Bunky NIH-3T3: Pokrok v štúdiu fibroblastov a aplikácií NIH-3T3
Bunková línia NIH-3T3, ktorú v roku 1962 vytvorili Howard Green a George Todaro na Lekárskej fakulte Newyorskej univerzity z tkaniva 17-dňového embrya švajčiarskej myši albínskej, sa stala základným zdrojom biomedicínskeho výskumu. Bunky NIH-3T3, ktoré sú uznávané pre svoju vysokú vnímavosť na tvorbu fokusov leukemického vírusu a sarkómového vírusu, slúžia ako dôležitý nástroj na množstvo vedeckých výskumov vrátane vírusových onkologických štúdií, analýzy génovej expresie a skúmania dynamiky bunkového rastu. Pomenovanie "3T3" odráža metódu kultivácie buniek a označuje "3-dňový interval prenosu" s počiatočnou hustotou výsevu 3 × 10^5 buniek, čím sa zdôrazňujú štandardizované podmienky, za ktorých boli tieto bunky prvýkrát kultivované a expandované.
Rôzne morfológie a aplikácie buniek NIH-3T3
Jednou z charakteristických vlastností buniek NIH-3T3 je ich morfologická prispôsobivosť, ktorá sa výrazne mení v závislosti od konfluencie kultúry. Pri nižších hustotách vykazujú tieto fibroblasty vretenovitú, solitárnu bunkovú štruktúru, ktorá sa pri dosiahnutí konfluencie populácie mení na husté, vírivé vzory. Bunky NIH-3T3 s priemerným priemerom približne 18 μm predstavujú univerzálny model pre hĺbkové štúdie bunkovej biológie, od mechanizmov opravy tkanív až po zložité cesty regulácie bunkového cyklu.
Kultivačné informácie
Kľúčové podrobnosti o kultivácii:
Čas zdvojnásobenia populácie: Približne 20 hodín.
Typ rastu: Adherentné kultúry.
Hustota výsevu: Odporúčaná hustota: 3 až 4 x 10^4 buniek/cm^2.
Rastové médium: DMEM alebo Ham's F12, doplnené 5 % FBS a 2,5 mM L-glutamínom.
Rastové podmienky: Udržujte pri 37 °C vo zvlhčenom inkubátore s 5 % CO2.
Skladovanie: Uchovávajte pri teplote nižšej ako -195 °C v parnej fáze tekutého dusíka.
Metóda zmrazovania: Použite médium CM-1 alebo CM-ACF; použite metódu pomalého zmrazovania (pokles teploty o 1 °C).
Protokol rozmrazovania: Rýchle zahriatie vo vodnom kúpeli pri 37 °C, po ktorom nasleduje odstredenie na odstránenie zmrazovacieho média a následná resuspenzia v rastovom médiu.
Úroveň biologickej bezpečnosti: Kultivácia vyžaduje nastavenie úrovne biologickej bezpečnosti 1.
Švajčiarska myš albínska v laboratóriu.
Výhody a nevýhody používania buniek NIH 3T3
Výhody
Účinnosť transfekcie: Bunky NIH 3T3 sú známe svojou vysokou rýchlosťou transfekcie a sú vynikajúce na štúdie prechodnej aj stabilnej génovej expresie, pričom sú vhodné na rôzne techniky transfekcie.
Užitočnosť podávacej vrstvy: Tieto bunky často slúžia ako podporná kŕmna vrstva pre spoločné kultúry s bunkami, ako sú keratinocyty a kmeňové bunky, vďaka uvoľňovaniu rastových faktorov, ktoré podporujú rast spoločne kultivovaných buniek.
Výskumkmeňových buniek : Bunky NIH-3T3 sú uprednostňovanou voľbou vo výskume kmeňových buniek, pretože indukujú pluripotenciu bez genetickej modifikácie a poskytujú priaznivé prostredie pre diferenciáciu kmeňových buniek.
Stabilita kultúry: Bunky NIH-3T3 sú známe svojou stabilitou a nízkou frekvenciou spontánnej transformácie. Za určitých podmienok alebo po vystavení špecifickým onkogénom alebo mutagénom však môžu bunky NIH-3T3 prejsť spontánnou transformáciou. Táto transformácia môže viesť k získaniu rakovinových vlastností, ako je nekontrolovaný rast, strata kontaktnej inhibície a schopnosť vytvárať nádory pri injekčnom podaní do citlivých hostiteľov.
Nevýhody
Nekonzistentná veľkosť buniek: Podlhovastá, vretenovitá morfológia buniek NIH-3T3 sa môže líšiť, čo komplikuje obrazové analýzy v testoch.
Vnímavosť na infekciu: Tieto bunky sú náchylné na bakteriálne a mykoplazmové infekcie, ak nie sú udržiavané v prísnych aseptických podmienkach, čo môže mať vplyv na integritu experimentu.
Výskumné aplikácie buniek NIH-3T3
Štúdie transfekcie DNA: Bunky NIH-3T3 sú vďaka svojej robustnosti ideálne na zavádzanie a štúdium funkcie rôznych génov, čo sa prejavuje vo výskume skúmajúcom proteíny ako NAB2-STAT6 a ich úlohy v bunkových procesoch.
Bunkové testy: Ich spoľahlivosť sa rozširuje na rôzne testy vrátane testov životaschopnosti, apoptózy a tvorby ohnísk, ktoré ponúkajú pohľad na bunkové reakcie za rôznych experimentálnych podmienok.
Výskum bunkového cyklu: Bunková línia je vďaka jednoduchej manipulácii bunkového cyklu prostredníctvom sérových hladín vhodným modelom na štúdium regulácie bunkového cyklu a jeho odchýlok v kontexte ochorení.
Zvýšte úroveň svojho výskumu pomocou buniek NIH-3T3
Zdôraznenie kľúčových štúdií zahŕňajúcich fibroblastovú bunkovú líniu NIH 3T3
Bunková línia NIH-3T3 bola kľúčová v mnohých výskumných projektoch, ktoré sa týkali rôznych aspektov bunkovej biológie. Nižšie sú uvedené niektoré významné štúdie využívajúce tieto bunky:
- Skúmanie fúzneho proteínu NAB2-STAT6: Táto štúdia, publikovaná v časopise Biochemical and Biophysical Research Communications, sa zaoberá vplyvom fúzneho proteínu NAB2-STAT6 na bunky NIH-3T3, konkrétne jeho úlohou pri zvyšovaní rastu a migrácie buniek prostredníctvom regulácie EGR-1
- Skúmanie APOBEC3 a vírusu leukémie myší: Tento výskum v časopise Virology skúma hypermutáciu vírusu leukémie myší AKV v bunkách NIH-3T3 exprimujúcich myší gén APOBEC3
- Hodnotenie antimetastatického potenciálu epigenetických liekov: Táto štúdia v časopise Oncotargets and Therapy hodnotí antimetastatické účinky hydralazínu a kyseliny valproovej na bunky NIH-3T3 transformované RAS
- Vplyv bajkalínu na proliferáciu a syntézu kolagénu v NIH-3T3: Tento výskum využíva bunky NIH-3T3 na skúmanie toho, ako bajkalín ovplyvňuje proliferáciu buniek a produkciu kolagénu prostredníctvom modulácie osi miR-9/insulínu podobného rastového faktora-1
- Štúdium deplécie riboflavínu a nádorového bujnenia: Táto štúdia prezentuje zistenia o tom, ako nedostatok riboflavínu v bunkách NIH-3T3 prispieva k nádorovému bujneniu podporou bunkovej proliferácie a dysreguláciou génov bunkového cyklu
Základné zdroje pre výskum buniek NIH-3T3
Pre výskumníkov, ktorí majú záujem pracovať s bunkami NIH-3T3, sú k dispozícii rôzne zdroje, ktoré im pomôžu pri kultivácii a experimentálnych protokoloch:
- Tvorba sféroidov v bunkách NIH-3T3: Toto video poskytuje podrobný návod na tvorbu sféroidov, čo je technika 3D kultivácie buniek, ktorá agreguje bunky NIH-3T3 do zhlukov a ponúka fyziologicky relevantnejší model pre štúdie
- Monitorovanie rastu buniek NIH-3T3: Toto video zachytáva dynamiku rastu buniek NIH-3T3 v priebehu 65 hodín a ukazuje proliferáciu buniek v reálnom čase
Cieľom týchto zdrojov je podporiť vaše výskumné úsilie s bunkami NIH-3T3 a poskytnúť základ pre úspešné experimenty a objavy.
Často kladené otázky o bunkách NIH-3T3
Odkazy
- Rahimi, A.M., M. Cai a S. Hoyer-Fender, Heterogenita bunkovej línie fibroblastov NIH3T3. Cells, 2022. 11(17): p. 2677.
- Leibiger, C., a i., Prvá molekulárna cytogenetická charakterizácia bunkovej línie NIH 3T3 s vysokým rozlíšením pomocou myšieho viacfarebného bandingu. Journal of Histochemistry & Cytochemistry, 2013. 61(4): p. 306-312.
- Wang, H.-X., et al., Comparative analysis of different feeder layers with 3T3 fibroblasts for culturing rabbits limbal stem cells (Porovnávacia analýza rôznych napájacích vrstiev s 3T3 fibroblastami na kultiváciu králičích limbálnych kmeňových buniek ). International Journal of Ophthalmology, 2017. 10(7): p. 1021.
- Wang, Z., et al., Differentiation of neuronal cells from NIH/3T3 fibroblasts under defined conditions (Diferenciácia neurónových buniek z NIH/3T3 fibroblastov za definovaných podmienok ). Development, growth & differentiation, 2011. 53(3): p. 357-365.
- Park, Y.-S., et al., NAB2-STAT6 fúzny proteín sprostredkúva proliferáciu buniek a onkogénnu progresiu prostredníctvom regulácie EGR-1. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2020. 526(2): p. 287-292.
- Mattsson, M., Expresia Sloppymerase™ v bunkách NIH/3T3: Zkoumanie všestrannosti fúznej polymérázy náchylnej na chyby. 2021.
- Sahinturk, V., a i., Acrylamide exerts its cytotoxicity in NIH/3T3 fibroblast cells by apoptosis (Akrylamid pôsobí cytotoxicky v bunkách fibroblastov NIH/3T3 apoptózou ). Toxikológia a priemyselné zdravie, 2018. 34(7): p. 481-489.
- Lusi, E.A. a F. Caicci, Objav prvého ľudského retro-gigantického vírusu: Opis jeho morfológie, retrovírusovej kinázy a schopnosti indukovať nádory u myší. bioRxiv, 2019: s. 851063.
- Endo, M., et al, E2F1-Ror2signaling mediates coordinated transcriptional regulation to promote G1/S phase transition inbFGF-stimulatedNIH/3T3 fibroblasts (Signalizácia E2F1-Ror2sprostredkúva koordinovanú reguláciu transkripcie na podporu prechodu do fázy G1/Svo fibroblastoch NIH/3T3). The FASEB Journal, 2020. 34(2): p. 3413-3428.
- Long, L., et al. deplécia riboflavínu podporuje tumorigenézu v bunkách HEK293T a NIH3T3 udržiavaním bunkovej proliferácie a reguláciou transkripcie génov súvisiacich s bunkovým cyklom. The Journal of Nutrition, 2018. 148(6): p. 834-843.