Vsebina: 100 ml
Shranjevanje: ≤ –15 °C
Sterilnost: Sterilno filtrirano
Stabilna glutaminska raztopina (L-alanil-L-glutamin, 200 mM) je visoko stabilna dipeptidna oblika L-glutamina, zasnovana kot neposredna nadomestitev za konvencionalni L-glutamin v gojiščih za celične kulture. L-glutamin je esencialna aminokislina in glavni vir energije za gojene celice, ki igra ključno vlogo pri celični rasti, metabolizmu in sintezi beljakovin.
Uporaba in prednosti
V standardnih tekočih medijih se L-glutamin pri 37 °C razgrajuje relativno hitro, kar vodi do nastajanja strupenih stranskih produktov, kot so amonijevi ioni, ki lahko negativno vplivajo na vitalnost celic in rezultate poskusov. Stabilni glutamin premaga to omejitev, saj zagotavlja nerazgradljivo dipeptidno obliko, ki ostane nespremenjena v pogojih kulture.
Celice encimsko razcepijo dipeptidno vez, da po potrebi sprostijo L-glutamin, kar zagotavlja neprekinjeno svežo oskrbo in hkrati preprečuje kopičenje škodljivih odpadnih produktov. Zaradi tega je raztopina še posebej ugodna za dolgoročne celične kulture in rastne sisteme z visoko gostoto.
Sestava in uporaba
Raztopina L-alanil-L-glutamina je pripravljena v vodi za celične kulture v koncentraciji 200 mM in je sterilno filtrirana za aplikacije, občutljive na kontaminacijo. Lahko se razredči neposredno v popolna gojišča v skladu z eksperimentalnimi zahtevami. Shranjujte pri ≤ –15 °C in se izogibajte ponavljajočim ciklom zamrzovanja in odmrzovanja, da ohranite stabilnost izdelka.
Samo za raziskovalne namene. Ni primerno za uporabo v diagnostičnih ali terapevtskih postopkih. Ni primerno za uporabo pri ljudeh ali živalih.
Vsebina: 100 ml
Shranjevanje: od +2 °C do +8 °C
Sterilnost: sterilno filtrirano
HEPES puferska raztopina (1 M), znana tudi kot N-2-hidroksietilpiperazin-N-2-etansulfonska kislina, je zwitterionsko organsko pufersko sredstvo, ki se pogosto uporablja v gojiščih za celične kulture. Njegova naloga je ohranjati stabilne pH pogoje v fiziološkem območju od 6,7 do 8,6, kar omogoča optimalno delovanje celic med in vitro aplikacijami.
Uporaba in prednosti
HEPES zagotavlja zanesljivo pufrsko zmogljivost v sistemih celičnih kultur, zlasti kadar se celice obdelujejo zunaj CO₂ inkubatorja. Dodajanje 10–25 mM HEPES v gojišča zagotavlja večjo stabilnost pH med daljšimi obdobji manipulacije, kar pomaga ohranjati dosledne eksperimentalne pogoje.
Ta pufr je neprepusten za membrane, minimalno vpliva na biokemične reakcije in kaže močno kemično in encimsko stabilnost. Zaradi teh lastnosti je primeren za široko paleto celičnih kultur in biokemičnih aplikacij.
Sestava in uporaba
Raztopina je na voljo kot 1 M koncentrat, pripravljen v vodi za celične kulture, in je sterilen filtriran za uporabo v okoljih, občutljivih na kontaminacijo. Lahko se razredči do želene delovne koncentracije, odvisno od zahtev uporabe. Shranjujte pri temperaturi od +2 °C do +8 °C in ravnajte v aseptičnih pogojih, da ohranite celovitost izdelka.
Samo za raziskovalne namene. Ni primerno za uporabo v diagnostičnih ali terapevtskih postopkih. Ni primerno za uporabo pri ljudeh ali živalih.
Vsebina: 50 ml
Shranjevanje: od +2 °C do +8 °C
Sterilnost: sterilno filtrirano
D-(+)-glukoza (dekstroza) je sterilni, takoj uporaben dodatek, ki vsebuje naravni sladkor D-(+)-glukozo, osrednjo sestavino celičnega metabolizma. Glukoza sodeluje v bistvenih bioloških procesih, kot so proizvodnja energije, glikozacija in nastajanje glikanov, ki prispevajo k celični strukturi in funkciji.
Uporaba in prednosti
Ta raztopina glukoze se pogosto uporablja kot dodatek v gojiščih za celične kulture in v številnih aplikacijah celične in molekularne biologije. Glukoza je primarni vir ogljika in energije, ki podpira rast, proliferacijo in presnovno aktivnost celic. Zaradi svoje vloge v biosintetičnih poteh je ključnega pomena za ohranjanje normalne celične fiziologije in eksperimentalne konsistentnosti.
Sestava in uporaba
Raztopina je na voljo v visoki koncentraciji 250 g/l glukoze, kar omogoča prilagodljivo redčenje v gojiščih v skladu z eksperimentalnimi zahtevami. Sterilno filtrirana je, da je primerna za aplikacije, občutljive na kontaminacijo. Shranjujte pri temperaturi od +2 °C do +8 °C in ravnajte aseptično, da ohranite kakovost in stabilnost izdelka.
Samo za raziskovalne namene. Ni primerno za uporabo v diagnostičnih ali terapevtskih postopkih. Ni primerno za uporabo pri ljudeh ali živalih.
Vsebina: 10 ml
Shranjevanje: od +2 °C do +8 °C
Sterilnost: sterilno filtrirano
Raztopina insulina-transferrina-selena (ITS) (100x) je kemično opredeljen dodatek, namenjen širokemu spektru uporabe v celičnih kulturah. Najpogosteje se uporablja kot dodatek k bazalnim gojiščem za celične kulture, da podpira rast celic v pogojih z zmanjšano vsebnostjo seruma ali brez seruma.
Uporaba in prednosti
Naš dodatek ITS zagotavlja bistvene sestavine, potrebne za optimalno delovanje medijev brez seruma. Z dopolnjevanjem konvencionalnih hranilnih medijev z ITS se lahko znatno zmanjša potreba po fetalnem govejem serumu (FBS) za rutinsko vzdrževanje številnih celičnih linij. To pomaga zmanjšati spremenljivost, povezano z uporabo seruma, hkrati pa ohranja dosledno rast in vitalnost celic.
Insulin podpira celično absorpcijo in metabolizem ključnih hranil, transferin olajšuje transport železa, selen pa prispeva k antioksidativni zaščiti in encimski aktivnosti. Skupaj te sestavine spodbujajo uravnotežen celični metabolizem in izboljšano reproduktivnost v definiranih kultivnih sistemih.
Sestava in uporaba
Insulin-transferrin-selen (ITS) je na voljo kot 100-kratno koncentrirana raztopina v Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) brez fenol rdeče. Za standardne aplikacije razredčite v razmerju 1:100 v ustreznem bazalnem mediju, da dosežete priporočeno delovno koncentracijo. Shranjujte pri temperaturi od +2 °C do +8 °C in ravnajte v aseptičnih pogojih, da ohranite stabilnost in sterilnost izdelka.
Samo za raziskovalne namene. Ni za uporabo v diagnostičnih ali terapevtskih postopkih. Ni za uporabo pri ljudeh ali živalih.
Vsebina: 5 ml
Shranjevanje: od +2 °C do +8 °C
Sterilnost: sterilno filtrirano
Raztopina rekombinantnega človeškega insulina je kemično opredeljen dodatek, ki se pogosto uporablja za gojenje celičnih linij sesalcev, vključno s celicami jajčnikov kitajskega hrčka (CHO). Ta raztopina za celične kulture vsebuje rekombinantni človeški insulin, izražen v Saccharomyces cerevisiae, kar zagotavlja visoko čistost in dosledno delovanje v raziskovalnih aplikacijah.
Uporaba in prednosti
Insulin se rutinsko dodaja v brezserumska in kemijsko definirana gojišča za spodbujanje rasti in produktivnosti celic. Kot ključni regulativni hormon insulin podpira celično absorpcijo, izkoriščanje in shranjevanje glukoze, aminokislin in maščobnih kislin. Zavira tudi razgradnjo glikogena, beljakovin in lipidov, s čimer prispeva k izboljšanju celične vitalnosti in presnovne stabilnosti v sistemih za gojenje celic. Kemijsko definirana formulacija podpira ponovljivost in zmanjšuje spremenljivost v občutljivih postopkih gojenja celic.
Biološke lastnosti in uporaba
Insulin je dvovrstni polipeptidni hormon, ki ga naravno proizvajajo β-celice pankreatičnih otočkov. Ima molekulsko maso približno 5.800 Da. Verigi α in β sta povezani z dvema medverigskima disulfidnima vezema, veriga α pa vsebuje eno znotrajverigsko disulfidno vez. Za uporabo v celičnih kulturah je treba z raztopino ravnati v aseptičnih pogojih in jo shranjevati pri temperaturi od +2 °C do +8 °C, da se ohranita stabilnost in učinkovitost.
Samo za raziskovalne namene. Ni za uporabo v diagnostičnih ali terapevtskih postopkih. Ni za uporabo pri ljudeh ali živalih.
Vsebina: 100 ml
Shranjevanje: +2 °C do +8 °C
Sterilnost: Sterilno filtrirano
Natrijev piruvat (100 mM) je sterilna, pripravljena za uporabo dopolnitev, namenjena zagotavljanju dodatnega, lahko dostopnega vira energije za celične kulture. Natrijev piruvat ima ključno vlogo v celičnem energetskem metabolizmu in podpira rast metabolno aktivnih in hitro proliferativnih celic, kot so tumorske celice. Dopolnitev lahko izboljša vitalnost celic in pomaga ohranjati metabolno stabilnost v kultiviranih sistemih.
Uporaba in prednosti
Ta raztopina se pogosto uporablja v rutinski celični kulturi za obogatitev medija s piruvatom in spodbujanje optimalnih pogojev rasti. Podpira proizvodnjo ATP, lahko pomaga zmanjšati oksidativni stres in prispeva k izboljšanju presnove kultiviranih celic. Izdelek je proizveden v vodi, primerni za celično kulturo, in sterilen filtriran, kar zagotavlja dosledno kakovost in reproduktivnost v raziskovalnih delovnih procesih.
Uporaba in združljivost
Priporočena končna koncentracija za večino uporab v celičnih kulturah je 1 mM natrijev piruvat, ki se doseže z razredčitvijo 100 mM osnovne raztopine v razmerju 1:100 v popolno gojišče. Raztopina je združljiva s široko paleto bazalnih gojišč in celičnih linij sesalcev. Shranjujte pri temperaturi od +2 °C do +8 °C in zaščitite pred onesnaženjem, da ohranite stabilnost izdelka.
Samo za raziskovalne namene. Ni primerno za uporabo v diagnostičnih ali terapevtskih postopkih. Ni primerno za uporabo pri ljudeh ali živalih.
Prostornina: 100 ml Shranjevanje: ≤-15 °C Sterilnost: Sterilnost: Sterilno filtrirano
Antibiotična/antimikotična raztopina (100x ) je sterilen koncentrat, pripravljen za uporabo, namenjen zmanjšanju tveganja mikrobne kontaminacije v celičnih kulturah in sorodnih laboratorijskih aplikacijah. Ta raztopina 100x vsebuje uveljavljeno kombinacijo penicilina, streptomicina in amfotericina B, ki zagotavlja širok spekter protimikrobnega delovanja proti grampozitivnim in gramnegativnim bakterijam, kvasovkam in nitastim glivicam. Formulacija je primerna za uporabo v evkariontskih celičnih kulturah, bakterijskih gojiščih in drugih sistemih, občutljivih na kontaminacijo, ter podpira čiste in dosledne laboratorijske postopke.
Uporaba in prednosti Ta raztopina, optimizirana za rutinske raziskovalne protokole, se pogosto uporablja za vzdrževanje aseptičnih pogojev v delovnih postopkih celičnih kultur. Zagotavlja zanesljivo delovanje v okoljih, občutljivih na kontaminacijo, in raziskovalcem pomaga zmanjšati tveganje za prekomerno rast mikrobov, ne da bi pri tem ogrozili zdravje celic ali ponovljivost poskusov. Sterilno filtrirana formulacija odpravlja potrebo po dodatnih korakih solubilizacije, kar podpira poenostavljeno pripravo gojišč in zmanjšuje variabilnost vsakodnevnih laboratorijskih postopkov.
Uporaba in združljivost Za doseganje standardnih delovnih koncentracij raztopino razredčite v razmerju 1 : 100 v celotnem gojišču. Izdelek je združljiv s številnimi celičnimi linijami sesalcev in osnovnimi gojišči. Zaradi stalne razpoložljivosti zalog imajo raziskovalci koristi od zanesljive neprekinjene oskrbe in poenostavljenega načrtovanja logistike. Raztopino je treba hraniti pri ≤ -15 °C in jo zaščititi pred ponavljajočimi se cikli zamrzovanja in odmrzovanja, da se ohrani stabilnost. Samo za raziskovalno uporabo. Ni za uporabo v diagnostičnih ali terapevtskih postopkih. Ni za uporabo pri ljudeh ali živalih.
Prostornina: 100 ml Shranjevanje: +°C do +8 °C Sterilnost: Sterilnost: Sterilno filtrirano
MEM Non-Essential Amino Acids (100x ) je sterilno dopolnilo, zasnovano za povečanje rasti in vitalnosti celic v sistemih celičnih kultur sesalcev. Formulacija ustreza 100-kratnemu koncentratu neesencialnih aminokislin, ki jih najdemo v standardnem minimalnem esencialnem mediju (MEM), kar omogoča neposredno dodajanje osnovnih medijev z minimalno pripravo.
Uporaba in prednosti Ta dodatek zagotavlja dodatno zalogo aminokislin za hitro razmnožujoče se celice ali za celične linije, ki so izgubile sposobnost sinteze neesencialnih aminokislin de novo. Z zmanjšanjem presnovnega bremena biosinteze podpira izboljšano kinetiko rasti, podaljšano vitalnost in večjo eksperimentalno doslednost
- zlasti v kulturah, ki so občutljive na hranila, ali kulturah z visoko gostoto.
Sestava in uporaba Raztopina vsebuje glicin, L-alanin, L-asparagin, L-asparaginsko kislino, L-glutaminsko kislino, L-prolin in L-serin. Združljiva je z MEM in večino drugih standardnih medijev. Za uporabo razredčite v razmerju 1:100 v končno gojišče. Ta izdelek je sterilno filtriran in pripravljen za uporabo brez dodatnih postopkov. Samo za raziskovalno uporabo. Ni za uporabo v diagnostičnih ali terapevtskih postopkih. Ni za uporabo pri ljudeh ali živalih.
Accutase je sterilno filtrirana raztopina za ločevanje celic, pripravljena za takojšnjo uporabo, zasnovana kot nežna alternativa tripsinu/EDTA za ločevanje adhezivnih sesalskih celic s standardne plastične posode za tkivno kulturo in površin, prevlečenih z adhezivnim premazom. Združuje proteolitično in kolagenolitično encimsko aktivnost v uravnoteženi solni raztopini, da zagotovi učinkovito, a nadzorovano ločevanje, ohranja proteine na površini celic ter podpira visoko preživetje po prehodu in hitro ponovno pritrditev.
Formulacija Accutase temelji na Dulbeccovem fosfatnem pufru (DPBS) z EDTA in fenol rdečim kot vizualnim indikatorjem pH. Encimi niso živalskega ali bakterijskega izvora, zaradi česar je Accutase še posebej primeren za raziskave matičnih celic, postopke pri razvoju cepiv in vse aplikacije, kjer je treba zmanjšati onesnaževala živalskega ali mikrobiološkega izvora. Raztopina se pri 37 °C samodejno inhibira, zato po ločitvi ni potrebno nevtralizacijsko reagens ali medij, ki vsebuje serum – celice se lahko prenesejo neposredno v svež medij.
Ključne lastnosti
Pripravljena za uporabo 1x sterilno filtrirana tekočina – ni potrebno redčenje ali rekonstitucija
Kombinirana proteolitična in kolagenolitična encimska aktivnost za nežno disociacijo
Vsaka serija je standardizirana na določeno disociacijsko aktivnost za doslednost med serijami
Encimi niso živalskega ali bakterijskega izvora
Samodejna inhibicija pri 37 °C – ni potrebna nevtralizacijska raztopina
Formulirano v Dulbeccovem PBS z EDTA
Vključena fenol rdeča kot vizualni indikator pH
pH 6,8 – 7,8
Tipične uporabe
Accutase nežno razkroji široko paleto adhezivnih in občutljivih celic, vključno s človeškimi embrionalnimi izvorniškimi celicami (hESCs), človeškimi indukiranimi pluripotentnimi izvorniškimi celicami (iPSCs), nevralnimi izvorniškimi celicami, primarnimi nevroni in rutinsko gojenimi adhezivnimi linijami, kot so HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 in A549. Tipični primeri uporabe vključujejo:
Rutinsko subkultiviranje in pasiranje adhezivnih sesalskih celic
Nežno razcepjanje posameznih celic hESCs, iPSCs in drugih občutljivih linij
Priprava vzorcev za pretočno citometrijo in analizo FACS
Analizo markerjev na celični površini, kjer je pomembna integriteta epitopa
Testi migracije, proliferacije in apoptoze celic
Testi mirovanja s pomočjo pomanjkanja seruma in študije transfekcije onkogenov
Testi migracije tumorskih celic in celic nevralnega grebena
Povečanje proizvodnje v delovnih tokovih bioreaktorjev
Za rutinsko delo nanesite približno 10 ml Accutase na 75 cm2 površine kulture in inkubirajte 5–10 minut pri sobni temperaturi. Optimalni čas inkubacije je treba določiti za vsako celično linijo in ne sme presegati ene ure. Pred dodajanjem sperite celični sloj z raztopino soli brez Ca2+/Mg2+, kot je DPBS brez kalcija in magnezija, da odstranite ostanke seruma in dvovalentne katione.
Ravnanje in shranjevanje
Neodprto stekleničko shranjujte zamrznjeno pri -15 °C ali nižji temperaturi. Odtalite pri sobni temperaturi ali čez noč pri +2 °C do +8 °C. Accutase ne odtaljujte v vodni kopeli pri 37 °C, saj višje temperature zmanjšujejo encimsko aktivnost. Po odtalitvi se raztopina lahko shranjuje do 2 mesecev pri +2 °C do +8 °C; ne shranjujte pri sobni temperaturi. Reagenta pred uporabo ne segrevajte na 37 °C – dodajte ga neposredno na oprane celice pri sobni temperaturi. Za daljšo rok uporabnosti priporočamo razdelitev v enkratne odmerke, da se izognete ponavljajočim se ciklom odmrzovanja. Vedno delajte v aseptičnih pogojih.
Kakovost
Izdelano v skladu s strogimi standardi kakovosti. Vsaka serija Accutase je sterilno filtrirana in testirana na sterilnost, pH, videz in disociacijsko aktivnost, da se zagotovi dosledna, ponovljiva učinkovitost med serijami.
Specifikacije izdelka
Specifikacija
Podrobnosti
Vrsta izdelkaReagent za ločevanje/disociacijo celic
OblikaSterilno filtrirana tekočina, pripravljena za uporabo
Količina100 ml
Delovna koncentracija1x (pripravljeno za uporabo)
Encimska aktivnostKombinirana proteolitična in kolagenolitična
Izvor encimovNesestavljen iz sesalcev in bakterij
Puferski sistemDulbeccov PBS z EDTA
Indikator pHFenol rdeča
Območje pH6,8 – 7,8
VidezBistra, bledo rdeča do oranžna raztopina
Temperatura shranjevanja-15 °C ali manj
Stabilnost po odmrzovanjuDo 2 mesecev pri temperaturi od +2 °C do +8 °C
Priporočena količina za uporabo~10 ml na 75 cm2 površine kulture
Tipični čas inkubacije5–10 minut pri sobni temperaturi
Pogoji za pošiljanjeZamrznjeno na suhem ledu
Namen uporabeSamo za raziskovalne namene in nadaljnjo proizvodnjo
Formulacija (sestava na liter)
Sestavina
Koncentracija (mg/l)
Anorganske soli
Natrijev klorid (NaCl)8000,00
Dinatrijev hidrogenfosfat (Na2HPO4)1150,00
Kalijev klorid (KCl)200,00
Kalijev dihidrogenfosfat (KH2PO4)200,00
Druge sestavine
EDTA · 4Na (tetranatrijev EDTA)220,00
Fenol rdeča3,00
Lastniška mešanica encimov (proteolitična in kolagenolitična aktivnost)1x
Accutase je registrirana blagovna znamka podjetja Innovative Cell Technologies, Inc.
Ta tekoča formulacija, pripravljena za uporabo in sterilizirana s filtriranjem, je dopolnjena z Earleovo uravnoteženo solno raztopino (EBSS), 2 mM L-glutaminom, D-glukozo (1,0 g/l) in 2,2 g/l natrijevim bikarbonatom (NaHCO3), zaradi česar je primerna za uporabo v inkubatorju z nadzorovano vsebnostjo CO2 (običajno 5 % CO2). Vključeni fenol rdeč deluje kot indikator pH, kar omogoča priročno vizualno spremljanje stanja gojišča med celično kulturo.
Ključne lastnosti
Klasična formulacija Eagle's MEM z Earle's Balanced Salt Solution (EBSS)
Vključena 2 mM L-glutamina – pripravljeno za takojšnjo uporabo
2,2 g/l natrijevega bikarbonata – pufrirano za inkubacijo s 5 % CO2
Z D-glukozo (1,0 g/l) kot primarnim virom ogljika
Z fenol rdečo kot indikatorjem pH
Brez HEPES in brez natrijevega piruvata
Sterilno filtrirano tekoče gojišče, pripravljeno za uporabo
pH 7,0 – 7,6
Tipične uporabe
EMEM podpira gojenje široke palete celičnih linij sesalcev, vključno z HeLa, HEK 293, Vero, MRC-5, L-929, BHK-21 in številnimi primarnimi celicami. Pogoste uporabe vključujejo:
Rutinsko vzdrževanje in razmnoževanje adhezivnih celičnih linij
Delovni postopki za razmnoževanje virusov in proizvodnjo cepiv
Uporabe na področju citotoksičnosti in bioloških testov
Študije transfekcije in izražanja beljakovin
Temeljne raziskave v celični biologiji in molekularni biologiji
Za optimalno rast celic se EMEM običajno dopolni z 5–10 % fetalnega govejega seruma (FBS) in, odvisno od celične linije, z neesencialnimi aminokislinami (NEAA) ter antibiotiki, kot sta penicilin in streptomicin.
Ravnanje in shranjevanje
Neodprto steklenico shranjujte pri temperaturi od +2 °C do +8 °C, zaščiteno pred svetlobo. Po odprtju uporabljajte v aseptičnih pogojih. L-glutamin v raztopini se postopoma razgrajuje – za najboljše rezultate priporočamo, da medij porabite v 4 tednih po odprtju ali da ga pred uporabo dopolnite s svežim L-glutaminom, če ga shranjujete dalj časa. Pred dodajanjem celicam pustite, da se medij segreje na 37 °C.
Kakovost
Proizvedeno v skladu s strogimi standardi kakovosti. Vsaka serija je testirana na sterilnost, pH, osmolalnost in raven endotoksinov, da se zagotovi dosledna učinkovitost pri uporabi v celičnih kulturah.
Tehnične specifikacije
Specifikacija
Podrobnosti
Vrsta izdelkaMEM
Kategorija izdelkaGojilna sredstva za celice
OblikaTekočina
SterilnoDa
Velikost500 ml
L-glutaminZ L-glutaminom (2 mM)
GlukozaZ glukozo (1,0 g/l)
Natrijev bikarbonatZ NaHCO3 (2,2 g/l)
HEPESBrez HEPES
Natrijev piruvatBrez natrijevega piruvata
Fenol rdečaZ fenol rdečo
Solna raztopinaEarleova uravnotežena solna raztopina (EBSS)
pH7,0 – 7,6
Vsebnost endotoksinovNi določeno
Shranjevanje+2 °C do +8 °C
Formulacija (sestava na liter)
Sestavina
Koncentracija (mg/l)
Anorganske soli
Kalcijev klorid · 2H2O265,00
Magnezijev sulfat97,72
Kalijev klorid400,00
Natrijev klorid6.800,00
Natrijev dihidrogenfosfat, brezvodni122,00
Natrijev bikarbonat (NaHCO3)2.200,00
Aminokisline
L-arginin · HCl126,00
L-cistin · 2HCl31,30
L-glutamin292,00
L-histidin · HCl · H2O42,00
L-izoleucin52,00
L-levcin52,00
L-lizin · HCl72,50
L-metionin15,00
L-fenilalanin32,00
L-treonin48,00
L-triptofan10,00
L-tirozin · 2Na · 2H2O51,90
L-valin46,00
Vitamini
D-kalcijev pantotenat1,00
Kolin klorid1,00
Folna kislina1,00
mio-inozitol2,00
Nikotinamid1,00
Piridoksal · HCl1,00
Riboflavin0,10
Tiamin · HCl1,00
Druge sestavine
D(+)-glukoza1.000,00
Fenol rdeča10,00
Ključne značilnosti Freeze Medium CM-1 vključujejo:
Široka združljivost: Učinkovita za širok spekter celičnih vrst, vključno s primarnimi celicami, matičnimi celicami in uveljavljenimi celičnimi linijami.
Visoka sposobnost preživetja: Optimizirano za čim večjo obnovo in vitalnost celic po odmrzovanju, kar zagotavlja zanesljive rezultate poskusov.
Pripravljen za uporabo: Priročno pripravljene in sterilizirane za takojšnjo uporabo, kar zmanjšuje čas priprave in tveganje kontaminacije.
Izboljšana stabilnost: Ohranja dosledno delovanje v standardnih pogojih kriokonzervacije, kar zagotavlja ponovljive rezultate.
Dolg rok trajanja: CM-1 je za uporabo pripravljen medij za kriokonzervacijo, ki vsebuje serum in se lahko v hladilniku hrani do enega leta.
Uporaba CM-1 za zamrzovanje celic
Če želite uporabiti CM-1 za zamrzovanje adherentnih in suspenzijskih celic, sledite naslednjim korakom
Pri adherentnih celicah jih sperite in ločite od podlage za gojenje. Za suspenzijske celice nadaljujte neposredno z naslednjim korakom.
Preštejte celice, da zagotovite njihovo ustrezno koncentracijo.
Celice centrifugirajte, da jih oprašite, nato jih ponovno suspendirajte v gojišču za zamrzovanje CM-1.
Resuspendirane celice prenesite v kriovile.
Pred prenosom celic v dolgoročno skladiščenje uporabite metodo počasnega zamrzovanja
Metoda
Opis
Koraki
❄️
Ročno zamrzovanje
Postopna metoda, ki vključuje postopno zniževanje temperature, da se zagotovi vitalnost celic
1️⃣ Postavite celice v gojišče za zamrzovanje v zamrzovalnik pri 4 °C za 40 minut.
2️⃣ Za 24 ur prenesite v zamrzovalnik pri -80 °C.
3️⃣ Za dolgoročno shranjevanje shranite celice v tekočem dušiku
❄️
Uporaba pripomočka Mr. Frosty
Priročna naprava, ki omogoča nadzorovano hitrost zamrzovanja brez električne energije
1️⃣ Pripravite celice v kriovile z gojiščem za zamrzovanje.
2️⃣ Kriovile postavite v posodo Mr. Frosty.
3️⃣ Pred prenosom v tekoči dušik jih 24 ur hranite pri -80 °C
❄️
Zamrzovalnik z nadzorovano hitrostjo
Zelo natančen zamrzovalnik Thermo Fisher ali drugih proizvajalcev, namenjen nadzorovanemu zniževanju temperature
1️⃣ Napravo sprogramirajte tako, da postopoma znižuje temperaturo.
2️⃣ Pripravljene celice postavite v zamrzovalnik.
3️⃣ Po ciklu zamrzovanja prenesite celice v tekoči dušik
Kriovile shranite pri temperaturi pod -130 °C ali v tekočem dušiku za dolgoročno shranjevanje.
Sestavine
Vsebuje FBS, DMSO, glukozo, soli
Pufrirna sposobnost: pH = 7,2 do 7,6
Sredstvo za zamrzovanje CM-1 podjetja Cytion ponuja zanesljivo rešitev za kriokonzervacijo, ki zagotavlja visoko vitalnost in funkcionalnost celic po odmrznitvi za širok spekter raziskovalnih aplikacij.
Medij Ham's F-12K (Kaighn's) je skrbno oblikovan za optimizacijo pogojev gojenja celic. Ima obogateno sestavo, ki zagotavlja povišane ravni bistvenih sestavin, kot so aminokisline in natrijev piruvat, ter dodatne elemente, vključno s putrescinom, timidinom, hipoksantinom in cinkom. Ti dodatki raziskovalcem omogočajo, da gojišče dopolnijo z minimalno količino seruma ali opredeljenih sestavin za določene vrste celic, kar olajša natančne eksperimentalne pogoje.
Medij Ham's F-12K (Kaighn's) ne vsebuje proteinov ali rastnih faktorjev. Zato je pogosto potrebno dodajanje rastnih faktorjev in fetalnega govejega seruma (FBS), kar raziskovalcem omogoča, da gojišče prilagodijo zahtevam svojih specifičnih celičnih linij. Za optimalno delovanje je treba koncentracijo FBS skrbno optimizirati za vsako celično linijo ter tako zagotoviti optimalno rast in delovanje.
Za vzdrževanje fiziološkega pH je v mediju Ham's F-12K (Kaighn's) uporabljen pufrski sistem natrijevega bikarbonata (2,5 g/L), zaradi česar je med gojenjem potrebno nadzorovano okolje s 5-10 % CO2. To zagotavlja, da pH gojišča ostaja v idealnem območju za rast in sposobnost preživetja celic
Nadzor kakovosti
pH = 7,2 +/
- 0,02 pri 20-25 °C.
Vsaka serija je bila testirana na sterilnost ter odsotnost mikoplazme in bakterij.
Vzdrževanje
Hranite v hladilniku pri temperaturi od +2 °C do +8 °C v temi. Zamrzovanje in segrevanje do +37 °C zmanjšujeta kakovost izdelka.
Medija ne segrevajte na več kot 37 °C in ne uporabljajte nenadzorovanih virov toplote (npr. mikrovalovnih naprav).
Če želite uporabiti le del medija, to količino odstranite iz stekleničke in jo segrejte pri sobni temperaturi.
Rok trajanja za katero koli gojišče razen osnovnega gojišča je 8 tednov od datuma izdelave.
Sestava
Sestavine
mg/L
Anorganske soli
Kalcijev klorid x 2H2O
135,24
Bakrov(II) sulfat x 5H2O
0,00
Železov (II) sulfat x 7H2O
0,83
Magnezijev klorid x 6H2O
105,72
Magnezijev sulfat x 7H2O
394,49
Kalijev klorid
283,29
Kalijev dihidrogenfosfat
58,52
Natrijev klorid
7597,20
natrijev vodikov fosfatbrezvodni
115,02
Cinkov sulfat x 7H2O
0,14
Druge sestavine
D(+)-glukoza, brezvodna
1260,00
Hipoksantin
4,08
DL-α-lipojska kislina
0,21
Fenol rdeče
3,00
Putrescin x 2HCl
0,32
Natrijev piruvat
220,00
NaHCO3
2500,00
Timidin
0,73
Aminokisline
L-alanin
17,82
L-arginin x HCl
421,40
L-asparagin x H2O
30,02
L-asparaginska kislina
26,62
L-cistein x HCl x H2O
70,24
L-glutamin
292,20
L-glutaminska kislina
29,42
Glicin
15,01
L-histidin x HCl x H2O
41,92
L-izolevcin
7,87
L-levcin
26,24
L-lizin x HCl
73,04
L-metionin
8,95
L-fenilalanin
9,91
L-prolin
69,06
L-serin
21,02
L-treonin
23,82
L-triptofan
4,08
L-tirozin
10,87
L-valin
23,42
Vitamini
D(+)-biotin
0,07
D-kalcijev pantotenat
0,48
Holin klorid
13,96
Folna kislina
1,32
mio-nizitol
18,02
Nikotinamid
0,04
Piridoksin x HCl
0,06
Riboflavin
0,04
Tiamin x HCl
0,34
Vitamin B12
1,36
S fosfatom puferirana fiziološka raztopina (PBS) je široko uporabljena puferska raztopina v bioloških in kemijskih raziskavah. Ima ključno vlogo pri ohranjanju ravnovesja pH in osmolarnosti med različnimi eksperimentalnimi postopki, vključno z obdelavo tkiv in gojenjem celic. Naša raztopina PBS je skrbno pripravljena iz sestavin visoke čistosti, kar zagotavlja stabilnost in zanesljivost pri vsakem poskusu. Osmolarnost in koncentracije ionov v naši raztopini PBS natančno posnemajo tiste v človeškem telesu, zato je izotonična in nestrupena za večino celic.
Sestava naše raztopine PBS
Naša raztopina PBS je mešanica fosfatnih pufrov in fizioloških raztopin ultračiste kakovosti, ki ji je prilagojen pH. V 1-kratni delovni koncentraciji vsebuje:
8000 mg/L natrijevega klorida (NaCl)
200 mg/L kalijev klorid (KCl)
1150 mg/L natrijev fosfat dvodazni brezvodni (Na2HPO4)
200 mg/L Kalijev fosfat enobazni brezvodni (KH2PO4)
Ta sestava zagotavlja optimalno pH in ionsko ravnovesje, primerno za širok spekter bioloških aplikacij.
Uporaba naše raztopine PBS
Naša raztopina PBS je idealna za različne aplikacije v bioloških raziskavah. Zaradi izotoničnih in netoksičnih lastnosti je primerna za redčenje snovi in izpiranje celičnih posod. Raztopine PBS, ki vsebujejo EDTA, so učinkovite za odstranjevanje pritrjenih in zlepljenih celic. Vendar se PBS ne sme dodajati dvovalentnih kovin, kot je cink, saj lahko povzroči obarjanje. V takih primerih se priporočajo Goodovi pufri. Poleg tega je naša raztopina PBS sprejemljiva alternativa mediju za prenos virusov za prenos in shranjevanje virusov RNA, vključno z virusom SARS-CoV-2.
Nadzor kakovosti
Sterilno filtriran
Shranjevanje in rok uporabnosti
Shranjujte pri temperaturi od +2 °C do +25 °C, zaščiteni pred svetlobo.
Po odprtju hranite pri temperaturi od 2 °C do 25 °C in porabite v 24 mesecih.
Pogoji pošiljanja
Temperatura okolja
Vzdrževanje
Hranite v hladilniku pri temperaturi od +2 °C do +8 °C v temi. Izogibajte se zamrzovanju in pogostemu segrevanju na +37 °C, saj to zmanjša kakovost izdelka.
Medija ne segrevajte nad 37 °C in ne uporabljajte nenadzorovanih virov toplote, kot so mikrovalovne naprave.
Če želite uporabiti le del medija, pred uporabo odstranite potrebno količino in jo segrejte na sobno temperaturo.
Sestava
Kategorija
Sestavine
Koncentracija (mg/L)
Soli
Kalijev klorid
200
Kalijev fosfat monobazni brezvodni
200
Natrijev klorid
8000
Natrijev fosfat dvobazni brezvodni
1150
Sredstvo RPMI 1640, ki je bilo sprva zasnovano za podporo rasti človeških levkemičnih celic v suspenzijskih in enoslojnih kulturah, se je z modifikacijami raziskovalcev in komercialnih dobaviteljev razvilo in postalo primerno za različne celice sesalcev. Izjemno je združljivo s celičnimi linijami, kot so HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrociti in karcinomi.
Medij RPMI 1640 se zaradi svoje edinstvene sestave razlikuje od drugih medijev za celične kulture. Vsebuje veliko količino fosfatov, aminokislin in vitaminov. Predvsem vsebuje biotin, vitamin B12 in PABA, ki jih ni v Eaglovem minimalnem esencialnem mediju ali Dulbeccovem modificiranem mediju Eagle. Poleg tega ima RPMI 1640 Medium znatno povišane koncentracije vitaminov inozitola in holina. Vendar ne vsebuje beljakovin, lipidov ali rastnih dejavnikov. Zato je za zagotovitev optimalnih pogojev za rast celic običajno potrebno dodajanje 10 % fetalnega govejega seruma (FBS).
Pufrirni sistem medija RPMI 1640 temelji na natrijevem bikarbonatu in za vzdrževanje fiziološko primernega pH potrebuje 5-10 % CO2. Vključitev reducenta glutationa še dodatno razlikuje to gojišče od drugih.
Nadzor kakovosti
Sterilno filtriran
Shranjevanje in rok trajanja
Shranjujte pri temperaturi od +2 °C do +8 °C, zaščiteno pred svetlobo.
Po odprtju hranite pri 4 °C in porabite v 6-8 tednih.
Pogoji pošiljanja
Temperatura okolja
Vzdrževanje
Hranite v hladilniku pri temperaturi od +2 °C do +8 °C v temi. Izogibajte se zamrzovanju in pogostemu segrevanju na +37 °C, saj to zmanjša kakovost izdelka.
Medija ne segrevajte nad 37 °C in ne uporabljajte nenadzorovanih virov toplote, kot so mikrovalovne naprave.
Če želite uporabiti le del medija, pred uporabo odstranite potrebno količino in jo segrejte na sobno temperaturo.
Sestava
Kategorija
Sestavine
Koncentracija (mg/L)
Aminokisline
Glicin
10.00
L-alanil-L-glutamin
434.40
L-arginin
200.00
L-asparaginH2O
56.82
L-asparaginska kislina
20.00
L-cistin 2HCl
65.20
L-glutaminska kislina
20.00
L-histidin HClH2O
20.27
L-hidroksi-L-prolin
20.00
L-izolevcin
50.00
L-levcin
50.00
L-lizin HCl
40.00
L-metionin
15.00
L-fenilalanin
15.00
L-prolin
20.00
L-serin
30.00
L-treonin
20.00
L-triptofan
5.00
L-tirozin 2Na 2H2O
28.83
L-valin
20.00
Vitamini
p-aminobenzojska kislina
1.00
D-biotin
0.20
Holin klorid
3.00
D-kalcijev pantotenat
0.25
Folna kislina
1.00
mio-nizitol
35.00
Nikotinamid
1.00
Piridoksin HCl
1.00
Riboflavin
0.20
Tiamin HCl
1.00
Vitamin B12
0.005
Anorganske soli
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Druge sestavine
D-glukoza
2000.00
Reducirani L-glutation
1.00
Natrijeva sol fenol rdečega
5.30
Ta edinstvena formulacija združuje Dulbeccov modificiran Eagleov medij (DMEM) in Hamov F-12 (Hamova mešanica hranil F-12) v natančnem razmerju 1:1. Dodatek L-glutamina dodatno izboljša njegovo sestavo.
DMEM, ki izhaja iz Eagleovega minimalnega esencialnega medija (EMEM), ponuja višjo koncentracijo aminokislin in vitaminov v primerjavi s svojim predhodnikom. Nasprotno pa Hamov F-12 temelji na Hamovem F-10 mediju in zagotavlja dopolnilni nabor esencialnih sestavin.
Za podporo optimalne rasti celic je običajna praksa, da se DMEM:Ham's F12 dopolni s FBS v tipični koncentraciji 5–10 %. Ta dodatek je potreben, saj mediju primanjkuje rastnih hormonov, lipidov in beljakovin, ki so ključni za celični razvoj.
DMEM:Ham's F12 vključuje sistem za uravnavanje pH in se pogosto dopolnjuje s fenol rdečim, indikatorjem pH. Gojene celice v DMEM:Ham's F12 ali katerem koli mediju, ki uporablja bikarbonatni puferski sistem, zahtevajo nadzorovano okolje s 5–10 % CO2 za ohranjanje ustreznih ravni pH.
Kontrola kakovosti
Sterilno filtrirano
Shranjevanje in rok uporabnosti
Shranjujte pri temperaturi od +2 °C do +8 °C, zaščiteno pred svetlobo.
Po odprtju shranjujte pri 4 °C in porabite v 6–8 tednih.
Pogoji za pošiljanje
Temperatura okolja
Vzdrževanje
Hranite v hladilniku pri temperaturi od +2 °C do +8 °C v temi. Izogibajte se zamrzovanju in pogostemu segrevanju na +37 °C, saj to zmanjša kakovost izdelka.
Medija ne segrevajte nad 37 °C in ne uporabljajte nekontroliranih virov toplote, kot so mikrovalovne pečice.
Če nameravate uporabiti le del gojišča, odvzemite potrebno količino in jo pred uporabo segrejte na sobno temperaturo.
Sestava
Kategorija
Sestavine
Koncentracija (mg/l)
Aminokisline
Glicin
18,75
L-alanin
4,45
L-arginin HCl
147,50
L-asparagin H₂O
7,50
L-asparaginska kislina
6,65
L-cistein HCl H₂O
17,56
L-cistin 2 HCl
31,29
L-glutaminska kislina
7,35
L-glutamin
365,00
L-histidin HCl H₂O
31,48
L-izoleucin
54,47
L-levcin
59,05
L-lizin HCl
91,25
L-metionin
17,24
L-fenilalanin
35,48
L-prolin
17,25
L-serin
26,25
L-treonin
53,45
L-triptofan
9,02
L-tirozin 2 Na 2 H2O
55,79
L-valin
52,85
Vitamini
D-biotin
0,0035
Holin klorid
8,98
D-kalcijev pantotenat
2,24
Folna kislina
2,66
mio-inozitol
12,60
Nikotinamid
2,02
Piridoksin HCl
0,031
Piridoksal HCl
2,00
Riboflavin
0,219
Tiamin HCl
2,17
Vitamin B12
0,68
Anorganske soli
CaCl2 2 H2O
154,50
CuSO4 5 H2O
0,0013
Fe(NO3)3 9 H2O
0,05
FeSO4 7 H2O
0,417
KCl
311,80
MgCl2 6 H2O
61,20
MgSO4 7 H2O
100,00
NaCl
6996,00
NaHCO3
1200,00
Na2HPO4
71,02
NaH2PO4 2 H2O
70,87
ZnSO4 7 H2O
0,432
Druge sestavine
D-glukoza
3151,00
Hipoksantin
2,40
HEPES
3574,50
Linolna kislina
0,042
Lipoična kislina
0,105
Fenol rdeča natrijeva sol
8,63
Putrescin 2 HCl
0,081
Natrijev piruvat
55,00
Timidin
0,365
- 0,02 pri 20–25 °C. Vsaka serija je bila testirana na sterilnost in odsotnost mikoplazme in bakterij. Hranjenje Hranite v hladilniku pri temperaturi +2 °C do +8 °C na temnem mestu. Zamrzovanje in segrevanje do +37 °C zmanjšata kakovost izdelka. Sredstva ne segrevajte na več kot 37 °C in ne uporabljajte nekontroliranih virov toplote (npr. mikrovalovne pečice). Če nameravate uporabiti le del gojišča, vzemite to količino iz steklenice in jo segrejte na sobni temperaturi. Rok uporabnosti za vsa gojišča razen osnovnega gojišča je 6 do 8 tednov od datuma odprtja. Sestava Sestavine mg/L Anorganske soliKalcijev klorid x 2H2O132,00 Magnezijev sulfat97,6 Kalijev klorid40 Natrijev klorid6.460 Dinatrijev hidrogen fosfat (brezvodni)504,00 Druge sestavineD(+)-glukoza (brezvodna)3.000 Glutation (zmanjšan)0 Meso peptone600,00 Fenol rdeča natrijeva sol11 AminokislineL-alanin13,36 L-arginin x HCl42,14 L-asparagin x H2O45,03 L-asparaginska kislina19,97 L-cistein x HCl x H2O31,75 L-glutamin (stabilen)219,15 L-glutaminska kislina22,07 Glicin7,5 L-histidin x HCl x H2O20,96 L-hidroksiprolin19,67 L-izolevcin39,3 L-levcin39,36 L-lizin x HCl36,54 L-metionin14,92 L-fenilalanin16,52 L-Prolin17,27 L-serin26,28 L-treonin17,87 L-triptofan3,06 L-tirozin dinatrijeva sol26,10 L-valin17,57 Vitaminip-Aminobenzojska kislina1,0 Askorbinska kislina0,56 D(+)-biotin0,2 D-kalcijev pantotenat0,2 Holin klorid5 Folna kislina10 Mio-inozitol36 Nikotinamid0 Nikotinska kislina0,5 Piridoksal HCl0,5 Piridoksin HCl0,5 Riboflavin0,2 Tiamin HCl0,2 Vitamin B122,0
Medij 199 ponuja vrsto aplikacij na tem področju. Učinkovito lahko vzdržuje kompleks kumulus-oocit (COC) in podpira zorenje jajčnih celic in vitro. Poleg tega se uporablja pri izpiranju aspiracijskih linij med zbiranjem jajčec pri nemških kravah holstein. Poleg tega je medij 199 odlično gojišče za gojenje srčnih endotelijskih celic, pridobljenih iz podgan. Te uporabe dokazujejo vsestranskost in prilagodljivost medija 199 različnim eksperimentalnim potrebam.
Zgodovina
Razvoj medija 199 v petdesetih letih prejšnjega stoletja je pomenil pomemben napredek na področju gojišč za tkivne kulture. Pred njegovo uvedbo je bilo veliko gojišč odvisnih od proizvodov živalskega izvora in tkivnih izvlečkov. Vendar so Morgan in sodelavci naredili revolucijo na tem področju, saj so oblikovali popolnoma določen vir hranil za celične kulture. S poskusi z različnimi kombinacijami vitaminov, aminokislin in drugih dejavnikov so odkrili izjemne lastnosti medija 199, ki spodbujajo rast.
Nadzor kakovosti
pH = 7,2 +/
- 0,02 pri 20-25 °C.
Vsaka serija je bila testirana na sterilnost ter odsotnost mikoplazme in bakterij.
Vzdrževanje
Hranite v hladilniku pri temperaturi od +2 °C do +8 °C v temi. Zamrzovanje in segrevanje do +37 °C zmanjšujeta kakovost izdelka.
Medija ne segrevajte na več kot 37° C in ne uporabljajte nenadzorovanih virov toplote (npr. mikrovalovne naprave).
Če želite uporabiti le del medija, to količino odstranite iz stekleničke in jo segrejte pri sobni temperaturi.
Rok trajanja za vsa gojišča, razen za osnovno gojišče, je 8 tednov od datuma izdelave.
Sestava
Sestavine
mg/L
Anorganske soli
Kalcijev klorid x 2H2O
264,92
Železov (III) nitrat x 9H2O
0,72
Magnezijev sulfat
97,67
Kalijev klorid
400,00
Natrijev acetat x 3H2O
82,95
Natrijev klorid
6,800.00
Natrijev dihidrogenfosfat x H2O
140,00
Druge sestavine
Adenin sulfat
10,00
AMP
0,20
ATP
1,00
Holesterol
0,20
2'-Deoksiriboza
0,50
D(+)-glukoza brezvodna
1,000.00
Glutation (rdeč)
0,05
Guanin x HCl
0,30
Hipoksantin
0,30
Fenol rdeče
10,00
D-riboza
0,50
Timin
0,30
Tween 80
4,90
Uracil
0,30
Ksantin
0,30
NaHCO3
2,200.00
Aminokisline
L-alanin
25,00
L-arginin x HCl
70,00
L-asparaginska kislina
30,00
L-cistein x HCl x H2O
0,10
L-cistin
20,00
Stabilen L-glutamin
149,00
L-glutaminska kislina
67,00
Glicin
50,00
L-histidin x HCl x H2O
21,88
L-hidroksiprolin
10,00
L-izolevcin
20,00
L-levcin
60,00
L-lizin x HCl
70,00
L-metionin
15,00
L-fenilalanin
25,00
L-prolin
40,00
L-serin
25,00
L-treonin
30,00
L-triptofan
10,00
L-tirozin
40,00
L-valin
25,00
Vitamini
4-amino benzojska kislina
0,05
Askorbinska kislina
0,05
D(+)-biotin
0,01
Kalciferol
0,10
D-kalcijev pantotenat
0,01
Holin klorid
0,50
Folna kislina
0,01
mio-nizitol
0,05
Menadion
0,01
Nikotinska kislina
0.025
Nikotinamid
0.025
Piridoksal x HCl
0.025
Piridoksol x HCl
0.025
Riboflavin
0,01
DL-α-tokoferol fosfat dinatrijeva sol
0,01
Tiamin x HCl
0,01
Vitamin A acetat
0,14
IMDM je primeren za hitro razmnožujoče se celične kulture z veliko gostoto, vključno s celicami Jurkat, COS-7 in makrofagi. Različne modifikacije IMDM, ki so na voljo za različne načine uporabe v celičnih kulturah, lahko poiščete z orodjem za izbiro medijev. Tekoča gojišča zagotavljajo bistvena hranila za vse aplikacije celičnih kultur. Vsako naše visokokakovostno gojišče za celične kulture je izdelano v skladu s prvotno objavljeno formulo ali modifikacijami, potrebnimi za dosledno delovanje in stabilnost gojišča.
IMDM proti DMEM
IMDM vsebuje kalijev nitrat namesto železovega nitrata ter HEPES in natrijev piruvat. Zaradi dodatnih sestavin v IMDM je primernejši za specializirane tipe celic in posebne aplikacije kot DMEM.
IMDM proti RPMI
IMDM in RPMI imata različne sestave, ki so lahko pomembne za stimulacijo s PMA/ionomicinom. Ena od pomembnih razlik je koncentracija Ca2+. RPMI vsebuje 0,42 mM Ca2+, IMDM pa 1,49 mM.
Nadzor kakovosti
pH = 7,2 +/
- 0,02 pri 20-25 °C.
Vsaka serija je bila testirana na sterilnost ter odsotnost mikoplazme in bakterij.
Vzdrževanje
Hranite v hladilniku pri temperaturi od +2 °C do +8 °C v temi. Zamrzovanje in segrevanje do +37 °C zmanjšujeta kakovost izdelka.
Medija ne segrevajte na več kot 37° C in ne uporabljajte nenadzorovanih virov toplote (npr. mikrovalovne naprave).
Če želite uporabiti le del medija, to količino odstranite iz stekleničke in jo segrejte pri sobni temperaturi.
Rok trajanja za vsa gojišča, razen za osnovno gojišče, je 8 tednov od datuma izdelave.
Sestava
Sestavine
mg/L
Anorganske soli
Kalcijev klorid x 2 H2O
219,00
Kalijev klorid
330,00
Kalijev nitrat
0.076
Brezvodni magnezijev sulfat
97,73
Natrijev klorid
4,505.00
Brezvodni natrijev dihidrogenfosfat
109,00
Natrijev selenit
0,02
Druge sestavine
D(+)-glukoza, brezvodna
4,500.00
HEPES
5,958.00
Natrijev piruvat
110,00
Fenol rdeče
15,00
Aminokisline
L-alanin
25,00
L-arginin x HCl
84,00
L-asparagin x H2O
25,00
L-asparaginska kislina
30,00
L-cistin x 2HCl
91,24
L-glutamin
584,00
L-glutaminska kislina
75,00
Glicin
30,00
L-histidin x HCl x H2O
42,00
L-izolevcin
104,80
L-levcin
104,80
L-lizin x HCl
146,20
L-metionin
30,00
L-fenilalanin
66,00
L-prolin
40,00
L-serin
42,00
L-treonin
95,20
L-triptofan
16,00
L-tirozin x 2Na
104,20
L-valin
93,60
Vitamini
D(+)-biotin
0.013
D-kalcijev pantotenat
4,00
Holin klorid
4,00
Folna kislina
4,00
mio-nizitol
7,20
Gojilna sredstva za celice: pregled
Na področju življenjskih znanosti je ena najpomembnejših metodologij celična kultura. Izraz »celična kultura« pomeni odvzem celic, tkiv ali organov iz živali ali rastline in njihovo naknadno vsaditev v umetno okolje, ki je ugodno za njihovo preživetje in/ali rast. Osnovne okoljske potrebe za optimalni razvoj celic so nadzorovana temperatura, substrat za pritrditev celic, ustrezen gojišče in inkubator, ki vzdržuje optimalno vrednost pH in osmolalnost. Celice morajo imeti te pogoje, da lahko zrastejo do svojega polnega potenciala.
Izbira ustreznega gojišča za gojenje in vitro je tista faza v celični kulturi, ki je hkrati najbolj kritična in najbolj pomembna. Rastno gojišče, znano tudi kot gojišče, je tekočina ali gel, zasnovan za spodbujanje razvoja organizmov na mikroskopski, celični ali rastlinski ravni. Gojišče, ki se uporablja za gojenje celic, pogosto vsebuje zadostno količino energije in snovi, ki uravnavajo celični cikel. Glavne sestavine gojišča so aminokisline, vitamini, anorganske soli, glukoza in serum. Serum se doda gojišču, ker deluje kot vir rastnih faktorjev, hormonov in faktorjev za pritrditev. Poleg zagotavljanja hranilnih snovi gojišče prispeva tudi k ohranjanju ravni pH in osmolalnosti.
Vrste gojišč, ki se uporabljajo v celični kulturi
Tako človeške kot živalske celice je mogoče gojiti v umetnem ali sintetičnem gojišču ali v povsem naravnem gojišču, ki je dopolnjeno z naravnimi elementi. V nadaljevanju vam bomo podali pregled različnih vrst gojišč, ki so trenutno na voljo.
Naravna gojišča
V naravnih gojiščih se nahajajo le biološke tekočine, ki obstajajo v naravnem stanju. Naravna gojišča so zelo koristna in enostavna za gojenje široke palete živalskih celic. Pomanjkanje razumevanja natančnih sestavin, iz katerih so sestavljena naravna gojišča, je glavni dejavnik, ki prispeva k nizki ponovljivosti rezultatov, pridobljenih z uporabo naravnih gojišč.
Umetna gojišča
Priprava umetnih ali sintetičnih gojišč vključuje dodajanje hranil (tako organskih kot anorganskih), serumskih beljakovin, ogljikovih hidratov, kofaktorjev, vitaminov in soli ter plinskih faz O₂ in CO₂ [1].
Razvite so bile različne vrste umetnih gojišč, da bi izpolnile eno ali več naslednjih funkcij: 1) Takojšnje preživetje (uravnotežena solna raztopina z natančno vrednostjo pH in osmotskim tlakom). 2) Podaljšano preživetje (uravnotežena solna raztopina, dopolnjena z različnimi formulacijami organskih kemikalij in/ali seruma). 3) Neomejen razvoj. 4) Specializirane funkcije.
Obstajajo štiri različne klasifikacije umetnih gojišč:
Gojilna sredstva, ki vsebujejo serum
Najpogostejša vrsta dodatka v gojiščih za gojenje živalskih celic je goveji fetalni serum. V gojišče se dodaja kot cenovno ugoden dodatek, da se dosežejo najboljši možni pogoji za rast. Poleg tega, da deluje kot prenašalec ali kelator za hranilne snovi, ki so nestabilne ali netopne v vodi, hormone in rastne faktorje, zaviralce proteaz ter druge snovi, serum tudi veže in nevtralizira škodljive molekule.
Gojilna podlaga brez seruma
Prisotnost seruma v gojiščih ima številne slabosti in lahko povzroči resne napake pri interpretaciji rezultatov v imunoloških raziskavah [2, 3]. Razviti so bili različni gojišča brez seruma [4, 5]. Ta gojišča so na splošno posebej zasnovana za podporo gojenja enega samega tipa celic, kot sta na primer Knockout Serum Replacement in Knockout DMEM podjetja Thermo Fisher Scientific ter gojišče mTESR podjetja Stem Cell Technologies [6] za izvorne celice [7].
Poleg tega ta gojišča vsebujejo določene količine prečiščenih rastnih faktorjev, lipoproteinov in drugih beljakovin, ki jih sicer običajno zagotavlja serum [8]. Ta gojišča se pogosto imenujejo »definirana gojišča«, saj so sestavine, iz katerih so sestavljena, dobro razumljive.
Kemično opredeljena gojišča
Ta gojišča vsebujejo ultračiste anorganske in organske sestavine, ki niso bile onesnažene z nobeno vrsto kontaminacije. Lahko vsebujejo tudi dodatke čistih beljakovin, kot so rastni faktorji.
Genska modifikacija bakterij ali kvasovk skupaj z dodajanjem določenih maščobnih kislin, vitaminov, holesterola in aminokislin omogoča proizvodnjo njihovih sestavnih delov [9].
Gojilna podlaga brez beljakovin
Gojilna sredstva brez beljakovin so tista, ki sploh ne vsebujejo beljakovin, temveč le nebeljakovinske sestavine. V primerjavi z gojilnimi sredstvi z dodanim serumom uporaba gojilnih sredstev brez dodanih beljakovin spodbuja večjo celično proliferacijo in izražanje beljakovin ter olajša čiščenje katerega koli proizvoda, nastalega v nadaljnjem procesu [10–12]. Beljakovine niso vključene v formulacije, kot sta MEM in RPMI-1640. Vendar se lahko po potrebi doda beljakovinski dodatek.
Kulturni mediji in njihove osnovne sestavine
Komercialna gojišča so na voljo v obliki prahu ali tekočine in pogosto vsebujejo različne hranilne snovi, kot so aminokisline, glukoza, soli, vitamini in druga prehranska dopolnila.
Potrebe po teh sestavinah se razlikujejo za vsako celično linijo, te razlike pa so razlog za veliko število različnih formulacij gojišč. Vsaka sestavina ima določeno funkcijo, ki bo opisana v naslednjih odstavkih:
Puferski sistemi
Za ohranjanje optimalnih pogojev rasti je treba nadzorovati pH, kar se pogosto izvaja z enim od dveh pufrskih sistemov:
Naravni pufrski sistem
Razmerje CO₂/H₂CO₃ v atmosferi je enako razmerju v gojišču, kar ustvarja naravni pufrski mehanizem. Da bi ohranili svoj naravni pufrski mehanizem, je treba kulture gojiti v zračnem okolju z 5–10 % CO₂, kar se pogosto doseže z uporabo inkubatorja s CO₂. Ena od največjih prednosti uporabe naravnega pufra je njegova cenovna dostopnost in varnost.
HEPES
Kemično pufriranje z uporabo zwitteriona HEPES ima večjo pufrsko sposobnost v območju pH 7,2–7,4 in ne potrebuje reguliranega plinskega okolja. Za določene vrste celic je lahko večji odmerek HEPES škodljiv. Gojilna sredstva, ki vsebujejo HEPES, so prav tako veliko bolj občutljiva na fototoksične učinke fluorescenčne svetlobe [13].
Fenol rdeča
Indikator pH fenol rdeča je pogosto vključen v komercialno dostopna gojišča, kar omogoča neprekinjeno spremljanje pH. Med razmnoževanjem celic presnovki, ki jih te celice proizvajajo, povzročijo spremembo pH in s tem tudi spremembo barve gojišča. Fenol rdeča ima dvojni učinek na barvo gojišča: pri kislem pH se obarva rumeno, pri alkalnem pH pa vijolično. Pri pH 7,4, ki je optimalna vrednost za celično kulturo, se gojišče obarva fluorescenčno rdeče.
Vendar ima fenol rdeča nekaj pomanjkljivosti: prvič, fenol rdeča lahko posnema delovanje številnih steroidnih hormonov, predvsem estrogena [14]. Zato se pri preučevanju celic, občutljivih na estrogen, kot je tkivo dojke, priporoča gojišče brez fenol rdeče. Prisotnost fenol rdeče v nekaterih formulacijah brez seruma moti ravnovesje natrija in kalija. Dodajanje seruma ali govejega hipofiznega hormona v gojišča lahko nevtralizira ta učinek [15]. Tretjič, prisotnost fenol rdeče ovira detekcijo v eksperimentih s pretočno citometrijo.
Anorganske soli
Gojilna sredstva, ki vsebujejo anorganske soli, kot so natrijevi, kalijevi in kalcijevi ioni, pomagajo ohranjati osmoško ravnovesje in uravnavajo membranski potencial.
Aminokisline
Ker so aminokisline osnovne sestavine beljakovin, so bistvena sestavina vsakega gojišča za celice, ki je bilo kdaj koli zasnovano. Ker celice same ne morejo proizvajati nekaterih aminokislin, je pomembno, da gojišče vsebuje esencialne aminokisline. So potrebne za proliferacijo celic, njihova koncentracija pa določa največjo gostoto celic, ki jo je mogoče doseči. Zlasti pomembna je esencialna aminokislina L-glutamin.
L-glutamin deluje kot sekundarni vir energije za presnovo in prispeva dušik k proizvodnji NAD, NADPH in nukleotidov. Ker je L-glutamin nestabilna aminokislina, ki se s časom spremeni v obliko, ki je za celice neuporabna, jo je treba dodati gojišču.
Poleg tega se v gojišče lahko dodajo neesencialne aminokisline, da se nadomestijo tiste, ki so bile porabljene med rastnim procesom. Rast celic se pospeši in njihova vitalnost se poveča, če se gojišče dopolni z neesencialnimi aminokislinami.
Ogljikovi hidrati
Ogljikovi hidrati v obliki sladkorjev so glavni vir energije. Mnoga gojišča poleg bolj običajnih sladkorjev, kot sta glukoza in galaktoza, vsebujejo tudi maltozo in fruktozo.
Beljakovine in peptidi
Albumin, transferin in fibronektin so najpogosteje uporabljene beljakovine in peptidi. Zlasti so pomembni v gojiščih, ki ne vsebujejo seruma. Albumin, transferin, aprotinin, fetuin in fibronektin so nekatere beljakovine, ki jih lahko najdemo v serumu, ki je bogat vir beljakovin.
Albumin je glavna beljakovina v krvi, njegova naloga pa je vezanje in prenos različnih snovi, vključno z vodo, solmi, prostimi maščobnimi kislinami, hormoni in vitamini, med različnimi organi in celicami. Zmožnost albumina, da se veže na kemikalije, ga naredi za učinkovitega kandidata za odstranjevanje škodljivih spojin iz gojišča, v katerem se gojijo celice.
Aprotinin je zaščitno sredstvo v sistemih celičnih kultur, saj je stabilen pri nevtralnem in kislim pH ter odporen na visoke temperature in razgradnjo, ki jo lahko povzročajo proteolitični encimi. Zmožen je zavirati številne serinske proteaze, med drugim tudi tripsin.
Fetuin je glikoprotein, ki ga je mogoče v večjih količinah zaznati v serumu plodov in novorojenčkov v primerjavi s serumom odraslih živali. Poleg tega deluje kot zaviralec serinskih proteaz. Beljakovina fibronektin je bistvena sestavina v procesu celične adhezije. Transferin je beljakovina, ki prenaša železo in je odgovorna za dostavo železa do celičnih membran.
Maščobne kisline in lipidi
Imajo ključno vlogo v brezserumskem gojišču, kadar seruma ni.
Vitamini
Za razvoj in proliferacijo celic so potrebni številni vitamini. Celice ne morejo proizvesti zadostnih količin vitaminov, zato so ti v tkivnih kulturah nujni kot prehranska dopolnila.
V celični kulturi je serum glavni vir vitaminov; vendar se gojišča obogatijo tudi z različnimi vitamini, da so primerna za določen tip celic. Najpogosteje se za spodbujanje rasti uporabljajo vitamini skupine B.
Sledni elementi
Kemični elementi, kot so baker, cink, selen in vmesni produkti trikarboksilne kisline, so znani kot oligoelementi. Oligoelementi se pogosto dodajajo gojiščem, ki ne vsebujejo seruma, da bi nadomestili tiste, ki so običajno prisotni v serumu. Ti elementi so pomembne kemične sestavine, potrebne za zdrav razvoj celic. Mnoge biokemične reakcije so odvisne od določenih mikrohranil, na primer encimska aktivnost.
Dodatki k gojišču
Celotno gojišče, priporočeno za določene celične linije, potrebuje dodatne sestavine, ki jih v osnovnem gojišču in serumu ni. Ti dodatki podpirajo rast celic in ustrezno presnovno delovanje.
Čeprav so hormoni, rastni faktorji in signalne molekule bistveni za ustrezno proliferacijo določenih celičnih linij, je treba vedno upoštevati naslednje previdnostne ukrepe: Ker lahko dodajanje dodatkov spremeni osmolalnost celotnega gojišča, kar lahko zavira razvoj celic, je vedno priporočljivo preveriti osmolalnost po dodajanju dodatkov. Za večino celičnih linij se optimalna osmolalnost giblje med 260 in 320 mOSM/kg.
Antibiotiki
Antibiotiki se pogosto uporabljajo za zaviranje razvoja bakterijskih in glivičnih onesnaževalcev [16], čeprav niso nujni za rast celic. Ker lahko antibiotiki prikrijejo okužbo z mikoplazmo in odpornimi bakterijami, se njihova rutinska uporaba v celičnih kulturah ne priporoča [17, 18].
Poleg tega lahko antibiotiki motijo presnovo preobčutljivih celic. Pogosto se uporabljajo kombinacije penicilina in streptomicina proizvajalcev MilliporeSigma in Life Technologies. Plasmocin se je uporabljal pri gojenju celičnih linij gliomov TS603, TS516 in BT260 [19], pri čemer se je izkazal za učinkovitega pri odstranjevanju okužbe z mikoplazmo (20).
Serum
V serumu so prisotni albumini, rastni faktorji in zaviralci rasti. Serum je ena najpomembnejših sestavin gojišča za celice, saj zagotavlja aminokisline, beljakovine, vitamine (zlasti maščobotopne vitamine, kot so A, D, E in K), ogljikove hidrate, lipide, hormone, rastne faktorje, minerale in oligoelemente.
Za spodbujanje razvoja gojenih celic se pogosto uporablja serum iz govejih plodov in telet. Plodni serum je bogat vir rastnih faktorjev in je primeren za kloniranje celic ter razvoj občutljivih celic. Zaradi zmanjšanih sposobnosti spodbujanja rasti se teletni serum uporablja v poskusih z zaviranjem stika. Običajna gojišča pogosto vsebujejo od 2 % do 10 % seruma. Dodajanje seruma v gojišče služi naslednjim namenom [21]:
-
Serum zagotavlja celicam nujna hranila (tako v raztopini kot vezana na beljakovine).
-
Serum vsebuje več rastnih faktorjev in hormonov, ki sodelujejo pri spodbujanju rasti in specializirani celični aktivnosti.
-
Vsebuje veliko vezavnih beljakovin, kot sta albumin in transferin, ki v celico prenašajo druge kemikalije. Albumin na primer v celice prenaša maščobe, vitamine, hormone itd.
-
Prav tako zagotavlja beljakovine, kot je fibronektin, ki povečujejo adhezijo celic na substrat. Poleg tega proizvaja elemente za širjenje, ki pomagajo pri širitvi celic pred delitvijo.
-
Prinaša zaviralce proteaz, ki preprečujejo proteolizo v celicah.
-
Vsebuje tudi minerale, kot so Na+, K+, Zn2+ in Fe2+.
-
Poveča viskoznost gojišča, s čimer ščiti celice pred mehanskimi poškodbami med mešanjem suspenzijske kulture.
-
Deluje tudi kot pufer.
Viri
[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Prehrana živalskih celic v tkivni kulturi; začetne študije o sintetičnem gojišču. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1–8
[2] Kerbel R, Blakeslee D. Hitra adsorpcija sestavine fetalnega telečjega seruma s strani sesalskih celic v kulturi. Morebitni vir artefaktov v študijah antiserumov proti celično specifičnim antigenom. Immunology. 1976;31:881–91
[3] Sula K, Draber P, Nouza K. Dodajanje seruma v gojišče, uporabljeno za pripravo celičnih suspenzij, kot možen vir artefaktov v celično posredovanih reakcijah, preučevanih s testom poplitealnih limfnih vozlov. J Immunogenet. 1980;7:483–9
[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Komercialna gojišča brez seruma: rast hibridomov in proizvodnja monoklonskih protiteles. J Immunol Methods. 1991;145:175–83
[5] Barnes D, Sato G. Metode za gojenje celic v gojišču brez seruma. Anal Biochem. 1980;102:255-70
[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O, in sod. HSP70 kot šaperon prevaža TDP-43 brez RNA v anizotropne intranuklearne tekoče sferične lupine. Science. 2021;371:
[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J, et al. Staranje, povzročeno z Downovim sindromom, moti jedrsko arhitekturo nevralnih progenitornih celic. Cell Stem Cell. 2022;29:116–130.e7
[8] Iscove N, Melchers F. Popolna zamenjava seruma z albuminom, transferinom in sojinimi lipidi v kulturah B-limfocitov, ki se odzivajo na lipopolisaharide. J Exp Med. 1978;147:923–33
[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Sistematično izboljševanje kemično opredeljenega gojišča brez beljakovin za rast hibridomov in proizvodnjo monoklonskih protiteles. J Biotechnol. 1996;45:111–23
[10] Darfler F. Gojišče brez beljakovin za rast hibridomov in drugih celic imunskega sistema. In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769–78
[11] Barnes D, Sato G. Brezserumska celična kultura: poenoten pristop. Cell. 1980;22:649–55
[12] Hamilton W, Ham R. Klonska rast celičnih linij kitajskega hrčka v gojiščih brez beljakovin. In Vitro. 1977;13:537–47
[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Analiza citotoksičnih učinkov gojišča, ki vsebuje HEPES in je bilo izpostavljeno svetlobi. In Vitro Cell Dev Biol. 1985;21:282–7
[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. Fenol rdeča v gojiščih za tkivne kulture je šibek estrogen: posledice za raziskovanje celic, ki se odzivajo na estrogen, v kulturi. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496–500
[15] Karmiol S. Razvoj gojišč brez seruma. V: Master JRW, urednik. Animal Cell culture, 3. izdaja. Oxford: Oxford University Press; 2000.
[16] Perlman D. Uporaba antibiotikov v gojiščih za celične kulture. Methods Enzymol. 1979;58:110–6
[17] McGarrity G. Širjenje in obvladovanje mikoplazemske okužbe celičnih kultur. In Vitro. 1976;12:643–8
[18] Masters J, Stacey G. Menjava gojišča in pasiranje celičnih linij. Nat Protoc. 2007;2:2276–84
[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M, et al. Histonska demetilaza KDM6A neposredno zazna kisik za nadzor kromatina in usode celic. Science. 2019;363:1217–1222
[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M, et al. Učinkovitost zdravila Plasmocin™ na različnih linijah sesalskih celic, okuženih z molikuti, v primerjavi s pogosto uporabljanimi antibiotiki v celičnih kulturah: lokalne izkušnje. Cytotechnology. 2011;63:609–20
[21] Kragh Hansen U. Molekularni vidiki vezave liganda na serumski albumin. Pharmacol Rev. 1981;33:17–53