Medium for cellekultur
Dyrking av celler krever omhyggelig miljøkontroll for vellykket vekst og vedlikehold. En omfattende tilnærming innebærer å sikre sterilitet, næringstilførsel, pH-stabilitet og temperaturkontroll.
Sterile forhold og næringstilførsel
For å forhindre kontaminering og sikre cellenes levedyktighet er det avgjørende med et sterilt miljø. Dette oppnås vanligvis ved hjelp av aseptiske teknikker og spesialutstyr som f.eks. laminar flow-hetter. Næringsstoffene tilføres via dyrkingsmedier, som inneholder en blanding av essensielle ingredienser, blant annet
- Uorganiske salter: Uorganiske salter er avgjørende for å opprettholde den osmotiske balansen og levere nødvendige ioner til celleaktivitetene.
- Karbohydrater: Fungerer som energikilder; glukose er det mest brukte sukkeret.
- Aminosyrer: Byggesteinene i proteiner; noen er essensielle og kan ikke syntetiseres av cellene.
- Vitaminer: Fungerer som kofaktorer for enzymatiske reaksjoner; B-vitaminer er essensielle for cellenes metabolisme.
- Fettsyrer og lipider: Essensielle komponenter for cellemembranens integritet og funksjon.
- Proteiner og peptider: I serumfrie medier erstatter disse vekstfaktorene og bindingsproteinene som vanligvis tilføres fra serum.
- Serum: Ofte inkludert som en kilde til vekstfaktorer, selv om serumfrie alternativer blir stadig mer populære for å redusere risikoen for variabilitet og kontaminering.
- pH- og temperaturstabilitet: Celler krever vanligvis en pH-verdi på 7,2-7,4 for optimal vekst. Dette reguleres av buffersystemer, som enten kan være CO2/bikarbonat-baserte eller oppnås kjemisk ved hjelp av midler som HEPES. Temperaturen holdes rundt 37 °C for å etterligne fysiologiske forhold.
Medievarianter og optimalisering
I årenes løp har det blitt utviklet ulike basalmedier for å imøtekomme spesifikke celletyper:
- Balanserte saltløsninger: Danner grunnlaget for mer komplekse medieformuleringer.
- Basalmedier, for eksempel Minimum Essential Medium (MEM), brukes til primærkulturer og diploide celler.
- Komplekse medier: I likhet med RPMI 1640 egner de seg til et bredere utvalg av pattedyrceller.
- Serumfrie medier: Skreddersydd for spesifikke bruksområder, noe som reduserer risikoen for kontaminering fra komponenter som stammer fra dyr.
Medietilberedning og kvalitetskontroll
Medier kan tilberedes internt fra essensielle ingredienser eller kjøpes som ferdige løsninger. Kvalitetskontroll innebærer å sikre fravær av forurensninger og riktig konsentrasjon av ingrediensene. Rekonstituering av pulverformige medier krever vann av høy kvalitet, og tilberedte medier må steriliseres, vanligvis ved hjelp av filtrering.
Serumbruk og sikkerhetshensyn
Det er vanlig å bruke serum, særlig føtalt bovint serum (FBS), på grunn av dets rike innhold av vekstfaktorer. På grunn av bekymringer for sykdommer som BSE følges imidlertid strenge test- og innkjøpsprotokoller for å garantere sikkerheten.
Regulatoriske retningslinjer og trender
Regelverket regulerer dyrebaserte materialer i kulturer, og understreker viktigheten av innkjøp og testing. Trenden mot å eliminere slike materialer der det er mulig, gjenspeiles i utviklingen av serumfrie og dyrefrie mediealternativer.
Konklusjonen er at cellekulturmedier spiller en grunnleggende rolle for vekst og vedlikehold av celler in vitro. Hver komponent er nøye utvalgt og optimalisert for å etterligne in vivo-miljøet og sikre at cellene har gode vekst-, overlevelses- og funksjonalitetsbetingelser.
Det som skiller DMEM fra andre medier, er den unike sammensetningen. Det inneholder en imponerende firedobling av aminosyre
- og vitaminkonsentrasjonen sammenlignet med det originale Eagle's Minimal Essential Medium. DMEM ble opprinnelig utviklet med lavt glukoseinnhold (1 g/l) og natriumpyruvat, men brukes ofte med høyere glukosenivåer, enten med eller uten natriumpyruvat. DMEM inneholder verken proteiner, lipider eller vekstfaktorer, noe som gjør det nødvendig med tilskudd. For å oppnå optimal vekst er det vanlig å supplere DMEM med 10 % føtalt bovint serum (FBS). I tillegg bruker DMEM et natriumbikarbonatbuffersystem, som krever 5-10 % CO2 for å opprettholde en fysiologisk pH.
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) er høyt ansett blant definerte medier for celle
- og vevskultur, og dekker vekstbehovene til ulike fenotyper av adherente celler. Det overgår det opprinnelige Eagle's Medium, som ble utviklet på 1950-tallet for dyrking av kyllingceller, gjennom den forbedrede tilleggsformuleringen kjent som Dulbeccos modifikasjon. Denne modifikasjonen øker innholdet av utvalgte aminosyrer og vitaminer opptil fire ganger sammenlignet med det opprinnelige mediet.
DMEM spiller en viktig rolle som vekstmedium for ulike celletyper, inkludert primærceller, stamceller og transformerte celler. Forskere bruker også den modifiserte versjonen av DMEM til en lang rekke forskningsformål, for eksempel legemiddelforskning, vevsteknikk og studier av cellesignalveier.
Kvalitetskontroll
Sterilfiltrert
Oppbevaring og holdbarhet
Oppbevares ved +2 °C til +8 °C, beskyttet mot lys.
Etter åpning, oppbevares ved 4 °C og brukes innen 6-8 uker.
Transportforhold
Omgivelsestemperatur
Vedlikehold
Oppbevares i kjøleskap ved +2 °C til +8 °C i mørke. Unngå frysing og hyppig oppvarming til +37 °C, da det reduserer produktkvaliteten.
Ikke varm opp mediet til mer enn 37 °C eller bruk ukontrollerte varmekilder som mikrobølgeovner.
Hvis bare en del av mediet skal brukes, ta ut den nødvendige mengden og varm den opp til romtemperatur før bruk.
Sammensetning
Kategori
Komponenter
Konsentrasjon (mg/L)
Aminosyrer
Glysin
30.00
L-arginin HCl
84.00
L-Cystin 2 HCl
62.57
L-glutamin
584.00
L-Histidin HClH2O
42.00
L-isoleucin
105.00
L-Leucin
105.00
L-Lysin HCl
146.00
L-metionin
30.00
L-fenylalanin
66.00
L-Serin
42.00
L-Threonin
95.00
L-Tryptofan
16.00
L-Tyrosin 2 Na 2H2O
103.79
L-Valin
94.00
Vitaminer
Kolinklorid
4.00
D-kalsiumpantotenat
4.00
Folsyre
4.00
myo-Inositol
7.20
Nikotinamid
4.00
Pyridoksal HCl
4.00
Riboflavin
0.40
Tiamin HCl
4.00
Uorganiske salter
CaCl2 2H2O
265.00
Fe(NO3)3 9H2O
0.10
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
200.10
NaCl
6400.00
NaHCO3
3700.00
NaH2PO4 2H2O
141.73
Andre komponenter
D-Glukose
4500.00
Fenolrødt natriumsalt
15.90
Natriumpyruvat
110.00
Hva er det i EMEM?
EMEM er en modifisert versjon av Eagles minimum essential medium, som inneholder Earle's Balanced Salt Solution, ikke-essensielle aminosyrer, L-glutamin, natriumpyruvat og natriumbikarbonat. Det er viktig å merke seg at dette nivået av natriumbikarbonat er beregnet for bruk i 5 % CO2 i luften. For å opprettholde effektiviteten anbefales det å oppbevare mediet ved 2 °C til 8 °C i mørket når det ikke er i bruk.
Hva brukes EMEM til?
Eagle's minimal essential medium (EMEM) er et celledyrkningsmedium som kan opprettholde celler i vevskultur. Mediet inneholder høyere konsentrasjoner av aminosyrer, noe som gir en mer nøyaktig tilnærming til proteinsammensetningen i dyrkede pattedyrceller. EMEM kan brukes til å dyrke ulike celler, blant annet fibroblaster, humane leverkreftceller (HepG2) og humane føtale hjerneprogenitor-deriverte astrocyttceller (PDA). Det brukes vanligvis i nærvær av føtalt bovint serum (FBS), kalve
- eller hestesera.
Hvordan skiller EMEM seg fra andre cellekulturmedier?
EMEM og Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) har noen likhetstrekk, men de er også forskjellige. Begge mediene mangler protein og inneholder de aminosyrene, saltene, glukosen og vitaminene som er nødvendige for å forsyne en celle med energi og opprettholde den i vevskultur. DMEM er imidlertid modifisert slik at det inneholder opptil fire ganger mer vitaminer og aminosyrer og to til fire ganger mer glukose enn EMEM. Det er verdt å merke seg at EMEM også er forskjellig fra den opprinnelige MEM-formuleringen.
Kvalitetskontroll
Sterilfiltrert
Oppbevaring og holdbarhet
Oppbevares ved +2 °C til +8 °C, beskyttet mot lys.
Etter åpning, oppbevares ved 4 °C og brukes innen 6-8 uker.
Transportforhold
Omgivelsestemperatur
Vedlikehold
Oppbevares i kjøleskap ved +2 °C til +8 °C i mørke. Unngå frysing og hyppig oppvarming til +37 °C, da det reduserer produktkvaliteten.
Ikke varm opp mediet til mer enn 37 °C eller bruk ukontrollerte varmekilder som mikrobølgeovner.
Hvis bare en del av mediet skal brukes, ta ut den nødvendige mengden og varm den opp til romtemperatur før bruk.
Sammensetning
Kategori
Komponenter
Konsentrasjon (mg/L)
Aminosyrer
L-arginin HCl
126.00
L-Cystin 2 HCl
31.30
L-glutamin
292.00
L-Histidin HClH2O
42.00
L-isoleucin
52.00
L-Leucin
52.00
L-Lysin HCl
72.50
L-metionin
15.00
L-fenylalanin
32.00
L-treonin
48.00
L-Tryptofan
10.00
L-Tyrosin 2 Na 2H2O
51.90
L-Valin
46.00
Vitaminer
Kolinklorid
1.00
Vitaminer
D-kalsiumpantotenat
1.00
Folsyre
1.00
myo-Inositol
2.00
Nikotinamid
1.00
Pyridoksal HCl
1.00
Riboflavin
0.10
Tiamin HCl
1.00
Uorganiske salter
CaCl2 2H2O
265.00
Uorganiske salter
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Andre komponenter
D-Glukose
1000.00
Andre komponenter
Fenolrødt natriumsalt
11.00
En av de viktigste fordelene er at mediet støtter cellevekst uten behov for serumtilskudd. Dette eliminerer potensiell interferens forårsaket av serumkomponenter, noe som sikrer konsistente og pålitelige forsøksresultater. Ved å tilby et serumfritt dyrkningsmiljø gir Ham's F-12 Medium forskere større kontroll over undersøkelsene sine.
En annen viktig egenskap ved Ham's F-12 Medium er at det egner seg for enkeltcelleplatering. Dette gjør det til et utmerket valg for en rekke cellelinjer, inkludert CHO-celler, lungeceller og L-celler fra mus. Mediets optimaliserte næringssammensetning legger til rette for effektiv feste og vekst av enkeltceller, noe som muliggjør etablering av homogene cellekulturer med bedre reproduserbarhet.
Ham's F-12 Medium har dessuten blitt anerkjent som det foretrukne mediet for klonal toksisitetsanalyse (CTA). Denne analysen spiller en avgjørende rolle når man skal vurdere de cytotoksiske effektene av stoffer på celler. Ved å bruke Ham's F-12 Medium i CTA kan forskere nøyaktig evaluere virkningen av ulike forbindelser eller behandlinger på individuelle celler, noe som gir verdifull innsikt i toksikologiske profiler.
Kvalitetskontroll
pH = 7,2 +/
- 0,02 ved 20-25 °C.
Hvert parti er testet for sterilitet og fravær av mykoplasma og bakterier.
Vedlikehold
Oppbevares i kjøleskap ved +2 °C til +8 °C i mørke. Frysing og oppvarming opp til +37 °C minimerer produktets kvalitet.
Ikke varm opp mediet til mer enn 37 °C eller bruk ukontrollerbare varmekilder (f.eks. mikrobølgeovner).
Hvis bare en del av mediet skal brukes, tar du denne mengden ut av flasken og varmer den opp i romtemperatur.
Holdbarheten for alle medier unntatt basismediet er 8 uker fra produksjonsdatoen.
Sammensetning
Komponenter
mg/L
Uorganiske salter
Kalsiumklorid x 2H2O
44,00
Kobber(II)sulfat x 5H2O
0,00
Jern(II)sulfat x 7H2O
0,83
Magnesiumklorid x 6H2O
122,00
Kaliumklorid
223,65
Natriumklorid
7599,00
di-Natriumhydrogenfosfatvannfritt
142,04
Sink sulfat x 7H2O
0,86
Andre komponenter
D(+)-Glukose vannfri
1801,60
Hypoksantin
4,08
Linolsyre
0,08
DL-α-liponsyre
0,21
Fenolrød
1,20
Putrescin x 2HCl
0,16
Natriumpyruvat
110,00
Tymidin
0,73
NaHCO3
1176,00
Aminosyrer
L-Alanin
8,91
L-arginin x HCl
210,70
L-asparagin x H2O
15,01
L-asparaginsyre
13,31
L-Cystein x HCl x H2O
35,12
L-Alanyl-L-glutamin
217,30
L-glutaminsyre
14,71
Glysin
7,51
L-Histidin x HCl x H2O
20,96
L-isoleucin
3,94
L-Leucin
13,12
L-Lysin x HCl
36,54
L-metionin
4,48
L-fenylalanin
4,96
L-prolin
34,53
L-Serin
10,51
L-Threonin
11,91
L-Tryptofan
2,04
L-Tyrosin
5,44
L-Valin
11,71
Vitaminer
D(+)-Biotin
0,01
D-kalsiumpantotenat
0,24
Kolinklorid
13,96
Folsyre
1,32
myo-Inositol
18,02
Nikotinamid
0,04
Pyridoksin x HCl
0,06
Riboflavin
0,04
Tiamin x HCl
0,34
Vitamin B12
1,36
Denne unike formuleringen kombinerer Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) og Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) i et nøyaktig 1:1-forhold. Sammensetningen er ytterligere forbedret ved tilsetning av L-glutamin.
DMEM, som er avledet fra Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), har en høyere konsentrasjon av aminosyrer og vitaminer enn forgjengeren. Ham's F-12 er derimot basert på Ham's F-10 medium, og gir et komplementært sett med essensielle komponenter.
For å støtte optimal cellevekst er det vanlig praksis å supplere DMEM:Ham's F12 med FBS i en typisk konsentrasjon på 5-10 %. Dette er nødvendig fordi mediet mangler veksthormoner, lipider og proteiner som er avgjørende for cellenes utvikling.
DMEM:Ham's F12 inneholder et pH-buffersystem og tilsettes ofte fenolrødt, som er en pH-indikator. Celler som dyrkes i DMEM:Ham's F12, eller i et hvilket som helst medium som bruker bikarbonatbuffersystemet, krever et kontrollert CO2-miljø på 5-10 % for å opprettholde passende pH-nivåer.
Kvalitetskontroll
Sterilfiltrert
Oppbevaring og holdbarhet
Oppbevares ved +2 °C til +8 °C, beskyttet mot lys.
Etter åpning, oppbevares ved 4 °C og brukes innen 6-8 uker.
Transportforhold
Omgivelsestemperatur
Vedlikehold
Oppbevares i kjøleskap ved +2 °C til +8 °C i mørke. Unngå frysing og hyppig oppvarming til +37 °C, da det reduserer produktkvaliteten.
Ikke varm opp mediet til mer enn 37 °C eller bruk ukontrollerte varmekilder som mikrobølgeovner.
Hvis bare en del av mediet skal brukes, ta ut den nødvendige mengden og varm den opp til romtemperatur før bruk.
Sammensetning
Kategori
Komponenter
Konsentrasjon (mg/L)
Aminosyrer
Glysin
18.75
L-Alanin
4.45
L-arginin HCl
147.50
L-asparagin H₂O
7.50
L-asparaginsyre
6.65
L-cystein HCl H₂O
17.56
L-Cystin 2 HCl
31.29
L-glutaminsyre
7.35
L-glutamin
365.00
L-Histidin HCl H₂O
31.48
L-isoleucin
54.47
L-Leucin
59.05
L-Lysin HCl
91.25
L-metionin
17.24
L-fenylalanin
35.48
L-prolin
17.25
L-Serin
26.25
L-Threonin
53.45
L-Tryptofan
9.02
L-Tyrosin Dinatriumsalt
48.10
L-Valin
52.85
Vitaminer
D-Biotin
0.0035
Kolinklorid
8.98
D-kalsiumpantotenat
2.24
Folsyre
2.66
myo-Inositol
12.60
Nikotinamid
2.02
Pyridoksin HCl
0.031
Pyridoksal HCl
2.00
Riboflavin
0.219
Tiamin HCl
2.17
Vitamin B12
0.68
Uorganiske salter
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Andre komponenter
D-Glukose
3151.00
Hypoksantin
2.40
HEPES
3574.50
Linolsyre
0.042
Liposyre
0.105
Fenolrødt natriumsalt
8.63
Putrescin 2 HCl
0.081
Natriumpyruvat
55.00
Tymidin
0.365
- og kyllingleverceller, spesielt under forhold med redusert serum.
Ham's F-12K (Kaighn's) Medium er nøye sammensatt for å optimalisere forholdene for celledyrking. Det har en beriket sammensetning som gir forhøyede nivåer av essensielle komponenter som aminosyrer og natriumpyruvat, samt tilleggselementer som putrescin, tymidin, hypoksantin og sink. Disse tilsetningene gjør det mulig for forskere å supplere mediet med minimalt med serum eller definerte komponenter for spesifikke celletyper, noe som forenkler presise eksperimentelle forhold.
Ham's F-12K (Kaighn's) Medium inneholder ikke proteiner eller vekstfaktorer. Derfor er det ofte nødvendig å supplere med vekstfaktorer og føtalt bovint serum (FBS), slik at forskerne kan skreddersy mediet etter kravene til sine spesifikke cellelinjer. For å oppnå optimal ytelse må konsentrasjonen av FBS optimaliseres nøye for hver enkelt cellelinje, slik at optimal vekst og funksjonalitet sikres.
For å opprettholde en fysiologisk pH benytter Ham's F-12K (Kaighn's) Medium et natriumbikarbonatbuffersystem (2,5 g/L), noe som krever et kontrollert CO2-miljø på 5-10 % under dyrkingen. Dette sikrer at pH-verdien i mediet holder seg innenfor det ideelle området for cellevekst og levedyktighet
Kvalitetskontroll
pH = 7,2 +/
- 0,02 ved 20-25 °C.
Hvert parti er testet for sterilitet og fravær av mykoplasma og bakterier.
Vedlikehold
Oppbevares i kjøleskap ved +2 °C til +8 °C i mørke. Frysing og oppvarming opp til +37 °C reduserer produktets kvalitet.
Ikke varm opp mediet til mer enn 37 °C eller bruk ukontrollerbare varmekilder (f.eks. mikrobølgeovner).
Hvis bare en del av mediet skal brukes, tar du denne mengden ut av flasken og varmer den opp i romtemperatur.
Holdbarhetstiden for alle medier unntatt basismediet er 8 uker fra produksjonsdato.
Sammensetning
Komponenter
mg/L
Uorganiske salter
Kalsiumklorid x 2H2O
135,24
Kobber(II)sulfat x 5H2O
0,00
Jern(II)sulfat x 7H2O
0,83
Magnesiumklorid x 6H2O
105,72
Magnesiumsulfat x 7H2O
394,49
Kaliumklorid
283,29
Kaliumdihydrogenfosfat
58,52
Natriumklorid
7597,20
di-Natriumhydrogenfosfatvannfritt
115,02
Sink sulfat x 7H2O
0,14
Andre komponenter
D(+)-Glukose vannfri
1260,00
Hypoksantin
4,08
DL-α-Liponsyre
0,21
Fenolrød
3,00
Putrescin x 2HCl
0,32
Natriumpyruvat
220,00
NaHCO3
2500,00
Tymidin
0,73
Aminosyrer
L-Alanin
17,82
L-arginin x HCl
421,40
L-asparagin x H2O
30,02
L-asparaginsyre
26,62
L-Cystein x HCl x H2O
70,24
L-glutamin
292,20
L-glutaminsyre
29,42
Glysin
15,01
L-Histidin x HCl x H2O
41,92
L-isoleucin
7,87
L-Leucin
26,24
L-Lysin x HCl
73,04
L-metionin
8,95
L-fenylalanin
9,91
L-prolin
69,06
L-Serin
21,02
L-Threonin
23,82
L-Tryptofan
4,08
L-Tyrosin
10,87
L-Valin
23,42
Vitaminer
D(+)-Biotin
0,07
D-kalsiumpantotenat
0,48
Kolinklorid
13,96
Folsyre
1,32
myo-Inositol
18,02
Nikotinamid
0,04
Pyridoksin x HCl
0,06
Riboflavin
0,04
Tiamin x HCl
0,34
Vitamin B12
1,36
- 0,02 ved 20-25 °C. Hvert parti er testet for sterilitet og fravær av mykoplasma og bakterier. Oppbevaring Oppbevares i kjøleskap ved +2 °C til +8 °C i mørket. Frysing og oppvarming til +37 °C reduserer produktets kvalitet. Ikke varm opp mediet til over 37 °C og ikke bruk ukontrollerbare varmekilder (f.eks. mikrobølgeovn). Hvis bare en del av mediet skal brukes, fjern denne mengden fra flasken og varm den opp til romtemperatur. Holdbarheten for alle medier unntatt basismediet er 6 til 8 uker fra åpningsdatoen. Sammensetning Komponenter mg/L Uorganiske salterKalsiumklorid x 2H2O132,00 Magnesiumsulfat97,67 Kaliumklorid400 Natriumklorid6 460,00 Dinatriumhydrogenfosfat (vannfritt)504,00 Andre komponenterD(+)-glukose (vannfri)3 000 Glutathion (redusert)0,5 Kjøttpeptone600 Fenolrødt natriumsalt11 AminosyrerL-alanin13,36 L-arginin x HCl42,14 L-asparagin x H2O45,03 L-asparaginsyre19,97 L-Cystein x HCl x H2O31,75 L-glutamin (stabil)219,15 L-glutaminsyre22,07 Glysin7,51 L-histidin x HCl x H2O20,96 L-hydroksyprolin19,67 L-isoleucin39,36 L-leucin39,36 L-lysin x HCl36,54 L-metionin14,92 L-fenylalanin16,52 L-prolin17,27 L-serin26,28 L-treonin17,87 L-tryptofan3,06 L-tyrosin dinatriumsalt26,1 L-valin17,57 Vitaminerp-Aminobensoesyre1,0 Askorbinsyre0,56 D(+)-biotin0,2 D-kalsiumpantotenat0,2 Kolin klorid5 Folsyre10 Myo-inositol36 Nikotinamid0,5 Nikotinsyre0,5 Pyridoksal-HCl0,5 Pyridoksin HCl0,5 Riboflavin0,2 Tiamin HCl0,2 Vitamin B122,0
IMDM egner seg godt til raskt prolifererende cellekulturer med høy tetthet, inkludert Jurkat-, COS-7
- og makrofagceller. De ulike modifikasjonene av IMDM som er tilgjengelige for en rekke ulike cellekulturapplikasjoner, finner du ved hjelp av medievælgerverktøyet. Flytende medier gir viktige næringsstoffer til alle celledyrkingsapplikasjoner. Alle våre høykvalitetsmedier for celledyrking produseres i henhold til den opprinnelig publiserte formelen eller de modifikasjonene som er nødvendige for å sikre konsekvent ytelse og stabilitet for dyrkingsmediet.
IMDM vs. DMEM
IMDM inneholder kaliumnitrat i stedet for jernnitrat og HEPES og natriumpyruvat. De ekstra komponentene i IMDM gjør det mer egnet for spesialiserte celletyper og spesifikke bruksområder enn DMEM.
IMDM vs. RPMI
IMDM og RPMI har forskjellige formuleringer som kan være relevante for PMA/ionomycin-stimulering. En vesentlig forskjell er konsentrasjonen av Ca2+. Mens RPMI inneholder 0,42 mM Ca2+, inneholder IMDM 1,49 mM.
Kvalitetskontroll
pH = 7,2 +/
- 0,02 ved 20-25 °C.
Hvert parti er testet for sterilitet og fravær av mykoplasma og bakterier.
Vedlikehold
Oppbevares i kjøleskap ved +2 °C til +8 °C i mørke. Frysing og oppvarming opp til +37 °C minimerer produktets kvalitet.
Ikke varm opp mediet til mer enn 37 °C eller bruk ukontrollerbare varmekilder (f.eks. mikrobølgeovner).
Hvis bare en del av mediet skal brukes, tar du denne mengden ut av flasken og varmer den opp i romtemperatur.
Holdbarheten for alle medier unntatt basismediet er 8 uker fra produksjonsdatoen.
Sammensetning
Komponenter
mg/L
Uorganiske salter
Kalsiumklorid x 2 H2O
219,00
Kaliumklorid
330,00
Kaliumnitrat
0.076
Magnesiumsulfat vannfritt
97,73
Natriumklorid
4,505.00
Natriumdihydrogenfosfat vannfritt
109,00
Natriumselenitt
0,02
Andre komponenter
D(+)-Glukose vannfri
4,500.00
HEPES
5,958.00
Natriumpyruvat
110,00
Fenolrød
15,00
Aminosyrer
L-Alanin
25,00
L-arginin x HCl
84,00
L-asparagin x H2O
25,00
L-asparaginsyre
30,00
L-Cystin x 2HCl
91,24
L-glutamin
584,00
L-glutaminsyre
75,00
Glysin
30,00
L-Histidin x HCl x H2O
42,00
L-isoleucin
104,80
L-Leucin
104,80
L-Lysin x HCl
146,20
L-metionin
30,00
L-fenylalanin
66,00
L-prolin
40,00
L-Serin
42,00
L-Threonin
95,20
L-Tryptofan
16,00
L-Tyrosin x 2Na
104,20
L-Valin
93,60
Vitaminer
D(+)-Biotin
0.013
D-kalsiumpantotenat
4,00
Kolinklorid
4,00
Folsyre
4,00
myo-Inositol
7,20
RPMI 1640 Medium ble opprinnelig utviklet for å støtte veksten av humane leukemiceller i både suspensjons
- og monolagskulturer, men har gjennom modifikasjoner fra forskere og kommersielle leverandører utviklet seg til å bli egnet for et bredt spekter av pattedyrceller. Det er eksepsjonelt kompatibelt med cellelinjer som HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocytter og karsinomer.
RPMI 1640 Medium skiller seg ut fra andre cellekulturmedier på grunn av sin unike sammensetning. Det inneholder en betydelig mengde fosfat, aminosyrer og vitaminer. Det inneholder blant annet biotin, vitamin B12 og PABA, som ikke finnes i Eagle's Minimal Essential Medium eller Dulbecco's Modified Eagle Medium. RPMI 1640 Medium har dessuten betydelig høyere konsentrasjoner av vitaminene inositol og kolin. Det inneholder imidlertid ikke proteiner, lipider eller vekstfaktorer. Derfor er det ofte nødvendig å tilsette 10 % føtalt bovint serum (FBS) for å skape optimale forhold for cellevekst.
Buffersystemet i RPMI 1640 Medium er basert på natriumbikarbonat og krever et 5-10 % CO2-miljø for å opprettholde en fysiologisk passende pH. Inkluderingen av reduksjonsmidlet glutation skiller dette mediet ytterligere fra andre.
Kvalitetskontroll
Sterilfiltrert
Oppbevaring og holdbarhet
Oppbevares ved +2 °C til +8 °C, beskyttet mot lys.
Etter åpning, oppbevar ved 4 °C og bruk innen 6-8 uker.
Transportforhold
Omgivelsestemperatur
Vedlikehold
Oppbevares i kjøleskap ved +2 °C til +8 °C i mørke. Unngå frysing og hyppig oppvarming til +37 °C, da det reduserer produktkvaliteten.
Ikke varm opp mediet til mer enn 37 °C eller bruk ukontrollerte varmekilder som mikrobølgeovner.
Hvis bare en del av mediet skal brukes, ta ut den nødvendige mengden og varm den opp til romtemperatur før bruk.
Sammensetning
Kategori
Komponenter
Konsentrasjon (mg/L)
Aminosyrer
Glysin
10.00
L-Alanyl-L-glutamin
434.40
L-arginin
200.00
L-asparaginH2O
56.82
L-asparaginsyre
20.00
L-Cystin 2HCl
65.20
L-glutaminsyre
20.00
L-Histidin HClH2O
20.27
L-hydroksy-L-prolin
20.00
L-isoleucin
50.00
L-Leucin
50.00
L-Lysin HCl
40.00
L-metionin
15.00
L-fenylalanin
15.00
L-prolin
20.00
L-Serin
30.00
L-Threonin
20.00
L-Tryptofan
5.00
L-Tyrosin 2Na 2H2O
28.83
L-Valin
20.00
Vitaminer
p-aminobensoesyre
1.00
D-Biotin
0.20
Kolinklorid
3.00
D-kalsiumpantotenat
0.25
Folsyre
1.00
myo-Inositol
35.00
Nikotinamid
1.00
Pyridoksin HCl
1.00
Riboflavin
0.20
Tiamin HCl
1.00
Vitamin B12
0.005
Uorganiske salter
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Andre komponenter
D-Glukose
2000.00
L-glutation redusert
1.00
Fenolrødt natriumsalt
5.30