Hep2 šūnas un to nozīme balsenes vēža pētniecībā
Hep 2 šūnas ir būtisks in vitro modelis, ko plaši izmanto dažādās biomedicīnas pētniecības jomās, piemēram, reimatoloģijā, vēža pētniecībā un imunoloģijā. Šīs cilvēka šūnas, kas cēlušās no balsenes karcinomas, ir bijušas neatņemama sastāvdaļa, noskaidrojot izcelsmes audu un balsenes audzēju specifiskās pazīmes. To nozīme ir labi atzīta translacionālajos vēža pētījumos, kur tās ir ievērojami veicinājušas mūsu izpratni par balsenes vēža būtību un izcelsmi, ieņemot nozīmīgu vietu publikācijās par balsenes vēža pētījumiem [1].
- Augšanas barotne
- Hep 2 šūnu kultivēšanai izmanto EMEM jeb Eagle minimālo nepieciešamo barotni. Šī barotne ir papildināta ar 10 % FBS, 1,0 g/l glikozes, 2,2 g/l NaHCO3, 2,0 mM L-glutamīna, 1 % NEAA un 1 mM nātrija piruvāta, lai nodrošinātu ideālu šūnu augšanu. Barotni jāmaina 2–3 reizes nedēļā.
- Dubultošanās laiks
- Hep 2 šūnu dubultošanās laiks ir aptuveni 40 stundas.
- Augšanas veids
- Hep 2 šūnas ir adhezīvas un aug monoslāņos.
- Bioloģiskās drošības līmenis
- BSL-1
- Piegādātājs
- Cytion — Pasūtīt Hep2
Hep 2 šūnu izcelsme un vispārējās īpašības
Šūnu līnijas izcelsme un vispārējās īpašības nosaka tās piemērotību pētniecībā. Šī sadaļa palīdzēs jums uzzināt par Hep 2 šūnu izcelsmi un dažām būtiskām īpašībām. Piemēram, jūs uzzināsiet: Kas ir HEp-2 šūnu līnija? Kāda ir Hep 2 šūnu izcelsme? Un kāda ir Hep 2 morfoloģija?
- Hep 2, nemirstīga cilvēka epitēlija šūnu līnija, pirmo reizi tika aprakstīta 1954. gadā kā balsenes karcinomas šūnas, ko aprakstīja H.W. Toolan. Tomēr pēdējā laikā ir ziņots, ka Hep 2 šūnu līnija sastāv no dzemdes kakla adenokarcinomas šūnām un cēlusies no Hela šūnu līnijas kontaminācijas [2].
- Hep 2 šūnas satur Hela marķieru hromosomas un ir pozitīvas attiecībā uz keratīnu un cilvēka papilomas vīrusa DNS sekvencēm, kā apstiprināts attiecīgi ar imūnperoksidāzes krāsošanu un PCR.
- Hela šūnu līnijas atvasinājums Hep 2 piemīt epitēlija tipa morfoloģija.
- Hep 2 šūnu līnijai ir gan strukturālas, gan skaitliskas hromosomu novirzes ar gandrīz triploīdu kariotipu [3].
HEp-2 šūnu līnija: informācija par kultivēšanu
Pirms sākt darbu ar šūnu līniju, ir jāzina šādi galvenie punkti par tās kultivēšanu. Šī informācija var būt noderīga, lai efektīvi kultivētu un uzturētu šūnu līniju. Jums jāzina: kāds ir HEp-2 šūnu dubultošanās laiks? Vai Hep 2 šūnas ir adhezīvas? Kāda ir Hep2 šūnu sēšanas blīvums?
Populācijas dubultošanās laiks:
Hep 2 šūnu dubultošanās laiks ir aptuveni 40 stundas.
Adhēzijas vai suspensijas šūnas:
Hep 2 šūnas ir adhezīvas un aug monoslāņos.
Sēšanas blīvums:
Ideāls Hep 2 šūnu kultūras sēšanas blīvums ir 1 x 104 šūnas/cm2. Lai veiktu sēšanu, adhezīvās Hep 2 šūnas noskalo ar 1 x PBS šķīdumu, pēc tam inkubē ar Accutase disociācijas šķīdumu. Pēc 8–10 minūšu inkubācijas istabas temperatūrā šūnas atkārtoti suspendē barotnē un centrifugē. Savāktās šūnas pēc tam izdalītas svaigā barotnē un ielejamas jaunās kolbās kultivēšanai.
Augšanas barotne:
Hep 2 šūnu kultivēšanai izmanto EMEM vai Eagle minimālo nepieciešamo barotni. Šim barotnei pievieno 10 % FBS, 1,0 g/l glikozes, 2,2 g/l NaHCO3, 2,0 mM L-glutamīna, 1 % NEAA un 1 mM nātrija piruvāta, lai nodrošinātu ideālu šūnu augšanu. Barotni jāmaina 2–3 reizes nedēļā.
Augšanas apstākļi:
Tāpat kā citas zīdītāju šūnu līnijas, arī Hep 2 tiek kultivētas mitrinātā inkubatorā, kas iestatīts uz 37 °C temperatūru un ar nepārtrauktu 5 % CO2 pievadi.
Uzglabāšana:
Hep 2 šūnas var uzglabāt ultra-zemas temperatūras elektriskajos saldētavās (zem -150 °C) vai šķidrā slāpekļa tvaika fāzē ilgtermiņa uzglabāšanai.
Sasaldēšanas process un barotne:
Hep 2 šūnām ieteicamās sasaldēšanas vides ir CM-1 vai CM-ACF. Šūnas jāiesaldē, izmantojot lēnu sasaldēšanas procesu, kas ļauj temperatūrai pakāpeniski pazemināties par 1 °C un aizsargā šūnu dzīvotspēju.
Atkausēšanas process:
Sasaldēto šūnu flakonu ātri atkausē, kratot ūdens vannā 37 °C temperatūrā, līdz paliek neliels ledus gabaliņš. Pēc tam šūnas pievieno svaigai barotnei un centrifugē, lai atdalītu sasaldēšanas barotnes sastāvdaļas. Vēlāk šūnu nogulsnes atkārtoti suspendē barotnē, un šūnas izpilda kultūras kolbās. Lai šūnas pieķertos, tām ir nepieciešams atpūsties gandrīz 24 stundas.
Bioloģiskās drošības līmenis
Hep 2 šūnu kultūru apstrādei un uzturēšanai ieteicams izmantot 1. bioloģiskās drošības līmeņa laboratoriju.
Hep 2 šūnu priekšrocības un ierobežojumi
Gandrīz visām šūnu līnijām piemīt unikāla priekšrocību un ierobežojumu kombinācija, kas veicina to izmantošanu pētniecības jomā. Šajā sadaļā tiks aprakstīti daži galvenie plusi un mīnusi, kas saistīti ar Hep 2 šūnu līniju.
Priekšrocības
Hep 2 šūnu līnijas galvenās priekšrocības ir šādas:
- Cilvēka izcelsme: Hep 2 ir iegūta no cilvēka epitēlija šūnām, tādējādi padarot to par vērtīgu in vitro modeli cilvēka slimību un vīrusu infekciju pētīšanai.
- ANA noteikšana: Hep 2 šūnu līnijai piemīt dabiskais proteīnu klāsts, kas satur daudzus antigēnus, padarot to par lielisku substrātu antinukleāro antivielu (ANA) noteikšanai. Šī īpašība ļauj veikt specifisku un ļoti jutīgu ANA skrīningu serumā, padarot to par būtisku diagnostikas rīku saistaudu slimību identificēšanai.
Ierobežojumi
- Hromosomu anomālijas: Hep 2 šūnas uzrāda vairākas hromosomu skaitliskas un strukturālas anomālijas. Šīs anomālijas var ietekmēt šūnu uzvedību un ierobežot to piemērojamību noteiktos laboratorijas eksperimentos.
- Tumorigenitāte: Hep 2, no audzēja iegūta cilvēka epitēlija šūnu līnija, var piemīt ģenētiskas anomālijas, kas parasti nav sastopamas epitēlija šūnās. Tāpēc Hep 2 šūnu izmantošana var būt ierobežota konkrētos pētījumos, kas vērsti uz normālu šūnu fizioloģiju.
Hep 2 šūnu līnijas pielietojuma paplašināšana biomedicīniskajā pētniecībā
Hep 2 šūnu līnija izceļas kā paraugmodelis daudzām lietojumiem biomedicīniskajos pētījumos. Šīs šūnas, kas ir pazīstamas ar savu daudzpusību, pilda svarīgu lomu in vitro eksperimentos, sākot no receptoru analīzes līdz sarežģītu slimību pētījumiem.
Tumorogēno mehānismu un terapeitisko mērķu izpēte ar Hep 2 šūnām
Hep 2 šūnas, būdamas tumorogēnas, ir izšķirošas, lai iedziļinātos vēža bioloģijas sarežģījumos. Tās sniedz ieskatu vēža signālu ceļos, mehānisma pētījumos un ir galvenais atbalsts pretvēža zāļu skrīningā un novērtēšanā. Piemēram, izsmeļošā pētījumā tika izmantotas Hep 2 šūnas, lai aprakstītu miRNA-33a ietekmi uz vēža šūnu proliferāciju. Rezultāti atklāja miRNA-33a antiproliferatīvo iedarbību, mijiedarbojoties ar PIM1, kas ir pazīstams onkogēns, norādot uz jaunu terapeitisko mērķi [4]. Citā gadījumā Hep 2 tika izmantots, lai novērtētu Marsdenia tenacissima cinka oksīda nanodaļiņu terapeitisko potenciālu, uzsverot to antiproliferatīvo un apoptozes efektivitāti [5].
Viroloģijas pētījumu attīstība, izmantojot Hep 2 šūnu atziņas
Hep 2 šūnu uzņēmība pret dažādiem cilvēka vīrusiem padara tās par nenovērtējamu resursu viroloģiskajos pētījumos. Tās ir efektīvi izmantotas SARS-CoV-2 vīrusu gēnu ekspresijā, lai atklātu sarežģīto mijiedarbību starp vīrusu un saimniekšūnu mehānismiem [6]. Šī pielietojuma nozīme ir īpaši liela šajā laikmetā, kad COVID-19 un citu vīrusu infekciju izpratne un apkarošana ir globāla prioritāte.
Šūnu funkciju atšifrēšana: gēnu manipulācija Hep 2 šūnās
Hep 2 šūnu līnijas pielāgojamība ģenētiskajai manipulācijai uzsver tās lietderību mehānisma pētījumos. Pētnieki izmanto šo īpašību, lai modulētu gēnu ekspresiju un noskaidrotu konkrētu gēnu lomu šūnu funkcijās. Vienā no ievērojamākajiem pētījumiem tika izmantota RBM6 RNS saistošā proteīna pārmērīga ekspresija Hep 2 šūnās, kas atviegloja tā audzēja supresora potenciāla izpēti, sniedzot vērtīgu ieskatu vēža molekulārajā pamatā [7].
Slimību diagnostikas uzlabošana, izmantojot Hep 2 šūnu līnijas
Papildus šīm pētniecības jomām Hep 2 šūnas ir atzītas par to diagnostiskajām spējām, jo īpaši ANA noteikšanā, kas ir būtiska autoimūno slimību, piemēram, sistēmiskā sarkanā vilkēde, diagnostikā. Precizitāte, ar kādu Hep 2 šūnas var parādīt ANA, atbalsta diagnozi un mērķtiecīgu ārstēšanas metožu izstrādi, uzlabojot mūsu izpratni par autoimūnajām patoloģijām un uzlabojot pacientu aprūpi.
Pateicoties šiem daudzveidīgajiem pielietojumiem, Hep 2 šūnas ir ievērojami veicinājušas progresu vēža translacionālajā pētniecībā, vīrusu infekciju izpētē un šūnu mehānismu izpētē. To ieguldījums klīniski nozīmīgu datu iegūšanā ir nenovērtējams, apstiprinot to neaizstājamo lomu gan laboratorijā, gan klīnikā. Pētniecībai turpinot attīstīties, Hep 2 šūnu līnija noteikti paliks priekšplānā, palīdzot atklāt jaunus ārstēšanas veidus un paplašinot mūsu zināšanas par cilvēka veselību un slimībām.
Nopirkt HEp-2 šūnu līniju jau šodien
Hep 2 šūnas: pētniecības publikācijas
Tālāk ir uzskaitītas dažas interesantas un visbiežāk citētas pētījumu publikācijas par Hep 2 šūnām.
- Cinka oksīda nanodaļiņu sintēze no Marsdenia tenacissima inhibē šūnu proliferāciju un izraisa apoptozi balsenes vēža šūnās (Hep-2)
Šis raksts, kas publicēts žurnālā „Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology” (2019), pētīja biosintetizētu Marsdenia tenacissima cinka oksīda nanodaļiņu pretvēža potenciālu Hep 2 šūnu līnijā. - Bioloģiski formulētas PLGA nanodaļiņas ar hesperidīna piedevu neitralizē mitohondriju mediēto iekšējo apoptozes ceļu vēža šūnās
Šis raksts tika publicēts žurnālā „Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials” 2021. gadā. Šajā pētījumā tika izvērtētas bioloģiski formulētu, ar hesperidīnu piepildītu poli(pienskābes-glikolskābes) (PLGA) nanodaļiņu pretvēža īpašības Hep 2 šūnās. - Lophatherum gracile etanola ekstrakta pretvīrusu aktivitāte pret respiratorā sinicītiskā vīrusa infekciju
Šajā 2019. gadā žurnālā „Journal of Ethnopharmacology” publicētajā rakstā tika izmantotas Hep 2 šūnas, lai pētītu respiratorā sinicītiskā vīrusa infekciju un atlasītu pret to iedarbīgus pretvīrusu medikamentus. Pētījumā ziņots par daudzsološo pretvīrusu potenciālu, kāds piemīt ārstniecības auga Lophatherum gracile etanola ekstraktam pret respiratorā sinicītiskā vīrusa infekciju. - Četru aromātisko augu ūdens ekstraktu novērtējums attiecībā uz to aktivitāti pret Candida albicans adheziju pie cilvēka HEp-2 epitēlija šūnām
Šis pētījums ir publicēts žurnālā „Gene Reports” (2020). Šajā pētījumā tika izpētīts četru aromātisko augu ūdens ekstraktu inhibējošais potenciāls pret Candida albicans adheziju cilvēka Hep 2 epitēlija šūnām. - Wnt1-inducējamais signālproteīns 1 regulē balsenes plakanšūnu karcinomas glikolīzi un ķīmijterapijas rezistenci caur YAP1/TEAD1/GLUT1 ceļu
Šis pētījums tika publicēts žurnālā „Journal of Cellular Physiology” 2019. gadā. Pētījumā ziņots, ka Wnt1 induciblais signālproteīns 1 (WISP1) mijiedarbojas ar YAP1/TEAD1/GLUT1 ceļu un regulē glikozes metabolismu un ķīmijterapijas rezistenci Hep 2 šūnu līnijā.
Resursi par Hep2 šūnu līniju: protokoli, video un citi materiāli
Hep 2 ir labi pazīstama šūnu līnija. Ir pieejami vairāki resursi, kas veltīti Hep 2 šūnu līnijai.
- Hep2 šūnu līnijas subkultivēšana: Šis video ir soli pa solim izstrādāts ceļvedis Hep 2 šūnu subkultivēšanai.
- Hep 2 šūnu ANA skrīnings: Šis video izskaidro antinukleāro antivielu (ANA) skrīningu, izmantojot Hep 2 šūnu līniju.
- Hep 2 kultivēšana: Šajā saitē ir atrodama pamatinformācija par Hep 2 šūnu kultivēšanu. Tajā ir iekļauta šūnu sadalīšana, sasaldēšana un atkausēšana.
Biežāk uzdotie jautājumi par HEp-2 šūnām biomedicīnas pētniecībā
Atsauces
- Fusi, M. un S. Dotti, HEp-2 šūnu līnijas pielāgošana pilnīgi bezdzīvnieku kultivēšanas sistēmām un šūnu augšanas analīze reālajā laikā. Biotechniques, 2021. 70(6): 319.–326. lpp.
- Gorphe, P., Hep-2 šūnu līnijas visaptverošs pārskats translacionālajos pētījumos par balsenes vēzi. Am J Cancer Res, 2019. 9(4): 644.–649. lpp.
- Wang, M., et al., Ar vēzi saistītie fibroblasti cilvēka HEp-2 izveidotā balsenes ksenotransplantētā audzējā nav iegūti no vēža šūnām caur epitēlija-mezenhīma pāreju, tie ir fenotipiski aktivizēti, bet kariotipiski normāli. PLoS One, 2015. 10(2): e0117405.
- Karatas, O.F., miR-33a antiproliferatīvais potenciāls balsenes vēža Hep-2 šūnās, mērķējot PIM1. Head Neck, 2018. 40(11): 2455.–2461. lpp.
- Wang, Y., et al., Cinka oksīda nanodaļiņu sintēze no Marsdenia tenacissima inhibē šūnu proliferāciju un inducē apoptozi balsenes vēža šūnās (Hep-2). Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology, 2019. 201: 111624. lpp.
- Zhang, J., et al., SARS-CoV-2 proteīnu subcelulārās lokalizācijas sistēmisks un molekulārs pētījums. Signal Transduct Target Ther, 2020. 5(1): 269. lpp.
- Wang, Q., et al., RNS saistošais proteīns RBM6 kā audzēja supresoru gēns nomāc augšanu un progresēšanu laringokarcinomā. Gene, 2019. 697: 26–34. lpp.
