Neuro-2a-cellelinje
Neuro-2a er en musedrevet nevral cellelinje som er mye brukt i nevrovitenskapelig forskning. Disse cellene brukes hovedsakelig til å studere nevral utvikling, differensiering, nevrotoksisitet, cellesignalveier og aksonal vekst. Dessuten brukes de til utvikling og screening av legemidler.
Denne artikkelen fokuserer på viktige aspekter ved Neuro-2a nevroblastomceller som kan hjelpe deg før du begynner å arbeide med dem. Den vil hovedsakelig dekke følgende:
- Generelle egenskaper og opprinnelse til Neuro-2a-celler
- Informasjon om dyrking av Neuro-2a-cellelinjen
- Fordeler og ulemper med Neuro-2a-cellelinjen
- Forskningsanvendelser av Neuro-2a-cellelinjen
- Forskningspublikasjoner som omhandler Neuro-2a-celler
- Ressurser for Neuro-2a-celler: Protokoller, videoer og mer
1. Generelle egenskaper og opprinnelse til Neuro-2a-celler
Denne delen av artikkelen tar for seg bakgrunnen og de grunnleggende egenskapene til Neuro-2a-cellelinjen som det er viktig å kjenne til før du arbeider med den. Her vil du lære mer: Hva er Neuro-2a-cellelinjen? Hva er opprinnelsen til Neuro-2a-cellelinjen? Hva er differensiering av Neuro-2a-celler? Hva er størrelsen på en Neuro-2a-celle? Hva er morfologien til Neuro-2a-celler?
- Neuro-2a-celler stammer fra en spontan tumor (nevroblastom) fra en albinomus (stamme A). Cellelinjen ble etablert av R.J. Klebe og F.H. Ruddle.
- Neuro-2a nevroblastomcellene har en nevronal og amøboid stamcellemorfologi.
- Neuro-2a-cellenes størrelse er 12 mikrometer i høyden [1].
- Kromosomantallet i Neuro-2a-celler kan variere fra 59 til 193, med et modalt tall på 95. Karyotypen til disse nevroblastomcellene er ustabil innenfor et område på 94 til 98 kromosomer.
2. Informasjon om dyrking av Neuro-2a-cellelinjen
Neuro-2a-celler er mye brukt i nevrovitenskapelige forskningslaboratorier. Før du arbeider med disse cellene, bør du sette deg inn i den viktige informasjonen om celledyrking som er nevnt nedenfor. Dette kan hjelpe deg med å gjøre det enkelt. Det vil du få vite: Hva er et Neuro-2a-cellekulturmedium? Hvordan dyrker du Neuro-2a-celler? Hva er fordoblingstiden for Neuro-2a-celler? Hva er såingstettheten til Neuro-2a? Hva er Neuro-2a-cellekulturprotokollen? Hva er Neuro-2a-cellemediet?
Nøkkelpunkter for dyrking av Neuro-2a-celler
|
Fordoblingstid: |
Neuro-2a-cellenes fordoblingstid er omtrent 70 timer. |
|
Adherent eller i suspensjon: |
Neuro-2a er en adherent cellelinje. |
|
Såingstetthet: |
Den optimaliserte celletettheten for Neuro-2a-cellelinjen er 1 x104 celler/cm2. Ved såing vaskes cellene med magnesium- og kalsiumfri fosfatbuffersaltløsning (1x). Deretter tilsettes en passasjeløsning (Accutase), og cellene inkuberes i 8 til 10 minutter ved omgivelsestemperatur. Etter celledissosiasjon tilsettes nytt medium, og cellene sentrifugeres. Den høstede cellepelleten resuspenderes forsiktig, og cellene helles over i et dyrkingskar for vekst. |
|
Vekstmedium: |
EMEM brukes til dyrking av Neuro-2a-celler. Det inneholder 10 % FBS, 2 mM L-glutamin, 1,5 g/L NaHCO3, EBSS, 1 mM natriumpyruvat og NEAA for ideell cellevekst. Mediet bør skiftes ut 1 til 2 ganger per uke. |
|
Vekstbetingelser: |
Neuro-2a-kulturer holdes i en 37 °C befuktet inkubator koblet til 5 % CO2-tilførsel. |
|
Oppbevaring: |
Cellene bør langtidslagres ved temperaturer under -150 °C i en elektrisk fryser med ultralave temperaturer eller i dampfasen av flytende nitrogen. |
|
Fryseprosess og medium: |
CM-1- eller CM-ACF-medier brukes til å fryse Neuro-2a-celler. Cellene fryses gjennom en langsom fryseprosess som kun tillater et fall på 1 °C per minutt. Dette beskytter cellene mot sjokk og opprettholder deres levedyktighet. |
|
Tineprosess: |
For å tine frosne kulturer plasseres hetteglasset i et 37 °C varmt vannbad i 40 til 60 sekunder til det bare er en liten isklump igjen. Deretter tilsettes dyrkingsmedium, og cellene sentrifugeres. Dette trinnet bidrar til å fjerne komponenter fra frysemediet. Cellepelleten resuspenderes deretter, og cellene overføres til en ny kolbe fylt med dyrkningsmedium. Deretter plasseres cellene i en inkubator ved 37 °C i minst 24 timer. |
|
Biosikkerhetsnivå: |
Det er obligatorisk å håndtere og vedlikeholde Neuro-2a-kulturer i laboratorier på biosikkerhetsnivå 1. |
3. Fordeler og ulemper med Neuro-2a-cellelinjen
Neuro-2a-celler har noen fordeler og ulemper som skiller dem fra andre nevronale cellelinjer. Noen bemerkelsesverdige fordeler og ulemper med disse cellene er listet opp her.
Fordeler og ulemper
Fordelene med Neuro-2a murin nevroblastomcellelinje er
-
Lett å vedlikeholde
Neuro-2a-cellelinjen er ikke forbundet med kompliserte eller innviklede celledyrkingsprosedyrer. De er enkle å dyrke og vedlikeholde i forskningslaboratorier.
-
In vitro nevronal cellemodell
Neuro-2a er en praktisk nevroncellemodell som er mye brukt av forskere i studier av nevronutvikling og differensiering.
Ulemper
Ulempene med Neuro-2a-celler er:
-
Murin opprinnelse
Neuro-2a stammer fra mus, og forskere bør utvise forsiktighet når de ekstrapolerer resultater fra musebaserte studier til helse og sykdom hos mennesker, ettersom biologien hos mus og mennesker kan variere betydelig.
4. Forskningsmessige anvendelser av Neuro-2a-cellelinjen
Neuro-2a-celler har mange bruksområder innen nevrovitenskapelig forskning. Noen lovende bruksområder for denne cellelinjen omtales her:
- Nevral utvikling: Neuro-2a er en in vitro-nevroncellemodell som er mye brukt til å studere nevronal utvikling og relaterte prosesser som differensiering, aksonal vekst og synapsedannelse. I en studie fra 2020 ble Neuro-2a-celler brukt til å undersøke hvilken rolle mikroRNA-124 spiller i retinsyreindusert nevroncelledifferensiering [2]. En annen studie undersøkte Neuro 2a retinsyre-reseptor gamma (RARG) og miRNA-124-uttrykk i nevroblastomcellelinjen (N2A). Denne studien foreslo at RARG er et mål for miR-124 og undertrykker nevrittisk utvekst [3].
- Nevrotoksisitet: Neuro-2a brukes også til å vurdere de toksiske effektene av legemidler, kjemikalier eller miljøfaktorer på nerveceller. I en studie utført av Zhihong Yin og medarbeidere undersøkte de for eksempel nevrotoksisiteten til bisfenol A (BPA), et miljøkjemikalie, ved hjelp av Neuro-2a-celler. De observerte at BPA undertrykker differensiering og spredning av nerveceller ved å forstyrre deres cellulære og synaptiske integritet [4].
- Screening av legemidler: Neuro-2a-celler brukes også til å evaluere den terapeutiske aktiviteten til en rekke legemidler, forbindelser og naturprodukter. I en studie ble det for eksempel brukt Neuro-2a-celler til å studere det antioksidative potensialet til Gingko biloba-planteekstrakt. Forskningen viste også at det fører til en nedgang i Aβ-aggregering og kan være en potensiell behandling for Alzheimers sykdom [5].
5. Forskningspublikasjoner som omhandler Neuro-2a-celler
Her er noen interessante forskningsartikler som omhandler Neuro-2a-cellelinjen.
Denne studien i Journal of Natural Medicines, 2018, undersøkte de terapeutiske effektene av alkamider isolert fra hvit pepper (P. nigrum) på Neuro-2a-nevronceller.
Nkx2. 1-nedregulering er involvert i hjerneabnormalitet indusert av overskudd av retinsyre
Denne forskningen i Acta Biochimica et Biophysica Sinica, 2020 foreslår at Nkx2.1-genet spiller en viktig rolle i utviklingen av musehjernen ved å regulere Shh-signalkaskaden.
Denne artikkelen ble publisert i Toxicology and Industrial Health (2023) og foreslår at miljøkjemikaliet bisfenol A utløser nevrotoksisitet i nevro-2a-celler og forstyrrer deres synaptiske og cytoskjelettale dysfunksjon.
Denne artikkelen i Pharmaceuticals (2021) foreslo at et medikament, heksarelin, modulerer PI3K / AKT og MAPK-kaskade i nevroblastomceller (Neuro-2a) og hemmer hydrogenperoksidindusert neuro-2a-celleapoptose.
Denne forskningsartikkelen i Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2021) foreslår at fruktekstrakt av Emblica officinalis undertrykker nevroinflammasjon i Neuro-2a-celler og dermed kan være gunstig for nevroinflammatoriske sykdommer.
6. Ressurser for Neuro-2a-celler: Protokoller, videoer og mer
Følgende er tilgjengelige nettressurser om Neuro-2a-celler. De inkluderer Neuro-2a-cellekultur og transfeksjonsprotokoll.
- Protokoll fortransfeksjon avNeuro-2a: Neuro-2a er en egnet transfeksjonsvert. Denne lenken vil veilede deg angående transfeksjonsprotokollen for cellelinjen. Neuro-2a-transfeksjonseffektiviteten varierer fra reagens til reagens.
Følgende lenke inneholder protokollen for dyrking av Neuro-2a-celler.
- Protokoll for dyrking av Neuro-2a-celler: Denne lenken vil hjelpe deg med å lære protokollen for subkulturering av neuro-2a-celler.
- Neuro-2a celler: Nettstedet inneholder omfattende kunnskap om Neuro-2a-cellemedier, såingstetthet og protokoller for subkulturering og håndtering av kryopreserverte og proliferative kulturer.
Referanser
- Lulevich, V., et al., Single-cell mechanics provides a sensitive and quantitative means for probing amyloid-beta peptide and neuronal cell interactions. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): p. 13872-7.
- You, Q., et al., Rollen til miR-124 i reguleringen av retinsyreindusert Neuro-2A-celledifferensiering. Neural Regen Res, 2020. 15(6): p. 1133-1139.
- Su, X., et al., Retinsyre-reseptor gamma er målrettet av microRNA-124 og hemmer neurittutvekst. Neuropharmacology, 2020. 163: p. 107657.
- Yin, Z., et al., Bisfenol-A-eksponering indusert nevrotoksisitet og assosiert med synapse og cytoskjelett i Neuro-2a-celler. Toksikologi in Vitro, 2020. 67: p. 104911.
- Chen, L., et al., Gingko biloba-ekstrakt (EGb) hemmer oksidativt stress i neuro 2A-celler som overuttrykker APPsw. BioMed research international, 2019. 2019.