Frequently asked questions

23. novembra 2023 se je CLS Cell Lines Service preimenoval v Cytion, prehod pa je bil od takrat zaključen v obeh pravnih subjektih. Sedaj poslujemo kot Cytion GmbH v Heidelbergu v Nemčiji in Cytion LLC v Sioux Fallsu v Južni Dakoti. Preimenovanje odraža našo širitev preko klasičnega shranjevanja celic v širši portfelj raziskovalnih izdelkov in storitev na osnovi celic.

Da. Katalogske številke iz obdobja CLS se nanašajo na iste avtentificirane celične linije in ostajajo priznane v sistemu za naročanje. Obstoječi certifikati o analizi in varnostni listi ostajajo veljavni kot zgodovinski dokumenti o serijah. Novi certifikati o analizi, varnostni listi in računi se izdajajo pod imenom Cytion, v publikacijah pa se sprejemajo navedbe tako CLS kot Cytion.

Cytion GmbH (Heidelberg, Nemčija) obdeluje naročila in zagotavlja podporo strankam po vsej Evropi in na večini mednarodnih trgov. Cytion LLC (Sioux Falls, Južna Dakota), ustanovljeno leta 2024, je ločena ameriška pravna oseba, ki obdeluje naročila, sporazume o prenosu materiala (MTA) in zagotavlja podporo strankam po vsej Severni Ameriki. Obe pravni osebi imata isti portfelj avtentificiranih celičnih linij in delujeta v skladu z istim sistemom kakovosti ISO 9001:2015.

Katalog obsega več kot 1000 avtentificiranih celičnih linij, ki zajemajo človeške in živalske tumorske linije, imortalizirane normalne linije, reporterje in stabilno transfektirane derivate, indukcijske pluripotentne izvorne celice (iPSC) ter mezenhimalne stromalne celice (MSC). Primarne celice, gojišča, zamrzovalno gojišče (CM-1), reagenti za ločevanje celic in PBS dopolnjujejo ponudbo.

Standardni obseg polnjenja je običajno 3 × 10⁶ celic na epruveto za adhezivne linije in 5 × 10⁶ celic na epruveto za suspenzijske linije, krioprezervirane v določenem zamrzovalnem mediju. Natančno število živih celic za serijo, ki jo prejmete, je dokumentirano na certifikatu analize, specifičnem za posamezno serijo.

Cytion lahko pridobi celične linije prek znanstvenih partnerstev, programov deponiranja in dogovorov o prenosu tehnologije. Obrnite se na našo znanstveno ekipo z imenom linije in nameravano uporabo – navedli vam bomo razpoložljivost, rok dobave in pogoje licenciranja.

Da. Naš program za prenos tehnologije sprejema depozite celičnih linij od akademskih in industrijskih raziskovalcev ter zajema avtentifikacijo, proizvodnjo matične in delovne banke, stalni nadzor kakovosti in globalno distribucijo. Obrnite se na nas za sporazum o depozitu in postopek predložitve.

Naročila lahko oddate neposredno prek spletne trgovine na cytion.com ali po e-pošti ali telefonu pri vaši regionalni podporni ekipi. Pri plačilu lahko dodate številko naročila, podpiramo pa tudi izdajanje računov na ime institucije. Za večja, ponavljajoča se ali po meri prilagojena naročila zaprosite prodajno službo za uradno ponudbo.

Vse cene na cytion.com so navedene brez DDV. Veljavni DDV, stroški poštnine in morebitni carinski stroški se pri zaključku nakupa dodajo glede na državo dostave in vaš status DDV. Stranke iz EU z veljavno identifikacijsko številko DDV prejmejo račun brez davka v skladu z mehanizmom obrnjene davčne obveznosti.

Standardni načini vključujejo kreditno kartico (Visa, Mastercard, American Express) in bančni prenos SEPA za evropske stranke. Za institucionalne račune je mogoče vzpostaviti plačilo na podlagi računa za naročilo. Stranke iz Severne Amerike obsluži Cytion USA z lokalno sprejetimi plačilnimi možnostmi.

Da. Za več viale, pakiranje po meri, večvrstna naročila ali okvirne pogodbe z raziskovalnimi institucijami zahtevajte uradno ponudbo. Ponudbe navajajo pravice uporabe po celični liniji (samo za raziskave ali komercialno) neposredno pri posamezni postavki ter vključujejo pogoje dostave in dobavnega roka.

Evropska spletna trgovina pošilja po vsem svetu z eno izjemo: za Ameriko skrbi podjetje Cytion USA v Sioux Fallsu, Južna Dakota. Stranke v ZDA, Kanadi in delih Latinske Amerike naj naročajo prek regionalne enote, da bodo imele krajše dobavne roke, regionalne MTA in lokalno izdajanje računov.

Krioprezervirane celice se pošiljajo zamrznjene na suhem ledu v validirani izolirani embalaži, pri čemer se med prevozom ohranja temperatura tovora približno −78 °C. Vsaka pošiljka vključuje certifikat analize za posamezno serijo in navodila za ravnanje, pošiljko pa je mogoče spremljati od začetka do konca prek kurirja.

Okvirni časi prevoza iz Heidelberga:

• Nemčija: 1–2 delovna dneva
• Po EU: 2–4 delovni dnevi
• Mednarodno: običajno 3–7 delovnih dni, odvisno od carinjenja

Naročila se odpremljajo od ponedeljka do srede, da se izognejo prevozu med vikendom in zagotovijo ohranitev suhega ledu ob prihodu.

Ob prejemu preglejte paket in se prepričajte, da so kriovialke še vedno globoko zamrznjene, brez znakov odtaljevanja ali motnosti. Takoj jih prenesite v dolgoročno skladiščenje v plinski fazi tekočega dušika (−150 do −196 °C). Zaradi sledljivosti zabeležite datum in morebitne ugotovitve ob odpiranju paketa.

Nemudoma se obrnite na znanstveno podporo in navedite številko naročila, fotografije embalaže in podatke o sledljivosti pošiljke. Celice, ki prispejo delno ali popolnoma odmrznjene, so zajete v našo 60-dnevno garancijo za vitalnost – ko bo problem dokumentiran, bomo uredili zamenjavo.

Shranjujte v plinski fazi tekočega dušika pri temperaturi −150 °C ali nižji. Mehanski zamrzovalnik pri −80 °C je sprejemljiv le kot kratkotrajna vmesna rešitev (dni, ne tedni) – zaradi rekristalizacije se vitalnost nad −135 °C stalno zmanjšuje. Vodite evidenco zalog z navedbo serije, lokacije in datuma zamrzovanja.

Standardno hitro odmrzovanje:

• Kriovialko odmrzujte v vodni kopeli pri 37 °C 40–60 sekund, takoj ko ostane le še majhen ledeni kristal, jo odstranite
• Aseptično prenesite v 9–10 ml predhodno ogretega popolnega gojišča
• Centrifugirajte pri 200 × g 5 minut
• Pelet ponovno suspendirajte v svežem mediju in posejte pri priporočeni gostoti

Pogoji za izolacijo, specifični za posamezno linijo (gostota nasaditve, format plošče, prva menjava gojišča), so navedeni na strani izdelka.

Za rutinsko krioprezervacijo uporabite popolno gojišče, dopolnjeno z 10 % DMSO, ali Cytionovo zamrzovalno gojišče CM-1, ki je pripravljeno za uporabo. Priporočamo hlajenje s kontrolirano hitrostjo približno −1 °C na minuto (Mr. Frosty ali programabilni zamrzovalnik), ki mu sledi prenos v tekoči dušik za dolgoročno shranjevanje.

Na vsaki strani izdelka so navedene sestava gojišča, priporočena gostota sejanja, razmerje subkultiviranja, pogostost pasiranja in pogoji za obnovo po odmrzovanju. Podatki, specifični za posamezno serijo – število živih celic, profil STR, status mikoplazme – so navedeni na certifikatu analize serije, ki je priložen vašemu naročilu in je na voljo za prenos s strani izdelka.

Da. Celične linije se proizvajajo v Nemčiji v skladu z našim sistemom vodenja kakovosti, certificiranim po standardu ISO 9001:2015. Trenutni obseg certifikata in datum poteka veljavnosti sta dokumentirana v razdelku Kakovost in garancija na spletni strani; kopijo lahko dobite na zahtevo.

Identiteta se potrdi s profiliranjem kratkih tandemskih ponovitev (STR) na 16 markerjih (AMEL, CSF1PO, D3S1358, D5S818, D7S820, D8S1179, D13S317, D16S539, D18S51, D21S11, FGA, Penta_D, Penta_E, TH01, TPOX, vWA), ki se primerja z mednarodnimi referenčnimi bazami podatkov (Cellosaurus, ATCC, DSMZ), pri čemer se za vsako serijo navede odstotek ujemanja identitete.

Od leta 2023 profiliranje STR izvaja IDEXX BioAnalytics kot neodvisni zunanji laboratorij. STR se ponovi za vsako novo glavno in delovno banko.

STR-avtentifikacija se uporablja za človeške, mišje, podganje, hrčkove in pasje celične linije.

Vsaka celična banka se pregleda s testom za odkrivanje na podlagi PCR s specifičnimi primerji, usmerjenimi v DNA mikoplazme. Na končni krioprezervirani seriji se izvede ločen test na mikoplazmo po proizvodnji. Rezultati se zabeležijo kot uspešno/neuspešno na certifikatu analize, specifičnem za serijo.

Sterilnost se ugotovi z neposrednim inokuliranjem na 8 gojiščih s 10-dnevno inkubacijo, čemur sledi identifikacija mikroorganizmov z MALDI-TOF MS, kjer se opazi rast. Kjer je to primerno, se opravi anaerobna kultura. Serija se sprosti šele, ko ni zaznana nobena aerobna mikrobiološka rast; ločen test sterilnosti po proizvodnji potrdi odsotnost bakterijske in glivične rasti na krioprezervirani viali.

Preverjanje virusov, specifičnih za posamezne vrste, se izvede na vsaki seriji, kjer je to primerno. Za človeške celične linije panel zajema:

• virus hepatitisa A, B in C (HAV, HBV, HCV)
• virus človeške imunske pomanjkljivosti tipa 1 in 2 (HIV-1, HIV-2)
• človeški T-limfotropni virus tipa 1 in 2 (HTLV-1, HTLV-2)

Testiranje patogenov, specifičnih za posamezne vrste, je na voljo za človeške, mišje, podganje, hrčkove, goveje in prašičje celične linije. Natančen nabor, uporabljen za vašo serijo, je naveden na certifikatu o analizi.

Vsaka serija se pregleda na medvrstno kontaminacijo v primerjavi z mišjo, podganjo, človeško, kitajsko hrčkovo in afriško zeleno opičjo ozadje. Pozitivni/negativni status za vsako vrsto je naveden na certifikatu analize. Ta test izvaja IDEXX BioAnalytics skupaj s testi STR in virusnih patogenov.

Živost po zamrznitvi se meri na napravi Vi-CELL BLU (Beckman Coulter), pri čemer se analizira 100 slik na vzorec na 200 µL celične suspenzije. Merilo za sproščanje je ≥70 % živost po odmrznitvi; dejanska vrednost za vašo serijo je natisnjena na certifikatu analize. Obnovitev se preveri z gojenjem referenčne viale in potrditvijo >80 % konfluence v pričakovanem obdobju obnovitve, skupaj s preverjanjem pričakovanih lastnosti rasti (adherentna, suspenzijska ali semi-adherentna).

Cytion zagotavlja, da so avtentificirane krioprezervirane celične linije vitalne, če se z njimi ravna v skladu s priporočenim protokolom v 60 dneh od datuma odpreme. Če v tem obdobju po dokumentiranem standardnem odmrzovanju ne pride do obnovitve, se obrnite na znanstveno podporo za nadomestno viale.

Certifikat o analizi (CoA) za posamezno serijo je priložen vsakemu naročilu in ga lahko prenesete s strani izdelka z uporabo številke serije, natisnjene na etiketi krioviale. Vsak CoA dokumentira številko pasaže, število živih celic, sposobnost preživetja po odmrzovanju, sterilnost, status mikoplazme, popoln profil STR z ujemanjem identitete, medvrstno kontaminacijo in panel patogenov, specifičen za vrsto. Če ne morete najti CoA za starejšo serijo, se obrnite na znanstveno podporo s kataloško številko in ID serije, mi pa vam ga bomo ponovno poslali.

Na vsaki strani izdelka je navedena priporočena stopnja biološke varnosti (običajno BSL-1 ali BSL-2) ter morebitna posebna upoštevanja glede vrste ali patogenov. Nekateri liniji – na primer derivati HEK293, ki nosijo virusne elemente – so razvrščeni kot gensko spremenjeni organizmi; v Nemčiji so to običajno GMO-S1. Razvrstitev GMO se lahko razlikuje po državah, zato pred uvozom preverite pri lokalnem regulatorju.

MTA je sporazum za raziskovalne namene, ki zajema prenos, uporabo in nadaljnji prenos določene celične linije za notranje raziskave na enem mestu. Linije, za katere je potreben MTA, so označene na strani izdelka. Sporazum je treba podpisati, preden se celice sprostijo za pošiljanje.

Samo tiste, ki imajo na strani izdelka označeno obvestilo o MTA. Obvestilo navaja pogoje deponenta in morebitne omejitve področja uporabe, ki so specifične za to linijo. Linije brez označbe MTA so v skladu s standardnimi pogoji Cytiona za raziskovalno uporabo.

Ne. Strankam v ZDA in Kanadi storitve zagotavlja Cytion USA, ki uporablja regionalne sporazume MTA in licenčne pogoje. Za Kitajsko in Tajvan veljajo ločeni sporazumi, specifični za posamezno regijo. Obrnite se na regionalno ekipo in izdali vam bomo sporazum, ki ustreza vaši jurisdikciji.

Celične linije se privzeto dobavljajo izključno za raziskovalne namene. Komercialne aplikacije – delo po naročilu, pogodbeno raziskovanje, preskušanje kakovosti izdelkov, odkrivanje zdravil za zunanje stranke, diagnostični kompleti in predložitev dokumentacije regulativnim organom – zahtevajo prilagojeno licenco. Izpolnite obrazec za nameravano uporabo na strani izdelka ali se obrnite neposredno na nas, da sklenemo sporazum.

Testiranje mikoplazme na podlagi PCR na celicah, ki jih predloži stranka, z uporabo istega validiranega testa, ki ga izvajamo na vsaki seriji Cytion. Vzorci se predložijo kot supernatant ali celični pelet v skladu z navodili za storitev; podpisano poročilo se vrne v navedenem roku. Uporabno za pregledovanje prihajajočih linij, redne revizije in nadzor kakovosti pred objavo.

STR-profiliranje peletov ali vzorcev DNA, ki jih predloži stranka, na panelu 16 markerjev, s primerjavo z mednarodnimi referenčnimi bazami podatkov (Cellosaurus, ATCC, DSMZ) in podpisanim poročilom o avtentifikaciji, vključno z odstotkom ujemanja identitete. Uporablja se za potrditev identitete, odkrivanje navzkrižne kontaminacije in izpolnjevanje zahtev revij glede avtentifikacije. Na voljo za človeške, mišje, podganje, hrčkove in pasje linije.

Proizvodnja velikih serij enotnih serij pripravljenih za uporabo celic, ki so usklajene z viale, za presejanje z visoko zmogljivostjo in razvoj testov. Vsaka viala v seriji izpolnjuje enaka merila glede življenskosti in zmogljivosti, kar zmanjšuje variabilnost med poskusi in pospeši časovni potek kampanj.

Da. Razširitev celične kulture (povečanje na določeno število celic, peletov ali količine DNA/RNA), proizvodnja glavne in delovne banke celic ter stalno shranjevanje vzorcev so na voljo kot projekti po načelu plačila za storitev. Vsako sodelovanje se začne s kratkim telefonskim pogovorom, da se potrdijo specifikacije, rezultati in časovni okvir.