Volume: 100 ml
Armazenamento: ≤ –15 °C
Esterilidade: Filtrado esterilizado
A solução estável de glutamina (L-alanil-L-glutamina, 200 mM) é uma forma dipeptídica altamente estável de L-glutamina, concebida como substituto direto da L-glutamina convencional em meios de cultura celular. A L-glutamina é um aminoácido essencial e uma importante fonte de energia para células cultivadas, desempenhando um papel fundamental no crescimento celular, metabolismo e síntese proteica.
Aplicação e benefícios
Em meios líquidos padrão, a L-glutamina degrada-se relativamente rápido a 37 °C, levando à formação de subprodutos tóxicos, como iões de amónio, que podem afetar negativamente a viabilidade celular e os resultados experimentais. A glutamina estável supera essa limitação, fornecendo uma forma de dipeptídeo não degradável que permanece intacta em condições de cultura.
As células clivam enzimaticamente a ligação dipeptídica para libertar L-glutamina conforme necessário, garantindo um fornecimento contínuo e fresco, ao mesmo tempo que evitam a acumulação de resíduos nocivos. Isto torna a solução particularmente vantajosa para culturas celulares de longo prazo e sistemas de crescimento de alta densidade.
Formulação e uso
A solução de L-alanil-L-glutamina é preparada em água de grau de cultura celular a uma concentração de 200 mM e é filtrada esterilizada para aplicações sensíveis à contaminação. Pode ser diluída diretamente em meios completos, de acordo com os requisitos experimentais. Armazenar a ≤ –15 °C e evitar ciclos repetidos de congelamento-descongelamento para manter a estabilidade do produto.
Apenas para uso em investigação. Não deve ser utilizado em procedimentos de diagnóstico ou terapêuticos. Não deve ser utilizado em seres humanos ou animais.
Volume: 100 ml
Armazenamento: +2 °C a +8 °C
Esterilidade: Filtrado esterilizado
A solução tampão HEPES (1 M), também conhecida como ácido N-2-hidroxietilpiperazina-N-2-etanosulfónico, é um agente tampão orgânico zwitteriônico amplamente utilizado em meios de cultura celular. Foi concebida para manter condições de pH estáveis na faixa fisiológica de 6,7 a 8,6, apoiando a função celular ideal durante aplicações in vitro.
Aplicação e benefícios
O HEPES oferece capacidade tampão confiável em sistemas de cultura celular, especialmente quando as células são manuseadas fora de uma incubadora de CO₂. A adição de 10–25 mM de HEPES aos meios de cultura oferece maior estabilidade de pH durante períodos prolongados de manipulação, ajudando a manter condições experimentais consistentes.
Este tampão é impermeável à membrana, tem interferência mínima nas reações bioquímicas e demonstra forte estabilidade química e enzimática. Estas propriedades tornam-no adequado para uma ampla gama de aplicações de cultura celular e bioquímicas.
Formulação e uso
A solução é fornecida como um concentrado 1 M preparado em água de grau de cultura celular e é filtrada esterilizada para uso em ambientes sensíveis à contaminação. Pode ser diluída até a concentração de trabalho desejada, dependendo dos requisitos da aplicação. Armazene a +2 °C a +8 °C e manuseie em condições assépticas para preservar a integridade do produto.
Apenas para uso em investigação. Não deve ser utilizado em procedimentos de diagnóstico ou terapêuticos. Não deve ser utilizado em seres humanos ou animais.
Volume: 50 ml
Armazenamento: +2 °C a +8 °C
Esterilidade: Filtrado esterilizado
A solução de D-(+)-glicose (solução de dextrose) é um suplemento estéril e pronto a usar que contém o açúcar natural D-(+)-glicose, um componente central do metabolismo celular. A glicose está envolvida em processos biológicos essenciais, tais como a produção de energia, a glicosilação e a formação de glicanos que contribuem para a estrutura e função celular.
Aplicação e benefícios
Esta solução de glicose é amplamente utilizada como suplemento em meios de cultura celular e em inúmeras aplicações de biologia celular e molecular. Como fonte primária de carbono e energia, a glicose apoia o crescimento celular, a proliferação e a atividade metabólica. O seu envolvimento nas vias biossintéticas também a torna fundamental para manter a fisiologia celular normal e a consistência experimental.
Formulação e uso
A solução é fornecida numa concentração elevada de 250 g/L de glicose, permitindo uma diluição flexível em meios de cultura de acordo com os requisitos experimentais. É filtrada de forma estéril para garantir a adequação a aplicações sensíveis à contaminação. Armazenar entre +2 °C e +8 °C e manusear de forma asséptica para manter a qualidade e a estabilidade do produto.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso em procedimentos de diagnóstico ou terapêuticos. Não se destina a uso em seres humanos ou animais.
Volume: 10 ml
Armazenamento: +2 °C a +8 °C
Esterilidade: Filtrado esterilizado
A Solução de Insulina-Transferrina-Selénio (ITS) (100x) é um suplemento quimicamente definido concebido para uma vasta gama de aplicações em cultura celular. É mais frequentemente utilizada como aditivo em meios de cultura celular basais para apoiar o crescimento celular em condições de soro reduzido ou sem soro.
Aplicação e benefícios
O nosso suplemento ITS fornece os componentes essenciais necessários para o desempenho ideal de meios sem soro. Ao suplementar meios nutritivos convencionais com ITS, a necessidade de soro fetal bovino (FBS) para a manutenção de rotina de muitas linhas celulares pode ser significativamente reduzida. Isto ajuda a minimizar a variabilidade associada à utilização de soro, mantendo simultaneamente um crescimento e viabilidade celular consistentes.
A insulina apoia a absorção celular e o metabolismo de nutrientes essenciais, a transferrina facilita o transporte de ferro e o selénio contribui para a defesa antioxidante e a atividade enzimática. Em conjunto, estes componentes promovem um metabolismo celular equilibrado e uma melhor reprodutibilidade em sistemas de cultura definidos.
Formulação e Utilização
A Insulina-Transferrina-Selénio (ITS) é fornecida como uma solução 100x concentrada em Solução Salina Equilibrada de Earle (EBSS) sem vermelho de fenol. Para aplicações padrão, dilua 1:100 no meio basal apropriado para atingir a concentração de trabalho recomendada. Armazene a +2 °C a +8 °C e manuseie em condições assépticas para manter a estabilidade e a esterilidade do produto.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a procedimentos de diagnóstico ou terapêuticos. Não se destina a uso em seres humanos ou animais.
Volume: 5 ml
Armazenamento: +2 °C a +8 °C
Esterilidade: Filtrado estéril
A Solução de Insulina Humana Recombinante é um suplemento quimicamente definido, comumente utilizado para o cultivo de linhas celulares de mamíferos, incluindo células de ovário de hamster chinês (CHO). Esta solução de grau de cultura celular contém insulina humana recombinante expressa em Saccharomyces cerevisiae, garantindo alta pureza e desempenho consistente em aplicações de investigação.
Aplicação e benefícios
A insulina é habitualmente adicionada a meios sem soro e quimicamente definidos para promover o crescimento celular e a produtividade. Como hormona reguladora fundamental, a insulina apoia a absorção, utilização e armazenamento celular de glicose, aminoácidos e ácidos gordos. Inibe também a degradação de glicogénio, proteínas e lípidos, contribuindo assim para uma melhor viabilidade celular e estabilidade metabólica em sistemas de cultura. A formulação quimicamente definida promove a reprodutibilidade e minimiza a variabilidade em fluxos de trabalho sensíveis de cultura celular.
Propriedades biológicas e utilização
A insulina é uma hormona polipeptídica de duas cadeias produzida naturalmente pelas células β das ilhotas pancreáticas. Tem um peso molecular de aproximadamente 5800 Da. As cadeias α e β estão ligadas por duas ligações dissulfureto inter-cadeias, e a cadeia α contém uma ligação dissulfureto intra-cadeia. Para aplicações em cultura celular, a solução deve ser manuseada em condições assépticas e armazenada a +2 °C a +8 °C para manter a estabilidade e o desempenho.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a ser utilizado em procedimentos de diagnóstico ou terapêuticos. Não se destina a ser utilizado em seres humanos ou animais.
Volume: 100 ml
Armazenamento: +2 °C a +8 °C
Esterilidade: Filtrado esterilizado
A solução de piruvato de sódio (100 mM) é um suplemento estéril e pronto a usar, concebido para fornecer uma fonte de energia adicional e facilmente acessível para meios de cultura celular. O piruvato de sódio desempenha um papel fundamental no metabolismo energético celular e apoia o crescimento de células metabolicamente ativas e de rápida proliferação, tais como as células tumorais. A suplementação pode aumentar a viabilidade celular e ajudar a manter a estabilidade metabólica em sistemas de cultura.
Aplicação e benefícios
Esta solução é amplamente utilizada na cultura celular de rotina para enriquecer os meios com piruvato e promover condições de crescimento ideais. Ela apoia a produção de ATP, pode ajudar a reduzir o stress oxidativo e contribui para melhorar o desempenho metabólico das células cultivadas. Fabricado com água de grau de cultura celular e filtrado esterilizado, o produto garante qualidade consistente e reprodutibilidade nos fluxos de trabalho de pesquisa.
Utilização e compatibilidade
A concentração final recomendada para a maioria das aplicações de cultura celular é de 1 mM de piruvato de sódio, obtida pela diluição da solução estoque de 100 mM em 1:100 em meio de cultura completo. A solução é compatível com uma ampla gama de meios basais e linhas celulares de mamíferos. Armazene a +2 °C a +8 °C e proteja contra contaminação para manter a estabilidade do produto.
Apenas para uso em investigação. Não deve ser utilizado em procedimentos de diagnóstico ou terapêuticos. Não deve ser utilizado em seres humanos ou animais.
Volume: 100 ml Armazenamento: ≤-15°C Esterilidade: Estéril-filtrado
A Solução Antibiótica/Antimicótica (100x) é um concentrado estéril, pronto a usar, concebido para reduzir os riscos de contaminação microbiana em culturas celulares e aplicações laboratoriais relacionadas. Esta solução 100x contém uma combinação bem estabelecida de penicilina, estreptomicina e anfotericina B, proporcionando uma atividade antimicrobiana de largo espetro contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, leveduras e fungos filamentosos. A formulação é adequada para utilização em culturas de células eucarióticas, meios bacterianos e outros sistemas sensíveis à contaminação, apoiando operações laboratoriais limpas e consistentes.
Aplicação e benefícios Optimizada para protocolos de investigação de rotina, esta solução é amplamente utilizada para manter condições assépticas em fluxos de trabalho de cultura de células. Oferece um desempenho fiável em ambientes sensíveis à contaminação, ajudando os investigadores a reduzir o risco de crescimento microbiano excessivo sem comprometer a saúde das células ou a reprodutibilidade experimental. A formulação estéril-filtrada elimina a necessidade de etapas adicionais de solubilização, apoiando a preparação simplificada de meios e reduzindo a variabilidade nos procedimentos laboratoriais diários.
Utilização e compatibilidade Para obter concentrações de trabalho padrão, diluir a solução 1:100 no seu meio de cultura completo. O produto é compatível com uma vasta gama de linhas celulares de mamíferos e meios basais. Com uma disponibilidade de stock consistente, os investigadores beneficiam de uma continuidade de fornecimento fiável e de um planeamento logístico simplificado. A solução deve ser armazenada a ≤ -15 °C e protegida de ciclos repetidos de congelamento e descongelamento para manter a estabilidade. Apenas para uso em investigação. Não se destina a ser utilizado em procedimentos de diagnóstico ou terapêuticos. Não se destina a ser utilizado em seres humanos ou animais.
Volume: 100 ml Armazenamento: +2°C a +8°C Esterilidade: Estéril-filtrado
MEM Non-Essential Amino Acids (100x) é um suplemento estéril concebido para melhorar o crescimento e a viabilidade celular em sistemas de cultura de células de mamíferos. A formulação corresponde a um concentrado de 100x dos aminoácidos não essenciais encontrados no Meio Essencial Mínimo (MEM) padrão, permitindo a suplementação direta do meio basal com uma preparação mínima.
Aplicação e benefícios Este suplemento fornece um conjunto adicional de aminoácidos para células em rápida proliferação ou para linhas celulares que perderam a capacidade de sintetizar aminoácidos não essenciais de novo. Ao aliviar a carga metabólica da biossíntese, suporta uma cinética de crescimento melhorada, viabilidade prolongada e maior consistência experimental
- especialmente em culturas sensíveis a nutrientes ou de alta densidade.
Composição e utilização A solução inclui glicina, L-alanina, L-asparagina, ácido L-aspártico, ácido L-glutâmico, L-prolina e L-serina. É compatível com MEM e com a maioria dos outros meios padrão. Para utilizar, diluir 1:100 no meio de cultura final. Este produto é filtrado de forma estéril e está pronto a utilizar sem etapas de manuseamento adicionais. Apenas para uso em investigação. Não se destina a ser utilizado em procedimentos de diagnóstico ou terapêuticos. Não se destina a ser utilizado em seres humanos ou animais.
- Uma Alternativa Suave à Tripsina
Accutase é uma solução de descolamento celular que está a revolucionar a indústria da cultura celular. É uma mistura de enzimas proteolíticas e colagenolíticas que imita a ação da tripsina e da colagenase. Ao contrário da tripsina, o Accutase não contém quaisquer componentes de mamíferos ou bactérias e é muito mais suave para as células, o que o torna uma solução ideal para o descolamento rotineiro de células de material plástico de cultura de tecidos padrão e material plástico revestido de adesão. Nesta publicação do blogue, vamos explorar as vantagens e utilizações do Accutase e a forma como está a mudar o jogo na cultura de células.
Vantagens do Accutase
A Accutase tem várias vantagens em relação às soluções tradicionais de tripsina. Em primeiro lugar, pode ser utilizado sempre que for necessário um descolamento suave e eficiente de qualquer linha celular aderente, o que o torna um substituto direto da tripsina. Em segundo lugar, a Accutase funciona extremamente bem em células estaminais embrionárias e neuronais, tendo sido demonstrado que mantém a viabilidade destas células após a passagem. Em terceiro lugar, a Accutase preserva a maioria dos epítopos para posterior análise por citometria de fluxo, tornando-a ideal para a análise de marcadores de superfície celular.
Além disso, a Accutase não necessita de ser neutralizada aquando da passagem das células aderentes. A adição de mais meios após a divisão das células dilui a Accutase de modo a que esta deixe de ser capaz de destacar as células. Isto elimina a necessidade de um passo de inativação e poupa tempo aos técnicos de cultura de células. Finalmente, o Accutase não precisa de ser aliquotado e um frasco mantém-se estável no frigorífico durante 2 meses.
Aplicações do Accutase
Accutase é um substituto direto da solução de tripsina e pode ser utilizado para a passagem de linhas celulares. Além disso, Accutase tem um bom desempenho na separação de células para a análise de muitos marcadores de superfície celular utilizando citometria de fluxo e para a seleção de células. Outras aplicações a jusante do tratamento com Accutase incluem a análise de marcadores de superfície celular, ensaio de crescimento de vírus, proliferação celular, ensaios de migração de células tumorais, passagem celular de rotina, aumento da escala de produção (bioreactor) e citometria de fluxo.
Composição do Accutase
Accutase não contém componentes de mamíferos ou bactérias e é uma mistura de enzimas naturais com atividade enzimática proteolítica e colagenolítica. É formulado numa concentração muito mais baixa do que a tripsina e a colagenase, tornando-o menos tóxico e mais suave, mas igualmente eficaz.
Eficácia do Accutase
O Accutase demonstrou ser eficiente na separação de células primárias e estaminais e na manutenção de uma elevada viabilidade celular em comparação com enzimas de origem animal, como a tripsina. 100% das células são recuperadas ao fim de 10 minutos e não há qualquer problema em deixar as células no Accutase até 45 minutos, graças à autodigestão do Accutase.
Em resumo
Em conclusão, o Accutase é uma solução poderosa que está a mudar o jogo na cultura de células. Com a sua natureza suave, eficiência e versatilidade, Accutase é a alternativa ideal à tripsina. Se procura uma solução fiável e eficiente para o descolamento de células, Accutase é a solução para si.
O que é que o EMEM contém?
O EMEM é uma versão modificada do meio essencial mínimo de Eagle, contendo a solução salina equilibrada de Earle, aminoácidos não essenciais, L-glutamina, piruvato de sódio e bicarbonato de sódio. É importante notar que este nível de bicarbonato de sódio se destina a ser utilizado em 5% de CO2 no ar. Para manter a sua eficácia, recomenda-se que o meio seja armazenado entre 2°C e 8°C, no escuro, quando não estiver a ser utilizado.
Para que é utilizado o EMEM?
O meio essencial mínimo de Eagle (EMEM) é um meio de cultura celular que pode manter as células em cultura de tecidos. O meio contém concentrações mais elevadas de aminoácidos, permitindo uma aproximação mais exacta da composição proteica das células de mamíferos em cultura. O EMEM pode ser utilizado para cultivar várias células, incluindo fibroblastos, células da linha celular do cancro do fígado humano (HepG2) e células astrocitárias derivadas de progenitores cerebrais fetais humanos (PDA). É normalmente utilizado na presença de soro fetal bovino (FBS), soro de vitelo ou de cavalo.
Em que é que o EMEM é diferente de outros meios de cultura de células?
Embora o EMEM e o meio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) partilhem algumas semelhanças, também são diferentes. Ambos os meios carecem de proteínas e contêm os aminoácidos, sais, glucose e vitaminas necessários para fornecer energia a uma célula e mantê-la em cultura de tecidos. No entanto, a formulação DMEM é modificada para conter até quatro vezes mais vitaminas e aminoácidos e duas a quatro vezes mais glucose do que o EMEM. Vale a pena notar que o EMEM também é diferente da formulação original do MEM.
Controlo de qualidade
Estéril-filtrado
Armazenamento e prazo de validade
Armazenar entre +2°C e +8°C, protegido da luz.
Depois de aberto, conservar a 4°C e utilizar no prazo de 6-8 semanas.
Condições de transporte
Temperatura ambiente
Conservação
Manter refrigerado a uma temperatura entre +2°C e +8°C, ao abrigo da luz. Evitar o congelamento e o aquecimento frequente a +37°C, uma vez que reduz a qualidade do produto.
Não aquecer o meio para além de 37°C nem utilizar fontes de calor não controladas, tais como aparelhos de micro-ondas.
Se apenas uma parte do meio for utilizada, retirar a quantidade necessária e aquecê-la à temperatura ambiente antes de a utilizar.
Composição
Categoria
Componentes
Concentração (mg/L)
Aminoácidos
L-Arginina HCl
126.00
L-Cistina 2 HCl
31.30
L-Glutamina
292.00
L-Histidina HCl H2O
42.00
L-Isoleucina
52.00
L-Leucina
52.00
L-Lisina HCl
72.50
L-Metionina
15.00
L-fenilalanina
32.00
L-Treonina
48.00
L-Triptofano
10.00
L-tirosina 2 Na 2 H2O
51.90
L-Valina
46.00
Vitaminas
Cloreto de colina
1.00
Vitaminas
Pantotenato de D-Cálcio
1.00
Ácido fólico
1.00
myo-Inositol
2.00
Nicotinamida
1.00
Piridoxal HCl
1.00
Riboflavina
0.10
Tiamina HCl
1.00
Sais inorgânicos
CaCl2 2 H2O
265.00
Sais inorgânicos
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Outros componentes
D-Glucose
1000.00
Outros componentes
Sal de sódio de vermelho de fenol
11.00
As principais caraterísticas do Freeze Medium CM-1 incluem:
Ampla compatibilidade: Eficaz para uma vasta gama de tipos de células, incluindo células primárias, células estaminais e linhas celulares estabelecidas.
Alta Viabilidade: Optimizado para maximizar a recuperação e a viabilidade das células pós-descongelamento, garantindo resultados experimentais fiáveis.
Pronto a utilizar: Convenientemente preparado e esterilizado para aplicação imediata, reduzindo o tempo de preparação e o risco de contaminação.
Estabilidade melhorada: Mantém um desempenho consistente sob condições padrão de criopreservação, garantindo resultados reprodutíveis.
Longo prazo de validade: O CM-1 é um meio de criopreservação pronto a utilizar que contém soro e que pode ser armazenado no frigorífico até um ano.
Utilização do CM-1 para congelação de células
Para utilizar o CM-1 para congelar células aderentes e em suspensão, siga estes passos
Para células aderentes, lavar e dissociar as células do substrato de cultura. No caso das células em suspensão, avançar diretamente para o passo seguinte.
Contar as células para garantir que estão na concentração correta.
Centrifugar as células para as pelletar e, em seguida, ressuspender em meio de congelação CM-1.
Transferir as células ressuspensas para frascos criogénicos.
Utilize um método de congelação lenta antes de transferir as células para armazenamento a longo prazo
Método
Descrição
Passos
❄️
Congelação manual
Um método passo a passo que envolve a redução gradual da temperatura para garantir a viabilidade das células
1️⃣ Colocar as células em meio de congelação num congelador a 4°C durante 40 minutos.
2️⃣ Transferir para um congelador a -80°C durante 24 horas.
3️⃣ Armazenar as células em azoto líquido para preservação a longo prazo
❄️
Utilização do Mr. Frosty
Um dispositivo conveniente que permite taxas de congelação controladas sem energia eléctrica
1️⃣ Preparar as células em frascos criogénicos com meio de congelação.
2️⃣ Colocar os frascos criogénicos no recipiente Mr. Frosty.
3️⃣ Armazenar a -80°C durante 24 horas antes de transferir para azoto líquido
❄️
Congelador de velocidade controlada
Um congelador de alta precisão da Thermo Fisher ou de outros fabricantes, concebido para a redução controlada da temperatura
1️⃣ Programar o dispositivo para diminuir gradualmente a temperatura.
2️⃣ Colocar as células preparadas no congelador.
3️⃣ Após o ciclo de congelação, transferir as células para azoto líquido
Armazenar os frascos criogénicos a temperaturas inferiores a -130°C ou em azoto líquido para preservação a longo prazo.
Ingredientes
Contém FBS, DMSO, Glucose, Sais
Capacidade tampão: pH = 7,2 a 7,6
O Freeze Medium CM-1 da Cytion oferece uma solução fiável para a criopreservação, garantindo uma elevada viabilidade celular e funcionalidade pós-descongelamento para uma vasta gama de aplicações de investigação.
O meio Ham's F-12K (Kaighn's) é cuidadosamente formulado para otimizar as condições de cultura de células. Apresenta uma composição enriquecida, fornecendo níveis elevados de componentes essenciais, tais como aminoácidos e piruvato de sódio, bem como elementos adicionais, incluindo putrescina, timidina, hipoxantina e zinco. Estas adições permitem aos investigadores suplementar o meio com um mínimo de soro ou componentes definidos para tipos de células específicos, facilitando condições experimentais precisas.
Em particular, o meio Ham's F-12K (Kaighn's) não contém proteínas ou factores de crescimento. Consequentemente, a suplementação com factores de crescimento e Soro Fetal Bovino (FBS) é frequentemente necessária, permitindo aos investigadores adaptar o meio aos requisitos das suas linhas celulares específicas. Para um desempenho ótimo, a concentração de FBS deve ser cuidadosamente optimizada para cada linha celular, assegurando um crescimento e funcionalidade óptimos.
Para manter o pH fisiológico, o meio Ham's F-12K (Kaighn's) emprega um sistema tampão de bicarbonato de sódio (2,5 g/L), necessitando de um ambiente controlado de 5-10% de CO2 durante o cultivo. Isto assegura que o pH do meio se mantém dentro do intervalo ideal para o crescimento e viabilidade das células
Controlo de qualidade
pH = 7,2 +/
- 0,02 a 20-25°C.
Cada lote foi testado quanto à esterilidade e ausência de micoplasma e bactérias.
Manutenção
Manter refrigerado a uma temperatura entre +2°C e +8°C, ao abrigo da luz. O congelamento e o aquecimento até +37°C minimizam a qualidade do produto.
Não aquecer o meio a mais de 37°C ou utilizar fontes de calor incontroláveis (por exemplo, aparelhos de micro-ondas).
Se apenas uma parte do meio for utilizada, retire essa quantidade do frasco e aqueça-a à temperatura ambiente.
O prazo de validade de qualquer meio, exceto o meio básico, é de 8 semanas a partir da data de fabrico.
Composição
Componentes
mg/L
Sais inorgânicos
Cloreto de cálcio x 2H2O
135,24
Sulfato de cobre(II) x 5H2O
0,00
Sulfato de ferro (II) x 7H2O
0,83
Cloreto de magnésio x 6H2O
105,72
Sulfato de magnésio x 7H2O
394,49
Cloreto de potássio
283,29
Di-hidrogenofosfato de potássio
58,52
Cloreto de sódio
7597,20
hidrogenofosfato de di-sódioanidro
115,02
Sulfato de zinco x 7H2O
0,14
Outros componentes
D(+)-Glucose anidra
1260,00
Hipoxantina
4,08
Ácido DL-α-lipóico
0,21
Vermelho de fenol
3,00
Putrescina x 2HCl
0,32
Piruvato de sódio
220,00
NaHCO3
2500,00
Timidina
0,73
Aminoácidos
L-Alanina
17,82
L-Arginina x HCl
421,40
L-Asparagina x H2O
30,02
Ácido L-aspártico
26,62
L-cisteína x HCl x H2O
70,24
L-Glutamina
292,20
Ácido L-Glutâmico
29,42
Glicina
15,01
L-Histidina x HCl x H2O
41,92
L-Isoleucina
7,87
L-Leucina
26,24
L-Lisina x HCl
73,04
L-Metionina
8,95
L-fenilalanina
9,91
L-Prolina
69,06
L-Serina
21,02
L-Treonina
23,82
L-Triptofano
4,08
L-tirosina
10,87
L-Valina
23,42
Vitaminas
D(+)-Biotina
0,07
D-Pantotenato de cálcio
0,48
Cloreto de colina
13,96
Ácido fólico
1,32
myo-Inositol
18,02
Nicotinamida
0,04
Piridoxina x HCl
0,06
Riboflavina
0,04
Tiamina x HCl
0,34
Vitamina B12
1,36
A solução salina tamponada com fosfato (PBS) é uma solução tampão amplamente utilizada na investigação biológica e química. Desempenha um papel crucial na manutenção do equilíbrio do pH e da osmolaridade durante vários procedimentos experimentais, incluindo o processamento de tecidos e a cultura de células. A nossa solução PBS é meticulosamente formulada com ingredientes de elevada pureza para garantir estabilidade e fiabilidade em todas as experiências. A osmolaridade e as concentrações de iões do nosso PBS imitam de perto as do corpo humano, tornando-o isotónico e não tóxico para a maioria das células.
Composição da nossa solução PBS
A nossa solução PBS é uma mistura com pH ajustado de tampões de fosfato de grau ultrapuro e soluções salinas. Numa concentração de trabalho 1X, contém
8000 mg/L de cloreto de sódio (NaCl)
200 mg/L de cloreto de potássio (KCl)
1150 mg/L Fosfato de sódio dibásico anidro (Na2HPO4)
200 mg/L Fosfato de potássio monobásico anidro (KH2PO4)
Esta composição assegura um pH e um equilíbrio iónico óptimos, adequados a uma vasta gama de aplicações biológicas.
Aplicações da nossa solução PBS
A nossa solução PBS é ideal para várias aplicações na investigação biológica. As suas propriedades isotónicas e não tóxicas tornam-na adequada para a diluição de substâncias e lavagem de recipientes de células. As soluções PBS que contêm EDTA são eficazes para desprender células ligadas e aglomeradas. No entanto, os metais divalentes, como o zinco, não devem ser adicionados ao PBS, uma vez que podem causar precipitação. Nestes casos, recomenda-se a utilização de tampões Good's. Além disso, a nossa solução de PBS é uma alternativa aceitável ao meio de transporte viral para o transporte e armazenamento de vírus de ARN, incluindo o SARS-CoV-2.
Controlo de qualidade
Estéril-filtrado
Armazenamento e prazo de validade
Armazenar entre +2°C e +25°C, protegido da luz.
Depois de aberto, conservar a uma temperatura entre 2°C e 25°C e utilizar no prazo de 24 meses.
Condições de transporte
Temperatura ambiente
Manutenção
Manter refrigerado a uma temperatura entre +2°C e +8°C, ao abrigo da luz. Evitar o congelamento e o aquecimento frequente a +37°C, uma vez que reduz a qualidade do produto.
Não aquecer o meio para além de 37°C nem utilizar fontes de calor não controladas, tais como aparelhos de micro-ondas.
Se apenas uma parte do meio for utilizada, retirar a quantidade necessária e aquecê-la à temperatura ambiente antes de a utilizar.
Composição
Categoria
Componentes
Concentração (mg/L)
Sais
Cloreto de potássio
200
Fosfato de potássio monobásico anidro
200
Cloreto de sódio
8000
Fosfato de sódio dibásico anidro
1150
Inicialmente concebido para suportar o crescimento de células leucémicas humanas em culturas em suspensão e em monocamada, o meio RPMI 1640 evoluiu através de modificações efectuadas por investigadores e fornecedores comerciais para se tornar adequado a uma gama diversificada de células de mamíferos. É excecionalmente compatível com linhas celulares como HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrócitos e carcinomas.
O meio RPMI 1640 distingue-se de outros meios de cultura de células devido à sua composição única. Contém uma quantidade substancial de fosfato, aminoácidos e vitaminas. Nomeadamente, inclui biotina, vitamina B12 e PABA, ausentes no Eagle's Minimal Essential Medium ou no Dulbecco's Modified Eagle Medium. Além disso, o meio RPMI 1640 apresenta concentrações significativamente elevadas de vitaminas inositol e colina. No entanto, não contém proteínas, lípidos ou factores de crescimento. Consequentemente, a suplementação com 10% de Soro Fetal Bovino (FBS) é normalmente necessária para proporcionar condições óptimas para o crescimento celular.
O sistema tampão do meio RPMI 1640 baseia-se no bicarbonato de sódio e necessita de um ambiente com 5-10% de CO2 para manter um pH fisiologicamente adequado. A inclusão do agente redutor glutatião distingue ainda mais este meio dos outros.
Controlo de qualidade
Estéril-filtrado
Armazenamento e prazo de validade
Armazenar entre +2°C e +8°C, protegido da luz.
Depois de aberto, conservar a 4°C e utilizar no prazo de 6-8 semanas.
Condições de transporte
Temperatura ambiente
Manutenção
Manter refrigerado a uma temperatura entre +2°C e +8°C, ao abrigo da luz. Evitar a congelação e o aquecimento frequente a +37°C, uma vez que reduz a qualidade do produto.
Não aquecer o meio para além de 37°C nem utilizar fontes de calor não controladas, tais como aparelhos de micro-ondas.
Se apenas uma parte do meio for utilizada, retirar a quantidade necessária e aquecê-la à temperatura ambiente antes de a utilizar.
Composição
Categoria
Componentes
Concentração (mg/L)
Aminoácidos
Glicina
10.00
L-Alanil-L-Glutamina
434.40
L-Arginina
200.00
L-Asparagina H2O
56.82
Ácido L-aspártico
20.00
L-Cistina 2HCl
65.20
Ácido L-Glutâmico
20.00
L-Histidina HCl H2O
20.27
L-hidroxi-L-prolina
20.00
L-Isoleucina
50.00
L-Leucina
50.00
L-Lisina HCl
40.00
L-Metionina
15.00
L-fenilalanina
15.00
L-Prolina
20.00
L-Serina
30.00
L-Treonina
20.00
L-Triptofano
5.00
L-tirosina 2Na 2H2O
28.83
L-Valina
20.00
Vitaminas
ácido p-amino-benzoico
1.00
D-Biotina
0.20
Cloreto de colina
3.00
D-pantotenato de cálcio
0.25
Ácido fólico
1.00
myo-Inositol
35.00
Nicotinamida
1.00
Piridoxina HCl
1.00
Riboflavina
0.20
Tiamina HCl
1.00
Vitamina B12
0.005
Sais inorgânicos
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Outros componentes
D-Glucose
2000.00
L-Glutatião reduzido
1.00
Sal de sódio de vermelho de fenol
5.30
Esta formulação única combina o Meio Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM) e Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) num rácio preciso de 1:1. A adição de L-glutamina melhora ainda mais a sua composição.
O DMEM, derivado do Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), oferece uma maior concentração de aminoácidos e vitaminas em comparação com o seu antecessor. Em contrapartida, o Ham's F-12 baseia-se no meio Ham's F-10, fornecendo um conjunto complementar de componentes essenciais.
Para apoiar um crescimento celular ótimo, é prática comum suplementar o DMEM:Ham's F12 com FBS a uma concentração típica de 5-10%. Esta adição é necessária porque o meio carece de hormonas de crescimento, lípidos e proteínas cruciais para o desenvolvimento celular.
O DMEM:Ham's F12 incorpora um sistema tampão de pH e é frequentemente suplementado com vermelho de fenol, um indicador de pH. As células cultivadas em DMEM:Ham's F12, ou em qualquer meio que utilize o sistema tampão de bicarbonato, requerem um ambiente controlado de CO2 de 5-10% para manter níveis de pH adequados.
Controlo de qualidade
Estéril-filtrado
Armazenamento e prazo de validade
Armazenar entre +2°C e +8°C, protegido da luz.
Depois de aberto, conservar a 4°C e utilizar no prazo de 6-8 semanas.
Condições de transporte
Temperatura ambiente
Manutenção
Manter refrigerado a uma temperatura entre +2°C e +8°C, ao abrigo da luz. Evitar o congelamento e o aquecimento frequente a +37°C, uma vez que reduz a qualidade do produto.
Não aquecer o meio para além de 37°C nem utilizar fontes de calor não controladas, tais como aparelhos de micro-ondas.
Se apenas uma parte do meio for utilizada, retirar a quantidade necessária e aquecê-la à temperatura ambiente antes de a utilizar.
Composição
Categoria
Componentes
Concentração (mg/L)
Aminoácidos
Glicina
18.75
L-Alanina
4.45
L-Arginina HCl
147.50
L-Asparagina H₂O
7.50
Ácido L-aspártico
6.65
L-Cisteína HCl H₂O
17.56
L-Cistina 2 HCl
31.29
Ácido L-Glutâmico
7.35
L-Glutamina
365.00
L-Histidina HCl H₂O
31.48
L-Isoleucina
54.47
L-Leucina
59.05
L-Lisina HCl
91.25
L-Metionina
17.24
L-fenilalanina
35.48
L-Prolina
17.25
L-Serina
26.25
L-Treonina
53.45
L-Triptofano
9.02
Sal dissódico de L-tirosina
48.10
L-Valina
52.85
Vitaminas
D-Biotina
0.0035
Cloreto de colina
8.98
Pantotenato de D-Cálcio
2.24
Ácido fólico
2.66
myo-Inositol
12.60
Nicotinamida
2.02
Piridoxina HCl
0.031
Piridoxal HCl
2.00
Riboflavina
0.219
Tiamina HCl
2.17
Vitamina B12
0.68
Sais inorgânicos
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Outros componentes
D-Glucose
3151.00
Hipoxantina
2.40
HEPES
3574.50
Ácido linoleico
0.042
Ácido lipóico
0.105
Sal de sódio de vermelho de fenol
8.63
Putrescina 2 HCl
0.081
Piruvato de sódio
55.00
Timidina
0.365
- 0,02 a 20-25 °C. Cada lote foi testado quanto à esterilidade e ausência de micoplasma e bactérias. Manutenção Manter refrigerado entre +2 °C e +8 °C, ao abrigo da luz. A congelação e o aquecimento até +37 °C minimizam a qualidade do produto. Não aqueça o meio a mais de 37 °C nem utilize fontes de calor incontroláveis (por exemplo, aparelhos de micro-ondas). Se apenas uma parte do meio for utilizada, retire essa quantidade do frasco e aqueça-a à temperatura ambiente. O prazo de validade de qualquer meio, exceto o meio básico, é de 6 a 8 semanas a partir da data de abertura. Composição Componentes mg/L Sais inorgânicosCloreto de cálcio x 2H2O132,00 Sulfato de magnésio97,67 Cloreto de potássio400 Cloreto de sódio6.460,00 Hidrogenofosfato dissódico (anidro)504,00 Outros componentesD(+)-Glicose (anidro)3.000,00 Glutationa (reduzida)0,5 Peptona de carne600,00 Sal de sódio do vermelho fenol11 AminoácidosL-alanina13,36 L-arginina x HCl42,14 L-Asparagina x H2O45,03 Ácido L-aspártico19,97 L-Cisteína x HCl x H2O31,75 L-glutamina (estável)219,15 Ácido L-glutâmico22,07 Glicina7,51 L-histidina x HCl x H2O20,96 L-hidroxiprolina19,67 L-isoleucina39,36 L-leucina39,36 L-Lisina x HCl36,54 L-Metionina14,92 L-fenilalanina16,52 L-Prolina17,27 L-Serina26,28 L-treonina17,87 L-triptofano3,06 Sal dissódico de L-tirosina26,10 L-Valina17,57 VitaminasÁcido p-aminobenzóico1,0 Ácido ascórbico0,56 D(+)-Biotina0,20 D-Pantotenato de cálcio0,20 Cloreto de colina5,0 Ácido fólico10,0 Mio-inositol36,00 Nicotinamida0,50 Ácido nicotínico0,5 Cloridrato de piridoxal0,50 Cloridrato de piridoxina0,50 Riboflavina0,20 Cloridrato de tiamina0,20 Vitamina B122,0
O Medium 199 oferece uma gama de aplicações no terreno. Pode manter eficazmente o complexo cumulus-oócito (COC) e apoiar a maturação in vitro de oócitos. Além disso, é utilizado na lavagem de linhas de aspiração durante a recolha de óvulos de vacas Holstein alemãs. Além disso, o meio 199 é um excelente meio para a cultura de células endoteliais cardíacas derivadas de ratos. Estas aplicações demonstram a versatilidade e adaptabilidade do Medium 199 a várias necessidades experimentais.
Historial
O desenvolvimento do Medium 199 na década de 1950 marcou um avanço significativo nos meios de cultura de tecidos. Antes da sua introdução, muitos meios de cultura baseavam-se em produtos derivados de animais e extractos de tecidos. No entanto, Morgan e colegas revolucionaram o campo ao formularem uma fonte nutricional completamente definida para culturas de células. Através das suas experiências envolvendo diferentes combinações de vitaminas, aminoácidos e outros factores, descobriram as excepcionais propriedades promotoras de crescimento do Meio 199.
Controlo de qualidade
pH = 7,2 +/
- 0,02 a 20-25°C.
Cada lote foi testado para esterilidade e ausência de micoplasma e bactérias.
Manutenção
Manter refrigerado a uma temperatura entre +2°C e +8°C, ao abrigo da luz. O congelamento e o aquecimento até +37° C minimizam a qualidade do produto.
Não aquecer o meio a mais de 37° C nem utilizar fontes de calor incontroláveis (por exemplo, aparelhos de micro-ondas).
Se apenas uma parte do meio for utilizada, retirar essa quantidade do frasco e aquecê-la à temperatura ambiente.
O prazo de validade de qualquer meio, com exceção do meio básico, é de 8 semanas a partir da data de fabrico.
Composição
Componentes
mg/L
Sais inorgânicos
Cloreto de cálcio x 2H2O
264,92
Nitrato de ferro (III) x 9H2O
0,72
Sulfato de magnésio
97,67
Cloreto de potássio
400,00
Acetato de sódio x 3H2O
82,95
Cloreto de sódio
6,800.00
Di-hidrogenofosfato de sódio x H2O
140,00
Outros componentes
Sulfato de adenina
10,00
AMP
0,20
ATP
1,00
Colesterol
0,20
2'-Desoxirribose
0,50
D(+)-Glucose anidra
1,000.00
Glutatião (vermelho)
0,05
Guanina x HCl
0,30
Hipoxantina
0,30
Vermelho de fenol
10,00
D-Ribose
0,50
Timina
0,30
Tween 80
4,90
Uracilo
0,30
Xantina
0,30
NaHCO3
2,200.00
Aminoácidos
L-Alanina
25,00
L-Arginina x HCl
70,00
Ácido L-aspártico
30,00
L-cisteína x HCl x H2O
0,10
L-Cistina
20,00
L-Glutamina estável
149,00
Ácido L-Glutâmico
67,00
Glicina
50,00
L-Histidina x HCl x H2O
21,88
L-hidroxiprolina
10,00
L-Isoleucina
20,00
L-Leucina
60,00
L-Lisina x HCl
70,00
L-Metionina
15,00
L-fenilalanina
25,00
L-Prolina
40,00
L-Serina
25,00
L-Treonina
30,00
L-Triptofano
10,00
L-tirosina
40,00
L-Valina
25,00
Vitaminas
ácido 4-amino-benzoico
0,05
Ácido ascórbico
0,05
D(+)-Biotina
0,01
Calciferol
0,10
D-Pantotenato de cálcio
0,01
Cloreto de colina
0,50
Ácido fólico
0,01
myo-Inositol
0,05
Menadiona
0,01
Ácido nicotínico
0.025
Nicotinamida
0.025
Piridoxal x HCl
0.025
Piridoxol x HCl
0.025
Riboflavina
0,01
Sal dissódico do fosfato de DL-α-tocoferol
0,01
Tiamina x HCl
0,01
Acetato de vitamina A
0,14
O IMDM é adequado para culturas de células de alta densidade e de rápida proliferação, incluindo células Jurkat, COS-7 e macrófagos. As várias modificações de IMDM disponíveis para uma gama de aplicações de cultura de células podem ser encontradas utilizando a ferramenta de seleção de meios. Os meios líquidos fornecem nutrientes essenciais para todas as aplicações de cultura de células. Cada um dos nossos meios de cultura celular de alta qualidade é fabricado de acordo com a fórmula inicialmente publicada ou com as modificações necessárias para o desempenho consistente e a estabilidade do meio de cultura.
IMDM vs. DMEM
O IMDM contém nitrato de potássio em vez de nitrato férrico e HEPES e piruvato de sódio. Os componentes adicionais no IMDM tornam-no mais adequado para tipos de células especializadas e aplicações específicas do que o DMEM.
IMDM vs. RPMI
O IMDM e o RPMI têm formulações diferentes que podem ser relevantes para a estimulação com PMA/ionomicina. Uma diferença significativa é a concentração de Ca2+. Enquanto o RPMI contém 0,42 mM de Ca2+, o IMDM contém 1,49 mM.
Controlo de qualidade
pH = 7,2 +/
- 0,02 a 20-25°C.
Cada lote foi testado quanto à esterilidade e ausência de micoplasma e bactérias.
Manutenção
Manter refrigerado a uma temperatura entre +2°C e +8°C, ao abrigo da luz. O congelamento e o aquecimento até +37° C minimizam a qualidade do produto.
Não aquecer o meio a mais de 37° C ou utilizar fontes de calor incontroláveis (por exemplo, aparelhos de micro-ondas).
Se apenas uma parte do meio for utilizada, retirar essa quantidade do frasco e aquecê-la à temperatura ambiente.
O prazo de validade de qualquer meio, com exceção do meio básico, é de 8 semanas a partir da data de fabrico.
Composição
Componentes
mg/L
Sais inorgânicos
Cloreto de cálcio x 2 H2O
219,00
Cloreto de potássio
330,00
Nitrato de potássio
0.076
Sulfato de magnésio anidro
97,73
Cloreto de sódio
4,505.00
Dihidrogenofosfato de sódio anidro
109,00
Selenito de sódio
0,02
Outros componentes
D(+)-Glucose anidra
4,500.00
HEPES
5,958.00
Piruvato de sódio
110,00
Vermelho de fenol
15,00
Aminoácidos
L-Alanina
25,00
L-Arginina x HCl
84,00
L-Asparagina x H2O
25,00
Ácido L-aspártico
30,00
L-Cistina x 2HCl
91,24
L-Glutamina
584,00
Ácido L-Glutâmico
75,00
Glicina
30,00
L-Histidina x HCl x H2O
42,00
L-Isoleucina
104,80
L-Leucina
104,80
L-Lisina x HCl
146,20
L-Metionina
30,00
L-fenilalanina
66,00
L-Prolina
40,00
L-Serina
42,00
L-Treonina
95,20
L-Triptofano
16,00
L-Tirosina x 2Na
104,20
L-Valina
93,60
Vitaminas
D(+)-Biotina
0.013
D-Pantotenato de cálcio
4,00
Cloreto de colina
4,00
Ácido fólico
4,00
myo-Inositol
7,20
Meios de cultura celular: Uma visão geral
No domínio das ciências da vida, uma das metodologias mais importantes é a cultura de células. A remoção de células, tecidos ou órgãos de um animal ou planta e a subsequente implantação dessas células, tecidos ou órgãos num ambiente artificial que seja favorável à sua sobrevivência e/ou crescimento é o que se entende por "cultura de células" As necessidades ambientais fundamentais para o desenvolvimento ótimo das células são a temperatura controlada, um substrato para a fixação das células, um meio de crescimento adequado e uma incubadora que mantenha o pH e a osmolalidade ideais. As células devem ter estas condições para poderem crescer em todo o seu potencial.
A seleção de um meio de crescimento adequado para o cultivo in vitro é a fase da cultura celular que é simultaneamente a mais crítica e a mais vital. Um meio de crescimento, também conhecido como meio de cultura, é um líquido ou gel formulado para encorajar o desenvolvimento de organismos a uma escala microscópica, celular ou vegetal. O meio utilizado para cultivar células contém frequentemente um fornecimento adequado de energia e substâncias que controlam o ciclo celular. Os principais componentes de um meio de cultura incluem aminoácidos, vitaminas, sais inorgânicos, glucose e soro. O soro é adicionado ao meio porque actua como uma fonte de factores de crescimento, hormonas e factores de fixação. Para além de fornecer nutrientes, o meio também contribui para a manutenção dos níveis de pH e osmolalidade.
Tipos de meios utilizados na cultura de células
Tanto as células humanas como as células animais podem ser cultivadas num meio artificial ou sintético ou num meio totalmente natural, complementado com elementos naturais. A seguir, damos-lhe uma visão geral dos diferentes tipos de meios atualmente disponíveis.
Meios naturais
Apenas os fluidos biológicos que existem no seu estado natural podem ser encontrados em meios naturais. Os meios naturais são muito úteis e fáceis para o cultivo de uma grande variedade de tipos de células animais. A falta de compreensão dos componentes exactos que constituem os meios naturais é o principal fator que contribui para a baixa repetibilidade dos resultados obtidos utilizando meios naturais.
Meios artificiais
A preparação de meios artificiais ou sintéticos envolve a adição de nutrientes (tanto orgânicos como inorgânicos), proteínas séricas, hidratos de carbono, cofactores, vitaminas e sais, bem como fases gasosas de O2 e CO2 [1].
Foram desenvolvidos vários tipos de meios artificiais com o objetivo de cumprir uma ou mais das seguintes funções 1) Sobrevivência imediata (uma solução salina equilibrada com um pH e uma pressão osmótica precisos). 2) Sobrevivência prolongada (uma solução salina equilibrada suplementada com diferentes formulações de produtos químicos orgânicos e/ou soro). 3) Desenvolvimento indefinido. 4) Funções especializadas.
Existem quatro classificações distintas para os meios artificiais:
Meios contendo soro
O tipo de suplemento mais frequente encontrado nos meios utilizados para o cultivo de células animais é o soro fetal bovino. É adicionado ao meio de cultura como um suplemento de baixo custo, de modo a obter as melhores condições de crescimento possíveis. Para além de atuar como transportador ou quelante de nutrientes instáveis ou insolúveis em água, hormonas e factores de crescimento, inibidores de proteases e outras substâncias, o soro também se liga e neutraliza moléculas nocivas.
Meio sem soro
A presença de soro nos meios tem uma série de desvantagens e tem o potencial de causar grandes erros de interpretação na investigação imunológica [2, 3]. Foi criada uma grande variedade de meios sem soro [4, 5]. Estes meios são geralmente formulados especificamente para apoiar a cultura de um único tipo de células, como o Knockout Serum Replacement e o Knockout DMEM da Thermo Fisher Scientific, e o meio mTESR da Stem Cell Technologies [6], para células estaminais [7].
Além disso, estes meios incorporam quantidades definidas de factores de crescimento purificados, lipoproteínas e outras proteínas, que são normalmente fornecidas pelo soro [8]. Estes meios são frequentemente referidos como "meios de cultura definidos", uma vez que os componentes que os constituem são bem conhecidos.
Meios quimicamente definidos
Estes meios incluem componentes inorgânicos e orgânicos ultra-puros que não foram contaminados por qualquer tipo de contaminação. Podem também incluir adições de proteínas puras, tais como factores de crescimento.
a modificação genética de bactérias ou leveduras, juntamente com a adição de determinados ácidos gordos, vitaminas, colesterol e aminoácidos, resulta na produção dos seus componentes [9].
Meios isentos de proteínas
Os meios isentos de proteínas são aqueles que não incluem qualquer proteína e, em vez disso, incluem apenas elementos não proteicos. Quando comparados com meios com adição de soro, a utilização de meios sem adição de proteínas promove uma maior proliferação celular e expressão proteica e facilita a purificação de qualquer produto gerado num processo a jusante [10-12]. As proteínas não são incluídas em formulações como MEM e RPMI-1640. No entanto, pode ser administrado um suplemento proteico se for necessário.
Meios de cultura e seus componentes básicos
Os meios de cultura comerciais podem ser adquiridos sob a forma de pó ou líquido e incluem frequentemente uma variedade de nutrientes, como aminoácidos, glucose, sais, vitaminas e outros suplementos alimentares.
As necessidades destes componentes são diferentes para cada linha celular, e estas variações são responsáveis pelo grande número de diferentes formulações de meios. Cada componente é responsável por uma determinada função, que será descrita nos parágrafos seguintes:
Sistemas tampão
Para manter condições óptimas de crescimento, o pH deve ser controlado, o que é frequentemente feito através de um de dois sistemas tampão:
Sistema tampão natural
A relação CO2/H2CO3 na atmosfera é igual à do meio, criando um mecanismo natural de tamponamento. Para preservar o seu mecanismo natural de tamponamento, as culturas devem ser mantidas num ambiente de ar com 5-10% de CO2, o que é frequentemente conseguido através da utilização de uma incubadora de CO2. Uma das melhores coisas sobre a utilização de um tampão natural é o facto de ser barato e seguro.
HEPES
O tamponamento químico utilizando o zwitterion HEPES tem uma maior capacidade de tamponamento na gama de pH de 7,2-7,4 e não necessita de um ambiente gasoso regulado. Para determinados tipos de células, uma dose maior de HEPES pode ser prejudicial. Os meios que contêm HEPES são também muito mais susceptíveis aos efeitos fototóxicos da luz fluorescente [13].
Vermelho de fenol
O indicador de pH vermelho de fenol é frequentemente incluído em meios de cultura comercialmente disponíveis, permitindo a monitorização contínua do pH. Ao expandir as células, os metabolitos produzidos por estas células provocam uma alteração do pH e, por conseguinte, uma mudança de cor do meio. O vermelho de fenol tem um efeito duplo na cor do meio, tornando-o amarelo em pH ácido e roxo em pH alcalino. O pH 7,4, o valor ótimo para a cultura de células, faz com que o meio apareça vermelho fluorescente.
Mas o vermelho de fenol tem alguns inconvenientes: Em primeiro lugar, o vermelho de fenol é capaz de simular o desempenho de uma série de hormonas esteróides, principalmente o estrogénio [14]. Por conseguinte, quando se estudam células sensíveis aos estrogénios, como o tecido mamário, recomenda-se um meio isento de vermelho de fenol. O equilíbrio sódio-potássio é perturbado pela presença de vermelho de fenol em várias formulações sem soro. A adição de soro ou de hormona pituitária bovina ao meio pode neutralizar este efeito [15]. Em terceiro lugar, a deteção em experiências de citometria de fluxo é dificultada pela presença de vermelho de fenol.
Sais inorgânicos
Os meios que contêm sais inorgânicos, como os iões de sódio, potássio e cálcio, ajudam a manter o equilíbrio osmótico e a regular o potencial da membrana.
Aminoácidos
Uma vez que os aminoácidos são os componentes fundamentais das proteínas, são um componente essencial de todos os meios de crescimento celular que alguma vez foram concebidos. Uma vez que as células são incapazes de produzir determinados aminoácidos por si próprias, é importante que o meio de cultura inclua aminoácidos essenciais. Estes são necessários para a proliferação das células e a concentração em que estão presentes determina a densidade celular máxima que pode ser atingida. Em particular, a L-glutamina, um aminoácido essencial, é especialmente crucial.
A L-glutamina funciona como uma fonte secundária de energia para o metabolismo e contribui com azoto para a produção de NAD, NADPH e nucleótidos. Devido ao facto de a L-glutamina ser um aminoácido instável que, com o tempo, se transforma numa forma que as células não conseguem utilizar, deve ser administrada ao meio.
Para além disso, podem ser fornecidos ao meio aminoácidos não essenciais para reabastecer os que foram consumidos durante o processo de crescimento. O crescimento das células é reforçado e a sua viabilidade aumenta quando o meio de crescimento é suplementado com aminoácidos não essenciais.
Hidratos de carbono
Os hidratos de carbono sob a forma de açúcares são a principal fonte de energia. Muitos dos meios de cultura incluem também maltose e frutose, para além dos açúcares mais comuns, a glucose e a galactose.
Proteínas e péptidos
A albumina, a transferrina e a fibronectina são as proteínas e os péptidos mais utilizados, sendo especialmente importantes nos meios que não incluem soro. A albumina, a transferrina, a aprotinina, a fetuina e a fibronectina são algumas das proteínas que podem ser encontradas no soro, que é um rico suprimento de proteínas.
A albumina é a principal proteína encontrada no sangue e a sua função é ligar e transportar várias substâncias, incluindo água, sais, ácidos gordos livres, hormonas e vitaminas, entre diferentes órgãos e células. A capacidade da albumina de se ligar a produtos químicos torna-a uma candidata eficaz para a remoção de compostos nocivos do meio em que as células são cultivadas.
A aprotinina é um agente protetor em sistemas de cultura de células, uma vez que é estável a pH neutro e ácido, bem como resistente a temperaturas elevadas e à destruição que pode ser causada por enzimas proteolíticas. É capaz de inibir um certo número de serino-proteases, incluindo a tripsina, entre outras.
A fetuina é uma glicoproteína que pode ser detectada em quantidades mais elevadas no soro de animais fetais e recém-nascidos do que no soro de adultos. Além disso, actua como um inibidor da serina protease. A proteína fibronectina é um componente essencial no processo de adesão celular. A transferrina é uma proteína que transporta o ferro e é responsável pela entrega do ferro às membranas das células.
Ácidos gordos e lípidos
Desempenham um papel crucial no meio isento de soro quando este está ausente.
Vitaminas
Numerosas vitaminas são necessárias para o desenvolvimento e proliferação celular. As vitaminas não podem ser produzidas em quantidades adequadas pelas células, pelo que são essenciais na cultura de tecidos como suplementos alimentares.
Na cultura de células, o soro é a principal fonte de vitaminas; no entanto, os meios também são tratados com várias vitaminas para os tornar adequados a um tipo específico de células. Normalmente, as vitaminas do grupo B são utilizadas para estimular o crescimento.
Oligoelementos
Elementos químicos como o cobre, o zinco, o selénio e os intermediários do ácido tricarboxílico são conhecidos como oligoelementos. Os oligoelementos são frequentemente adicionados a meios que não incluem soro, a fim de substituir os que estão normalmente presentes no soro. Estes elementos são componentes químicos importantes que são necessários para um desenvolvimento celular saudável. Muitas reacções bioquímicas dependem de certos micronutrientes, como a atividade enzimática.
Suplementos ao meio
O meio de crescimento completo sugerido para certas linhas celulares necessita de componentes extra que estão ausentes do meio de base e do soro. Estes suplementos alimentares apoiam o crescimento celular e a função metabólica adequada.
Embora as hormonas, os factores de crescimento e as moléculas de sinalização sejam essenciais para a proliferação adequada de determinadas linhas celulares, devem ser sempre tomadas as seguintes precauções: Uma vez que a adição de suplementos pode alterar a osmolalidade do meio de crescimento completo, o que pode inibir o desenvolvimento celular, é sempre aconselhável verificar a osmolalidade após a adição de suplementos. Para a maioria das linhas celulares, a osmolalidade óptima varia entre 260 e 320 mOSM/kg.
Antibióticos
Os antibióticos são frequentemente utilizados para inibir o desenvolvimento de poluentes bacterianos e fúngicos [16], embora não sejam essenciais para o crescimento celular. Uma vez que os antibióticos podem ocultar a contaminação por micoplasma e bactérias resistentes, a sua utilização de rotina não é sugerida para a cultura de células [17, 18].
Além disso, os antibióticos podem perturbar o metabolismo das células hipersensíveis. As combinações de penicilina-estreptomicina fabricadas pela MilliporeSigma e pela Life Technologies são frequentemente utilizadas. A plasmocina foi utilizada na cultura das linhas celulares de glioma TS603, TS516 e BT260 [19], e demonstrou ser eficaz na remoção da contaminação por micoplasma (20).
Soro
As albuminas, os factores de crescimento e os inibidores de crescimento estão todos presentes no soro. O soro é um dos componentes mais importantes do meio de cultura de células porque fornece aminoácidos, proteínas, vitaminas (especialmente vitaminas lipossolúveis como A, D, E e K), hidratos de carbono, lípidos, hormonas, factores de crescimento, minerais e oligoelementos.
O soro de fontes fetais e de vitelo bovino é frequentemente utilizado para promover o desenvolvimento de células em cultura. O soro fetal constitui uma fonte abundante de factores de crescimento e é adequado para a clonagem de células e o desenvolvimento de células sensíveis. Devido às suas reduzidas capacidades de promoção do crescimento, o soro de vitelo é utilizado em experiências de inibição do contacto. Os meios de cultura normais incluem frequentemente 2% a 10% de soro. A adição de soro ao meio de cultura tem os seguintes objectivos [21]:
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O soro fornece os nutrientes essenciais para as células (tanto em solução como ligados a proteínas).
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O soro contém vários factores de crescimento e hormonas envolvidos na promoção do crescimento e na atividade celular especializada.
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O soro contém muitas proteínas de ligação, como a albumina e a transferrina, que transportam outros produtos químicos para a célula. Por exemplo, a albumina transporta gorduras, vitaminas, hormonas, etc. para o interior das células.
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Também fornece proteínas, como a fibronectina, que aumentam a adesão das células ao substrato. Além disso, produz elementos de propagação que ajudam na expansão celular antes da divisão.
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Fornece inibidores de protease que impedem a proteólise nas células.
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Também contém minerais como Na+, K+, Zn2+ e Fe2+.
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Aumenta a viscosidade do meio, protegendo assim as células de lesões mecânicas durante a agitação da cultura em suspensão.
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É também um tampão.
Referências
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[3] Sula K, Draber P, Nouza K. A adição de soro ao meio utilizado para a preparação de suspensões celulares como possível fonte de artefactos em reacções mediadas por células estudadas através do teste do nódulo linfático poplíteo. J Immunogenet. 1980;7:483-9
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[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J,et al. A senescência induzida pela síndrome de Down interrompe a arquitetura nuclear dos progenitores neurais. Cell Stem Cell. 2022;29:116-130.e7
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[21] Kragh Hansen U. Molecular aspects of ligand binding to serum albumin. Pharmacol Rev. 1981;33:17-53