Ramosa šūnas - B-šūnu limfomas izpēte: Ramosa šūnu nozīme
Ramosa šūnas ir B limfocītu šūnu līnija, ko plaši izmanto biomedicīnas pētījumos. Jo īpaši tās galvenokārt tiek izmantotas imunoloģijā un vēža pētījumos. Pētnieki izmanto šīs šūnas citotoksisko zāļu novērtēšanai un B šūnu virsmas antigēnu, mutāciju un apoptozes mehānismu izpētei.
Ramosa šūnu izcelsme un vispārīgās pazīmes s
Izpratnei par šūnu līnijas izcelsmi un galvenajām īpašībām ir izšķiroša nozīme, lai noteiktu tās piemērotību jūsu pētījumiem. Tāpēc pirms darba uzsākšanas ar to ir ieteicams rūpīgi izvērtēt šo informāciju. Šajā iedaļā aplūkoti šādi bieži uzdotie jautājumi: Kas ir Ramos vēža šūnu līnija? Kas ir Ramos šūnu līnija CD19? Kas ir Ramos šūnu līnija CD20? Kāda ir Ramosa šūnu izcelsme? Kādi ir Ramos šūnu līnijas marķieri? Kāds ir Ramosa šūnu izmērs? Kāda ir Ramos šūnu līnijas morfoloģija?
- Ramosa šūnu līnija tika izveidota 1972. gadā. Šīs šūnas tika iegūtas no trīs gadus veca baltādaina zēna ar amerikāņu tipa Burkita limfomu [1].
- Tās ekspresē galvenos B šūnu marķierus, tostarp imūnglobulīnu M (IgM), CD19, CD20 un CD22.
- Ramosa šūnas ir Epšteina Bāra vīrusa negatīvas šūnas. Tomēr tās var pastāvīgi pāriet uz Epšteina-Bara vīrusa pozitīvām šūnām.
- Šīm B limfoblasta šūnām ir apaļas formas morfoloģija.
Ramosa zilās šūnas pret Ramosa B šūnām
Ramosa zilās šūnas un Ramosa B šūnas ir cilvēka Burkita limfomas šūnas. Abas ir negatīvas attiecībā uz Epšteina Bāra vīrusu. Atšķirība starp šīm šūnām ir tāda, ka Ramosa zilās šūnas ekspresē NF-κB/AP-1 inducējamu ziņotāja gēnu, ko sauc par SEAP (izdalītais embrionālais sārmainais fosfāts), bet Ramosa baltās šūnas to neizsaka.
Ramosa šūnu kultivēšana
Šī raksta sadaļa ir veltīta tam, lai palīdzētu jums uzzināt obligātu informāciju par Ramosa šūnu kultūrām. Šeit jūs uzzināsiet: Kāds ir šūnu līniju dubultošanās laiks? Kāda ir ieteicamā barotne? Kā kultivēt Ramosa šūnas?
Ramosa šūnu kultivēšanas galvenie punkti
|
Dubultošanās laiks: |
Ramosa šūnu dubultošanās laiks ir aptuveni 20,4 ± 1,5 stundas. Tomēr tas var atšķirties atkarībā no paredzētajiem šūnu kultivēšanas apstākļiem. |
|
Adhēzijas vai suspensijas veidā: |
Ramosa šūnas aug suspensijā. |
|
Šūnu blīvums: |
Ramos šūnu līnijas optimālais šūnu blīvums ir 3 x105 šūnas/ml. Subkulturēšanai suspendētās šūnas savāc, veicot centrifugēšanu. Šūnām pievieno svaigu barotni un rūpīgi resuspendē. Pēc tam šūnas pārlej jaunā kolbā ar blīvumu 3-9 x105 šūnas/ml. |
|
Augšanas barotne: |
Ramosa šūnu kultivēšanai izmanto RPMI 1640, kas papildināts ar 10 % liellopu fetālo serumu, 2,1 mM stabilu glutamīnu un 2,0 g/l NaHCO3. barotni jāmaina 2 reizes nedēļā. |
|
Augšanas apstākļi: |
Cilvēka Burkita limfomas šūnu līniju (Ramos) tur mitrinātā inkubatorā 5 % CO2 un 37 °C temperatūrā. |
|
Uzglabāšana: |
Lai ilgāk saglabātu šūnu dzīvotspēju, sasaldētas Ramosa šūnas glabā temperatūrā zem -150 °C vai šķidrā slāpekļa tvaika fāzē. |
|
Sasaldēšanas process un vide: |
Ramosa šūnām ieteicams izmantot CM-1 vai CM-ACF sasaldēšanas barotni. Izmanto lēnu sasaldēšanas procesu, kas ļauj pakāpeniski pazemināt temperatūru par 1 grādu pēc Celsija minūtē. Šāda lēna sasaldēšana pasargā šūnas no jebkāda šoka un uzlabo to dzīvotspēju. |
|
Atkausēšanas process: |
Atkausēšanai sasaldētās šūnas40 līdz 60 sekundes tur iepriekš uzsildītā ūdens vannā 37 °C temperatūrā, līdz paliek neliels ledus gabaliņš. Pēc tam pievieno svaigu barotni un šūnas centrifugē, lai atdalītu sasalstošās barotnes elementus. Granulas atkal resuspendē un šūnas iepilda jaunā kolbā ar barotni. |
|
Bioloģiskās drošības līmenis: |
Epšteina-Barr vīrusa negatīvu Ramosa šūnu kultūru uzturēšanai ir nepieciešama 1. bioloģiskās drošības līmeņa laboratorija. Tomēr bioloģiskās drošības līmenis tiek pārcelts uz 2. līmeni, ja Ramosa šūnas pastāvīgi kļūst Epšteina-Barr vīrusa pozitīvas. |
Ramoss: Priekšrocības un ierobežojumi
Tāpat kā citām šūnu līnijām, arī Ramosa šūnām ir atšķirīgas priekšrocības un ierobežojumi. Šajā iedaļā tiks aplūkotas dažas nozīmīgākās no tām, kas var būtiski ietekmēt to izmantošanu pētniecībā.
Priekšrocības
- Burkita limfomas šūnu modelis: Ramosa šūnas tika iegūtas no Burkita limfomas pacienta, tāpēc tās ir piemērots šūnu modelis limfoīdo ļaundabīgo audzēju izpētei
- Viegla kultivēšana: Ramosa šūnas ir viegli kultivēt un uzturēt laboratorijā. Tām ir vienkāršas šūnu kultivēšanas prasības un apstākļi
Ierobežojumi
- In vitro modelis: Ramosa šūnas var pilnībā neatspoguļot pacientu audzēju ģenētisko sarežģītību, tādējādi ierobežojot to pielietojamību. Turklāt eksperimentu rezultāti, kas iegūti, izmantojot Ramosa šūnu līniju, var pilnībā neatspoguļot in vivo apstākļus, kas, iespējams, var radīt problēmas, kas saistītas ar pielietošanu
ramosa šūnu pielietojums pētniecībā
Ramos piedāvā daudzsološus pielietojumus biomedicīnas jomā. Daži no obligātajiem Ramosa šūnu izmantošanas veidiem pētniecībā ir šādi:
- Limfomas bioloģija: Ramosa šūnas plaši izmanto limfomas bioloģijas pētniecībā. Tās izmanto, lai izpētītu ģenētiskos un molekulāros faktorus, kas ir limfoīdo ļaundabīgo audzēju pamatā. Turklāt, izmantojot šīs Burkita limfomas šūnas, pētnieki gūst ieskatu par slimības sākšanos, progresēšanu un heterogenitāti. Tiek pētītas arī ģenētiskās mutācijas un signalizācijas ceļi, kas, iespējams, ļaus izstrādāt precīzākas diagnostikas un terapeitiskās pieejas. 2019. gadā veiktajā pētījumā konstatēts, ka GCN5 (General control non-depressible 5) histona acetiltransferāzes inhibīcija samazina cilvēka Burkitta limfomas šūnu (Ramos) tumorigenitāti, traucējot BCR signalizāciju. Tāpēc GCN5 tiek ieteikts kā iespējams mērķis limfomas zāļu terapijas izstrādei [2].
- Zāļu skrīnings un testēšana: Ramosa šūnu līniju plaši izmanto zāļu skrīninga un testēšanas nolūkos. Pētnieki novērtē potenciālo terapeitisko savienojumu efektivitāti šūnu proliferācijas un augšanas kavēšanā un šūnu nāves izraisīšanā limfomas šūnās. Tas palīdz identificēt daudzsološas zāļu kandidātvielas, tādējādi veicinot mērķtiecīgas ārstēšanas izstrādi limfomas pacientiem. Piemēram, pētījumi parādīja, ka Annona augļu mizas, mīkstuma un sēklu metanola ekstrakts mēreni, bet hloroforma ekstrakts spēcīgi ietekmē Ramosa šūnu proliferāciju. Tādējādi pētījumā tika ierosināts, ka Annona augļi var izrādīties efektīvi limfomas profilaksei un ārstēšanai [3].
Ramosa šūnas jūsu pētījumiem
Publikācijas ar Ramosa šūnām
Šajā raksta sadaļā ir uzskaitītas dažas interesantas pētniecības publikācijas, kurās izmantota Ramosa šūnu līnija:
Nepārtraukta CD 79b un CD 19 signalizācija ir nepieciešama Burkita limfomas B šūnu piemērotībai
Šis pētījums tika publicēts 2018. gadā EMBO žurnālā. Pētījumā konstatēts, ka Ramosa B šūnām ir nepieciešama Ramosa šūnu CD19 un CD79b (BCR signalizācijas komponents Igβ) marķieru ekspresija, lai tās būtu piemērotas un konkurētspējīgi augtu.
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā Neoplasia (2021), tika izmantotas Ramosa šūnas un ierosināts, ka Burkita limfomas (Burkitt lymphoma) šūnās epigenētiski tiek regulēts jauktās līnijas kināzes domēns (MLKL). Tādējādi tas ir daudzsološs prognostisks marķieris ar nekroptozi saistītas terapijas ārstēšanas panākumiem.
PBK/TOPK Tyr74 fosforilēšana ar JAK2 veicina Burkita limfomas audzēja augšanu
Šajā pētnieciskajā rakstā, kas publicēts žurnālā Cancer Letters (2022), izteikts pieņēmums, ka JAK2/TOPK/histona H3 signalizācijas asij ir būtiska nozīme B limfomas šūnu līniju proliferācijā in vitro.
Verotoksīna-1 izraisīts ER stress izraisa apoptozes vai izdzīvošanas ceļus Burkita limfomas šūnās
Šis raksts publicēts 2020. gadā žurnālā Toxins. Pētījumā tika ierosināts, ka apstrāde ar verotoksīnu-1 izraisa endoplazmas retikuluma (ER) stresu Ramosa B šūnās. Tas noved pie apoptozes vai izdzīvošanas signalizācijas ierosināšanas limfomas šūnu līnijās.
Silimarīns inhibē Toll līdzīgo receptoru 8 gēnu ekspresiju un apoptozi Ramosa vēža šūnu līnijā
Šajā pētījumā, kas publicēts Avicenna Journal of Phytomedicine (2020), ziņots, ka dabiskais savienojums silimarīns nomāc TLR8 (Toll līdzīgs receptoram 8) ekspresiju un apoptozi Ramos šūnu līnijā.
Ramos šūnu līnijas resursi: Ramos Ramos sistēmas resursu avoti: protokoli, videoklipi un citi
Turpmāk ir sniegti daži tiešsaistes resursi par Ramosa šūnām:
- Ramos šūnu transfekcija: Šis dokuments palīdzēs apgūt Ramos šūnu līnijas transfekcijas protokolu.
Šajā saitē atrodams Ramos šūnu kultūras protokols:
- Ramosa šūnas: Šajā tīmekļa vietnē ir pamatinformācija par Ramos šūnu līniju. Tajā ir arī protokols Ramos šūnu subkultivēšanai un darbam ar proliferējošām un kriokonservētām kultūrām. Turklāt ir pieejama arī informācija par Ramos šūnu barotnēm, dubultošanās laiku un šūnu blīvumu.
Galvenās atziņas par Ramosa šūnām: Biežāk uzdotie jautājumi
Atsauces
- Kerntke, C.G., Membrānas IgE organizācijas un signalizācijas spējas analīze mijiedarbības laikā ar CD19 un CD23 B limfocītos. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
- Farria, A.T., et al., GCN5 HAT inhibīcija samazina cilvēka Burkitta limfomas šūnu izdzīvošanu, samazinot MYC mērķa gēnu ekspresiju un kavējot BCR signalizācijas ceļus. Oncotarget, 2019. 10(56): p. 5847.
- Al-Shaya, H.M., et al., Phytochemical profile and antioxidation activity of annona fruit and its effect on lymphoma cell proliferation. Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): p. 58-68.