Preverjanje pristnosti mišjih celičnih linij (kratki tandemski repetitivi (STR))
Glede na pogostost navzkrižne kontaminacije in napačne identifikacije je verodostojnost celic, uporabljenih v znanstvenih raziskovalnih projektih, glavna skrb. Ocenjuje se, da se pri približno 15–20 % vseh raziskav, ki temeljijo na celičnih linijah, uporabljajo napačno identificirane celične linije. Zato je določitev profila celične linije z uporabo STR-analize ključnega pomena za izvajanje zanesljivih in ponovljivih raziskav. Poleg tega vedno več znanstvenih revij zahteva verifikacijo celične linije, preden sprejmejo članek.
Naša storitev vključuje
- Preverjanje pristnosti celičnih linij
- Primerjavo z spletnimi bazami podatkov
- Analitično poročilo, pripravljeno za objavo
Enostavna uporaba
- Prosimo, prenesite obrazec za naročilo avtentifikacije celične linije ter izpolnjen in natisnjen obrazec priložite pošiljki z vzorci.
- Vzorce nam pošljite v oblazinjeni ovojnici pri sobni temperaturi.
- Za gDNA nam prosimo priskrbite ≥ 50 μl 50 ng/μl gDNA v Tris ali EDTA (10 mM Tris, 0,1 mM EDTA).
- Za celične pelete nam prosimo priskrbite 1,0–5,0 milijonov celic v obliki celičnega peleta. Prosimo, da jih dvakrat sperete s PBS in ponovno suspendirate v 0,5 ml 70–90-odstotnega etanola.
Markerji
- Človeške celice tipiziramo s sistemom PowerPlex podjetja Promega z uporabo 16 STR-markerjev.
- Mišje celice se tipizirajo z 18 STR-markerji.
- Celice podgan se tipizirajo s 14 STR-markerji in enim spolnospecifičnim markerjem.
- Psje celice se tipizirajo z 11 STR-markerji.
- Celice hrčkov se tipizirajo z 10 STR-markerji.
Rezultati
Rezultate boste prejeli v roku 2 tednov po e-pošti. Rezultati vključujejo primerjavo podatkov z bazo podatkov Cellosaurus. Celična linija bo razvrščena kot avtentificirana ali napačno identificirana.
Kratki tandemski ponovitvi (STR)
Kratki tandemski ponovki (STR) sestavljajo DNK-motivi z 2–13 bazami, ki se ponavljajo do več sto krat. Posamezna variabilnost v številu ponovitev v STR povzroča razlike v dolžini nastalih fragmentov pri uporabi PCR. Celične linije se profilirajo z uporabo teh razlik v dolžini fragmentov na več lokusih.
Odkrivanje mešanic celičnih linij
Mogoče je identificirati kontaminacijo ene celične linije z eno ali več dodatnimi celičnimi linijami že pri 10-odstotni pogostnosti kontaminirane celične linije. Kombinacije celičnih linij običajno dajejo STR-profile s tremi ali več vrhovi za eno ali več lokusov.