Iet uz galveno lapu
Iepirkumu grozs 0,00 €*
Rādīt visas kategorijas Mitohondriālās disfunkcijas pētījumi SK neiroblastomu līnijās Atpakaļ

Mitohondriālās disfunkcijas pētījumi SK neiroblastomas līnijās

Mitohondriji kalpo kā šūnas spēkstacija, bet to loma ir daudz plašāka nekā tikai ATP ražošana, un tie veic būtiskas funkcijas apoptozes, kalcija homeostāzes un reaktīvo skābekļa sugu veidošanās procesos. Uzņēmumā Cytion mēs apzināmies, ka mitohondriju disfunkcija ir gan neiroblastomas progresēšanas virzītājspēks, gan terapeitiska ievainojamība, ko var izmantot ārstēšanai. SK neiroblastomas šūnu līnijas, tostarp SK-N-SH, SK-N-BE(2) un SK-N-MC, ir būtiskas platformas mitohondriju bioloģijas izpētei bērnu vēža gadījumā un uz mitohondrijiem vērstu terapiju izstrādei.

Galvenie secinājumi

  • SK neiroblastomas līnijām ir atšķirīga mitohondriju funkcija, kas korelē ar diferenciācijas stāvokli
  • MYCN amplifikācija ietekmē mitohondriālo biogēzi un metabolismu
  • Mitohondriju membrānas potenciāls kalpo kā galvenais šūnu veselības un atbildes reakcijas uz zālēm rādītājs
  • Oksidatīvās fosforilēšanas un glikolīzes līdzsvars ietekmē terapeitisko jutību
  • Uz mitohondrijiem vērsti savienojumi ir daudzsološi neiroblastomas ārstēšanai
Mitohondriju funkcija SK neiroblastomas šūnās Mitohondriji OXPHOS/ATP ΔΨm/ROS/Ca²⁺ SK-N līnijas SK-N-SH: heterogēnas SK-N-BE(2): MYCN pastiprinātājs SK-N-MC: neironu SK-N-LO: ar zemu caurlaidību SH-SY5Y: dopamīnerģisks (SK-N-SH subklons) Mito testi - ΔΨm (JC-1/TMRE) - OCR (jūras zirdziņš) - ROS (MitoSOX) - ATP kvantitatīva noteikšana - Citohroma c izdalīšanās - mtDNS kopiju skaits Mitohondriālie ceļi neiroblastomā OXPHOS I-V komplekss Apoptoze Cyt c/kaspāzes ROS veidošanās Oksidatīvais stress Ca²⁺ buferēšana MCU/NCLX Dinamika Sadalīšanās/saplūšana MYCN un mitohondriji - MYCN ↑ mitohondriālā biogenēze - Pastiprināts glutamīna metabolisms - Izmainīta OXPHOS atkarība Terapeitiskie mērķi - I kompleksa inhibitori (metformīns) - BH3 mimētiķi (venetoklakss) - Mito mērķēti antioksidanti © Cytion - neiroblastomas pētniecības attīstība

SK neiroblastomas šūnu līniju portfelis

SK neiroblastomas šūnu līniju sērija ietver ievērojamu bioloģisko daudzveidību, kas atspoguļo šī bērnu ļaundabīgā audzēja neviendabīgo raksturu. Katrai līnijai ir atšķirīgas priekšrocības mitohondriju izpētē, pamatojoties uz to diferenciācijas stāvokli, MYCN statusu un metaboliskajām īpašībām.

Mūsu SK-N-SH šūnas (305028 ) ir viens no visplašāk izmantotajiem neiroblastomas modeļiem, kas iegūts no kaulu smadzeņu metastāzēm. Šai līnijai piemīt ievērojama heterogenitāte, jo tā satur gan neiroblastiem līdzīgas (N tipa), gan substrātam pieguļošas (S tipa) šūnas ar atšķirīgām mitohondriālajām īpašībām. SK-N-SH šūnas var inducēt diferencēties ar retinoīnskābi, nodrošinot sistēmu, lai pētītu, kā diferenciācija ietekmē mitohondriālo funkciju.

SK-N-BE(2) šūnas (305058 ) satur MYCN amplifikāciju, kas ir kritisks neiroblastomas prognostiskais marķieris, kurš būtiski ietekmē mitohondriālo bioloģiju. MYCN veicina mitohondriju biogēnāzē un funkcijās iesaistīto gēnu ekspresiju, radot unikālas metabolisma atkarības, ko var izmantot terapeitiski.

Attiecībā uz dopamīnerģisko neironu modeļiem SH-SY5Y šūnas (300154), kas ir SK-N-SH subklons, tiek plaši izmantotas Parkinsona slimības un neirotoksicitātes pētījumos, kur mitohondriālajai disfunkcijai ir galvenā nozīme.

Mitohondriālā membrānas potenciāla novērtējums

Mitohondriju membrānas potenciāls (ΔΨm) ir galvenais mitohondriju veselības un funkcijas rādītājs. Elektroķīmiskais gradients caur iekšējo mitohondriju membrānu, ko rada elektronu transporta ķēde, virza ATP sintēzi un regulē vairākus mitohondriju procesus.

JC-1 krāsviela nodrošina ΔΨm ratiometrisku novērtēšanu SK neiroblastomas šūnās. Veselos mitohondrijos ar augstu ΔΨm JC-1 agregāti izstaro sarkanu fluorescenci; depolarizētos mitohondrijos ar zemu ΔΨm ir JC-1 monomēri, kas izstaro zaļu fluorescenci. Sarkanā/zaļā attiecība kvantificē membrānas potenciālu dažādās šūnu populācijās.

TMRE (tetrametilrhodamīna etilesteris) piedāvā alternatīvu pieeju ar vienkāršāku analīzi. Šī šūnu caurlaidīgā krāsviela uzkrājas polarizētajos mitohondrijos proporcionāli ΔΨm. Plūsmas citometrijas vai plākšņu nolasīšanas mērījumi ļauj ar lielu jaudu novērtēt zāļu ietekmi uz mitohondriju polarizāciju.

Mitohondriju depolarizācija bieži notiek pirms apoptozes, tāpēc ΔΨm mērījumi ir vērtīgi, lai identificētu savienojumus, kas izraisa iekšējos apoptozes ceļus. SK neiroblastomas šūnām, kas apstrādātas ar ķīmijterapeitiskiem līdzekļiem, ir raksturīgs ΔΨm zudums pirms kaspāzes aktivācijas un šūnu nāves.

Oksidatīvā fosforilēšana un metabolisma profilēšana

Seahorse ekstracelulārās plūsmas analīze ir revolucionizējusi mitohondriālās respirācijas novērtēšanu intaktās šūnās. Vienlaikus mērot skābekļa patēriņa ātrumu (OCR) un ārpusšūnu paskābināšanās ātrumu (ECAR), pētnieki var veidot oksidatīvās fosforilēšanas un glikolīzes relatīvo ieguldījumu šūnu enerģijas ražošanā.

Mito stresa testā secīgi pievieno oligomicīnu (ATP sintāzes inhibitors), FCCP (atvienotājs) un rotenonu/antimicīnu A (I/III kompleksa inhibitori), lai aprēķinātu galvenos parametrus, tostarp bazālo elpošanu, ATP saistīto elpošanu, maksimālo elpošanas jaudu un rezerves elpošanas jaudu.

SK neiroblastomas līnijas atšķiras pēc to atkarības no OXPHOS. MYCN amplificētām līnijām, piemēram, SK-N-BE(2), bieži vien ir pastiprināta mitohondriālā elpošana, kas veicina to augsto proliferatīvo pieprasījumu. Šis metabolisma fenotips rada neaizsargātību pret OXPHOS inhibitoriem, ko var izmantot terapeitiski.

Metabolisko elastību var novērtēt, kultivējot šūnas barotnē bez glikozes un galaktozi saturošā barotnē, kas liek paļauties uz OXPHOS. Šādos apstākļos šūnu līnijas ar mitohondriālu disfunkciju uzrāda traucētu augšanu, kas ļauj veikt funkcionālo skrīningu mitohondriālu defektu noteikšanai.

Reaktīvās skābekļa sugas un oksidatīvais stress

Mitohondriji ir galvenie reaktīvo skābekļa savienojumu (ROS) avoti un mērķi. Elektronu noplūde no elpošanas ķēdes rada superoksīdu, kas var bojāt mitohondriju DNS, olbaltumvielas un lipīdus, radot apburto mitohondriju disfunkcijas un ROS rašanās ciklu.

MitoSOX Red specifiski nosaka superoksīdu mitohondrijos, ļaujot novērtēt mitohondriālo ROS veidošanos SK neiroblastomas šūnās. Paaugstināta MitoSOX fluorescence norāda uz oksidatīvo stresu, kas var veicināt slimības patoģenēzi vai reakciju uz zālēm.

Līdzsvars starp ROS veidošanos un antioksidantu aizsardzību nosaka šūnu redoksstāvokli. Mitohondriālā superoksīda dismutāze (SOD2) pārveido superoksīdu par ūdeņraža peroksīdu, ko pēc tam detoksicē glutationa peroksidāzes. SK neiroblastomas šūnām ir atšķirīga antioksidantu kapacitāte, kas ietekmē jutību pret oksidatīvo stresu.

Prooksidantu terapeitisko stratēģiju mērķis ir pārspēt vēža šūnu antioksidatīvo aizsardzību. Savienojumi, kas palielina mitohondriālo ROS, tostarp daži ķīmijterapijas līdzekļi un mērķtiecīgi līdzekļi, var uzrādīt lielāku efektivitāti šūnās ar jau traucētu redoks līdzsvaru.

Uz mitohondrijiem vērsta terapija

Mitohondriju unikālās īpašības ļauj izstrādāt uz orgānelēm mērķētas terapijas. Mitohondrijos uzkrājas lipofīlie katjoni, ko nosaka membrānas potenciāls, nodrošinot terapeitiskās slodzes mērķēšanas mehānismu.

BH3 mimetiķi, piemēram, venetoklakss, ir vērsti pret anti-apoptozes BCL-2 ģimenes olbaltumvielām mitohondrijos, atbrīvojot proapoptozes faktorus un izraisot šūnu nāvi. SK neiroblastomas šūnās BCL-2 ģimenes locekļu līmenis ir atšķirīgs, kas ietekmē jutību pret šiem mērķētajiem līdzekļiem.

I kompleksa inhibitori, tostarp metformīns un fenformīns, traucē mitohondriālā ATP veidošanos. MYCN amplificētas neiroblastomas šūnas ar pastiprinātu OXPHOS atkarību var būt īpaši jutīgas pret šīm metabolisma intervencēm.

Ieteicamie produkti neiroblastomas mitohondriju izpētei:

Šajā tīmekļa vietnē tiek izmantotas sīkdatnes, lai nodrošinātu vislabāko pieredzi mūsu tīmekļa vietnē... Vairāk informācijas.
- Imprint

Esam konstatējuši, ka atrodaties citā valstī vai izmantojat citu pārlūkprogrammas valodu, kas nav pašlaik izvēlētā. Vai vēlaties pieņemt ieteiktos iestatījumus?

Aizvērt