Vsebina: 100 ml
Shranjevanje: ≤ –15 °C
Sterilnost: Sterilno filtrirano
Stabilna glutaminska raztopina (L-alanil-L-glutamin, 200 mM) je visoko stabilna dipeptidna oblika L-glutamina, zasnovana kot neposredna nadomestitev za konvencionalni L-glutamin v gojiščih za celične kulture. L-glutamin je esencialna aminokislina in glavni vir energije za gojene celice, ki igra ključno vlogo pri celični rasti, metabolizmu in sintezi beljakovin.
Uporaba in prednosti
V standardnih tekočih medijih se L-glutamin pri 37 °C razgrajuje relativno hitro, kar vodi do nastajanja strupenih stranskih produktov, kot so amonijevi ioni, ki lahko negativno vplivajo na vitalnost celic in rezultate poskusov. Stabilni glutamin premaga to omejitev, saj zagotavlja nerazgradljivo dipeptidno obliko, ki ostane nespremenjena v pogojih kulture.
Celice encimsko razcepijo dipeptidno vez, da po potrebi sprostijo L-glutamin, kar zagotavlja neprekinjeno svežo oskrbo in hkrati preprečuje kopičenje škodljivih odpadnih produktov. Zaradi tega je raztopina še posebej ugodna za dolgoročne celične kulture in rastne sisteme z visoko gostoto.
Sestava in uporaba
Raztopina L-alanil-L-glutamina je pripravljena v vodi za celične kulture v koncentraciji 200 mM in je sterilno filtrirana za aplikacije, občutljive na kontaminacijo. Lahko se razredči neposredno v popolna gojišča v skladu z eksperimentalnimi zahtevami. Shranjujte pri ≤ –15 °C in se izogibajte ponavljajočim ciklom zamrzovanja in odmrzovanja, da ohranite stabilnost izdelka.
Samo za raziskovalne namene. Ni primerno za uporabo v diagnostičnih ali terapevtskih postopkih. Ni primerno za uporabo pri ljudeh ali živalih.
Vsebina: 100 ml
Shranjevanje: od +2 °C do +8 °C
Sterilnost: sterilno filtrirano
HEPES puferska raztopina (1 M), znana tudi kot N-2-hidroksietilpiperazin-N-2-etansulfonska kislina, je zwitterionsko organsko pufersko sredstvo, ki se pogosto uporablja v gojiščih za celične kulture. Njegova naloga je ohranjati stabilne pH pogoje v fiziološkem območju od 6,7 do 8,6, kar omogoča optimalno delovanje celic med in vitro aplikacijami.
Uporaba in prednosti
HEPES zagotavlja zanesljivo pufrsko zmogljivost v sistemih celičnih kultur, zlasti kadar se celice obdelujejo zunaj CO₂ inkubatorja. Dodajanje 10–25 mM HEPES v gojišča zagotavlja večjo stabilnost pH med daljšimi obdobji manipulacije, kar pomaga ohranjati dosledne eksperimentalne pogoje.
Ta pufr je neprepusten za membrane, minimalno vpliva na biokemične reakcije in kaže močno kemično in encimsko stabilnost. Zaradi teh lastnosti je primeren za široko paleto celičnih kultur in biokemičnih aplikacij.
Sestava in uporaba
Raztopina je na voljo kot 1 M koncentrat, pripravljen v vodi za celične kulture, in je sterilen filtriran za uporabo v okoljih, občutljivih na kontaminacijo. Lahko se razredči do želene delovne koncentracije, odvisno od zahtev uporabe. Shranjujte pri temperaturi od +2 °C do +8 °C in ravnajte v aseptičnih pogojih, da ohranite celovitost izdelka.
Samo za raziskovalne namene. Ni primerno za uporabo v diagnostičnih ali terapevtskih postopkih. Ni primerno za uporabo pri ljudeh ali živalih.
Vsebina: 50 ml
Shranjevanje: od +2 °C do +8 °C
Sterilnost: sterilno filtrirano
D-(+)-glukoza (dekstroza) je sterilni, takoj uporaben dodatek, ki vsebuje naravni sladkor D-(+)-glukozo, osrednjo sestavino celičnega metabolizma. Glukoza sodeluje v bistvenih bioloških procesih, kot so proizvodnja energije, glikozacija in nastajanje glikanov, ki prispevajo k celični strukturi in funkciji.
Uporaba in prednosti
Ta raztopina glukoze se pogosto uporablja kot dodatek v gojiščih za celične kulture in v številnih aplikacijah celične in molekularne biologije. Glukoza je primarni vir ogljika in energije, ki podpira rast, proliferacijo in presnovno aktivnost celic. Zaradi svoje vloge v biosintetičnih poteh je ključnega pomena za ohranjanje normalne celične fiziologije in eksperimentalne konsistentnosti.
Sestava in uporaba
Raztopina je na voljo v visoki koncentraciji 250 g/l glukoze, kar omogoča prilagodljivo redčenje v gojiščih v skladu z eksperimentalnimi zahtevami. Sterilno filtrirana je, da je primerna za aplikacije, občutljive na kontaminacijo. Shranjujte pri temperaturi od +2 °C do +8 °C in ravnajte aseptično, da ohranite kakovost in stabilnost izdelka.
Samo za raziskovalne namene. Ni primerno za uporabo v diagnostičnih ali terapevtskih postopkih. Ni primerno za uporabo pri ljudeh ali živalih.
Vsebina: 10 ml
Shranjevanje: od +2 °C do +8 °C
Sterilnost: sterilno filtrirano
Raztopina insulina-transferrina-selena (ITS) (100x) je kemično opredeljen dodatek, namenjen širokemu spektru uporabe v celičnih kulturah. Najpogosteje se uporablja kot dodatek k bazalnim gojiščem za celične kulture, da podpira rast celic v pogojih z zmanjšano vsebnostjo seruma ali brez seruma.
Uporaba in prednosti
Naš dodatek ITS zagotavlja bistvene sestavine, potrebne za optimalno delovanje medijev brez seruma. Z dopolnjevanjem konvencionalnih hranilnih medijev z ITS se lahko znatno zmanjša potreba po fetalnem govejem serumu (FBS) za rutinsko vzdrževanje številnih celičnih linij. To pomaga zmanjšati spremenljivost, povezano z uporabo seruma, hkrati pa ohranja dosledno rast in vitalnost celic.
Insulin podpira celično absorpcijo in metabolizem ključnih hranil, transferin olajšuje transport železa, selen pa prispeva k antioksidativni zaščiti in encimski aktivnosti. Skupaj te sestavine spodbujajo uravnotežen celični metabolizem in izboljšano reproduktivnost v definiranih kultivnih sistemih.
Sestava in uporaba
Insulin-transferrin-selen (ITS) je na voljo kot 100-kratno koncentrirana raztopina v Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) brez fenol rdeče. Za standardne aplikacije razredčite v razmerju 1:100 v ustreznem bazalnem mediju, da dosežete priporočeno delovno koncentracijo. Shranjujte pri temperaturi od +2 °C do +8 °C in ravnajte v aseptičnih pogojih, da ohranite stabilnost in sterilnost izdelka.
Samo za raziskovalne namene. Ni za uporabo v diagnostičnih ali terapevtskih postopkih. Ni za uporabo pri ljudeh ali živalih.
Vsebina: 5 ml
Shranjevanje: od +2 °C do +8 °C
Sterilnost: sterilno filtrirano
Raztopina rekombinantnega človeškega insulina je kemično opredeljen dodatek, ki se pogosto uporablja za gojenje celičnih linij sesalcev, vključno s celicami jajčnikov kitajskega hrčka (CHO). Ta raztopina za celične kulture vsebuje rekombinantni človeški insulin, izražen v Saccharomyces cerevisiae, kar zagotavlja visoko čistost in dosledno delovanje v raziskovalnih aplikacijah.
Uporaba in prednosti
Insulin se rutinsko dodaja v brezserumska in kemijsko definirana gojišča za spodbujanje rasti in produktivnosti celic. Kot ključni regulativni hormon insulin podpira celično absorpcijo, izkoriščanje in shranjevanje glukoze, aminokislin in maščobnih kislin. Zavira tudi razgradnjo glikogena, beljakovin in lipidov, s čimer prispeva k izboljšanju celične vitalnosti in presnovne stabilnosti v sistemih za gojenje celic. Kemijsko definirana formulacija podpira ponovljivost in zmanjšuje spremenljivost v občutljivih postopkih gojenja celic.
Biološke lastnosti in uporaba
Insulin je dvovrstni polipeptidni hormon, ki ga naravno proizvajajo β-celice pankreatičnih otočkov. Ima molekulsko maso približno 5.800 Da. Verigi α in β sta povezani z dvema medverigskima disulfidnima vezema, veriga α pa vsebuje eno znotrajverigsko disulfidno vez. Za uporabo v celičnih kulturah je treba z raztopino ravnati v aseptičnih pogojih in jo shranjevati pri temperaturi od +2 °C do +8 °C, da se ohranita stabilnost in učinkovitost.
Samo za raziskovalne namene. Ni za uporabo v diagnostičnih ali terapevtskih postopkih. Ni za uporabo pri ljudeh ali živalih.
Vsebina: 100 ml
Shranjevanje: +2 °C do +8 °C
Sterilnost: Sterilno filtrirano
Natrijev piruvat (100 mM) je sterilna, pripravljena za uporabo dopolnitev, namenjena zagotavljanju dodatnega, lahko dostopnega vira energije za celične kulture. Natrijev piruvat ima ključno vlogo v celičnem energetskem metabolizmu in podpira rast metabolno aktivnih in hitro proliferativnih celic, kot so tumorske celice. Dopolnitev lahko izboljša vitalnost celic in pomaga ohranjati metabolno stabilnost v kultiviranih sistemih.
Uporaba in prednosti
Ta raztopina se pogosto uporablja v rutinski celični kulturi za obogatitev medija s piruvatom in spodbujanje optimalnih pogojev rasti. Podpira proizvodnjo ATP, lahko pomaga zmanjšati oksidativni stres in prispeva k izboljšanju presnove kultiviranih celic. Izdelek je proizveden v vodi, primerni za celično kulturo, in sterilen filtriran, kar zagotavlja dosledno kakovost in reproduktivnost v raziskovalnih delovnih procesih.
Uporaba in združljivost
Priporočena končna koncentracija za večino uporab v celičnih kulturah je 1 mM natrijev piruvat, ki se doseže z razredčitvijo 100 mM osnovne raztopine v razmerju 1:100 v popolno gojišče. Raztopina je združljiva s široko paleto bazalnih gojišč in celičnih linij sesalcev. Shranjujte pri temperaturi od +2 °C do +8 °C in zaščitite pred onesnaženjem, da ohranite stabilnost izdelka.
Samo za raziskovalne namene. Ni primerno za uporabo v diagnostičnih ali terapevtskih postopkih. Ni primerno za uporabo pri ljudeh ali živalih.
Prostornina: 100 ml Shranjevanje: ≤-15 °C Sterilnost: Sterilnost: Sterilno filtrirano
Antibiotična/antimikotična raztopina (100x ) je sterilen koncentrat, pripravljen za uporabo, namenjen zmanjšanju tveganja mikrobne kontaminacije v celičnih kulturah in sorodnih laboratorijskih aplikacijah. Ta raztopina 100x vsebuje uveljavljeno kombinacijo penicilina, streptomicina in amfotericina B, ki zagotavlja širok spekter protimikrobnega delovanja proti grampozitivnim in gramnegativnim bakterijam, kvasovkam in nitastim glivicam. Formulacija je primerna za uporabo v evkariontskih celičnih kulturah, bakterijskih gojiščih in drugih sistemih, občutljivih na kontaminacijo, ter podpira čiste in dosledne laboratorijske postopke.
Uporaba in prednosti Ta raztopina, optimizirana za rutinske raziskovalne protokole, se pogosto uporablja za vzdrževanje aseptičnih pogojev v delovnih postopkih celičnih kultur. Zagotavlja zanesljivo delovanje v okoljih, občutljivih na kontaminacijo, in raziskovalcem pomaga zmanjšati tveganje za prekomerno rast mikrobov, ne da bi pri tem ogrozili zdravje celic ali ponovljivost poskusov. Sterilno filtrirana formulacija odpravlja potrebo po dodatnih korakih solubilizacije, kar podpira poenostavljeno pripravo gojišč in zmanjšuje variabilnost vsakodnevnih laboratorijskih postopkov.
Uporaba in združljivost Za doseganje standardnih delovnih koncentracij raztopino razredčite v razmerju 1 : 100 v celotnem gojišču. Izdelek je združljiv s številnimi celičnimi linijami sesalcev in osnovnimi gojišči. Zaradi stalne razpoložljivosti zalog imajo raziskovalci koristi od zanesljive neprekinjene oskrbe in poenostavljenega načrtovanja logistike. Raztopino je treba hraniti pri ≤ -15 °C in jo zaščititi pred ponavljajočimi se cikli zamrzovanja in odmrzovanja, da se ohrani stabilnost. Samo za raziskovalno uporabo. Ni za uporabo v diagnostičnih ali terapevtskih postopkih. Ni za uporabo pri ljudeh ali živalih.
Prostornina: 100 ml Shranjevanje: +°C do +8 °C Sterilnost: Sterilnost: Sterilno filtrirano
MEM Non-Essential Amino Acids (100x ) je sterilno dopolnilo, zasnovano za povečanje rasti in vitalnosti celic v sistemih celičnih kultur sesalcev. Formulacija ustreza 100-kratnemu koncentratu neesencialnih aminokislin, ki jih najdemo v standardnem minimalnem esencialnem mediju (MEM), kar omogoča neposredno dodajanje osnovnih medijev z minimalno pripravo.
Uporaba in prednosti Ta dodatek zagotavlja dodatno zalogo aminokislin za hitro razmnožujoče se celice ali za celične linije, ki so izgubile sposobnost sinteze neesencialnih aminokislin de novo. Z zmanjšanjem presnovnega bremena biosinteze podpira izboljšano kinetiko rasti, podaljšano vitalnost in večjo eksperimentalno doslednost
- zlasti v kulturah, ki so občutljive na hranila, ali kulturah z visoko gostoto.
Sestava in uporaba Raztopina vsebuje glicin, L-alanin, L-asparagin, L-asparaginsko kislino, L-glutaminsko kislino, L-prolin in L-serin. Združljiva je z MEM in večino drugih standardnih medijev. Za uporabo razredčite v razmerju 1:100 v končno gojišče. Ta izdelek je sterilno filtriran in pripravljen za uporabo brez dodatnih postopkov. Samo za raziskovalno uporabo. Ni za uporabo v diagnostičnih ali terapevtskih postopkih. Ni za uporabo pri ljudeh ali živalih.
- nežna alternativa tripsinu
Accutase je raztopina za ločevanje celic, ki revolucionarno spreminja industrijo celičnih kultur. Je mešanica proteolitičnih in kolagenolitičnih encimov, ki posnema delovanje tripsina in kolagenaze. Za razliko od tripsina Accutase ne vsebuje sesalskih ali bakterijskih sestavin in je do celic veliko nežnejša, zato je idealna rešitev za rutinsko ločevanje celic s standardne plastične posode za tkivne kulture in plastične posode z adhezijsko prevleko. V tem prispevku bomo raziskali prednosti in uporabo Accutase ter kako spreminja pravila igre v celičnih kulturah.
Prednosti Accutase
Accutase ima več prednosti pred tradicionalnimi raztopinami tripsina. Prvič, uporablja se lahko, kadar koli je potrebna nežna in učinkovita ločitev katere koli adherentne celične linije, zato je neposredna zamenjava za tripsin. Drugič, Accutase zelo dobro deluje na embrionalnih in nevronskih matičnih celicah in dokazano ohranja vitalnost teh celic po prehodu. Tretjič, Accutase ohrani večino epitopov za kasnejšo analizo s pretočno citometrijo, zaradi česar je idealna za analizo označevalcev celične površine.
Poleg tega Accutase ni treba nevtralizirati, ko se prenašajo adherentne celice. Dodajanje večje količine medija po razdelitvi celic razredči Accutase, tako da ta ne more več ločiti celic. S tem odpade potreba po postopku inaktivacije, tehniki celičnih kultur pa prihranijo čas. Accutase ni treba alikvotno odmerjati, steklenička pa je v hladilniku stabilna 2 meseca.
Uporaba Accutase
Accutase je neposreden nadomestek za raztopino tripsina in se lahko uporablja za pasažiranje celičnih linij. Poleg tega se Accutase dobro obnese pri ločevanju celic za analizo številnih označevalcev celične površine s pretočno citometrijo in za sortiranje celic. Druge nadaljnje uporabe obdelave z Accutase vključujejo analizo celičnih površinskih označevalcev, testiranje rasti virusov, proliferacijo celic, teste migracije tumorskih celic, rutinsko prehajanje celic, povečanje proizvodnje (bioreaktor) in pretočno citometrijo.
Sestava zdravila Accutase
Accutase ne vsebuje sesalskih ali bakterijskih sestavin in je naravna mešanica encimov s proteolitično in kolagenolitično encimsko aktivnostjo. Sestavljena je v veliko nižji koncentraciji kot tripsin in kolagenaza, zato je manj toksična in nežnejša, vendar enako učinkovita.
Učinkovitost zdravila Accutase
Dokazano je, da je akutaza učinkovita pri ločevanju primarnih in matičnih celic ter ohranjanju visoke vitalnosti celic v primerjavi z encimi živalskega izvora, kot je tripsin. po 10 minutah se obnovi 100 % celic, zaradi avtodigestije v kislini Accutase pa ni škode, če celice pustite v kislini Accutase do 45 minut.
Če povzamemo
Accutase je učinkovita rešitev, ki spreminja pravila igre na področju celičnih kultur. Zaradi svoje nežne narave, učinkovitosti in vsestranskosti je Accutase idealna alternativa tripsinu. Če iščete zanesljivo in učinkovito rešitev za ločevanje celic, je Accutase prava rešitev za vas.
Kaj vsebuje EMEM?
EMEM je modificirana različica Eaglovega minimalnega esencialnega gojišča, ki vsebuje Earleovo uravnoteženo solno raztopino, neesencialne aminokisline, L-glutamin, natrijev piruvat in natrijev bikarbonat. Pomembno je opozoriti, da je ta raven natrijevega bikarbonata namenjena za uporabo pri 5-odstotnem CO2 na zraku. Za ohranitev učinkovitosti je priporočljivo, da gojišče hranite pri temperaturi od 2 °C do 8 °C v temi, ko ga ne uporabljate.
Za kaj se uporablja EMEM?
Eagle's minimum essential medium (EMEM) je gojišče za celične kulture, ki lahko vzdržuje celice v tkivnih kulturah. Gojišče vsebuje višje koncentracije aminokislin, kar omogoča natančnejši približek beljakovinske sestave gojenih celic sesalcev. EMEM se lahko uporablja za gojenje različnih celic, vključno s fibroblasti, celicami celične linije raka človeških jeter (HepG2) in celicami astrocitov, pridobljenih iz progenitorjev človeških plodovih možganov (PDA). Običajno se uporablja v prisotnosti fetalnega govejega seruma (FBS), telečjega ali konjskega seruma.
V čem se EMEM razlikuje od drugih gojišč za celične kulture?
EMEM in Dulbeccovo modificirano gojišče Eagle (DMEM) imata nekaj podobnosti, vendar se tudi razlikujeta. V obeh medijih ni beljakovin, vsebujeta pa aminokisline, soli, glukozo in vitamine, ki so potrebni za oskrbo celic z energijo in njihovo vzdrževanje v tkivni kulturi. Vendar je formulacija DMEM spremenjena tako, da vsebuje do štirikrat več vitaminov in aminokislin ter dva
- do štirikrat več glukoze kot EMEM. Velja omeniti, da se EMEM prav tako razlikuje od prvotne formulacije MEM.
Nadzor kakovosti
Sterilno filtriran
Shranjevanje in rok uporabnosti
Shranjujte pri temperaturi od +2 °C do +8 °C, zaščiteni pred svetlobo.
Po odprtju hranite pri 4 °C in uporabite v 6-8 tednih.
Pogoji pošiljanja
Temperatura okolja
Vzdrževanje
Hranite v hladilniku pri temperaturi od +2 °C do +8 °C v temi. Izogibajte se zamrzovanju in pogostemu segrevanju na +37 °C, saj to zmanjša kakovost izdelka.
Medija ne segrevajte nad 37 °C in ne uporabljajte nenadzorovanih virov toplote, kot so mikrovalovne naprave.
Če želite uporabiti le del medija, pred uporabo odstranite potrebno količino in jo segrejte na sobno temperaturo.
Sestava
Kategorija
Sestavine
Koncentracija (mg/L)
Aminokisline
L-arginin HCl
126.00
L-cistin 2 HCl
31.30
L-glutamin
292.00
L-histidin HClH2O
42.00
L-izolevcin
52.00
L-levcin
52.00
L-lizin HCl
72.50
L-metionin
15.00
L-fenilalanin
32.00
L-treonin
48.00
L-triptofan
10.00
L-tirozin 2 Na 2H2O
51.90
L-valin
46.00
Vitamini
Holin klorid
1.00
Vitamini
D-kalcijev pantotenat
1.00
Folna kislina
1.00
mio-nizitol
2.00
Nikotinamid
1.00
Piridoksal HCl
1.00
Riboflavin
0.10
Tiamin HCl
1.00
Anorganske soli
CaCl2 2H2O
265.00
Anorganske soli
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Druge sestavine
D-glukoza
1000.00
Druge sestavine
Natrijeva sol fenol rdečega
11.00
Ključne značilnosti Freeze Medium CM-1 vključujejo:
Široka združljivost: Učinkovita za širok spekter celičnih vrst, vključno s primarnimi celicami, matičnimi celicami in uveljavljenimi celičnimi linijami.
Visoka sposobnost preživetja: Optimizirano za čim večjo obnovo in vitalnost celic po odmrzovanju, kar zagotavlja zanesljive rezultate poskusov.
Pripravljen za uporabo: Priročno pripravljene in sterilizirane za takojšnjo uporabo, kar zmanjšuje čas priprave in tveganje kontaminacije.
Izboljšana stabilnost: Ohranja dosledno delovanje v standardnih pogojih kriokonzervacije, kar zagotavlja ponovljive rezultate.
Dolg rok trajanja: CM-1 je za uporabo pripravljen medij za kriokonzervacijo, ki vsebuje serum in se lahko v hladilniku hrani do enega leta.
Uporaba CM-1 za zamrzovanje celic
Če želite uporabiti CM-1 za zamrzovanje adherentnih in suspenzijskih celic, sledite naslednjim korakom
Pri adherentnih celicah jih sperite in ločite od podlage za gojenje. Za suspenzijske celice nadaljujte neposredno z naslednjim korakom.
Preštejte celice, da zagotovite njihovo ustrezno koncentracijo.
Celice centrifugirajte, da jih oprašite, nato jih ponovno suspendirajte v gojišču za zamrzovanje CM-1.
Resuspendirane celice prenesite v kriovile.
Pred prenosom celic v dolgoročno skladiščenje uporabite metodo počasnega zamrzovanja
Metoda
Opis
Koraki
❄️
Ročno zamrzovanje
Postopna metoda, ki vključuje postopno zniževanje temperature, da se zagotovi vitalnost celic
1️⃣ Postavite celice v gojišče za zamrzovanje v zamrzovalnik pri 4 °C za 40 minut.
2️⃣ Za 24 ur prenesite v zamrzovalnik pri -80 °C.
3️⃣ Za dolgoročno shranjevanje shranite celice v tekočem dušiku
❄️
Uporaba pripomočka Mr. Frosty
Priročna naprava, ki omogoča nadzorovano hitrost zamrzovanja brez električne energije
1️⃣ Pripravite celice v kriovile z gojiščem za zamrzovanje.
2️⃣ Kriovile postavite v posodo Mr. Frosty.
3️⃣ Pred prenosom v tekoči dušik jih 24 ur hranite pri -80 °C
❄️
Zamrzovalnik z nadzorovano hitrostjo
Zelo natančen zamrzovalnik Thermo Fisher ali drugih proizvajalcev, namenjen nadzorovanemu zniževanju temperature
1️⃣ Napravo sprogramirajte tako, da postopoma znižuje temperaturo.
2️⃣ Pripravljene celice postavite v zamrzovalnik.
3️⃣ Po ciklu zamrzovanja prenesite celice v tekoči dušik
Kriovile shranite pri temperaturi pod -130 °C ali v tekočem dušiku za dolgoročno shranjevanje.
Sestavine
Vsebuje FBS, DMSO, glukozo, soli
Pufrirna sposobnost: pH = 7,2 do 7,6
Sredstvo za zamrzovanje CM-1 podjetja Cytion ponuja zanesljivo rešitev za kriokonzervacijo, ki zagotavlja visoko vitalnost in funkcionalnost celic po odmrznitvi za širok spekter raziskovalnih aplikacij.
Medij Ham's F-12K (Kaighn's) je skrbno oblikovan za optimizacijo pogojev gojenja celic. Ima obogateno sestavo, ki zagotavlja povišane ravni bistvenih sestavin, kot so aminokisline in natrijev piruvat, ter dodatne elemente, vključno s putrescinom, timidinom, hipoksantinom in cinkom. Ti dodatki raziskovalcem omogočajo, da gojišče dopolnijo z minimalno količino seruma ali opredeljenih sestavin za določene vrste celic, kar olajša natančne eksperimentalne pogoje.
Medij Ham's F-12K (Kaighn's) ne vsebuje proteinov ali rastnih faktorjev. Zato je pogosto potrebno dodajanje rastnih faktorjev in fetalnega govejega seruma (FBS), kar raziskovalcem omogoča, da gojišče prilagodijo zahtevam svojih specifičnih celičnih linij. Za optimalno delovanje je treba koncentracijo FBS skrbno optimizirati za vsako celično linijo ter tako zagotoviti optimalno rast in delovanje.
Za vzdrževanje fiziološkega pH je v mediju Ham's F-12K (Kaighn's) uporabljen pufrski sistem natrijevega bikarbonata (2,5 g/L), zaradi česar je med gojenjem potrebno nadzorovano okolje s 5-10 % CO2. To zagotavlja, da pH gojišča ostaja v idealnem območju za rast in sposobnost preživetja celic
Nadzor kakovosti
pH = 7,2 +/
- 0,02 pri 20-25 °C.
Vsaka serija je bila testirana na sterilnost ter odsotnost mikoplazme in bakterij.
Vzdrževanje
Hranite v hladilniku pri temperaturi od +2 °C do +8 °C v temi. Zamrzovanje in segrevanje do +37 °C zmanjšujeta kakovost izdelka.
Medija ne segrevajte na več kot 37 °C in ne uporabljajte nenadzorovanih virov toplote (npr. mikrovalovnih naprav).
Če želite uporabiti le del medija, to količino odstranite iz stekleničke in jo segrejte pri sobni temperaturi.
Rok trajanja za katero koli gojišče razen osnovnega gojišča je 8 tednov od datuma izdelave.
Sestava
Sestavine
mg/L
Anorganske soli
Kalcijev klorid x 2H2O
135,24
Bakrov(II) sulfat x 5H2O
0,00
Železov (II) sulfat x 7H2O
0,83
Magnezijev klorid x 6H2O
105,72
Magnezijev sulfat x 7H2O
394,49
Kalijev klorid
283,29
Kalijev dihidrogenfosfat
58,52
Natrijev klorid
7597,20
natrijev vodikov fosfatbrezvodni
115,02
Cinkov sulfat x 7H2O
0,14
Druge sestavine
D(+)-glukoza, brezvodna
1260,00
Hipoksantin
4,08
DL-α-lipojska kislina
0,21
Fenol rdeče
3,00
Putrescin x 2HCl
0,32
Natrijev piruvat
220,00
NaHCO3
2500,00
Timidin
0,73
Aminokisline
L-alanin
17,82
L-arginin x HCl
421,40
L-asparagin x H2O
30,02
L-asparaginska kislina
26,62
L-cistein x HCl x H2O
70,24
L-glutamin
292,20
L-glutaminska kislina
29,42
Glicin
15,01
L-histidin x HCl x H2O
41,92
L-izolevcin
7,87
L-levcin
26,24
L-lizin x HCl
73,04
L-metionin
8,95
L-fenilalanin
9,91
L-prolin
69,06
L-serin
21,02
L-treonin
23,82
L-triptofan
4,08
L-tirozin
10,87
L-valin
23,42
Vitamini
D(+)-biotin
0,07
D-kalcijev pantotenat
0,48
Holin klorid
13,96
Folna kislina
1,32
mio-nizitol
18,02
Nikotinamid
0,04
Piridoksin x HCl
0,06
Riboflavin
0,04
Tiamin x HCl
0,34
Vitamin B12
1,36
S fosfatom puferirana fiziološka raztopina (PBS) je široko uporabljena puferska raztopina v bioloških in kemijskih raziskavah. Ima ključno vlogo pri ohranjanju ravnovesja pH in osmolarnosti med različnimi eksperimentalnimi postopki, vključno z obdelavo tkiv in gojenjem celic. Naša raztopina PBS je skrbno pripravljena iz sestavin visoke čistosti, kar zagotavlja stabilnost in zanesljivost pri vsakem poskusu. Osmolarnost in koncentracije ionov v naši raztopini PBS natančno posnemajo tiste v človeškem telesu, zato je izotonična in nestrupena za večino celic.
Sestava naše raztopine PBS
Naša raztopina PBS je mešanica fosfatnih pufrov in fizioloških raztopin ultračiste kakovosti, ki ji je prilagojen pH. V 1-kratni delovni koncentraciji vsebuje:
8000 mg/L natrijevega klorida (NaCl)
200 mg/L kalijev klorid (KCl)
1150 mg/L natrijev fosfat dvodazni brezvodni (Na2HPO4)
200 mg/L Kalijev fosfat enobazni brezvodni (KH2PO4)
Ta sestava zagotavlja optimalno pH in ionsko ravnovesje, primerno za širok spekter bioloških aplikacij.
Uporaba naše raztopine PBS
Naša raztopina PBS je idealna za različne aplikacije v bioloških raziskavah. Zaradi izotoničnih in netoksičnih lastnosti je primerna za redčenje snovi in izpiranje celičnih posod. Raztopine PBS, ki vsebujejo EDTA, so učinkovite za odstranjevanje pritrjenih in zlepljenih celic. Vendar se PBS ne sme dodajati dvovalentnih kovin, kot je cink, saj lahko povzroči obarjanje. V takih primerih se priporočajo Goodovi pufri. Poleg tega je naša raztopina PBS sprejemljiva alternativa mediju za prenos virusov za prenos in shranjevanje virusov RNA, vključno z virusom SARS-CoV-2.
Nadzor kakovosti
Sterilno filtriran
Shranjevanje in rok uporabnosti
Shranjujte pri temperaturi od +2 °C do +25 °C, zaščiteni pred svetlobo.
Po odprtju hranite pri temperaturi od 2 °C do 25 °C in porabite v 24 mesecih.
Pogoji pošiljanja
Temperatura okolja
Vzdrževanje
Hranite v hladilniku pri temperaturi od +2 °C do +8 °C v temi. Izogibajte se zamrzovanju in pogostemu segrevanju na +37 °C, saj to zmanjša kakovost izdelka.
Medija ne segrevajte nad 37 °C in ne uporabljajte nenadzorovanih virov toplote, kot so mikrovalovne naprave.
Če želite uporabiti le del medija, pred uporabo odstranite potrebno količino in jo segrejte na sobno temperaturo.
Sestava
Kategorija
Sestavine
Koncentracija (mg/L)
Soli
Kalijev klorid
200
Kalijev fosfat monobazni brezvodni
200
Natrijev klorid
8000
Natrijev fosfat dvobazni brezvodni
1150
Sredstvo RPMI 1640, ki je bilo sprva zasnovano za podporo rasti človeških levkemičnih celic v suspenzijskih in enoslojnih kulturah, se je z modifikacijami raziskovalcev in komercialnih dobaviteljev razvilo in postalo primerno za različne celice sesalcev. Izjemno je združljivo s celičnimi linijami, kot so HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrociti in karcinomi.
Medij RPMI 1640 se zaradi svoje edinstvene sestave razlikuje od drugih medijev za celične kulture. Vsebuje veliko količino fosfatov, aminokislin in vitaminov. Predvsem vsebuje biotin, vitamin B12 in PABA, ki jih ni v Eaglovem minimalnem esencialnem mediju ali Dulbeccovem modificiranem mediju Eagle. Poleg tega ima RPMI 1640 Medium znatno povišane koncentracije vitaminov inozitola in holina. Vendar ne vsebuje beljakovin, lipidov ali rastnih dejavnikov. Zato je za zagotovitev optimalnih pogojev za rast celic običajno potrebno dodajanje 10 % fetalnega govejega seruma (FBS).
Pufrirni sistem medija RPMI 1640 temelji na natrijevem bikarbonatu in za vzdrževanje fiziološko primernega pH potrebuje 5-10 % CO2. Vključitev reducenta glutationa še dodatno razlikuje to gojišče od drugih.
Nadzor kakovosti
Sterilno filtriran
Shranjevanje in rok trajanja
Shranjujte pri temperaturi od +2 °C do +8 °C, zaščiteno pred svetlobo.
Po odprtju hranite pri 4 °C in porabite v 6-8 tednih.
Pogoji pošiljanja
Temperatura okolja
Vzdrževanje
Hranite v hladilniku pri temperaturi od +2 °C do +8 °C v temi. Izogibajte se zamrzovanju in pogostemu segrevanju na +37 °C, saj to zmanjša kakovost izdelka.
Medija ne segrevajte nad 37 °C in ne uporabljajte nenadzorovanih virov toplote, kot so mikrovalovne naprave.
Če želite uporabiti le del medija, pred uporabo odstranite potrebno količino in jo segrejte na sobno temperaturo.
Sestava
Kategorija
Sestavine
Koncentracija (mg/L)
Aminokisline
Glicin
10.00
L-alanil-L-glutamin
434.40
L-arginin
200.00
L-asparaginH2O
56.82
L-asparaginska kislina
20.00
L-cistin 2HCl
65.20
L-glutaminska kislina
20.00
L-histidin HClH2O
20.27
L-hidroksi-L-prolin
20.00
L-izolevcin
50.00
L-levcin
50.00
L-lizin HCl
40.00
L-metionin
15.00
L-fenilalanin
15.00
L-prolin
20.00
L-serin
30.00
L-treonin
20.00
L-triptofan
5.00
L-tirozin 2Na 2H2O
28.83
L-valin
20.00
Vitamini
p-aminobenzojska kislina
1.00
D-biotin
0.20
Holin klorid
3.00
D-kalcijev pantotenat
0.25
Folna kislina
1.00
mio-nizitol
35.00
Nikotinamid
1.00
Piridoksin HCl
1.00
Riboflavin
0.20
Tiamin HCl
1.00
Vitamin B12
0.005
Anorganske soli
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Druge sestavine
D-glukoza
2000.00
Reducirani L-glutation
1.00
Natrijeva sol fenol rdečega
5.30
Ta edinstvena formulacija združuje Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) in Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) v natančnem razmerju 1:1. Dodatek L-glutamina še izboljša njeno sestavo.
DMEM, pridobljen iz Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), ponuja večjo koncentracijo aminokislin in vitaminov v primerjavi s svojim predhodnikom. Nasprotno pa Ham's F-12 temelji na gojišču Ham's F-10 in zagotavlja dopolnilni nabor bistvenih sestavin.
Za podporo optimalne rasti celic se DMEM:Ham's F12 običajno dopolnjuje s FBS v običajni koncentraciji 5-10 %. Ta dodatek je potreben, ker v gojišču ni rastnih hormonov, lipidov in beljakovin, ki so ključni za razvoj celic.
DMEM:Ham's F12 vsebuje pH pufrski sistem in je pogosto dopolnjen s fenol rdečim, indikatorjem pH. Gojene celice v DMEM:Ham's F12 ali katerem koli drugem gojišču, ki uporablja bikarbonatni pufrski sistem, potrebujejo nadzorovano okolje s 5-10 % CO2, da se ohrani ustrezna raven pH.
Nadzor kakovosti
Sterilno filtriran
Shranjevanje in rok uporabnosti
Shranjujte pri temperaturi od +2 °C do +8 °C, zaščiteni pred svetlobo.
Po odprtju hranite pri 4 °C in uporabite v 6-8 tednih.
Pogoji pošiljanja
Temperatura okolja
Vzdrževanje
Hranite v hladilniku pri temperaturi od +2 °C do +8 °C v temi. Izogibajte se zamrzovanju in pogostemu segrevanju na +37 °C, saj to zmanjša kakovost izdelka.
Medija ne segrevajte nad 37 °C in ne uporabljajte nenadzorovanih virov toplote, kot so mikrovalovne naprave.
Če želite uporabiti le del medija, pred uporabo odstranite potrebno količino in jo segrejte na sobno temperaturo.
Sestava
Kategorija
Sestavine
Koncentracija (mg/L)
Aminokisline
Glicin
18.75
L-alanin
4.45
L-arginin HCl
147.50
L-asparagin H₂O
7.50
L-asparaginska kislina
6.65
L-cistein HCl H₂O
17.56
L-cistin 2 HCl
31.29
L-glutaminska kislina
7.35
L-glutamin
365.00
L-histidin HCl H₂O
31.48
L-izolevcin
54.47
L-levcin
59.05
L-lizin HCl
91.25
L-metionin
17.24
L-fenilalanin
35.48
L-prolin
17.25
L-serin
26.25
L-treonin
53.45
L-triptofan
9.02
Dinatrijeva sol L-tirozina
48.10
L-valin
52.85
Vitamini
D-biotin
0.0035
Holin klorid
8.98
D-kalcijev pantotenat
2.24
Folna kislina
2.66
mio-nizitol
12.60
Nikotinamid
2.02
Piridoksin HCl
0.031
Piridoksal HCl
2.00
Riboflavin
0.219
Tiamin HCl
2.17
Vitamin B12
0.68
Anorganske soli
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Druge sestavine
D-glukoza
3151.00
Hipoksantin
2.40
HEPES
3574.50
Linolna kislina
0.042
Lipojska kislina
0.105
Natrijeva sol fenol rdečega
8.63
Putrescin 2 HCl
0.081
Natrijev piruvat
55.00
Timidin
0.365
- 0,02 pri 20–25 °C. Vsaka serija je bila testirana na sterilnost in odsotnost mikoplazme in bakterij. Hranjenje Hranite v hladilniku pri temperaturi +2 °C do +8 °C na temnem mestu. Zamrzovanje in segrevanje do +37 °C zmanjšata kakovost izdelka. Sredstva ne segrevajte na več kot 37 °C in ne uporabljajte nekontroliranih virov toplote (npr. mikrovalovne pečice). Če nameravate uporabiti le del gojišča, vzemite to količino iz steklenice in jo segrejte na sobni temperaturi. Rok uporabnosti za vsa gojišča razen osnovnega gojišča je 6 do 8 tednov od datuma odprtja. Sestava Sestavine mg/L Anorganske soliKalcijev klorid x 2H2O132,00 Magnezijev sulfat97,6 Kalijev klorid40 Natrijev klorid6.460 Dinatrijev hidrogen fosfat (brezvodni)504,00 Druge sestavineD(+)-glukoza (brezvodna)3.000 Glutation (zmanjšan)0 Meso peptone600,00 Fenol rdeča natrijeva sol11 AminokislineL-alanin13,36 L-arginin x HCl42,14 L-asparagin x H2O45,03 L-asparaginska kislina19,97 L-cistein x HCl x H2O31,75 L-glutamin (stabilen)219,15 L-glutaminska kislina22,07 Glicin7,5 L-histidin x HCl x H2O20,96 L-hidroksiprolin19,67 L-izolevcin39,3 L-levcin39,36 L-lizin x HCl36,54 L-metionin14,92 L-fenilalanin16,52 L-Prolin17,27 L-serin26,28 L-treonin17,87 L-triptofan3,06 L-tirozin dinatrijeva sol26,10 L-valin17,57 Vitaminip-Aminobenzojska kislina1,0 Askorbinska kislina0,56 D(+)-biotin0,2 D-kalcijev pantotenat0,2 Holin klorid5 Folna kislina10 Mio-inozitol36 Nikotinamid0 Nikotinska kislina0,5 Piridoksal HCl0,5 Piridoksin HCl0,5 Riboflavin0,2 Tiamin HCl0,2 Vitamin B122,0
Medij 199 ponuja vrsto aplikacij na tem področju. Učinkovito lahko vzdržuje kompleks kumulus-oocit (COC) in podpira zorenje jajčnih celic in vitro. Poleg tega se uporablja pri izpiranju aspiracijskih linij med zbiranjem jajčec pri nemških kravah holstein. Poleg tega je medij 199 odlično gojišče za gojenje srčnih endotelijskih celic, pridobljenih iz podgan. Te uporabe dokazujejo vsestranskost in prilagodljivost medija 199 različnim eksperimentalnim potrebam.
Zgodovina
Razvoj medija 199 v petdesetih letih prejšnjega stoletja je pomenil pomemben napredek na področju gojišč za tkivne kulture. Pred njegovo uvedbo je bilo veliko gojišč odvisnih od proizvodov živalskega izvora in tkivnih izvlečkov. Vendar so Morgan in sodelavci naredili revolucijo na tem področju, saj so oblikovali popolnoma določen vir hranil za celične kulture. S poskusi z različnimi kombinacijami vitaminov, aminokislin in drugih dejavnikov so odkrili izjemne lastnosti medija 199, ki spodbujajo rast.
Nadzor kakovosti
pH = 7,2 +/
- 0,02 pri 20-25 °C.
Vsaka serija je bila testirana na sterilnost ter odsotnost mikoplazme in bakterij.
Vzdrževanje
Hranite v hladilniku pri temperaturi od +2 °C do +8 °C v temi. Zamrzovanje in segrevanje do +37 °C zmanjšujeta kakovost izdelka.
Medija ne segrevajte na več kot 37° C in ne uporabljajte nenadzorovanih virov toplote (npr. mikrovalovne naprave).
Če želite uporabiti le del medija, to količino odstranite iz stekleničke in jo segrejte pri sobni temperaturi.
Rok trajanja za vsa gojišča, razen za osnovno gojišče, je 8 tednov od datuma izdelave.
Sestava
Sestavine
mg/L
Anorganske soli
Kalcijev klorid x 2H2O
264,92
Železov (III) nitrat x 9H2O
0,72
Magnezijev sulfat
97,67
Kalijev klorid
400,00
Natrijev acetat x 3H2O
82,95
Natrijev klorid
6,800.00
Natrijev dihidrogenfosfat x H2O
140,00
Druge sestavine
Adenin sulfat
10,00
AMP
0,20
ATP
1,00
Holesterol
0,20
2'-Deoksiriboza
0,50
D(+)-glukoza brezvodna
1,000.00
Glutation (rdeč)
0,05
Guanin x HCl
0,30
Hipoksantin
0,30
Fenol rdeče
10,00
D-riboza
0,50
Timin
0,30
Tween 80
4,90
Uracil
0,30
Ksantin
0,30
NaHCO3
2,200.00
Aminokisline
L-alanin
25,00
L-arginin x HCl
70,00
L-asparaginska kislina
30,00
L-cistein x HCl x H2O
0,10
L-cistin
20,00
Stabilen L-glutamin
149,00
L-glutaminska kislina
67,00
Glicin
50,00
L-histidin x HCl x H2O
21,88
L-hidroksiprolin
10,00
L-izolevcin
20,00
L-levcin
60,00
L-lizin x HCl
70,00
L-metionin
15,00
L-fenilalanin
25,00
L-prolin
40,00
L-serin
25,00
L-treonin
30,00
L-triptofan
10,00
L-tirozin
40,00
L-valin
25,00
Vitamini
4-amino benzojska kislina
0,05
Askorbinska kislina
0,05
D(+)-biotin
0,01
Kalciferol
0,10
D-kalcijev pantotenat
0,01
Holin klorid
0,50
Folna kislina
0,01
mio-nizitol
0,05
Menadion
0,01
Nikotinska kislina
0.025
Nikotinamid
0.025
Piridoksal x HCl
0.025
Piridoksol x HCl
0.025
Riboflavin
0,01
DL-α-tokoferol fosfat dinatrijeva sol
0,01
Tiamin x HCl
0,01
Vitamin A acetat
0,14
IMDM je primeren za hitro razmnožujoče se celične kulture z veliko gostoto, vključno s celicami Jurkat, COS-7 in makrofagi. Različne modifikacije IMDM, ki so na voljo za različne načine uporabe v celičnih kulturah, lahko poiščete z orodjem za izbiro medijev. Tekoča gojišča zagotavljajo bistvena hranila za vse aplikacije celičnih kultur. Vsako naše visokokakovostno gojišče za celične kulture je izdelano v skladu s prvotno objavljeno formulo ali modifikacijami, potrebnimi za dosledno delovanje in stabilnost gojišča.
IMDM proti DMEM
IMDM vsebuje kalijev nitrat namesto železovega nitrata ter HEPES in natrijev piruvat. Zaradi dodatnih sestavin v IMDM je primernejši za specializirane tipe celic in posebne aplikacije kot DMEM.
IMDM proti RPMI
IMDM in RPMI imata različne sestave, ki so lahko pomembne za stimulacijo s PMA/ionomicinom. Ena od pomembnih razlik je koncentracija Ca2+. RPMI vsebuje 0,42 mM Ca2+, IMDM pa 1,49 mM.
Nadzor kakovosti
pH = 7,2 +/
- 0,02 pri 20-25 °C.
Vsaka serija je bila testirana na sterilnost ter odsotnost mikoplazme in bakterij.
Vzdrževanje
Hranite v hladilniku pri temperaturi od +2 °C do +8 °C v temi. Zamrzovanje in segrevanje do +37 °C zmanjšujeta kakovost izdelka.
Medija ne segrevajte na več kot 37° C in ne uporabljajte nenadzorovanih virov toplote (npr. mikrovalovne naprave).
Če želite uporabiti le del medija, to količino odstranite iz stekleničke in jo segrejte pri sobni temperaturi.
Rok trajanja za vsa gojišča, razen za osnovno gojišče, je 8 tednov od datuma izdelave.
Sestava
Sestavine
mg/L
Anorganske soli
Kalcijev klorid x 2 H2O
219,00
Kalijev klorid
330,00
Kalijev nitrat
0.076
Brezvodni magnezijev sulfat
97,73
Natrijev klorid
4,505.00
Brezvodni natrijev dihidrogenfosfat
109,00
Natrijev selenit
0,02
Druge sestavine
D(+)-glukoza, brezvodna
4,500.00
HEPES
5,958.00
Natrijev piruvat
110,00
Fenol rdeče
15,00
Aminokisline
L-alanin
25,00
L-arginin x HCl
84,00
L-asparagin x H2O
25,00
L-asparaginska kislina
30,00
L-cistin x 2HCl
91,24
L-glutamin
584,00
L-glutaminska kislina
75,00
Glicin
30,00
L-histidin x HCl x H2O
42,00
L-izolevcin
104,80
L-levcin
104,80
L-lizin x HCl
146,20
L-metionin
30,00
L-fenilalanin
66,00
L-prolin
40,00
L-serin
42,00
L-treonin
95,20
L-triptofan
16,00
L-tirozin x 2Na
104,20
L-valin
93,60
Vitamini
D(+)-biotin
0.013
D-kalcijev pantotenat
4,00
Holin klorid
4,00
Folna kislina
4,00
mio-nizitol
7,20
Gojišča za celične kulture: Pregled
Na področju znanosti o življenju je ena najpomembnejših metodologij gojenje celic. Besedna zveza "celična kultura" pomeni odvzem celic, tkiv ali organov iz živali ali rastline in naknadno vsaditev teh celic, tkiv ali organov v umetno okolje, ki je ugodno za njihovo preživetje in/ali rast Temeljne okoljske potrebe za optimalen razvoj celic so nadzorovana temperatura, substrat za pritrditev celic, ustrezno gojišče in inkubator, ki vzdržuje optimalni pH in osmolalnost. Celice morajo imeti te pogoje, da lahko razvijejo svoj polni potencial.
Izbira ustreznega rastnega gojišča za gojenje in vitro je faza v celični kulturi, ki je hkrati najbolj kritična in najbolj pomembna. Rastno gojišče, znano tudi kot gojišče, je tekočina ali gel, oblikovan za spodbujanje razvoja organizmov na mikroskopski, celični ali rastlinski ravni. Gojišče, ki se uporablja za gojenje celic, pogosto vsebuje ustrezno količino energije in snovi, ki nadzorujejo celični cikel. Glavne sestavine gojišča so aminokisline, vitamini, anorganske soli, glukoza in serum. Serum je dodan gojišču, ker deluje kot vir rastnih dejavnikov, hormonov in dejavnikov pritrditve. Poleg zagotavljanja hranil gojišče prispeva tudi k vzdrževanju ravni pH in osmolalnosti.
Vrste gojišč, ki se uporabljajo v celičnih kulturah
Tako človeške kot živalske celice je mogoče gojiti v umetnem ali sintetičnem gojišču ali v popolnoma naravnem gojišču, ki je dopolnjeno z naravnimi elementi. V nadaljevanju vam bomo predstavili pregled različnih vrst medijev, ki so trenutno na voljo.
Naravni mediji
V naravnih gojiščih lahko najdemo le biološke tekočine, ki obstajajo v svojem naravnem stanju. Naravni mediji so zelo koristni in enostavni za gojenje najrazličnejših vrst živalskih celic. Pomanjkanje razumevanja natančnih sestavin, ki sestavljajo naravne medije, je glavni dejavnik, ki prispeva k nizki ponovljivosti rezultatov, pridobljenih z uporabo naravnih medijev.
Umetna gojišča
Priprava umetnih ali sintetičnih gojišč vključuje dodajanje hranil (organskih in anorganskih), serumskih beljakovin, ogljikovih hidratov, kofaktorjev, vitaminov in soli ter plinskih faz O2 in CO2 [1].
Razvite so bile različne vrste umetnih gojišč, da bi izpolnile eno ali več naslednjih funkcij: 1) takojšnje preživetje (uravnotežena raztopina soli z natančno določenim pH in osmotskim tlakom). 2) Podaljšano preživetje (uravnotežena raztopina soli, dopolnjena z različnimi formulacijami organskih kemikalij in/ali seruma). 3) Neomejen razvoj. 4) Specializirane funkcije.
Obstajajo štiri različne klasifikacije umetnih gojišč:
Mediji, ki vsebujejo serum
Najpogostejša vrsta dodatka, ki ga najdemo v gojišču, ki se uporablja za gojenje živalskih celic, je fetalni goveji serum. Dodajamo ga gojišču kot poceni dodatek, da bi dosegli najboljše možne pogoje za rast. Poleg tega, da serum deluje kot prenašalec ali kelator za hranila, ki so nestabilna ali netopna v vodi, hormone in rastne dejavnike, inhibitorje proteaz in druge snovi, tudi veže in nevtralizira škodljive molekule.
Medij brez seruma
Prisotnost seruma v mediju ima številne pomanjkljivosti in lahko povzroči velike napake pri interpretaciji v imunoloških raziskavah [2, 3]. Ustvarjeni so bili različni mediji brez seruma [4, 5]. Ti mediji so običajno posebej oblikovani za podporo gojenja ene vrste celic, kot sta na primer Knockout Serum Replacement in Knockout DMEM podjetja Thermo Fisher Scientific ter medij mTESR podjetja Stem Cell Technologies [6] za matične celice [7].
Poleg tega ti mediji vsebujejo določene količine prečiščenih rastnih dejavnikov, lipoproteinov in drugih beljakovin, ki jih sicer običajno zagotavlja serum [8]. Ta gojišča se pogosto imenujejo "definirana gojišča", saj so sestavine, ki jih sestavljajo, dobro poznane.
Kemično opredeljeni mediji
Ti mediji vključujejo ultračiste anorganske in organske sestavine, ki niso bile kontaminirane z nobeno vrsto onesnaženja. Vključujejo lahko tudi čiste beljakovinske dodatke, kot so rastni dejavniki.
genetska modifikacija bakterij ali kvasovk skupaj z dodajanjem določenih maščobnih kislin, vitaminov, holesterola in aminokislin povzroči proizvodnjo njihovih sestavnih delov [9].
Gojišča brez beljakovin
Brezbeljakovinska gojišča so tista, ki sploh ne vsebujejo beljakovin in namesto tega vsebujejo le nebeljakovinske elemente. V primerjavi z mediji z dodanim serumom uporaba medijev brez dodanih beljakovin spodbuja večjo proliferacijo celic in izražanje beljakovin ter omogoča lažje čiščenje vseh proizvodov, ki nastanejo v nadaljnjem postopku [10-12]. Beljakovine niso vključene v formule, kot sta MEM in RPMI-1640. Vendar se lahko po potrebi doda beljakovinski dodatek.
Gojišča in njihove osnovne sestavine
Komercialno gojišče je mogoče kupiti v prahu ali tekočini in pogosto vsebuje različna hranila, kot so aminokisline, glukoza, soli, vitamini in drugi prehranski dodatki.
Potrebe po teh sestavinah so za vsako celično linijo drugačne, te razlike pa so vzrok za veliko število različnih formulacij gojišč. Vsaka sestavina je odgovorna za določeno funkcijo, ki bo opisana v naslednjih odstavkih:
Pufrirni sistemi
Za vzdrževanje optimalnih pogojev za rast je treba nadzorovati pH, kar se pogosto izvaja z enim od dveh puferskih sistemov:
Naravni pufrirni sistem
Razmerje CO2/H2CO3 v ozračju je enako razmerju v gojišču, kar ustvarja naravni pufrirni mehanizem. Da bi ohranili naravni puferski mehanizem, je treba kulture hraniti v zračnem okolju s 5-10 % CO2, kar se pogosto doseže z uporabo CO2 inkubatorja. Ena od najboljših stvari pri uporabi naravnega pufra je, kako poceni in varen je.
HEPES
Kemično puferiranje z uporabo zwitteriona HEPES ima večjo pufersko sposobnost v območju pH 7,2-7,4 in ne potrebuje urejenega plinskega okolja. Za določene vrste celic je lahko večji odmerek HEPES škodljiv. Mediji, ki vsebujejo HEPES, so tudi veliko bolj občutljivi na fototoksične učinke fluorescenčne svetlobe [13].
Fenol rdeče
Indikator pH fenol rdeče je pogosto vključen v komercialno dostopna gojišča, kar omogoča stalno spremljanje pH. S širjenjem celic metaboliti, ki jih te proizvajajo, povzročijo spremembo pH in s tem spremembo barve gojišča. Fenol rdeče ima dvojni učinek na barvo gojišča, saj ga spremeni v rumeno pri kislem pH in vijolično pri bazičnem pH. pH 7,4, ki je optimalna vrednost za gojenje celic, povzroči, da je gojišče videti fluorescentno rdeče.
Vendar ima fenol rdeče nekaj pomanjkljivosti: Prvič, fenol rdeče lahko simulira delovanje številnih steroidnih hormonov, predvsem estrogena [14]. Zato je pri preučevanju celic, občutljivih na estrogen, kot je tkivo dojke, priporočljivo uporabiti gojišče brez fenol rdečega. Ravnovesje med natrijem in kalijem je moteno zaradi prisotnosti fenol rdečega v več pripravkih brez seruma. Dodajanje seruma ali govejega hipofiznega hormona mediju lahko ta učinek izniči [15]. Tretjič, prisotnost fenol rdečega ovira zaznavanje pri pretočnih citometričnih poskusih.
Anorganske soli
Mediji, ki vsebujejo anorganske soli, kot so natrijevi, kalijevi in kalcijevi ioni, pomagajo vzdrževati osmotsko ravnovesje in uravnavati membranski potencial.
Aminokisline
Ker so aminokisline temeljne sestavine beljakovin, so bistvena sestavina vsakega posameznega gojišča za rast celic, ki je bilo kdajkoli zasnovano. Ker celice ne morejo same proizvesti nekaterih aminokislin, je pomembno, da gojišče vsebuje esencialne aminokisline. Te so potrebne za razmnoževanje celic, koncentracija, v kateri so prisotne, pa določa največjo gostoto celic, ki jo je mogoče doseči. Zlasti L-glutamin, esencialna aminokislina, je še posebej pomemben.
L-glutamin deluje kot sekundarni vir energije za presnovo in prispeva dušik k proizvodnji NAD, NADPH in nukleotidov. Ker je L-glutamin nestabilna aminokislina, ki se sčasoma spremeni v obliko, ki je celice ne morejo izkoristiti, jo je treba dodajati v medij.
Poleg tega se lahko v gojišče dodajo tudi neesencialne aminokisline, da se ponovno napolnijo tiste, ki so se porabile med procesom rasti. Rast celic se pospeši, njihova sposobnost preživetja pa poveča, če se rastnemu gojišču dodajo neesencialne aminokisline.
Ogljikovi hidrati
Glavni vir energije so ogljikovi hidrati v obliki sladkorjev. Številna gojišča poleg bolj običajnih sladkorjev glukoze in galaktoze vsebujejo tudi maltozo in fruktozo.
Beljakovine in peptidi
Alumin, transferin in fibronektin so najpogosteje uporabljeni proteini in peptidi. Ti so še posebej pomembni v medijih, ki ne vključujejo seruma. Albumin, transferin, aprotinin, fetuin in fibronektin so nekatere beljakovine, ki jih je mogoče najti v serumu, ki je bogata zaloga beljakovin.
Albumin je glavna beljakovina, ki jo najdemo v krvi, njegova naloga pa je vezava in prenos različnih snovi, vključno z vodo, solmi, prostimi maščobnimi kislinami, hormoni in vitamini, med različnimi organi in celicami. Albumin se lahko veže na kemikalije, zato je učinkovit kandidat za odstranjevanje škodljivih spojin iz medija, v katerem se gojijo celice.
Aprotinin je zaščitno sredstvo v sistemih celičnih kultur, saj je stabilen pri nevtralnem in kislem pH ter odporen na visoke temperature in uničenje, ki ga lahko povzročijo proteolitični encimi. Zavira številne serinske proteaze, med drugim tudi tripsin.
Fetuin je glikoprotein, ki ga je mogoče v serumu fetalnih in novorojenčkov zaznati v večjih količinah kot v serumu odraslih živali. Poleg tega deluje kot zaviralec serinskih proteaz. Beljakovina fibronektin je bistvena sestavina v procesu lepljenja celic. Transferin je beljakovina, ki prenaša železo in je odgovorna za prenos železa v membrane celic.
Maščobne kisline in lipidi
Imajo ključno vlogo v mediju brez seruma, kadar seruma ni.
Vitamini
Številni vitamini so potrebni za razvoj in razmnoževanje celic. Celice ne morejo proizvesti ustreznih količin vitaminov, zato so v tkivnih kulturah nujno potrebni kot prehranska dopolnila.
V celičnih kulturah je glavni vir vitaminov serum, vendar se mediji obdelajo tudi z različnimi vitamini, da so primerni za določeno vrsto celic. Najpogosteje se za spodbujanje rasti uporabljajo vitamini skupine B.
Elementi v sledovih
Kemični elementi, kot so baker, cink, selen in intermediati trikarboksilne kisline, so znani kot elementi v sledovih. Elementi v sledovih se pogosto dodajajo medijem, ki ne vključujejo seruma, da bi nadomestili tiste, ki so običajno prisotni v serumu. Ti elementi so pomembne kemične sestavine, ki so potrebne za zdrav razvoj celic. Številne biokemične reakcije so odvisne od določenih mikrohranil, na primer aktivnost encimov.
Dopolnila za gojišča
Polno rastno gojišče, predlagano za nekatere celične linije, potrebuje dodatne sestavine, ki jih v osnovnem gojišču in serumu ni. Ti prehranski dodatki podpirajo rast celic in ustrezno presnovno delovanje.
Čeprav so hormoni, rastni dejavniki in signalne molekule bistveni za ustrezno razmnoževanje določenih celičnih linij, je treba vedno upoštevati naslednje previdnostne ukrepe: Ker lahko dodajanje dodatkov spremeni osmolalnost celotnega rastnega gojišča, kar lahko zavira razvoj celic, je po dodajanju dodatkov vedno priporočljivo preveriti osmolalnost. Za večino celičnih linij je optimalna osmolalnost med 260 in 320 mOSM/kg.
Antibiotiki
Antibiotiki se pogosto uporabljajo za zaviranje razvoja bakterijskih in glivičnih onesnaževalcev [16], čeprav niso bistveni za rast celic. Ker lahko antibiotiki zakrijejo kontaminacijo z mikoplazmo in odpornimi bakterijami, se njihova rutinska uporaba za celične kulture ne predlaga [17, 18].
Poleg tega lahko antibiotiki motijo presnovo preobčutljivih celic. Pogosto se uporabljajo kombinacije penicilin-streptomicin, ki jih izdelujeta podjetji MilliporeSigma in Life Technologies. Plazmocin je bil uporabljen pri gojenju gliomskih celičnih linij TS603, TS516 in BT260 [19] in se je izkazal za učinkovitega pri odstranjevanju kontaminacije z mikoplazmo (20).
Serum
V serumu so prisotni albumini, rastni dejavniki in zaviralci rasti. Serum je ena najpomembnejših sestavin gojišča celičnih kultur, saj vsebuje aminokisline, beljakovine, vitamine (zlasti v maščobi topne vitamine, kot so A, D, E in K), ogljikove hidrate, lipide, hormone, rastne dejavnike, minerale in elemente v sledovih.
Za spodbujanje razvoja gojenih celic se pogosto uporablja serum iz fetalnih in telečjih govejih virov. Fetalni serum je bogata zaloga rastnih dejavnikov in je primeren za kloniranje celic in razvoj občutljivih celic. Telečji serum se zaradi zmanjšane sposobnosti spodbujanja rasti uporablja pri poskusih z zaviranjem stika. Običajna rastna gojišča pogosto vsebujejo 2 % do 10 % seruma. Dodajanje seruma gojišču služi naslednjim namenom [21]:
-
S serumom se celice oskrbijo z bistvenimi hranilnimi snovmi (v raztopini in vezanimi na beljakovine).
-
V serumu je vključenih več rastnih dejavnikov in hormonov, ki sodelujejo pri spodbujanju rasti in specializirani celični dejavnosti.
-
Ponuja veliko vezavnih beljakovin, kot sta albumin in transferin, ki prenašajo druge kemikalije v celico. Albumin na primer v celice prenaša maščobe, vitamine, hormone itd.
-
Zagotavlja tudi beljakovine, kot je fibronektin, ki povečujejo oprijem celic na podlago. Poleg tega proizvaja elemente za širjenje, ki pomagajo pri širjenju celic pred delitvijo.
-
Zagotavlja inhibitorje proteaz, ki preprečujejo proteolizo v celicah.
-
Vsebuje tudi minerale, kot so Na+, K+, Zn2+ in Fe2+.
-
Povečuje viskoznost gojišča in tako ščiti celice pred mehanskimi poškodbami med mešanjem suspenzijskih kultur.
-
Je tudi pufer.
Reference
[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Nutrition of animal cells in tissue culture; initial studies on a synthetic medium (Prehrana živalskih celic v tkivni kulturi; prve študije o sintetičnem gojišču). Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8
[2] Kerbel R, Blakeslee D. Rapid adsorption of a fetal calf serum component by mammalian cells in culture (Hitra adsorpcija komponente fetalnega telečjega seruma s celicami sesalcev v kulturi). Potencialni vir artefaktov v študijah antiserumov na celično specifične antigene. Imunologija. 1976;31:881-91
[3] Sula K, Draber P, Nouza K. Dodatek seruma gojišču, ki se uporablja za pripravo celičnih suspenzij, kot možen vir artefaktov pri celično posredovanih reakcijah, preučevanih s testom poplitealnih bezgavk. J Immunogenet. 1980;7:483-9
[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Komercialna gojišča brez seruma: rast hibridomov in proizvodnja monoklonskih protiteles. J Immunol Methods. 1991;145:175-83
[5] Barnes D, Sato G. Methods for growth of cultured cells in serum-free medium. Anal Biochem. 1980;102:255-70
[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O,et al. HSP70 chaperones RNA-free TDP-43 into anisotropic intranuclear liquid spherical shells. Science. 2021;371:
[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J,et al. Down-syndrome-induced senescence disrupts nuclear architecture of neural progenitors. Cell Stem Cell. 2022;29:116-130.e7
[8] Iscove N, Melchers F. Popolna zamenjava seruma z albuminom, transferinom in sojinimi lipidi v kulturah limfocitov B, reaktivnih na lipopolisaharid. J Exp Med. 1978;147:923-33
[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Systematic improvement of a chemically-defined protein-free medium for hybridoma growth and monoclonal antibody production. J Biotechnol. 1996;45:111-23
[10] Darfler F. A protein-free medium for the growth of hybridomas and other cells of the immune system (Gojišče brez beljakovin za rast hibridomov in drugih celic imunskega sistema). In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769-78
[11] Barnes D, Sato G. Serum-free cell culture: a unifying approach (Gojenje celic brez seruma: enoten pristop). Cell. 1980;22:649-55
[12] Hamilton W, Ham R. Clonal growth of chinese hamster cell lines in protein-free media (Klonska rast celičnih linij kitajskega hrčka v medijih brez beljakovin). In Vitro. 1977;13:537-47
[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Analysis of the cytotoxic effects of light-exposed HEPES-containing culture medium. In Vitro Cell Dev Biol. 1985;21:282-7
[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. Phenol red in tissue culture media is a weak estrogen: implications concerning the study of estrogen-responsive cells in culture. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496-500
[15] Karmiol S. Development of serum free media (Razvoj gojišč brez seruma). In: Master JRW, urednik. Animal Cell Culture, 3. izdaja. Oxford: Oxford University Press; 2000.
[16] Perlman D. Use of antibiotics in cell culture media (Uporaba antibiotikov v medijih za celične kulture). Methods Enzymol. 1979;58:110-6
[17] McGarrity G. Spread and control of mycoplasmal infection of cell cultures (Širjenje in nadzor mikoplazemske okužbe celičnih kultur). In Vitro. 1976;12:643-8
[18] Masters J, Stacey G. Changing medium and passaging cell lines (Spreminjanje gojišča in prehajanje celičnih linij). Nat Protoc. 2007;2:2276-84
[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M,et al. Histonska demetilaza KDM6A neposredno zaznava kisik za nadzor kromatina in usode celic. Science. 2019;363:1217-1222
[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M,et al. Efficiency of Plasmocin™ on various mammalian cell lines infected by mollicutes in comparison with commonly used antibiotics in cell culture: a local experience. Citotehnologija. 2011;63:609-20
[21] Kragh Hansen U. Molecular aspects of ligand binding to serum albumin (Molekularni vidiki vezave ligandov na serumski albumin). Pharmacol Rev. 1981;33:17-53