Linha celular BEWO

BeWo é uma linha celular derivada de coriocarcinoma humano amplamente utilizada na investigação biomédica. Serve como um valioso modelo in vitro para explorar o intrincado processo de desenvolvimento placentário e a sincicialização de trofoblastos humanos. Os investigadores também utilizam estas células para estudar o comportamento dos trofoblastos, a produção de hormonas e o transporte de substâncias através da placenta. Além disso, as células BeWo também oferecem aplicações em estudos de toxicologia, infeção e transmissão de doenças.

Este artigo abrange conhecimentos fundamentais sobre as células BeWo que podem ajudá-lo a lidar com elas na sua investigação. Incluirá:

Caraterísticas gerais e origem das células BeWo
Linha celular BeWo: Informações sobre a cultura
Vantagens e desvantagens da linha celular BeWo
Aplicações de investigação das células BeWo
Publicações de investigação com células BeWo
Recursos para a linha de células BeWo: Protocolos, vídeos e muito mais

1. Caraterísticas gerais e origem das células BeWo

O conhecimento prévio da origem e das caraterísticas gerais de uma linha celular é crucial para a sua utilização na investigação. Esta parte do artigo explora a origem da linha celular BeWo, as suas caraterísticas e muito mais. Aqui, ficará a saber: O que é a linha celular de coriocarcinoma BeWo? O que é a sincicialização da BeWo? De onde vêm as células BeWo? Qual é a morfologia das células BeWo? Qual é a ploidia da BeWo?

A linha celular placentária, BeWo, teve origem no coriocarcinoma gestacional maligno de uma placenta fetal masculina em 1968 [1]. Assim, serve como um modelo inestimável para a investigação da placenta.
As células BeWo exibem uma morfologia epitelial.
As células BeWo são relativamente pequenas, variando entre 20 e 30 µM [2].
As células BeWo exibem um cariótipo estável. O seu número de linhas estaminais é hipo-tetraploide. O número modal de cromossomas das células BeWo é 86. Pode variar de 71 a 178.
As células BeWo produzem várias hormonas, ou seja, somatomamotropina coriónica humana, gonadotropina coriónica humana (hCG) e hormonas esteróides.
As células BeWo expressam marcadores moleculares, incluindo CK 7, E-caderina e VE-caderina.

Sublinha B30

B30 é a sub-linha de células BeWo. É utilizada para investigar a absorção e o transporte de nutrientes. Este facto é atribuído ao seu crescimento vigoroso em membranas porosas.

BeWo e JEG-3

As linhas celulares BeWo e JEG-3 são derivadas de coriocarcinomas e utilizadas na investigação da placenta. As células BeWo produzem hormonas em níveis mais baixos do que as JEG-3, como a gonadotropina coriónica humana (hCG) e o estradiol.

Visualização em lapso de tempo da fertilidade de um óvulo humano, ilustrando as fases de formação do blastocisto, conforme observado ao microscópio.

2. Linha celular BeWo: Informações sobre a cultura

A manutenção de uma cultura de células pode ser complicada, a menos que se conheçam pormenores importantes. Por exemplo: Qual é o tempo de duplicação da BeWo? O que é o meio celular BeWo? Como se faz a cultura da linha celular BeWo e Como se congelam as células BeWo?

Pontos-chave para a cultura de células BeWo

Tempo de duplicação:	O tempo de duplicação da população para as células BeWo é de aproximadamente 30 horas.
Aderente ou em suspensão:	A BeWo é uma linha celular aderente.
Densidade de sementeira das células:	A densidade de sementeira recomendada para as células BeWo é de 1 x¹⁰⁴ ^células/cm2. Para a sementeira, os meios antigos são removidos das células e estas são lavadas com 1 x PBS. Em seguida, adiciona-se Accutase (solução de passagem) e as células são incubadas durante 8 a 10 minutos à temperatura ambiente. Em seguida, as células destacadas são adicionadas ao meio de cultura e centrifugadas. As células colhidas são então ressuspendidas e vertidas para um novo frasco.
Meio de cultura:	O meio Ham's F12K contendo 10% de FBS, 2,0 mM de L-Glutamina, 2,0 mM de piruvato de sódio e 2,5 g/L de NaHCO3 é utilizado para cultivar células BeWo. O meio para células BeWo deve ser substituído 2 a 3 vezes por semana.
Condições de crescimento:	As células BeWo são mantidas numa incubadora humidificada a uma temperatura de 37 graus Celcius e com um fornecimento de 5% de CO2.
Armazenamento:	As células BeWo congeladas são armazenadas a uma temperatura inferior a -150°C num congelador elétrico de temperatura ultrabaixa ou na fase de vapor do azoto líquido.
Processo e meio de congelação:	Recomenda-se que as células BeWo sejam congeladas em meio de congelação CM-1 ou CM-ACF. As células são congeladas utilizando um método de congelação lenta. Este método permite apenas um declínio de 1 grau na temperatura por minuto, prevenindo assim as células de qualquer choque e protegendo a viabilidade das células.
Processo de descongelação:	As células congeladas são descongeladas imergindo-as num banho de água a 37°C pré-definido durante 40 a 60 segundos até que reste um pequeno aglomerado de gelo. Em seguida, adiciona-se um meio de cultura fresco e as células são centrifugadas para remover os componentes do meio de congelação. O pellet de células recolhido é ressuspenso e distribuído num frasco de cultura para crescimento.
Nível de Biossegurança:	É necessário um laboratório de Nível de Biossegurança 1 para manusear e manter as culturas de células BeWo.

Captura da morfologia epitelial e poligonal e do crescimento semelhante a uma ilhota da linha celular de coriocarcinoma humano, BEWO, através de ampliação de 10x e 20x ao microscópio.

3. Vantagens e desvantagens da linha de células BeWo

As células BeWo apresentam caraterísticas únicas e têm vantagens e desvantagens específicas. Nesta secção, vamos explorar alguns dos mais importantes.

Vantagens

As principais vantagens da linha celular de coriocarcinoma BeWo são

Modelo de células placentárias in vitro
As células BeWo fornecem um modelo in vitro para estudar o comportamento das células trofoblásticas e a sincicialização da placenta, replicando processos difíceis de observar in vivo.
Produção de hormonas
As células BeWo segregam hormonas, como a hCG e o lactogénio placentário, o que as torna valiosas para estudos de regulação hormonal e investigação em biologia reprodutiva.

Desvantagens

As desvantagens das células trofoblásticas BeWo são as seguintes

Linha celular cancerígena
As células BeWo foram derivadas de coriocarcinoma, que é um tumor da placenta. Esta origem pode não representar totalmente a função normal das células da placenta.

4. Aplicações de investigação das células BeWo

A linha celular BeWo é amplamente utilizada na investigação sobre a placenta. São aqui mencionadas algumas aplicações específicas desta linha celular:

Investigação relacionada com a placenta e a gravidez: As células BeWo são fundamentais na investigação relacionada com a placenta e a gravidez. Os investigadores utilizam estas células para estudar o transporte de substâncias, incluindo medicamentos, nutrientes e toxinas, através da barreira placentária. Além disso, também investigam a produção e a regulação de hormonas, incluindo a gonadotropina coriónica humana (hCG), o lactogénio placentário e as hormonas esteróides. Isto é importante para compreender as alterações hormonais durante a gravidez. A investigação realizada em 2018 investigou o efeito dos retardadores de chama bromados (BFRs) na atividade da sulfotransferase na linha celular trofoblástica humana (BeWo). Esta enzima está envolvida na regulação dos níveis intracelulares da hormona tiroideia [3].
Investigação de infecções e doenças: As células BeWo são também utilizadas para examinar a interação entre os agentes patogénicos e as células da placenta. Esta investigação é valiosa para compreender as doenças que podem ser transmitidas da mãe para o feto e para desenvolver estratégias de proteção da saúde fetal. Além disso, esta linha celular ajuda os investigadores a investigar complicações que surgem durante a gravidez, como a pré-eclampsia. Por exemplo, um estudo realizado por Michalina Bralewska em 2023 utilizou o modelo de células trofoblásticas BeWo e descobriu que tanto a cromogranina A (CgA) como o péptido dela derivado, a catestatina (CST), podem ter papéis no intrincado processo de patogénese da pré-eclampsia (PE) [4]. Mais adiante, outro estudo explorou o potencial anti-cancerígeno da tricosantina utilizando a linha celular de coriocarcinoma BeWo. A investigação também fez um esforço extra para descobrir biomarcadores, realizando uma análise proteómica comparativa antes e depois da experiência [5].

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5. Publicações de investigação com células BeWo

Aqui estão algumas publicações de investigação importantes que apresentam as células trofoblásticas BeWo.

A sinalização AMPK regula a mitofagia e a produção de ATP mitocondrial na linha celular de trofoblasto humano BeWo

Este estudo na Frontiers in Bioscience-Landmark (2022) propôs que a sinalização AMPK ativa a mitofagia em células trofoblásticas BeWo através das vias de mitofagia facilitadas por FUNDC1 e PRKN. Como resultado, a mitofagia ajuda a manter a produção de ATP e o potencial da membrana mitocondrial.

O etilparabeno induz a morte celular apoptótica em células BeWo da placenta humana através da via da Caspase-3

Este artigo foi publicado na revista Animal Cells and Systems (2020). O estudo propôs que o etilparabeno medeia a apoptose das células BeWo através da regulação da via da caspase 3.

Caracterização do Potencial de Disposição de Xenobióticos e Esteróides do Tecido Placentário Humano e Linhas Celulares (BeWo, JEG-3, JAR, e HTR-8/SVneo) por Proteómica Quantitativa

Este estudo na revista Drug Metabolism and Disposition (2023) utilizou linhas celulares placentárias, incluindo BeWo, JAR, JEG-3 e HTR-8/SVneo, para investigar a deposição de xenobióticos e esteróides nas células.

Apelina e recetor de apelina na placenta humana: Expressão, via de sinalização e regulação da proliferação e ciclo celular dos trofoblastos JEG-3 e BeWo

Este artigo de investigação no International Journal of Molecular Medicine (2020) propôs que a Apelina, o ligando do recetor APJ, promove a proliferação das células BeWo através da sinalização APJ e ERK1/2, stat3 e AMPK. Assim, poderia ser uma adipocina essencial que regula o desenvolvimento da placenta.

Medicamentos anti-convulsivos e nutrientes fetais: efeitos nos transportadores de colina numa linha celular da placenta humana

Este estudo na Epilepsia (2021) explorou os efeitos dos nutrientes fetais e dos anti-convulsivos nos transportadores de colina na linha celular trofoblástica derivada de humanos, BeWo.

6. Recursos para a linha de células BeWo: Protocolos, vídeos e muito mais

Aqui estão alguns recursos online disponíveis sobre as células BeWo:

Transfecção in vitro: Este vídeo ajudá-lo-á a aprender o protocolo de transfecção in vitro de ADN plasmídico para células aderentes.

A seguinte ligação contém informações sobre cultura de células para células BeWo:

Células BeWo: Este sítio Web contém informações essenciais sobre a cultura de células da linha celular BeWo. Inclui informações sobre os meios celulares e as condições de cultura. Também tem protocolos para subcultura e manuseamento de culturas criopreservadas e proliferativas.

Referências

Weber, M., et al., Cytogenomics of six human trophoblastic cell lines (Citogenómica de seis linhas celulares trofoblásticas humanas). Placenta, 2021. 103: p. 72-75.
Kolokol'tsova, T., et al., Caraterísticas dos trofoblastos em cultura de longo prazo. Boletim de Biologia Experimental e Medicina, 2017. 164: p. 259-265.
Leonetti, CP, CM Butt e HM Stapleton, Interrupção da atividade da hormona tireoidiana sulfotransferase por produtos químicos retardadores de chama bromados na linha celular de placenta de coriocarcinoma humano, BeWo. Chemosphere, 2018. 197: p. 81-88.
Bralewska, M., T. Pietrucha e A. Sakowicz, Redução no nível de proteína CST derivada de CgA nas linhas de células trofoblásticas HTR-8 / SVneo e BeWo causadas pelo ambiente pré-eclâmptico. Revista Internacional de Ciências Moleculares, 2023. 24(8): p. 7124.
Hu, Y., et al., Análise proteómica comparativa da adição de trichosanthin de drogas à linha celular BeWo. Molecules, 2022. 27(5): p. 1603.