Ramosove bunky - výskum B-bunkového lymfómu: Význam Ramosových buniek
Ramosove bunky sú bunkovou líniou B lymfocytov, ktorá sa vo veľkej miere používa v biomedicínskom výskume. Hlavné uplatnenie nachádzajú najmä v imunológii a v štúdiách rakoviny. Výskumníci využívajú tieto bunky na hodnotenie cytotoxických liekov a štúdium povrchových antigénov B buniek, mutácií a apoptotických mechanizmov.
Pôvod a všeobecné vlastnosti Ramosových buniek s
Pochopenie pôvodu bunkovej línie a jej základných vlastností zohráva kľúčovú úlohu pri rozhodovaní o jej vhodnosti pre váš výskum. Preto sa odporúča dôkladne posúdiť tieto informácie pred začatím akejkoľvek práce na nej. Táto časť sa zaoberá nasledujúcimi často kladenými otázkami: Čo je to rakovinová bunková línia Ramos? Čo je to bunková línia Ramos CD19? Čo je Ramosova bunková línia CD20? Aký je pôvod buniek Ramos? Aké sú markery na bunkovej línii Ramos? Aká je veľkosť buniek Ramos? Aká je morfológia bunkovej línie Ramos?
- Ramosova bunková línia bola vytvorená v roku 1972. Tieto bunky boli získané z ascitickej tekutiny 3-ročného chlapca kaukazskej rasy s Burkittovým lymfómom amerického typu [1].
- Exprimujú kľúčové markery B buniek vrátane imunoglobulínu M (IgM), CD19, CD20 a CD22.
- Ramosove bunky sú Epstein Bar vírus negatívne bunky. Môžu však byť trvalo posunuté na Epstein-Barrovej vírus pozitívne bunky.
- Tieto B lymfoblastové bunky majú morfológiu okrúhleho tvaru.
Ramosove modré bunky vs. Ramosove B bunky
Ramosove modré bunky a Ramosove B bunky sú ľudské Burkittovy lymfómové bunky. Obidve sú negatívne na Epstein Bar vírus. Rozdiel medzi týmito bunkami spočíva v tom, že modré bunky Ramos exprimujú reportérový gén indukovaný NF-κB/AP-1 s názvom SEAP (vylučovaný embryonálny alkalický fosfát), zatiaľ čo biele bunky Ramos nie.
Kultivácia buniek Ramos
Táto časť článku je venovaná tomu, aby vám pomohla získať nevyhnutné informácie o kultivácii buniek Ramos. Tu sa dozviete: Aký je čas zdvojnásobenia bunkových línií? Aké je odporúčané médium? Ako sa kultivujú bunky Ramos?
Kľúčové body pre kultiváciu buniek Ramos
|
Čas zdvojnásobenia: |
Čas zdvojenia buniek Ramos je približne 20,4 ± 1,5 hodiny. Môže sa však odchýliť v závislosti od poskytnutých podmienok kultivácie buniek. |
|
Adherentné alebo v suspenzii: |
Ramosove bunky rastú v suspenzii. |
|
Hustota buniek: |
Optimálna hustota buniek pre bunkovú líniu Ramos je 3 x105 buniek/ml . Na subkultiváciu sa suspendované bunky zbierajú centrifugáciou. Bunky sa doplnia čerstvým médiom a opatrne sa resuspendujú. Potom sa bunky prelejú do novej banky s hustotou 3 až 9 x105 buniek/ml . |
|
Rastové médium: |
Na kultiváciu buniek Ramos sa používa RPMI 1640 doplnené 10 % fetálnym hovädzím sérom, 2,1 mM stabilným glutamínom a 2,0 g/l NaHCO3. |
|
Rastové podmienky: |
Ľudská bunková línia Burkittovho lymfómu (Ramos) sa uchováva vo zvlhčenom inkubátore pri 5 % CO2 a teplote 37 °C. |
|
Skladovanie: |
Zmrazené bunky Ramos sa uchovávajú pri teplote nižšej ako -150 °C alebo v parnej fáze tekutého dusíka, aby sa ochránila životaschopnosť buniek počas dlhšieho obdobia. |
|
Proces zmrazovania a médium: |
Pre bunky Ramos sa odporúča zmrazovacie médium CM-1 alebo CM-ACF. Používa sa pomalý proces zmrazovania, ktorý umožňuje postupný pokles teploty o 1 stupeň Celzia za minútu. Toto pomalé zmrazovanie chráni bunky pred akýmkoľvek šokom a zvyšuje ich životaschopnosť. |
|
Proces rozmrazovania: |
Na rozmrazovanie sa zmrazené bunkyudržiavajú vo vopred zohriatom vodnom kúpeli pri teplote 37 °C počas 40 až 60 sekúnd, kým nezostane malý ľadový chumáč. Potom sa pridá čerstvé médium a bunky sa odstredia, aby sa odstránili prvky zmrazovacieho média. Pelet sa opäť resuspenduje a bunky sa dávkujú do novej banky obsahujúcej kultivačné médium. |
|
Úroveň biologickej bezpečnosti: |
Laboratórium s úrovňou biologickej bezpečnosti 1 je nevyhnutné na udržiavanie Epstein-Barrovej vírus negatívnych bunkových kultúr Ramos. Úroveň biologickej bezpečnosti sa však posunie na 2, keď sa Ramosove bunky trvalo zmenia na pozitívne na vírus Epsteinovej-Barrovej. |
Ramos: Výhody a obmedzenia
Podobne ako iné bunkové línie, aj bunky Ramos majú výrazné výhody a obmedzenia. Táto časť sa zaoberá niektorými významnými, ktoré môžu významne ovplyvniť ich použitie vo výskume.
Výhody
- Bunkový model Burkittovho lymfómu: Ramosove bunky boli vyvinuté z pacienta s Burkittovým lymfómom, čo z nich robí vhodný bunkový model na štúdium lymfoidných malignít
- Jednoduchá kultivácia: Ramosove bunky sa ľahko kultivujú a udržiavajú v laboratóriu. Majú jednoduché požiadavky a podmienky na kultiváciu buniek
Obmedzenia
- Model in vitro: Ramosove bunky nemusia úplne reprezentovať genetickú zložitosť nádorov pacientov, čo obmedzuje ich použiteľnosť. Okrem toho výsledky experimentov s použitím bunkovej línie Ramos nemusia úplne odrážať podmienky in vivo, čo môže viesť k problémom pri aplikácii
aplikácie Ramosových buniek vo výskume
Ramos ponúka sľubné aplikácie v biomedicínskej oblasti. Niektoré z nevyhnutných výskumných využití Ramosových buniek zahŕňajú:
- Biológia lymfómov: Ramosove bunky sa široko používajú na štúdium biológie lymfómu. Používajú sa na skúmanie genetických a molekulárnych faktorov, ktoré sú základom lymfoidných malignít. Okrem toho výskumníci získavajú poznatky o vzniku, progresii a heterogenite ochorenia pomocou týchto buniek Burkittovho lymfómu. Skúmajú sa aj genetické mutácie a signálne dráhy, čo môže viesť k vývoju presnejších diagnostických a terapeutických prístupov. V štúdii uskutočnenej v roku 2019 sa zistilo, že inhibícia GCN5 (General control non-depressible 5) histón acetyltransferázy znižuje tumorigénnosť buniek ľudského Burkittovho lymfómu (Ramos) prostredníctvom narušenia BCR signalizácie. Preto sa GCN5 navrhuje ako reálny cieľ pre vývoj liekovej terapie lymfómov [2].
- Skríning a testovanie liečiv: Bunková línia Ramos sa široko využíva na účely skríningu a testovania liekov. Výskumníci hodnotia účinnosť potenciálnych terapeutických zlúčenín pri inhibícii proliferácie a rastu buniek a pri indukcii bunkovej smrti v lymfómových bunkách. To pomáha identifikovať sľubných kandidátov na lieky, čím sa uľahčuje vývoj cielenej liečby pacientov s lymfómom. Takýto výskum ukázal, že metanolový extrakt zo šupky, dužiny a semien plodov Annona mal mierny, zatiaľ čo chloroformový extrakt vykazoval silný účinok na proliferáciu Ramosových buniek. Štúdia teda navrhla, že plody Annona by sa mohli ukázať ako účinné pri prevencii a liečbe lymfómov [3].
Bunky Ramos pre váš výskum
Publikácie s bunkami Ramos
V tejto časti článku je uvedených niekoľko zaujímavých výskumných publikácií, v ktorých je použitá bunková línia Ramos:
Kontinuálna signalizácia CD 79b a CD 19 je potrebná pre kondíciu B-buniek Burkittovho lymfómu
Tento výskum bol uverejnený v časopise The EMBO v roku 2018. V štúdii sa zistilo, že B bunky Ramos vyžadujú pre svoju zdatnosť a konkurenčný rast expresiu markerov CD19 a CD79b (BCR signalizačná zložka Igβ).
V tejto štúdii uverejnenej v časopise Neoplasia (2021) sa využili bunky Ramos a navrhlo sa, že doména zmiešanej línie kináz (MLKL) je epigeneticky regulovaná v bunkách Burkittovho lymfómu (Ramos). Ide teda o sľubný prognostický marker úspešnosti liečby súvisiacej s nekroptózou.
Fosforylácia PBK/TOPK Tyr74 pomocou JAK2 podporuje rast nádorov Burkittovho lymfómu
Tento výskumný článok v časopise Cancer Letters (2022) naznačil, že signálna os JAK2/TOPK/histón H3 zohráva kľúčovú úlohu pri proliferácii bunkových línií B lymfómu in vitro.
Tento článok bol uverejnený v roku 2020 v časopise Toxins. V štúdii sa navrhuje, že liečba verotoxínom-1 indukuje stres endoplazmatického retikula (ER) v bunkách Ramos B. To vedie k iniciácii apoptotickej signalizácie alebo signalizácie prežitia v lymfómových bunkových líniách.
Silymarín inhibuje expresiu génu Toll-like receptor 8 a apoptózu v nádorovej bunkovej línii Ramos
Táto štúdia v Avicenna Journal of Phytomedicine (2020) uvádza, že prírodná zlúčenina, silymarín, potláča expresiu TLR8 (Toll-like receptor 8) a apoptózu v bunkovej línii Ramos.
Zdroje pre bunkovú líniu Ramos: Ramosove zdroje: protokoly, videá a ďalšie informácie
Nasleduje niekoľko online zdrojov o bunkách Ramos:
- Transfekcia buniek Ramos: Tento dokument vám pomôže naučiť sa protokol transfekcie bunkovej línie Ramos.
Nasledujúci odkaz obsahuje protokol o kultivácii buniek Ramos:
- Ramosove bunky: Táto webová stránka obsahuje základné informácie o bunkovej línii Ramos. Obsahuje aj protokol na subkultiváciu buniek Ramos a manipuláciu s proliferujúcimi a kryokonzervovanými kultúrami. Okrem toho sú k dispozícii aj informácie týkajúce sa médií pre bunky Ramos, zdvojovacieho času a hustoty buniek.
Kľúčové poznatky o Ramosových bunkách: Často kladené otázky
Odkazy
- Kerntke, C.G., Analýza organizácie a signalizačnej kapacity membránového IgE počas jeho interakcie s CD19 a CD23 v B lymfocytoch. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
- Farria, A.T., a i., Inhibícia GCN5 HAT znižuje prežívanie buniek ľudského Burkittovho lymfómu prostredníctvom zníženia expresie cieľových génov MYC a zabránenia signálnym dráham BCR. Oncotarget, 2019. 10(56): p. 5847.
- Al-Shaya, H.M., et al., Phytochemical profile and antioxidation activity of annona fruit and its effect on lymphoma cell proliferation (Fytochemický profil a antioxidačná aktivita plodov annony a ich vplyv na proliferáciu lymfómových buniek ). Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): p. 58-68.