Bunky NCI-H1299: NCI-H1299 bunky rakoviny pľúc: výskumné a klinické dôsledky
NCI-H1299 je imortalizovaná ľudská bunková línia nemalobunkového karcinómu pľúc, ktorá sa široko používa v imunitnej onkológii, výskume rakoviny a objavovaní liekov. Okrem toho výskumníci použili tieto bunky na skúmanie citlivosti na lieky, základných signálnych dráh a molekulárnych mechanizmov súvisiacich s rakovinou pľúc. Okrem toho sa tieto bunky používajú na štúdium vírusových infekcií, ako je SARS-CoV-2.
Všeobecné charakteristiky a pôvod buniek NCI-H1299
Prvá vec, ktorú je potrebné vedieť o bunkovej línii, je jej pôvod a všeobecné charakteristiky, pretože vám pomôžu navrhnúť jej použitie vo vašom výskume. Táto časť článku vám pomôže dozvedieť sa niektoré dôležité informácie o pôvode a vlastnostiach bunky NCI-H1299. Napríklad, čo sú bunky rakoviny pľúc NCI-H1299? Aký typ bunky je NCI-H1299? Aká je veľkosť buniek NCI-H1299? Aký je rozdiel medzi bunkami A549 a NCI-H1299?
- Bunková línia NCI-H1299 pochádza z metastáz lymfatických uzlín pľúc 43-ročného muža bielej rasy, ktorý mal rakovinu.
- Tieto bunky majú homozygotnú čiastočnú deléciu génu p53; neexprimujú teda proteín p53. Nedostatočná expresia proteínu p53 NCI-H1299 prispieva k proliferačnej tendencii buniek rakoviny pľúc H1299.
- Okrem p53 majú tieto imortalizované bunky údajne aj mutáciu NCI-H1299 KRAS, ktorá je zodpovedná za ich rast, proliferáciu, migráciu a invazívne vlastnosti.
- Karyotyp NCI-H1299 je takmer diploidný.
- Bunky NCI-H1299 majú morfológiu podobnú epitelovým bunkám.
- Tieto bunky sú sploštené a majú hrúbku menej ako 5 µm.
NCI-H1299 a A549
NCI-H1299 a A549 sú bunkové línie nemalého karcinómu pľúc. Bunky NCI-H1299 sú v porovnaní s bunkami A549 agresívnejšie a citlivejšie. Obe majú relatívne podobné mutácie, napríklad KRAS. Na rozdiel od buniek NCI-H1299 však bunky A549 exprimujú gén P53.
Kultivačné informácie
Udržiavanie kultúry bunkovej línie nie je jednoduché, kým o nej nepoznáte všetky kľúčové informácie vrátane: Aký je čas zdvojnásobenia NCI-H1299? Aká je hustota výsevu NCI-H1299? Aké sú bunkové médiá NCI-H1299? Ako sa kultivujú bunkové línie NCI-H1299? Táto časť vám pomôže dozvedieť sa odpovede na všetky tieto otázky o kultivácii buniek NCI-H1299.
Kľúčové body pre kultiváciu buniek NCI-H1299
|
Čas zdvojnásobenia: |
Čas zdvojenia buniek NCI-H1299 sa pohybuje v rozmedzí 22 - 30 hodín. |
|
Adherentné alebo v suspenzii: |
NCI-H1299 je adherentná bunková línia. |
|
Pomer subkultivácie: |
NCI-H1299 sa subkultivuje v odporúčanom pomere 1:3 až 1:6. Na nasadenie sa adherentné bunky premyjú 1x PBS a inkubujú s pasážovacím roztokom Accutase 8 až 10 minút pri teplote okolia. Odpojené bunky sa doplnia čerstvým kultivačným médiom a odstredia sa. Bunkový pelet sa potom resuspenduje a bunky sa prelejú do nových fliaš obsahujúcich rastové médium. |
|
Rastové médium: |
RPM1 1640 je ideálnym médiom pre bunky NCI-H1299. Je doplnené 10 % fetálnym hovädzím sérom, 4500 mg/l glukózy, 2,0 mM L-glutamínu, 1 mM pyruvátu sodného, 1500 mg/l NaHCO3 a 10 mM HEPES. Médium by sa malo obnovovať každé 2 až 3 razy týždenne. |
|
Rastové podmienky: |
Bunkové kultúry rakoviny pľúc NCI-H1299 sa udržiavajú vo zvlhčenom inkubátore pri teplote 37 °C s prívodom 5 % CO2. |
|
Skladovanie: |
Bunková línia NCI-H1299 sa môže dlhodobo skladovať v parnej fáze tekutého dusíka alebo v mrazničkách s veľmi nízkou teplotou pri teplote nižšej ako -150 °C. |
|
Proces zmrazovania a médium: |
CM-1 alebo CM-ACF sú médiá na zmrazovanie buniek NCI-H1299. Bunky sa zmrazujú pomocou pomalého zmrazovacieho procesu, ktorý umožňuje pokles teploty len o 1 stupeň za minútu, aby sa ochránila životaschopnosť buniek. |
|
Proces rozmrazovania: |
Zmrazené bunky NCI-H1299 sa rýchlo miešajú v predhriatom vodnom kúpeli pri teplote 37 stupňov Celzia počas 40 až 60 sekúnd, kým nezostane malý kúsok ľadu. Rozmrazené bunky sa pridajú s čerstvým médiom a môžu sa priamo kultivovať v nových bankách alebo odstrediť. V prvom prípade by sa malo médium vymeniť po 24 hodinách inkubácie. Centrifugácia pomáha odstrániť prvky mrznúceho média. Potom sa zozbierané bunky resuspendujú v čerstvom médiu a dávkujú sa do novej banky na kultiváciu. |
|
Úroveň biologickej bezpečnosti: |
Na manipuláciu s kultúrou buniek NCI-H1299 sa vyžaduje laboratórium s úrovňou biologickej bezpečnosti 1. |
Zakúpenie bunkovej línie NCI-H1299: vysokokvalitné výskumné nástroje na skúmanie biológie rakoviny pľúc
Výhody a nevýhody buniek NCI-H1299
Podobne ako iné ľudské nádorové bunkové línie, aj NCI-H1299 má niektoré charakteristické vlastnosti spojené so špecifickými výhodami a nevýhodami. Tu sme zhrnuli niekoľko významných z nich.
Výhody
Hlavné výhody bunkovej línie nemalobunkového karcinómu pľúc NCI-H1299 sú:
-
Model rakoviny pľúc in vitro
Bunkové línie NCI-H1299 boli vyvinuté z metastáz karcinómu pľúc v lymfatických uzlinách, a preto majú relatívne podobné vlastnosti. Preto môžu tieto bunky slúžiť ako in vitro model na skúmanie biológie rakoviny pľúc, bunkových a molekulárnych mechanizmov a na skríning a testovanie potenciálnych terapeutík.
-
Jednoduchá kultivácia
Bunky NCI-H1299 sa dajú ľahko kultivovať a udržiavať vo výskumnom laboratóriu. Neexistujú žiadne náročné požiadavky a postupy na kultiváciu buniek.
-
NCI-H1299 P53 a NCI-H1299 KRAS mutácia
Bunky NCI-H1299 nemajú expresiu génu p53, čo umožňuje bunkám intenzívne sa množiť. Okrem toho majú mutáciu KRAS, ktorá prispieva k rastu, proliferácii, invázii a migrácii buniek. Vzhľadom na to vedci používajú bunky H1299 na skúmanie molekulárnych mechanizmov súvisiacich s mutáciami KRAS a P53.
Nevýhody
Nevýhody buniek NCI-H1299 sú:
-
Tkanivová špecifickosť
NCI-H1299 pochádzajú z pľúcneho tkaniva. Preto je jej použiteľnosť väčšinou obmedzená na výskum karcinómu pľúc. Nemusí plne reprezentovať heterogenitu a všeobecné charakteristiky iných typov rakoviny.
Výskumné aplikácie buniek NCI-H1299
Bunková línia NCI-H1299 sa vo veľkej miere používa vo výskume rakoviny pľúc. Tu je uvedených niekoľko sľubných aplikácií tejto bunkovej línie.
- Biológia rakoviny: Bunky NCI-H1299 slúžia ako skvelý výskumný nástroj na skúmanie vývoja rakoviny, jej progresie a súvisiacich bunkových a molekulárnych mechanizmov. Tieto bunky sú vybavené určitými mutáciami, ktoré umožňujú výskumníkom skúmať súvisiace správanie rakovinových buniek, signálne dráhy a profily expresie génov. Viaceré štúdie použili bunkovú líniu nemalobunkového karcinómu pľúc NCI-H1299 na štúdium biológie rakoviny pľúc. Napríklad štúdia uskutočnená v roku 2018 skúmala signalizačnú dráhu zapojenú do apoptózy buniek karcinómu pľúc s použitím buniek NCI-H1299. Vedci zistili, že dráha PI3K/AKT prispieva k proliferácii buniek a jej inhibícia môže spôsobiť smrť rakovinových buniek [1]. Podobne sa v inom výskume skúmali mechanizmy, ktoré sa podieľajú na prechode buniek NCI-H1299 z epitelu do mezenchýmu (EMT). Táto štúdia navrhla, že extracelulárny proteín SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine) prispieva k EMT a migrácii NCI-H1299, a teda podporuje tumorigenézu buniek - proteín SPARC pôsobí ako mediátor signalizácie TGF-β1 [2].
- Objavovanie a skríning liečiv: NCI-H1299, ľudská bunková línia rakoviny pľúc, sa vo veľkej miere používa na hodnotenie toxicity a účinnosti potenciálnych liekov. Okrem toho ju výskumníci používajú na skúmanie mechanizmu účinku protinádorových liekov. V štúdiách sa tieto bunky používajú aj na identifikáciu možných cieľov liečiv a mechanizmov rezistencie. Napríklad výskum, ktorý uskutočnil Xiao-Yun Shen s kolegami, skúmal protinádorový potenciál prírodnej zlúčeniny bruceínu D (BD). Zistenia odhalili, že BD významne bráni proliferácii, invázii a migrácii buniek NCI-H1299. Preto sa môže považovať za potenciálnu adjuvantnú liečbu pri liečbe nemalobunkového karcinómu pľúc [3]. Podobne sa v štúdii hodnotili cytotoxické účinky xanthohumolu samotného a v kombinácii s chemoterapeutickým liekom cisplatinou na bunky karcinómu pľúc NCI-H1299 [4].
Výskumné publikácie s bunkami NCI-H1299
Niektoré významné a najcitovanejšie výskumné publikácie o bunkovej línii karcinómu pľúc NCI-H1299 nájdete tu.
Tento článok je uverejnený v časopise Human and Experimental Toxicology (2021). V štúdii sa navrhuje, že indol-3-karbinol indukuje apoptózu v bunkách H1299 prostredníctvom zvýšenia hladiny reaktívnych foriem kyslíka (ROS).
Tento výskum bol uverejnený v roku 2018 v časopise Cellular Physiology and Biochemistry. Výsledky výskumu odhalili, že kombinácia kyseliny kávovej a paklitaxelu má synergický protinádorový účinok v bunkovej línii nemalobunkového karcinómu pľúc NCI-H1299.
Tento výskumný článok bol uverejnený v časopise Molecular Medicine Reports (2018). V štúdii sa hodnotil protinádorový účinok tubeimosidu-1, triterpenoidného saponínu, a základné mechanizmy v bunkovej línii NCI-H1299.
Pristimerín indukuje apoptózu a inhibuje proliferáciu, migráciu v bunkách rakoviny pľúc H1299
V tomto článku uverejnenom v časopise Journal of Cancer (2020) sa navrhuje, že pristimerín, prírodná zlúčenina, potláča proliferáciu a migráciu buniek NCI-H1299.
Mechanizmus regulácie génu VIPR1 v bunkách ľudského adenokarcinómu pľúc H1299
Táto štúdia v časopise Medical Oncology (2019) skúmala potenciálne účinky nadmernej expresie génu VIPR1 na bunkovú líniu adenokarcinómu NCI-H1299.
Zdroje pre bunkovú líniu NCI-H1299: Riešenia: protokoly, videá a ďalšie zdroje
Tu nájdete niekoľko online zdrojov, ktoré obsahujú bunky NCI-H1299.
- Transfekcia NCI-H1299: Toto video vysvetľuje protokol pre prechodnú transfekciu bunkových línií NCI-H1299.
- Subkultivácia adherentnej bunkovej línie: Toto video vám pomôže naučiť sa všeobecný postup subkultivácie adherentnej bunkovej línie.
Nasledujúci odkaz obsahuje informácie o kultivácii buniek pre bunky NCI-H1299.
- Bunková línia NCI-H1299: Toto prepojenie vám pomôže dozvedieť sa o pasážovaní buniek NCI-H1299 a transfekčnom protokole.
Často kladené otázky o bunkovej línii NCI-H1299
Odkazy
- Gu, J. a kol., Štúdia apoptózy indukovanej EGCG v bunkách rakoviny pľúc inhibíciou signálnej dráhy PI3K/Akt. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): p. 4557-4563.
- Sun, W., a i., SPARC pôsobí ako mediátor TGF-β1 pri podpore epiteliálneho až mezenchymálneho prechodu v bunkách rakoviny pľúc A549 a H1299. Biofactors, 2018. 44(5): p. 453-464.
- Shen, X.-Y., et al. štúdia o mechanizme bruceínu D pri liečbe buniek nemalobunkového karcinómu pľúc H1299. World Journal of Traditional Chinese Medicine, 2020. 6(4): p. 500.
- Long, B., et al., Cytotoxické účinky xanthohumolu a jeho kombinácie s cisplatinou na ľudské metastatické bunky rakoviny pľúc H1299. Journal of Advances in Medicine and Medical Research, 2019. 30(9): p. 1-15.