostatných.
Kontrola kvality
Sterilne filtrované
Skladovanie a trvanlivosť
Skladujte pri teplote +2 °C až +8 °C, chránené pred svetlom.
Po otvorení skladujte pri teplote 4 °C a spotrebujte do 6 až 8 týždňov.
Podmienky prepravy
Okolitá teplota
Údržba
Uchovávajte v chlade pri teplote +2°C až +8°C v tme. Vyhnite sa zmrazovaniu a častému zahrievaniu na +37 °C, pretože sa tým znižuje kvalita výrobku.
Neohrievajte médium na teplotu vyššiu ako 37 °C a nepoužívajte nekontrolované zdroje tepla, ako sú mikrovlnné zariadenia.
Ak sa má použiť len časť média, odoberte požadované množstvo a pred použitím ho zohrejte na izbovú teplotu.
Zloženie
Kategória
Zložky
Koncentrácia (mg/l)
Aminokyseliny
Glycín
10.00
L-alanyl-L-glutamín
434.40
L-arginín
200.00
L-asparagínH2O
56.82
Kyselina L-aspartová
20.00
L-cystín 2HCl
65.20
Kyselina L-glutámová
20.00
L-histidín HClH2O
20.27
L-Hydroxy-L-Prolín
20.00
L-izoleucín
50.00
L-leucín
50.00
L-Lyzín HCl
40.00
L-metionín
15.00
L-fenylalanín
15.00
L-Prolín
20.00
L-serín
30.00
L-Treonín
20.00
L-tryptofán
5.00
L-Tyrozín 2Na 2H2O
28.83
L-Valín
20.00
Vitamíny
kyselina p-aminobenzoová
1.00
D-Biotín
0.20
Cholín chlorid
3.00
D-pantotenát vápenatý
0.25
Kyselina listová
1.00
myo-Inozitol
35.00
Nikotínamid
1.00
Pyridoxín HCl
1.00
Riboflavín
0.20
Tiamín HCl
1.00
Vitamín B12
0.005
Anorganické soli
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Ostatné zložky
D-glukóza
2000.00
L-Glutatión redukovaný
1.00
Fenolová červená sodná soľ
5.30