Raztopina za ločevanje celic Accutase z EDTA in fenol rdečim – 100 ml

Accutase je sterilno filtrirana raztopina za ločevanje celic, pripravljena za takojšnjo uporabo, zasnovana kot nežna alternativa tripsinu/EDTA za ločevanje adhezivnih sesalskih celic s standardne plastične posode za tkivno kulturo in površin, prevlečenih z adhezivnim premazom. Združuje proteolitično in kolagenolitično encimsko aktivnost v uravnoteženi solni raztopini, da zagotovi učinkovito, a nadzorovano ločevanje, ohranja proteine na površini celic ter podpira visoko preživetje po prehodu in hitro ponovno pritrditev.

Formulacija Accutase temelji na Dulbeccovem fosfatnem pufru (DPBS) z EDTA in fenol rdečim kot vizualnim indikatorjem pH. Encimi niso živalskega ali bakterijskega izvora, zaradi česar je Accutase še posebej primeren za raziskave matičnih celic, postopke pri razvoju cepiv in vse aplikacije, kjer je treba zmanjšati onesnaževala živalskega ali mikrobiološkega izvora. Raztopina se pri 37 °C samodejno inhibira, zato po ločitvi ni potrebno nevtralizacijsko reagens ali medij, ki vsebuje serum – celice se lahko prenesejo neposredno v svež medij.

Ključne lastnosti

Pripravljena za uporabo 1x sterilno filtrirana tekočina – ni potrebno redčenje ali rekonstitucija
Kombinirana proteolitična in kolagenolitična encimska aktivnost za nežno disociacijo
Vsaka serija je standardizirana na določeno disociacijsko aktivnost za doslednost med serijami
Encimi niso živalskega ali bakterijskega izvora
Samodejna inhibicija pri 37 °C – ni potrebna nevtralizacijska raztopina
Formulirano v Dulbeccovem PBS z EDTA
Vključena fenol rdeča kot vizualni indikator pH
pH 6,8 – 7,8


Tipične uporabe
Accutase nežno razkroji široko paleto adhezivnih in občutljivih celic, vključno s človeškimi embrionalnimi izvorniškimi celicami (hESCs), človeškimi indukiranimi pluripotentnimi izvorniškimi celicami (iPSCs), nevralnimi izvorniškimi celicami, primarnimi nevroni in rutinsko gojenimi adhezivnimi linijami, kot so HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 in A549. Tipični primeri uporabe vključujejo:

Rutinsko subkultiviranje in pasiranje adhezivnih sesalskih celic
Nežno razcepjanje posameznih celic hESCs, iPSCs in drugih občutljivih linij
Priprava vzorcev za pretočno citometrijo in analizo FACS
Analizo markerjev na celični površini, kjer je pomembna integriteta epitopa
Testi migracije, proliferacije in apoptoze celic
Testi mirovanja s pomočjo pomanjkanja seruma in študije transfekcije onkogenov
Testi migracije tumorskih celic in celic nevralnega grebena
Povečanje proizvodnje v delovnih tokovih bioreaktorjev

Za rutinsko delo nanesite približno 10 ml Accutase na 75 cm2 površine kulture in inkubirajte 5–10 minut pri sobni temperaturi. Optimalni čas inkubacije je treba določiti za vsako celično linijo in ne sme presegati ene ure. Pred dodajanjem sperite celični sloj z raztopino soli brez Ca2+/Mg2+, kot je DPBS brez kalcija in magnezija, da odstranite ostanke seruma in dvovalentne katione.

Ravnanje in shranjevanje
Neodprto stekleničko shranjujte zamrznjeno pri -15 °C ali nižji temperaturi. Odtalite pri sobni temperaturi ali čez noč pri +2 °C do +8 °C. Accutase ne odtaljujte v vodni kopeli pri 37 °C, saj višje temperature zmanjšujejo encimsko aktivnost. Po odtalitvi se raztopina lahko shranjuje do 2 mesecev pri +2 °C do +8 °C; ne shranjujte pri sobni temperaturi. Reagenta pred uporabo ne segrevajte na 37 °C – dodajte ga neposredno na oprane celice pri sobni temperaturi. Za daljšo rok uporabnosti priporočamo razdelitev v enkratne odmerke, da se izognete ponavljajočim se ciklom odmrzovanja. Vedno delajte v aseptičnih pogojih.

Kakovost
Izdelano v skladu s strogimi standardi kakovosti. Vsaka serija Accutase je sterilno filtrirana in testirana na sterilnost, pH, videz in disociacijsko aktivnost, da se zagotovi dosledna, ponovljiva učinkovitost med serijami.

Specifikacije izdelka



Specifikacija
Podrobnosti



Vrsta izdelkaReagent za ločevanje/disociacijo celic
OblikaSterilno filtrirana tekočina, pripravljena za uporabo
Količina100 ml
Delovna koncentracija1x (pripravljeno za uporabo)
Encimska aktivnostKombinirana proteolitična in kolagenolitična
Izvor encimovNesestavljen iz sesalcev in bakterij
Puferski sistemDulbeccov PBS z EDTA
Indikator pHFenol rdeča
Območje pH6,8 – 7,8
VidezBistra, bledo rdeča do oranžna raztopina
Temperatura shranjevanja-15 °C ali manj
Stabilnost po odmrzovanjuDo 2 mesecev pri temperaturi od +2 °C do +8 °C
Priporočena količina za uporabo~10 ml na 75 cm2 površine kulture
Tipični čas inkubacije5–10 minut pri sobni temperaturi
Pogoji za pošiljanjeZamrznjeno na suhem ledu
Namen uporabeSamo za raziskovalne namene in nadaljnjo proizvodnjo



Formulacija (sestava na liter)



Sestavina
Koncentracija (mg/l)




Anorganske soli

Natrijev klorid (NaCl)8000,00
Dinatrijev hidrogenfosfat (Na2HPO4)1150,00
Kalijev klorid (KCl)200,00
Kalijev dihidrogenfosfat (KH2PO4)200,00

Druge sestavine

EDTA · 4Na (tetranatrijev EDTA)220,00
Fenol rdeča3,00
Lastniška mešanica encimov (proteolitična in kolagenolitična aktivnost)1x



Accutase je registrirana blagovna znamka podjetja Innovative Cell Technologies, Inc.

Raztopina fiziološke raztopine s puferjem fosfata (PBS)
S fosfatom puferirana fiziološka raztopina (PBS) je široko uporabljena puferska raztopina v bioloških in kemijskih raziskavah. Ima ključno vlogo pri ohranjanju ravnovesja pH in osmolarnosti med različnimi eksperimentalnimi postopki, vključno z obdelavo tkiv in gojenjem celic. Naša raztopina PBS je skrbno pripravljena iz sestavin visoke čistosti, kar zagotavlja stabilnost in zanesljivost pri vsakem poskusu. Osmolarnost in koncentracije ionov v naši raztopini PBS natančno posnemajo tiste v človeškem telesu, zato je izotonična in nestrupena za večino celic.

Sestava naše raztopine PBS
Naša raztopina PBS je mešanica fosfatnih pufrov in fizioloških raztopin ultračiste kakovosti, ki ji je prilagojen pH. V 1-kratni delovni koncentraciji vsebuje:

8000 mg/L natrijevega klorida (NaCl)
200 mg/L kalijev klorid (KCl)
1150 mg/L natrijev fosfat dvodazni brezvodni (Na2HPO4)
200 mg/L Kalijev fosfat enobazni brezvodni (KH2PO4)

Ta sestava zagotavlja optimalno pH in ionsko ravnovesje, primerno za širok spekter bioloških aplikacij.

Uporaba naše raztopine PBS
Naša raztopina PBS je idealna za različne aplikacije v bioloških raziskavah. Zaradi izotoničnih in netoksičnih lastnosti je primerna za redčenje snovi in izpiranje celičnih posod. Raztopine PBS, ki vsebujejo EDTA, so učinkovite za odstranjevanje pritrjenih in zlepljenih celic. Vendar se PBS ne sme dodajati dvovalentnih kovin, kot je cink, saj lahko povzroči obarjanje. V takih primerih se priporočajo Goodovi pufri. Poleg tega je naša raztopina PBS sprejemljiva alternativa mediju za prenos virusov za prenos in shranjevanje virusov RNA, vključno z virusom SARS-CoV-2.

Nadzor kakovosti

Sterilno filtriran


Shranjevanje in rok uporabnosti

Shranjujte pri temperaturi od +2 °C do +25 °C, zaščiteni pred svetlobo.
Po odprtju hranite pri temperaturi od 2 °C do 25 °C in porabite v 24 mesecih.


Pogoji pošiljanja

Temperatura okolja


Vzdrževanje

Hranite v hladilniku pri temperaturi od +2 °C do +8 °C v temi. Izogibajte se zamrzovanju in pogostemu segrevanju na +37 °C, saj to zmanjša kakovost izdelka.
Medija ne segrevajte nad 37 °C in ne uporabljajte nenadzorovanih virov toplote, kot so mikrovalovne naprave.
Če želite uporabiti le del medija, pred uporabo odstranite potrebno količino in jo segrejte na sobno temperaturo.

Sestava



Kategorija
Sestavine
Koncentracija (mg/L)


Soli
Kalijev klorid
200



Kalijev fosfat monobazni brezvodni
200



Natrijev klorid
8000



Natrijev fosfat dvobazni brezvodni
1150

Mikoplazme so majhni prokariontski organizmi, ki so premajhni, da bi bili vidni v mikroskopu, in jih ni mogoče odstraniti z običajnimi antibiotičnimi reagenti. Mikoplazme lahko vplivajo na celično rast, razmnoževanje in morfologijo celičnih linij, kar lahko privede do nezanesljivih eksperimentalnih rezultatov. približno 15 do 35 % laboratorijskih celičnih kultur je okuženih z mikoplazmo. Zato se priporoča pogosta kontrola, da se zagotovi okolje brez mikoplazme.
Analitična metoda
Podjetje CLS ponuja tako kratkoročno kot dolgoročno testiranje za odkrivanje mikoplazme. V prvem primeru se vzorci testirajo takoj po prispetju, v drugem pa se začne gojenje celične kulture in celice se testirajo po 14 dneh gojenja brez antibiotikov. Testiranje na mikoplazme se izvaja z dvotočkovnim sistemom odkrivanja s kompletom za odkrivanje mikoplazme PlasmoTest™ (Invivogen) in kompletom Certus QC
- mycoADVANCED (Certus).
Vzorci

Za hitri test zagotovite najmanj 50 µl celične suspenzije, ki vsebuje 50 000 celic. Celično suspenzijo lahko pošljete pri sobni temperaturi.
Za test Premium zagotovite najmanj 1 milijon celic v ustreznem zamrzovalnem gojišču, da zagotovite trdno in zdravo kulturo za gojenje in poznejše testiranje celic. Vzorce pošljite v suhem ledu.

Izpolnite obrazec za vzorec za testiranje mikoplazme in ga priložite pošiljki vzorcev.

Kolorimetrični poročevalski test
Ta test je kolorimetrični test, ki temelji na celicah. V prisotnosti mikoplazme reporterska celična linija inducira signalno kaskado, ki sproži spremembo barve medija iz rdeče v modro. Preskus se izvaja v 96-delčnih večkotličnih ploščah. Signali se zaznavajo v spektrofotometru za mikroplošče pri 620-655 nm. Zaznamo vse vrste mikoplazme in aholeplazme, pa tudi druge kontaminante v celičnih kulturah, kot so bakterije.
Izotermno pomnoževanje
Izotermalna amplifikacija je hiter in zanesljiv test, ki temelji na izotermalni amplifikaciji za mikoplazmo specifične DNK v kombinaciji z detekcijo v realnem času z uporabo barvila, ki interkalira DNK. S testom je mogoče odkriti šest najpogostejših vrst, ki predstavljajo > 95 % kontaminacij: M.orale, M.hyorhinis, M.arginini, M.fermentans, M.hominis in A.laidlawii. Zaradi homologije zaporedja bodo zaznane tudi druge vrste mikoplazme (M.pneumoniae, M.gallisepticum in M.synoviae). Da bi ugotovili, ali je vzorec pozitiven ali negativen na mikoplazmo, preučimo temperaturo taljenja (Tm).