BEWO šūnu līnija
BeWo ir cilvēka horiokarcinomas atvasināta šūnu līnija, ko plaši izmanto biomedicīnas pētījumos. Tā kalpo kā vērtīgs in vitro modelis cilvēka trofoblastu sarežģītā placentas attīstības un sincifikācijas procesa izpētei. Pētnieki šīs šūnas izmanto arī, lai pētītu trofoblasta šūnu uzvedību, hormonu ražošanu un vielu transportēšanu placentā. Turklāt BeWo šūnas var izmantot arī toksikoloģijā, infekciju un slimību pārnešanas pētījumos.
Šajā rakstā sniegtas pamatzināšanas par BeWo šūnām, kas var palīdzēt jums ar tām strādāt savos pētījumos. Tajā būs ietverti šādi jautājumi:
- BeWo šūnu vispārīgās īpašības un izcelsme
- BeWo šūnu līnija: Informācija par kultivēšanu
- BeWo šūnu līnijas priekšrocības un trūkumi
- BeWo šūnu izmantošana pētniecībā
- Pētniecības publikācijas ar BeWo šūnām
- BeWo šūnu līnijas resursi: Protokoli, videomateriāli un citi resursi
1. BeWo šūnu vispārīgās īpašības un izcelsme
Lai izmantotu šūnu līniju savos pētījumos, ir ļoti svarīgi iepriekš zināt tās izcelsmi un vispārīgās īpašības. Šajā raksta daļā aplūkota BeWo šūnu līnijas izcelsme, raksturīgās iezīmes un daudz kas cits. Šeit jūs uzzināsiet: Kas ir BeWo horeokarcinomas šūnu līnija? Kas ir BeWo sincitializācija? No kurienes nāk BeWo šūnas? Kāda ir BeWo šūnu morfoloģija? Kāda ir BeWo ploidija?
- Placentas šūnu līnija BeWo radās 1968. gadā no ļaundabīgas gesta horiokarcinomas vīriešu augļa placentā [1]. Tādējādi tā kalpo kā nenovērtējams modelis placentas pētījumiem.
- BeWo šūnām ir epitēlijam līdzīga morfoloģija.
- BeWo šūnas ir relatīvi mazas, 20 līdz 30 µM [2].
- BeWo šūnām ir stabils kariotips. To cilmes līniju skaits ir hipotetraploīds. BeWo šūnu modālais hromosomu skaits ir 86. Tas var svārstīties no 71 līdz 178.
- BeWo šūnas ražo vairākus hormonus, t. i., cilvēka horionisko somatomammotropīnu, cilvēka horionisko gonadotropīnu (hCG) un steroīdu hormonus.
- BeWo šūnas ekspresē molekulāros marķierus, tostarp CK 7, E-kadherīnu un VE-kadherīnu.
B30 apakšlīnija
B30 ir BeWo šūnu apakšlīnija. To izmanto, lai pētītu barības vielu uzņemšanu un transportēšanu. Tas skaidrojams ar to spēcīgo augšanu uz porainām membrānām.
BeWo un JEG-3
BeWo JEG-3 šūnu līnijas ir iegūtas no horiokarcinomām un tiek izmantotas placentas pētījumos. BeWo šūnas ražo hormonus zemākā līmenī nekā JEG-3, piemēram, cilvēka horiongonadotropīnu (hCG) un estradiolu.
2. BeWo šūnu līnija: Kultivēšanas informācija
Šūnu kultūras uzturēšana var būt sarežģīta, ja nezināt svarīgāko informāciju. Piemēram: Kāds ir BeWo divkāršošanās laiks? Kas ir BeWo šūnu barotne? Kā kultivēt BeWo šūnu līniju? un Kā sasaldēt BeWo šūnas?
Galvenie punkti BeWo šūnu kultivēšanai
|
Dubultošanās laiks: |
BeWo šūnu populācijas dubultošanās laiks ir aptuveni 30 stundas. |
|
Adhēzijas vai suspensijas veidā: |
BeWo ir adherentu šūnu līnija. |
|
Šūnu izsējas blīvums: |
Ieteicamais BeWo šūnu izsējas blīvums ir 1 x104 šūnas/cm2. Sēšanai no šūnām noņem veco barotni un šūnas skalo ar 1 x PBS. Pēc tam pievieno Accutase (pasāžas šķīdumu), un šūnas inkubē 8 līdz 10 minūtes istabas temperatūrā. Pēc tam atdalītajām šūnām pievieno barotni un centrifugē. Pēc tam savāktās šūnas resuspendē un ielej jaunā kolbā. |
|
Augšanas barotne: |
BeWo šūnu audzēšanai izmanto Hama F12K barotni, kas satur 10 % FBS, 2,0 mM L-glutamīnu, 2,0 mM nātrija piruvātu un 2,5 g/l NaHCO3. BeWo šūnu barotne jāmaina 2 līdz 3 reizes nedēļā. |
|
Augšanas apstākļi: |
BeWo šūnas tiek uzturētas mitrinātā inkubatorā 37 °C temperatūrā ar 5 % CO2 pieplūdi. |
|
Uzglabāšana: |
BeWo šūnas uzglabā zem -150 °C temperatūrā elektriskajā saldētavā ar īpaši zemu temperatūru vai šķidrā slāpekļa tvaika fāzē. |
|
Saldēšanas process un vide: |
BeWo šūnas ieteicams sasaldēt CM-1 vai CM-ACF sasaldēšanas vidē. Šūnas sasaldē, izmantojot lēnās sasaldēšanas metodi. Šī metode ļauj samazināt temperatūru tikai par 1 grādu minūtē, tādējādi pasargājot šūnas no jebkāda šoka un aizsargājot šūnu dzīvotspēju. |
|
Atkausēšanas process: |
Šūnas atkausē, iegremdējot tās iepriekš iestatītā 37 °C ūdens vannā uz 40 līdz 60 sekundēm, līdz paliek neliels ledus gabaliņš. Pēc tam pievieno svaigu barotni, un šūnas centrifugē, lai atdalītu saldēšanas barotnes sastāvdaļas. Savākto šūnu granulu resuspendē un iepilda audzēšanas kolbā. |
|
Bioloģiskās drošības līmenis: |
Biodrošības līmenis: 1. bioloģiskās drošības līmenis. 1. bioloģiskās drošības līmeņa laboratorija ir nepieciešama, lai apstrādātu un uzturētu BeWo šūnu kultūras. |
3. BeWo šūnu līnijas priekšrocības un trūkumi
BeWo šūnām piemīt unikālas īpašības, un tām ir specifiski plusi un mīnusi. Šajā sadaļā mēs aplūkosim dažus no tiem, kas ir ievērības cienīgi.
Priekšrocības
Galvenās BeWo horeokarcinomas šūnu līnijas priekšrocības ir šādas:
-
In vitro placentas šūnu modelis
BeWo šūnas ir in vitro modelis trofoblasta šūnu uzvedības un placentas sincifikācijas izpētei, atveidojot procesus, kurus ir grūti novērot in vivo.
-
Hormonu ražošana
BeWo šūnas izdala hormonus, piemēram, hCG un placentāro laktogēnu, tāpēc tās ir vērtīgas hormonālās regulācijas pētījumiem un reproduktīvās bioloģijas pētījumiem.
Trūkumi
BeWo trofoblasta šūnu trūkumi ir šādi:
-
Vēža šūnu līnija
BeWo šūnas tika iegūtas no horiokarcinomas, kas ir placentas audzējs. Šī izcelsme var pilnībā neatspoguļot normālu placentas šūnu funkciju.
4. BeWo šūnu izmantošana pētniecībā
BeWo šūnu līniju plaši izmanto placentas pētījumos. Šeit ir minēti daži konkrēti šīs šūnu līnijas lietojumi:
- Placentas un ar grūtniecību saistīti pētījumi: BeWo šūnas ir ļoti svarīgas ar placentu un grūtniecību saistītos pētījumos. Piemēram, pētnieki izmanto šīs šūnas, lai pētītu vielu, tostarp medikamentu, barības vielu un toksīnu, transportēšanu caur placentas barjeru. Turklāt viņi pēta arī hormonu, tostarp cilvēka horioniskā gonadotropīna (hCG), placentārā laktogēna un steroīdu hormonu, veidošanos un regulāciju. Tas ir svarīgi, lai izprastu hormonālās izmaiņas grūtniecības laikā. 2018. gadā veiktajos pētījumos tika pētīta bromēto antipirēnu (BFR) ietekme uz sulfotransferāzes aktivitāti cilvēka trofoblastisko šūnu līnijā (BeWo). Šis enzīms ir iesaistīts vairogdziedzera hormona intracelulārā līmeņa regulēšanā [3].
- Infekciju un slimību izpēte: BeWo šūnas tiek izmantotas arī patogēnu un placentas šūnu mijiedarbības izpētei. Šie pētījumi ir vērtīgi, lai izprastu slimības, kas var tikt pārnestas no mātes uz augli, un lai izstrādātu stratēģijas augļa veselības aizsardzībai. Turklāt šī šūnu līnija palīdz pētniekiem pētīt grūtniecības laikā radušās komplikācijas, piemēram, preeklampsiju. Piemēram, 2023. gadā veiktajā pētījumā, ko veica Michalina Bralewska, tika izmantots BeWo trofoblasta šūnu modelis un tika konstatēts, ka gan hromogranīnam A (CgA), gan no tā atvasinātajam peptīdam katestatīnam (CST) var būt nozīme sarežģītā preeklampsijas (PE) patoģenēzes procesā [4]. Citā pētījumā tika pētīts trihosantīna pretvēža potenciāls, izmantojot BeWo horiokarcinomas šūnu līniju. Pētījumā tika pieliktas arī papildu pūles, lai atklātu biomarķierus, veicot salīdzinošo proteomisko analīzi pirms un pēc eksperimenta [5].
5. Pētniecības publikācijas ar BeWo šūnām
Šeit ir dažas nozīmīgas pētniecības publikācijas, kurās izmantotas BeWo trofoblasta šūnas.
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā Frontiers in Bioscience-Landmark (2022), ierosināts, ka AMPK signalizācija aktivizē mitofāģiju BeWo trofoblasta šūnās, izmantojot FUNDC1 un PRKN veicinātus mitofāģijas ceļus. Rezultātā mitofāgija palīdz uzturēt ATP ražošanu un mitohondriālās membrānas potenciālu.
Etilparabēns izraisa apoptozētu šūnu nāvi cilvēka placentas BeWo šūnās, izmantojot Kaspāzes-3 ceļu
Šis raksts publicēts žurnālā Animal Cells and Systems (2020). Pētījumā tika ierosināts, ka etilparabēns izraisa BeWo šūnu apoptozi, regulējot kaspāzes 3 ceļu.
Šajā pētījumā zāļu metabolism and Disposition (2023) tika izmantotas placentas šūnu līnijas, tostarp BeWo, JAR, JEG-3 un HTR-8/SVneo, lai izpētītu ksenobiotiku un steroīdu nogulsnēšanos šūnās.
Šajā pētnieciskajā rakstā, kas publicēts žurnālā International Journal of Molecular Medicine (2020), ierosināts, ka apelīns, APJ receptora ligands, veicina BeWo šūnu proliferāciju, izmantojot APJ un ERK1/2, stat3 un AMPK signālus. Tādējādi tas varētu būt būtisks adipokīns, kas regulē placentas attīstību.
Šajā pētījumā, kas publicēts Epilepsia (2021), tika pētīta augļa barības vielu un pretkrampju medikamentu ietekme uz holīna transportieriem no cilvēka iegūtajā trofoblastisko šūnu līnijā BeWo.
6. Resursi par šūnu līniju BeWo: Protokoli, videoklipi un citi resursi
Šeit ir pieejami daži tiešsaistes resursi par BeWo šūnām:
- In vitro transfekcija: Šis video palīdzēs apgūt in vitro plazmīdu DNS transfekcijas protokolu adherentām šūnām.
Šajā saitē ir informācija par šūnu kultūrām attiecībā uz BeWo šūnām:
- BeWo šūnas: Šajā tīmekļa vietnē ir būtiska informācija par šūnu kultūrām, kas attiecas uz BeWo šūnu līniju. Tā ietver informāciju par šūnu barotnēm un kultivēšanas apstākļiem. Tajā ir arī protokoli par subkulturēšanu un rīcību ar kriokonservētām un proliferatīvām kultūrām.
Atsauces
- Weber, M., et al., Cytogenomics of six human trophoblastic cell lines. Placenta, 2021. 103: p. 72-75.
- Kolokol'tsova, T., et al., Trophoblasts characteristics in long-term culture. Eksperimentālās bioloģijas un medicīnas biļetens, 2017. 164: p. 259-265.
- Leonetti, C.P., C.M. Butt, and H.M. Stapleton, Disruption of thyroid hormone sulfotransferase activity by brominated flame retardant chemicals in the human choriocarcinoma placenta cell line, BeWo [Leonetti, C.P., C.M. Butt, and H.M. Stapleton, Vairogdziedzera hormonu sulfotransferāzes aktivitātes traucējumi, ko izraisa bromēti liesmas slāpētāji cilvēka horiokarcinomas placentas šūnu līnijā. Chemosphere, 2018. 197: p. 81-88.
- Bralewska, M., T. Pietrucha, and A. Sakowicz, Reduction in CgA-Derived CST Protein Level in HTR-8/SVneo and BeWo Trophoblastic Cell Lines Caused by the Preeclamptic Environment. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(8): p. 7124.
- Hu, Y., et al. zāļu trihosantīna pievienošanas BeWo šūnu līnijai salīdzinošā proteomiskā analīze. Molecules, 2022. 27(5): p. 1603.