Bunky P19 - Výskum embryonálneho karcinómu s použitím buniek P19
P19 je línia buniek myšieho embryonálneho karcinómu. Široko sa používa v biomedicínskom výskume, najmä na štúdium vývojovej biológie, biológie kmeňových buniek, diferenciácie buniek a skríningu liečiv. Keďže bunky P19 majú schopnosť diferenciácie, môžu byť užitočné pri skúmaní komplexných biologických procesov, ako je tvorba tkanív a skorý embryonálny vývoj. V tomto článku sa budeme venovať základom myších buniek P19.
Všeobecné charakteristiky a pôvod buniek P19
Predtým, ako začnete pracovať s bunkovou líniou, je nevyhnutné poznať jej všeobecné vlastnosti a pôvod. V tejto časti sa budeme zaoberať nasledujúcim: Čo je to bunková línia P19? Aká je veľkosť buniek P19? Aký je pôvod buniek P19?
- P19 je typ pluripotentných embryonálnych karcinómových buniek pôvodne získaných z teratokarcinómu vyvinutého na myši C3H/He. Túto bunkovú líniu prvýkrát vytvorili v roku 1982 McBurney a Rogers.
- Bunky P19 môžu kontinuálne rásť v kultivačnom médiu doplnenom sérom. Môžu sa diferencovať na iné typy buniek, keď sú vystavené netoxickým liekom, ako je kyselina retinová a dimetylsulfoxid (DMSO) [1].
- Tieto myšie karcinómové bunky majú morfológiu podobnú epitelu.
- Bunková línia P19 má euploidný samčí karyotyp (n=40; XY).
Informácie o kultivácii buniek P19
Bunková línia P19 sa vďaka svojim jedinečným vlastnostiam hojne kultivuje vo výskumných laboratóriách. Jej kultivácia je jednoduchá a zvládnuteľná. V tejto časti sú uvedené všetky kľúčové informácie, ktoré potrebujete na udržiavanie a pestovanie bunkovej kultúry P19. Budeme vedieť: Aký je čas zdvojenia buniek P19? Ako kultivovať bunkovú líniu P19? Je P19 adherentná bunková línia?
Kľúčové body pre kultiváciu buniek P19
|
Čas zdvojenia: |
Čas zdvojnásobenia bunkovej línie P19 je približne 2 až 3 dni. |
|
Adherentné alebo v suspenzii: |
Bunková línia embryonálneho karcinómu P19 je adherentná. |
|
Pomer subkultivácie: |
Bunky P19 by sa mali subkultúrovať každých 48 hodín a pre tieto bunky by sa mal zachovať pomer delenia 1:10. Adherentné bunky sa premyjú 1 X fosfátovým tlmivým roztokom a inkubujú sa s akutázou, kým sa bunky nedisociujú. Bunky sa doplnia kultivačným médiom a zozbierajú sa centrifugáciou. Zozbierané bunky sa opatrne resuspendujú a dávkujú do nových fliaš. |
|
Rastové médium: |
Na kultiváciu buniek P19 sa používa médium DMEM/Ham's F12 obsahujúce 5 % fetálneho bovinného séra, 3,1 g/l glukózy, 1,6 mM L-glutamínu, 1,0 mM pyruvátu sodného, 15 mM HEPES a 1,2 g/l NaHCO3. |
|
Rastové podmienky: |
Pri pestovaní a kultivácii bunkovej línie embryonálneho karcinómu P19 je nevyhnutný zvlhčený inkubátor nastavený na 37 °C s prívodom 5 % CO2. |
|
Skladovanie: |
Zmrazené fľaštičky s bunkami P19 by sa mali skladovať pri teplote nižšej ako -150 °C v mrazničke alebo v parnej fáze tekutého dusíka, aby sa zachovala dlhodobá životaschopnosť buniek. |
|
Proces zmrazovania a médium: |
Na zmrazenie buniek P19 sa môže použiť médium CM-1 alebo CM-ACF s použitím metódy pomalého zmrazovania, ktorá chráni bunky pred akýmkoľvek šokom a zachováva ich životaschopnosť. |
|
Postup rozmrazovania: |
Zmrazené bunky P19 sa môžu rozmraziť vo vodnom kúpeli s teplotou 37 °C rýchlym miešaním fľaštičky počas 40 až 60 sekúnd. Bunky sa doplnia čerstvým médiom a odstredia sa, aby sa odstránili prvky zmrazovacieho média. Paleta buniek sa opäť resuspenduje a bunky sa nalejú do novej banky na rast. |
|
Úroveň biologickej bezpečnosti: |
Pre bunkovú líniu P19 sa vyžaduje laboratórne prostredie úrovne biologickej bezpečnosti 1. |
Bunková línia P19: Výhody a nevýhody
V tejto časti sa rozoberajú výhody a nevýhody bunkovej línie P19.
Výhody
- Diferenciačný potenciál: Bunky P19 sa môžu diferencovať na rôzne typy buniek vrátane kardiomyocytov, neurónov a mikroglií. Na diferenciáciu potrebujú netoxické liečivá, ako je kyselina retinová a dimetylsulfoxid (DMSO). Kyselina retinová indukuje vývoj neurónov, mikroglie a astroglie, zatiaľ čo DMSO iniciuje vývoj bijúcich kardiomyocytov a hladkých svalových buniek. Bunky P19 sú teda užitočné pri štúdiu diferenciácie buniek a vývojových procesov
- Modelový systém: Pluripotentná bunková línia embryonálneho karcinómu P19 je cenným modelom na štúdium skorého embryonálneho vývoja. Výskumníci využívajú bunky P19 na objasnenie bunkových signálnych dráh a bunkových a molekulárnych mechanizmov zapojených do týchto procesov
Nevýhody
- Murinský pôvod: P19 je línia myších embryonálnych karcinómových buniek. Z toho vyplýva, že výsledky štúdií s použitím týchto buniek sa nemusia úplne preniesť na ľudskú biológiu a procesy
Výskumné aplikácie buniek P19
Bunky P19 majú niekoľko výskumných aplikácií vďaka svojej schopnosti diferenciácie a významu pre vývojovú biológiu a výskum kmeňových buniek. Medzi dôležité výskumné aplikácie buniek embryonálneho karcinómu P19 patria:
- Štúdie diferenciácie buniek: Ako vieme, bunky P19 sa môžu diferencovať na neuróny, mikrogliálne bunky, bunky hladkého svalstva a kardiomyocyty; preto sa široko používajú na štúdium procesov diferenciácie buniek. Okrem toho pomáhajú pri výskume nervového a srdcového vývoja a základných mechanizmov. Štúdia uskutočnená v roku 2018 zistila, že reaktívne formy kyslíka (ROS) usmerňujú diferenciáciu buniek P19 na špecifické typy buniek a zabraňujú indukcii iných [3]. Iná štúdia skúmala proces neurálnej diferenciácie sprostredkovaný kyselinou retinovou a zistila zapojenie signálnej dráhy PI3K/Akt/GSK3β [4].
- Vývojová biológia: Bunky P19 sú neoceniteľným modelom na štúdium skorého embryonálneho vývoja. Pomáhajú výskumníkom pochopiť komplexné biologické procesy, ako je napríklad tvorba tkanív počas vývoja embrya. Vo výskume sa použili bunky P19 a skúmali sa molekulárne faktory prispievajúce k vzniku defektu komorového septa (VSD). Zistenia odhalili, že dlhá nekódujúca RNA SNHG6 prispieva k vzniku VSD negatívnou reguláciou miRNA-101 a aktiváciou dráhy Wnt/β-katenín [5].
- Testovanie liekov: Na skríning potenciálnych kandidátov na lieky sa používa aj bunková línia myšieho embryonálneho karcinómu P19. V štúdii sa použili diferencované bunkové neuróny P19 a skúmali sa neuroprotektívne účinky inhibície acetylcholínesterázy syntetickým L-Dopa a vodným extraktom zo semien Mucuna pruriens. Výsledky ukázali, že rastlinný extrakt vykazuje sľubné výsledky v porovnaní s L-Dopa [6].
Zakúpte si svoju bunkovú líniu P19 ešte dnes
Bunky P19: Výskumné publikácie
Táto časť článku sa zaoberá niekoľkými zaujímavými výskumnými publikáciami, v ktorých sa objavujú bunky P19.
Tento článok bol uverejnený v časopise Oncology Reports v roku 2017. V štúdii sa navrhuje, že pohlavné hormóny hypofýzy riadia adhéziu, proliferáciu a migráciu bunkových línií teratokarcinómu vrátane buniek P19.
Dlhá nekódujúca RNA uc. 4 ovplyvňuje diferenciáciu buniek prostredníctvom signálnej dráhy TGF-beta
V tejto publikácii v časopise Experimental & Molecular Medicine (2018) boli použité bunky P19 a skúmala sa funkcia dlhej nekódujúcej RNA uc.4. Zistenia odhalili, že uc.4 ovplyvňuje diferenciáciu buniek prostredníctvom modulácie signálnej dráhy TGF beta.
Tento výskumný článok bol uverejnený v roku 2018 v časopise Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. V štúdii sa zistilo, že extrakt z prírodného mozgového tkaniva a trojrozmerná bunková kultúra môžu urýchliť diferenciáciu buniek embryonálneho karcinómu P19 na neurálne bunky.
Táto štúdia bola uverejnená v časopise Journal of Ethnopharmacology v roku 2020. V štúdii sa navrhlo, že extrakt z listov Cichorium intybus L. môže indukovať diferenciáciu embryonálnych karcinómových buniek P19 na β bunky pankreasu produkujúce inzulín.
Tento výskum bol uverejnený v časopise Molecules (2022). V tejto štúdii sa skúmali neuroprotektívne a acetylcholínesterázové inhibičné účinky extraktu zo semien Mucuna pruriens na neuróny buniek P19.
Zdroje pre bunkovú líniu P19: Protokoly, videá a ďalšie zdroje
Nasleduje niekoľko zdrojov o bunkách P19.
- Protokol diferenciácie neurónov buniek P19: Tento článok obsahuje protokol diferenciácie neurónov buniek P19 a ďalšie užitočné informácie o diferenciácii buniek P19.
- Transfekcia buniek P19: Tento odkaz vám pomôže naučiť sa protokol transfekcie buniek P19.
Tento odkaz obsahuje protokol kultivácie buniek P19.
- Bunky P19: Táto webová stránka obsahuje všetky užitočné informácie o bunkovej línii P19 vrátane podmienok jej kultivácie, médií pre bunky P19, delenia buniek a mnohých ďalších informácií.
Skúmanie bunkovej línie P19: Často kladené otázky
Odkazy
- McBurney, M.W., bunky embryonálneho karcinómu P19. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): p. 135-40.
- Bressler, J., et al., P19 Embryonic Carcinoma Cell Line (Bunková línia embryonálneho karcinómu P19): A Model To Study Gene-Environment Interactions. Cell Culture Techniques, 2011: s. 223-240.
- Pashkovskaia, N., U. Gey a G. Rödel, Mitochondrial ROS direct the differentiation of murine pluripotent P19 cells (Mitochondriálne ROS usmerňujú diferenciáciu myších pluripotentných buniek P19). Výskum kmeňových buniek, 2018. 30: p. 180-191.
- Fu, F. a i., All-trans-retinoid acid induces differentiation of P19 cells into neurons involved in the PI3K/Akt/GSK3β signaling pathway. Journal of Cellular Biochemistry, 2020. 121(11): p. 4386-4396.
- Jiang, Y., et al. dlhá nekódujúca RNA SNHG6 prispieva k vzniku defektu komorového septa prostredníctvom negatívnej regulácie miR-101 a aktivácie dráhy Wnt/β-katenínu. Die Pharmazie-An International Journal of Pharmaceutical Sciences, 2019. 74(1): p. 23-28.
- Kamkaen, N., a i., Mucuna pruriens seed aqueous extract improved neuroprotective and acetylcholinesterase inhibitory effects compared with synthetic L-dopa. Molecules, 2022. 27(10): p. 3131.