Hep2 šūnas un to loma balsenes vēža pētniecībā
Hep 2 šūnas ir galvenais in vitro modelis, ko plaši izmanto biomedicīnas pētījumu jomās, piemēram, reimatoloģijā, vēža pētniecībā un imunoloģijā. Šīs cilvēka šūnas, kas iegūtas no balsenes karcinomas, ir bijušas neatņemama sastāvdaļa, lai noskaidrotu balsenes audzēju izcelsmes audus un specifiskās iezīmes. To nozīme ir labi atpazīstama translatoloģiskajos vēža pētījumos, kur tās ir ievērojami veicinājušas mūsu izpratni par balsenes vēža raksturu un izcelsmi, iezīmējot būtisku klātbūtni balsenes vēža pētniecības publikācijās [1].
Hep 2 šūnu izcelsme un vispārīgās īpašības
Šūnu līnijas izcelsme un vispārīgās īpašības nosaka tās pielietojamību pētniecībā. Šī sadaļa palīdzēs jums uzzināt par Hep 2 šūnu izcelsmi un dažām būtiskām iezīmēm. Piemēram, jūs uzzināsiet: Kas ir HEp 2 šūnu līnija? Kāds ir Hep 2 šūnu avots? Un kāda ir Hep 2 šūnu morfoloģija?
- Hep 2, nemirstīgu cilvēka epitēlija šūnu līniju, 1954. gadā pirmo reizi aprakstīja H. W. Toolans kā balsenes karcinomas šūnas. Tomēr pēdējā laikā ir ziņots, ka Hep 2 šūnu līnija sastāv no dzemdes kakla adenokarcinomas šūnām un ir radusies, piesārņojot Hela šūnu līniju [2].
- Hep 2 šūnas satur Hela marķieru hromosomas un ir pozitīvas attiecībā uz keratīna un cilvēka papilomas vīrusa DNS sekvencēm, ko apstiprina attiecīgi imunoperoksidāzes krāsošana un PCR.
- Hela šūnu līnijas atvasinājumam Hep 2 piemīt epitēlijveidīga morfoloģija.
- Hep 2 šūnu līnijai ir gan strukturālas, gan skaitliskas hromosomu nobrāzumi ar gandrīz triploidālu kariotipu [3].
Hep 2 šūnu līnija: Informācija par kultivēšanu
Pirms sākt strādāt ar šūnu līniju, mums jāzina šādi galvenie punkti par tās kultivēšanu. Šī informācija var būt noderīga efektīvai šūnu līnijas kultivēšanai un uzturēšanai. Jums jāzina: Kāds ir HEp 2 šūnu dubultošanās laiks? Vai Hep 2 šūnas ir adherentas? Kāds ir Hep2 šūnu izsējas blīvums?
|
Populācijas dubultošanās laiks: |
Hep 2 šūnu dubultošanās laiks ir aptuveni 40 stundas. |
|
Pielipušas vai suspensijā: |
Hep 2 šūnas ir adherentas un aug monoslānī. |
|
Sēšanas blīvums: |
Hep 2 šūnu kultūrai ideāli piemērots izsējas blīvums ir 1 x104 šūnas/cm2. Sēšanai adherētās Hep 2 šūnas skalo ar 1 x PBS šķīdumu, pēc tam inkubē ar Accutase disociācijas šķīdumu. Pēc 8-10 minūšu inkubācijas apkārtējās vides temperatūrā šūnas resuspendē barotnē un centrifugē. Pēc tam savāktās šūnas izšķīdina svaigā barotnē un ielej jaunās kolbās kultivēšanai. |
|
Augšanas barotne: |
Hep 2 šūnu kultivēšanai izmanto EMEM vai Eagle's minimal essential medium. Šai barotnei pievieno 10 % FBS, 1,0 g/l glikozes, 2,2 g/l NaHCO3, 2,0 mM L-glutamīna, 1 % NEAA un 1 mM nātrija piruvāta ideālai šūnu augšanai. Barotne jāatjauno 2 līdz 3 reizes nedēļā. |
|
Augšanas apstākļi: |
Tāpat kā citas zīdītāju šūnu līnijas, arī Hep 2 kultivē mitrinātā inkubatorā 37 °C temperatūrā un ar pastāvīgu 5 % CO2 pieplūdi. |
|
Uzglabāšana: |
Hep 2 šūnas var uzglabāt ļoti zemas temperatūras elektriskās saldētavās (zem -150 °C) vai šķidrā slāpekļa tvaika fāzē, lai tās uzglabātu ilgstoši. |
|
Saldēšanas process un vide: |
Hep 2 šūnām ieteicams izmantot CM-1 vai CM-ACF. Šūnas jāsasaldē, izmantojot lēnu sasaldēšanas procesu, kas ļauj pakāpeniski pazemināt temperatūru par 1 °C un aizsargā šūnu dzīvotspēju. |
|
Atkausēšanas process: |
Saldēto šūnu flakonu ātri atkausē, maisot ūdens vannā37 °C temperatūrā, līdz paliek neliels ledus gabaliņš. Pēc tam šūnas pievieno svaigai barotnei un centrifugē, lai atdalītu sasalstošās barotnes sastāvdaļas. Vēlāk šūnu granulas resuspendē barotnē, un šūnas iepilda barotnēs. Šūnām ir jāatpūšas gandrīz 24 stundas, lai tās pieliptu. |
|
Bioloģiskās drošības līmenis |
Hep 2 šūnu kultūru apstrādei un uzturēšanai ir ieteicama 1. bioloģiskās drošības līmeņa laboratorija. |
Hep 2 šūnu priekšrocības un ierobežojumi
Gandrīz visām šūnu līnijām piemīt unikāla priekšrocību un ierobežojumu kombinācija, kas veicina to izmantošanu pētniecības jomā. Šajā iedaļā aprakstīti daži galvenie plusi un mīnusi, kas saistīti ar Hep 2 šūnu līniju.
Priekšrocības
Galvenās Hep 2 šūnu līnijas priekšrocības ir šādas:
- Cilvēka izcelsme: Hep 2 ir iegūta no cilvēka epitēlija šūnām, tāpēc tā ir vērtīgs in vitro modelis cilvēka slimību un vīrusu infekciju izpētei
- ANA noteikšana: Hep 2 šūnu līnijai piemīt dabisks olbaltumvielu masīvs, kas satur daudzus antigēnus, padarot to par lielisku substrātu antinukleāro antivielu (ANA) noteikšanai. Šī īpašība ļauj veikt specifisku un ļoti jutīgu ANA skrīningu serumā, padarot to par būtisku diagnostikas līdzekli saistaudu slimību noteikšanai
Ierobežojumi
- Hromosomu anomālijas: Hep 2 šūnām ir vairākas skaitliskas un strukturālas hromosomu anomālijas. Šīs anomālijas var ietekmēt šūnu uzvedību un var ierobežot to lietojamību noteiktos laboratorijas eksperimentos
- Audzēju aktivitāte: Hep 2, kas ir no audzēja iegūta cilvēka epitēlija šūnu līnija, var būt ģenētiskas anomālijas, kas parasti nav raksturīgas epitēlija šūnām. Līdz ar to Hep 2 šūnu izmantošana var būt ierobežota īpašos pētījumos, kas vērsti uz normālu šūnu fizioloģiju.
Hep 2 šūnu līnijas pielietojuma paplašināšana biomedicīniskajos pētījumos
Hep 2 šūnu līnija izceļas kā paraugmodelis daudzām biomedicīniskajā pētniecībā izmantojamām metodēm. Šīs šūnas, kas ir slavenas ar savu daudzpusību, pilda būtiskas funkcijas in vitro eksperimentos, sākot no receptoru analīzes līdz sarežģītu slimību izpētei.
Audzēju mehānismu un terapeitisko mērķu izpēte ar Hep 2 šūnām
Hep 2 šūnas, kas ir tumorigēnas, ir ļoti svarīgas, lai izpētītu vēža bioloģijas nianses. Tās sniedz ieskatu vēža signalizācijas ceļos, mehānistikas pētījumos un ir galvenais balsts pretvēža zāļu skrīningā un novērtēšanā. Piemēram, kādā izvērstā pētījumā tika izmantota Hep 2, lai noteiktu miRNA-33a ietekmi uz vēža šūnu proliferāciju. Iegūtie rezultāti atklāja miRNA-33a antiproliferatīvo iedarbību, izmantojot tās mijiedarbību ar PIM1, kas ir zināms onkogēns, un tas liecina par jaunu terapeitisku mērķi [4]. Citā gadījumā Hep 2 tika izmantots, novērtējot Marsdenia tenacissima cinka oksīda nanodaļiņu terapeitisko potenciālu, uzsverot to antiproliferatīvo un apoptozes efektivitāti [5].
Viroloģijas pētījumu attīstība, izmantojot Hep 2 šūnu ieskatu
Hep 2 šūnu uzņēmība pret dažādiem cilvēka vīrusiem padara tās par nenovērtējamu resursu virusoloģiskajos pētījumos. Tās ir efektīvi izmantotas SARS-CoV-2 vīrusa gēnu ekspresijai, lai atklātu sarežģīto mijiedarbību starp vīrusa un saimnieka šūnas mehānismiem [6]. Šis pielietojums ir īpaši svarīgs pašreizējā laikmetā, kad izpratne par tādām vīrusu infekcijām kā COVID-19 un to apkarošana ir globāla prioritāte.
Šūnu funkciju atšifrēšana: Gēnu manipulācijas Hep 2 šūnās
Hep 2 šūnu līnijas spēja pielāgoties ģenētiskajām manipulācijām uzsver tās lietderību mehānistiskos pētījumos. Pētnieki izmanto šo īpašību, lai modulētu gēnu ekspresiju un noskaidrotu konkrētu gēnu lomu šūnu funkcijās. Ievērojams pētījums bija saistīts ar RNS saistošā proteīna RBM6 pārmērīgu ekspresiju Hep 2 šūnās, kas ļāva izpētīt tā audzēja supresora potenciālu, sniedzot vērtīgu ieskatu vēža molekulārajos pamatos [7].
Slimību diagnostikas uzlabošana, izmantojot Hep 2 šūnu līnijas lietojumus
Papildus šīm pētniecības jomām Hep 2 šūnas ir plaši pazīstamas ar savām diagnostikas spējām, jo īpaši attiecībā uz ANA noteikšanu, kas ir ļoti svarīga autoimūno slimību, piemēram, sistēmiskās sarkanās vilkēdes, diagnosticēšanā. Precizitāte, ar kādu Hep 2 šūnas var noteikt ANAs, palīdz diagnosticēt un izstrādāt mērķtiecīgu ārstēšanu, uzlabojot mūsu izpratni par autoimūnām patoloģijām un uzlabojot pacientu aprūpi.
Izmantojot šos daudzveidīgos lietojumus, Hep 2 šūnas ir ievērojami veicinājušas progresu vēža pētniecībā, vīrusu infekciju izpētē un šūnu mehānismu izpētē. To ieguldījums klīniski nozīmīgu datu iegūšanā ir nenovērtējams, apliecinot to neaizstājamo lomu gan laboratorijā, gan klīnikā. Tā kā pētniecība turpina attīstīties, Hep 2 šūnu līnija noteikti saglabās vadošo lomu, palīdzot atklāt jaunus ārstēšanas veidus un paplašinot mūsu zināšanas par cilvēka veselību un slimībām.
Nodrošiniet savu HEp-2 šūnu līniju jau šodien
Hep 2 šūnas: Pētniecības publikācijas
Turpmāk uzskaitītas dažas interesantas un visvairāk citētas zinātniskās publikācijas par Hep 2 šūnām.
- Cinka oksīda nanodaļiņu sintēze no Marsdenia tenacissima kavē šūnu proliferāciju un inducē apoptozi balsenes vēža šūnās (Hep-2)
Šajā rakstā, kas publicēts žurnālā Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology (2019), pētīts Marsdenia tenacissima biosintētisko cinka oksīda nanodaļiņu pretvēža potenciāls Hep 2 šūnu līnijā. - Ar bioformulētu hesperidīnu pildītas PLGA nanodaļiņas iedarbojas pret mitohondriāli mediētu iekšējo apoptozes ceļu vēža šūnās
Šis raksts publicēts žurnālā Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials 2021. gadā. Šajā pētījumā tika pētītas ar hesperidīnu pildītu poli(pienskābes-koglikolskābes) (PLGA) nanodaļiņu bioloģiski formulētu nanodaļiņu pretvēža īpašības Hep 2 šūnās. - Lophatherum gracile etanola ekstrakta pretvīrusu aktivitāte pret respiratorā sincitiālā vīrusa infekciju
Šajā publikācijā žurnālā Journal of Ethnopharmacology 2019. gadā tika izmantotas Hep 2 šūnas, lai pētītu respiratorā sincitiālā vīrusa infekciju un veiktu pretvīrusu zāļu skrīningu pret to. Pētījumā tika ziņots par daudzsološu ārstniecības auga, t. i., Lophatherum gracile, etanola ekstrakta pretvīrusu potenciālu pret respiratorā sincitiālā vīrusa infekciju. - Četru aromātisko augu ūdens ekstraktu aktivitātes novērtējums attiecībā uz Candida albicans adhēziju uz cilvēka HEp-2 epitēlija šūnām
Šis pētījums ir publicēts žurnālā Gene Reports (2020). Šajā pētījumā tika pētīts četru aromātisko augu ūdens ekstraktu inhibējošais potenciāls pret Candida albicans adhēziju uz cilvēka Hep 2 epitēlija šūnām. - Wnt1 inducētais signālproteīns 1 regulē balsenes plakanšūnu karcinomas glikolīzi un ķīmorezistenci, izmantojot YAP1/TEAD1/GLUT1 ceļu
Šis pētījums publicēts žurnālā Journal of Cellular Physiology 2019. gadā. Pētījumā ziņots, ka Wnt1 inducējamais signalizācijas proteīns 1 (WISP1) mijiedarbojas ar YAP1/TEAD1/GLUT1 ceļu un regulē glikozes metabolismu un ķīmorezistenci Hep 2 šūnu līnijā.
Hep2 šūnu līnijas resursi: Protokoli, videomateriāli un citi resursi
Hep 2 ir labi pazīstama šūnu līnija. Ir pieejami vairāki resursi, kuros aprakstīta Hep 2 šūnu līnija.
- Hep2 šūnu līnijas subkultivēšana: Šajā videoklipā ir soli pa solim aprakstīta Hep 2 šūnu subkultivēšana.
- Hep 2 šūnu ANA skrīnings: Šajā videoklipā ir izskaidrots pretkodolu antivielu (ANA) skrīnings, izmantojot Hep 2 šūnu līniju.
- Hep 2 kultivēšana: Šajā saitē sniegta pamatinformācija par Hep 2 šūnu kultivēšanu. Tā ietver šūnu sadalīšanu, šūnu sasaldēšanu un atkausēšanu.
Biežāk uzdotie jautājumi par HEp-2 šūnām biomedicīnas pētniecībā
Atsauces
- Fusi, M. un S. Dotti, HEp-2 šūnu līnijas pielāgošana pilnīgi bezdzīvnieku kultūru sistēmām un šūnu augšanas analīze reālajā laikā. Biotechniques, 2021. 70(6): p. 319-326.
- Gorphe, P., A comprehensive review of Hep-2 cell line in translational research for laryngeal cancer (Visaptverošs pārskats par Hep-2 šūnu līniju laringeālā vēža translatoloģiskajos pētījumos). Am J Cancer Res, 2019. 9(4): p. 644-649.
- Wang, M., et al., Cancer-associated fibroblasts in a human HEp-2 established laryngeal xenograftinged tumor are not derived from cancer cells through epithelial-mesenchymal transition, fenotyically activated but kariotyically normal. PLoS One, 2015. 10(2): p. e0117405.
- Karatas, O.F., miR-33a antiproliferatīvais potenciāls balsenes vēža Hep-2 šūnās, mērķējot uz PIM1. Head Neck, 2018. 40(11): p. 2455-2461.
- Wang, Y., et al., Synthesis of Zinc oxide nanoparticles from Marsdenia tenacissima inhibits the cell proliferation and induces apoptosis in laryngeal cancer cells (Hep-2). Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology, 2019. 201: p. 111624.
- Zhang, J., et al., SARS-CoV-2 proteīnu subcelulārās lokalizācijas sistēmisks un molekulārs pētījums. Signal Transduct Target Ther, 2020. 5(1): p. 269.
- Wang, Q., et al., RNA saistošais proteīns RBM6 kā audzēju nomācošs gēns nomāc laringokarcinomas augšanu un progresēšanu. Gene, 2019. 697: p. 26-34.
