COS-1 šūnas: Šūnu darbarīks gēnu ekspresijas pētījumos
COS-1 šūnu līnija ir fibroblastiem līdzīga šūna, kas iegūta no pērtiķa nieru audiem, un pētnieki to bieži izmanto pērtiķu vīrusa SV40 izpētei. Šīs šūnas ir viegli transficējamas, un tās bieži izmanto, lai radītu rekombinantus proteīnus dažādiem bioķīmiskiem, molekulāriem un šūnu bioloģijas eksperimentiem.
Šajā rakstā būs sniegta visaptveroša informācija par COS-1 šūnu līniju, ietverot visu būtisko informāciju, kas jums nepieciešama. Konkrēti, jūs iegūsiet zināšanas par šādiem jautājumiem:
- COS-1 šūnu līniju: Izcelsme un vispārīga informācija.
- COS-1 šūnu priekšrocības un trūkumi
- COS-1 šūnu izmantošana pētniecībā
- COS-1 šūnas: Publikācijas
- Resursi par COS-1 šūnu līniju, tostarp protokoli, videoklipi un citi
- COS-1 šūnu kultivēšana
1.cOS-1 šūnu līnija: Izcelsme un vispārīga informācija.
Pirms sākt darbu ar šūnu līniju, ir būtiski iegūt pamatzināšanas par pašu šūnu līniju. Tas ietver tādu informāciju kā šūnu izcelsme, kā tās tika izolētas un to īpašības. Šajā iedaļā mēs aplūkosim COS-1 šūnu pamatus.
Kas ir COS-1 šūnu līnija?
COS-1 šūnu līniju veido fibroblastiem līdzīgas šūnas, ko J. W. F. Cowell un viņa kolēģi pirmo reizi radīja 1981. gadā. Šīs šūnas tika radītas, pārveidojot zaļo pērtiķu epitēlija šūnu līniju, kas pazīstama kā CV-1, ar Simian vīrusa SV40 mutantu formu. Pēc tam izveidotā COS-1 šūnu līnija tika rūpīgi raksturota, lai atjaunotu SV40 genoma apgabalu, kas iepriekš bija izdzēsts no replikācijas avota. Šīs šūnas ekspresē lielos T antigēnus un citus proteīnus, kas nepieciešami, lai pareizi replicētu apļveida genomus, piemēram, plazmīdas.
COS-1 šūnām ir fibroblastiem līdzīga morfoloģija, un tās pieguļ pie virsmām, izkliedējoties monoslānī. Šobrīd nav zināmi COS-1 šūnu līnijas ģenētiskie varianti. Tomēr radniecīga šūnu līnija COS-7 arī ir radusies no CV-1 šūnām, un tai ir līdzīgas īpašības.
2.cOS-1 šūnu plusi un mīnusi
COS-1 šūnu līnijai ir unikālas priekšrocības un ierobežojumi, kurus mēs aplūkosim turpmāk.
Priekšrocības
- Pielietojamība transfekcijai: COS-1 šūnu līnija ir viegli transfekējama, izmantojot dažādas metodes, tostarp fizikālas un ķīmiskas metodes.
- Ļentivīrusu ražošana: COS-1 šūnu līnija ir piemērots iepakojuma saimnieks augstas kvalitātes rekombinantu lenirovīrusu daļiņu ražošanai bez papildu attīrīšanas posmiem. Šīs šūnas stingri pieguļ plastmasas virsmām, kas novērš vīrusu daļiņas saturošu transfekcijas supernatantu piesārņošanu [1].
- Gēnu ekspresija: COS-1 šūnu līniju plaši izmanto pārejošas un stabilas ekspresijas analīzes pētījumiem, ražojot daudzus rekombinantus proteīnus, izmantojot transfekciju ar apļveida plazmīdām, kas satur SV40 replikācijas sākumu [2].
Ierobežojumi
- Necilvēku šūnu līnija: Tā kā COS-1 šūnu izcelsme nav no primātiem, ar šo šūnu līniju iegūtie rekombinantie proteīni ir piemēroti tikai laboratorijas eksperimentiem un nav ieteicami lietošanai cilvēkiem.
3.cOS-1 šūnu izmantošana pētniecībā
Viens no būtiskākajiem apsvērumiem, apspriežot šūnu līniju, ir tās izmantošana pētniecībā. Šajā iedaļā tiks aplūkoti nozīmīgākie COS-1 šūnu izmantošanas veidi pētniecībā.
- Rekombinantu proteīnu ražošana: COS-1 šūnu līniju plaši izmanto rekombinantu proteīnu ražošanai, izmantojot pārejošu vai stabilu apļveida vektoru transfekciju, kas satur SV40 replikācijas izcelsmi. Nesenā pētījumā biologi izmantoja COS-1 šūnu līniju, lai ražotu zirgu horiona gonadotropīnu - rekombinantu reproduktīvo hormonu reproduktīviem lietojumiem [3]. Tāpat citā pētījumā COS-1 šūnas tika izmantotas, lai iegūtu rekombinantu vistas izcelsmes monoklonālu antivielu pret noteikta tipa gripas vīrusu [4].
- Vīrusiem līdzīgu daļiņu ražošana: COS-1 šūnas kalpo kā iepakojuma saimniekorganizatori augstas kvalitātes lentivīrusu ražošanai, un tās var izmantot vīrusu vakcīnu ražošanai. Kādā pētījumā COS-1 šūnu līnija tika izmantota, lai ražotu neinfekciozas, bet ļoti imūndzenošas vīrusam līdzīgas denges vīrusam līdzīgas daļiņas, kas ir efektīvas vakcīnas kandidātvielas [5].
4.cOS-1 šūnas: Publikācijas
Dažas ievērojamas publikācijas par COS-1 šūnām:
- Denges vīrusam līdzīgu daļiņu iegūšana un attīrīšana no COS-1 šūnām: Šajā publikācijā Bio-Protocol ir izskaidrota COS-1 šūnu izmantošana augsti imūnģenēno Denges vīrusam līdzīgu daļiņu ražošanai.
- Rekombinantā zirgu horiona gonadotropīna ekspresijas analīze trīs saimniekdēļu sistēmās - E. coli BL21C, Sf kukaiņu šūnu lizātā un COS-1 zīdītāju šūnās: Šajā pētījumā pētnieki ir salīdzinājuši rekombinantā reproduktīvā hormona, piemēram, zirgu horioniskā gonadotropīna, ražošanu un post-translācijas modifikāciju dažādās ekspresijas sistēmās, tostarp COS-1 zīdītāju šūnās.
- Pētītas ērču pārnēsātas flavivīrusiem līdzīgas daļiņas kā gēnu terapijas piegādes sistēma: Šajā pētījumā tika izmantotas COS-1 šūnas, lai iegūtu ērču encefalīta vīrusam (TBEV) līdzīgas daļiņas. Šīs daļiņas ir ierosināts izmantot kā transporta līdzekli nepieciešamo replikonu (t. i., terapeitisko gēnu) piegādei.
- Rekombinantu vistas izcelsmes monoklonālo antivielu pret H9N2 putnu gripas vīrusa neiraminidāzi ģenerēšana: Šajā rakstā, kas publicēts AMB Express žurnālā, izmantotas COS-1 šūnas, lai iegūtu rekombinantās vistas izcelsmes monoklonālās antivielas pret putnu gripas vīrusa H9N2 tipa neiraminidāzi.
- Cilvēka Kv kanālu, kas izteikti zīdītāju šūnās, šķīdināšana bez mazgāšanas līdzekļiem: Šajā pētījumā, lai veiktu dažus solubilizācijas eksperimentus, tika izmantota zīdītāju šūnu līnija COS-1, kurā tika ekspresēti cilvēka Kv kanāli.
5.resursi par COS-1 šūnu līniju, tostarp protokoli, videoklipi un citi resursi
Šūnu kultūru protokoli
- COS-1 šūnu kultūras: Šī saite satur vērtīgu informāciju par COS-1 šūnu sadalīšanu, sasaldēšanu un atkausēšanu.
- COS-1 šūnas: Šī saite satur pamatinformāciju par COS-1 šūnu līniju.
Transfekcijas protokoli
Šeit ir daži avoti, kuros aprakstīta COS-1 šūnu transfekcijas metode.
- COS-1 šūnu pārejoša transfekcija: Šajā dokumentā ir ietverts COS-1 šūnu līnijas pārejas transfekcijas protokols.
Videoieraksti, kas saistīti ar COS-1 šūnu līniju
Turpmāk minētie video resursi var palīdzēt iegūt vispārīgu informāciju par COS-1 šūnu kultivēšanu, uzturēšanu un transfekciju.
- Šūnu pasāža: Šajā videoklipā aplūkota zīdītāju šūnu līniju kultivēšanas pamatprakse.
- Adhēzijas šūnu sasaldēšana: Šajā videoklipā ir sniegta informācija par adherento šūnu līniju sasaldēšanu.
- Transfekcijas protokols: Šajā videoklipā parādīta zīdītāju šūnu transfekcijas procedūra.
6.cOS-1 šūnu kultivēšana
|
Raksturīgs |
Informācija |
|
Dubultošanās laiks |
Aptuveni 48 stundas |
|
Adhēzijas vai suspensijas veidā |
Pielipušās aug kā monoslānīši uz barotnes virsmas |
|
Sēšanas blīvums |
2 līdz 4 x 10^4 šūnas/cm²; adherētās šūnas mazgā ar 1x PBS, apstrādā ar Accutase, centrifugē, resuspendē un izpludina jaunā kolbā |
|
Augšanas barotne |
Dulbekko modificētā Eagle barotne (DMEM), kas satur 10 % FBS; barotne jāmaina 2 līdz 3 reizes nedēļā |
|
Augšanas apstākļi (temperatūra, CO2) |
Nepieciešams mitrināts inkubators ar 5 % CO2 un 37 °C temperatūru |
|
Uzglabāšana |
Temperatūra zem -150 °C šķidrā slāpeklī tvaika fāzē |
|
Sasaldēšanas process un barotne |
Lēna sasaldēšanas metode ar temperatūras pazemināšanos tikai par 1 °C, izmantojot CM-1 vai CM-ACF barotni |
|
Atkausēšanas process |
Sasaldētās šūnas atkausē, inkubējot tās ūdens vannā 37 °C temperatūrā 40-60 sekundes ar strauju maisīšanu. Centrifugē šūnas, lai atdalītu sasaldēšanas barotni, resuspendē peletes un iepilda kultūras kolbā ar svaigu barotni. Adhēzija ilgst aptuveni 24 stundas. |
|
Bioloģiskās drošības līmenis |
COS-1 šūnu apstrādei ieteicams 1. bioloģiskās drošības līmenis |
Mēs ceram, ka šajā rakstā ir sniegts pietiekams informācijas apjoms, kas palīdzēs jums sākt darbu ar COS-1 šūnām. Lūdzu, pasūtiet pie mums, ja vēlaties izmantot šo šūnu līniju savam pētījumam.
Atsauces
- Smith, S.L. and T. Shioda, Advantages of COS-1 monkey kidney epithelial cells as packaging host for small-volume production of high-quality recombinant lentiviruses. Journal of virological methods, 2009. 157(1): p. 47-54.
- MacKenzie, C.J. and T. Shioda, COS-1Cells as Packaging Host for Production of Lentiviruses. Current protocols in cell biology, 2011. 50(1): p. 26.7. 1-26.7. 15.
- Bhardwaj, A., et al., Expression analysis of recombinant equine chorionic gonadotropin in three host systems: E. coli BL21C, Sf kukaiņu šūnu lizātā un COS-1 zīdītāju šūnās. Indian Journal of Animal Research, 2021. 55(1): p. 40-45.
- Wang, F., et al., Recombinant chickenized monoklonālās antivielas pret H9N2 putnu gripas vīrusa neiraminidāzi ģenerēšana. AMB Express, 2020. 10: p. 1-7.
- Galula, J.U., G.-J.J. Chang un D.-Y. Chao, Denges vīrusam līdzīgu daļiņu ražošana un attīrīšana no COS-1 šūnām. Bio-protocol, 2019. 9(12): p. e3280-e3280.