Volume: 100 ml
Armazenamento: ≤ –15 °C
Esterilidade: Filtrado esterilizado
A solução estável de glutamina (L-alanil-L-glutamina, 200 mM) é uma forma dipeptídica altamente estável de L-glutamina, concebida como substituto direto da L-glutamina convencional em meios de cultura celular. A L-glutamina é um aminoácido essencial e uma importante fonte de energia para células cultivadas, desempenhando um papel fundamental no crescimento celular, metabolismo e síntese proteica.
Aplicação e benefícios
Em meios líquidos padrão, a L-glutamina degrada-se relativamente rápido a 37 °C, levando à formação de subprodutos tóxicos, como iões de amónio, que podem afetar negativamente a viabilidade celular e os resultados experimentais. A glutamina estável supera essa limitação, fornecendo uma forma de dipeptídeo não degradável que permanece intacta em condições de cultura.
As células clivam enzimaticamente a ligação dipeptídica para libertar L-glutamina conforme necessário, garantindo um fornecimento contínuo e fresco, ao mesmo tempo que evitam a acumulação de resíduos nocivos. Isto torna a solução particularmente vantajosa para culturas celulares de longo prazo e sistemas de crescimento de alta densidade.
Formulação e uso
A solução de L-alanil-L-glutamina é preparada em água de grau de cultura celular a uma concentração de 200 mM e é filtrada esterilizada para aplicações sensíveis à contaminação. Pode ser diluída diretamente em meios completos, de acordo com os requisitos experimentais. Armazenar a ≤ –15 °C e evitar ciclos repetidos de congelamento-descongelamento para manter a estabilidade do produto.
Apenas para uso em investigação. Não deve ser utilizado em procedimentos de diagnóstico ou terapêuticos. Não deve ser utilizado em seres humanos ou animais.
Volume: 100 ml
Armazenamento: +2 °C a +8 °C
Esterilidade: Filtrado esterilizado
A solução tampão HEPES (1 M), também conhecida como ácido N-2-hidroxietilpiperazina-N-2-etanosulfónico, é um agente tampão orgânico zwitteriônico amplamente utilizado em meios de cultura celular. Foi concebida para manter condições de pH estáveis na faixa fisiológica de 6,7 a 8,6, apoiando a função celular ideal durante aplicações in vitro.
Aplicação e benefícios
O HEPES oferece capacidade tampão confiável em sistemas de cultura celular, especialmente quando as células são manuseadas fora de uma incubadora de CO₂. A adição de 10–25 mM de HEPES aos meios de cultura oferece maior estabilidade de pH durante períodos prolongados de manipulação, ajudando a manter condições experimentais consistentes.
Este tampão é impermeável à membrana, tem interferência mínima nas reações bioquímicas e demonstra forte estabilidade química e enzimática. Estas propriedades tornam-no adequado para uma ampla gama de aplicações de cultura celular e bioquímicas.
Formulação e uso
A solução é fornecida como um concentrado 1 M preparado em água de grau de cultura celular e é filtrada esterilizada para uso em ambientes sensíveis à contaminação. Pode ser diluída até a concentração de trabalho desejada, dependendo dos requisitos da aplicação. Armazene a +2 °C a +8 °C e manuseie em condições assépticas para preservar a integridade do produto.
Apenas para uso em investigação. Não deve ser utilizado em procedimentos de diagnóstico ou terapêuticos. Não deve ser utilizado em seres humanos ou animais.
Volume: 50 ml
Armazenamento: +2 °C a +8 °C
Esterilidade: Filtrado esterilizado
A solução de D-(+)-glicose (solução de dextrose) é um suplemento estéril e pronto a usar que contém o açúcar natural D-(+)-glicose, um componente central do metabolismo celular. A glicose está envolvida em processos biológicos essenciais, tais como a produção de energia, a glicosilação e a formação de glicanos que contribuem para a estrutura e função celular.
Aplicação e benefícios
Esta solução de glicose é amplamente utilizada como suplemento em meios de cultura celular e em inúmeras aplicações de biologia celular e molecular. Como fonte primária de carbono e energia, a glicose apoia o crescimento celular, a proliferação e a atividade metabólica. O seu envolvimento nas vias biossintéticas também a torna fundamental para manter a fisiologia celular normal e a consistência experimental.
Formulação e uso
A solução é fornecida numa concentração elevada de 250 g/L de glicose, permitindo uma diluição flexível em meios de cultura de acordo com os requisitos experimentais. É filtrada de forma estéril para garantir a adequação a aplicações sensíveis à contaminação. Armazenar entre +2 °C e +8 °C e manusear de forma asséptica para manter a qualidade e a estabilidade do produto.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso em procedimentos de diagnóstico ou terapêuticos. Não se destina a uso em seres humanos ou animais.
Volume: 10 ml
Armazenamento: +2 °C a +8 °C
Esterilidade: Filtrado esterilizado
A Solução de Insulina-Transferrina-Selénio (ITS) (100x) é um suplemento quimicamente definido concebido para uma vasta gama de aplicações em cultura celular. É mais frequentemente utilizada como aditivo em meios de cultura celular basais para apoiar o crescimento celular em condições de soro reduzido ou sem soro.
Aplicação e benefícios
O nosso suplemento ITS fornece os componentes essenciais necessários para o desempenho ideal de meios sem soro. Ao suplementar meios nutritivos convencionais com ITS, a necessidade de soro fetal bovino (FBS) para a manutenção de rotina de muitas linhas celulares pode ser significativamente reduzida. Isto ajuda a minimizar a variabilidade associada à utilização de soro, mantendo simultaneamente um crescimento e viabilidade celular consistentes.
A insulina apoia a absorção celular e o metabolismo de nutrientes essenciais, a transferrina facilita o transporte de ferro e o selénio contribui para a defesa antioxidante e a atividade enzimática. Em conjunto, estes componentes promovem um metabolismo celular equilibrado e uma melhor reprodutibilidade em sistemas de cultura definidos.
Formulação e Utilização
A Insulina-Transferrina-Selénio (ITS) é fornecida como uma solução 100x concentrada em Solução Salina Equilibrada de Earle (EBSS) sem vermelho de fenol. Para aplicações padrão, dilua 1:100 no meio basal apropriado para atingir a concentração de trabalho recomendada. Armazene a +2 °C a +8 °C e manuseie em condições assépticas para manter a estabilidade e a esterilidade do produto.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a procedimentos de diagnóstico ou terapêuticos. Não se destina a uso em seres humanos ou animais.
Volume: 5 ml
Armazenamento: +2 °C a +8 °C
Esterilidade: Filtrado estéril
A Solução de Insulina Humana Recombinante é um suplemento quimicamente definido, comumente utilizado para o cultivo de linhas celulares de mamíferos, incluindo células de ovário de hamster chinês (CHO). Esta solução de grau de cultura celular contém insulina humana recombinante expressa em Saccharomyces cerevisiae, garantindo alta pureza e desempenho consistente em aplicações de investigação.
Aplicação e benefícios
A insulina é habitualmente adicionada a meios sem soro e quimicamente definidos para promover o crescimento celular e a produtividade. Como hormona reguladora fundamental, a insulina apoia a absorção, utilização e armazenamento celular de glicose, aminoácidos e ácidos gordos. Inibe também a degradação de glicogénio, proteínas e lípidos, contribuindo assim para uma melhor viabilidade celular e estabilidade metabólica em sistemas de cultura. A formulação quimicamente definida promove a reprodutibilidade e minimiza a variabilidade em fluxos de trabalho sensíveis de cultura celular.
Propriedades biológicas e utilização
A insulina é uma hormona polipeptídica de duas cadeias produzida naturalmente pelas células β das ilhotas pancreáticas. Tem um peso molecular de aproximadamente 5800 Da. As cadeias α e β estão ligadas por duas ligações dissulfureto inter-cadeias, e a cadeia α contém uma ligação dissulfureto intra-cadeia. Para aplicações em cultura celular, a solução deve ser manuseada em condições assépticas e armazenada a +2 °C a +8 °C para manter a estabilidade e o desempenho.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a ser utilizado em procedimentos de diagnóstico ou terapêuticos. Não se destina a ser utilizado em seres humanos ou animais.
Volume: 100 ml
Armazenamento: +2 °C a +8 °C
Esterilidade: Filtrado esterilizado
A solução de piruvato de sódio (100 mM) é um suplemento estéril e pronto a usar, concebido para fornecer uma fonte de energia adicional e facilmente acessível para meios de cultura celular. O piruvato de sódio desempenha um papel fundamental no metabolismo energético celular e apoia o crescimento de células metabolicamente ativas e de rápida proliferação, tais como as células tumorais. A suplementação pode aumentar a viabilidade celular e ajudar a manter a estabilidade metabólica em sistemas de cultura.
Aplicação e benefícios
Esta solução é amplamente utilizada na cultura celular de rotina para enriquecer os meios com piruvato e promover condições de crescimento ideais. Ela apoia a produção de ATP, pode ajudar a reduzir o stress oxidativo e contribui para melhorar o desempenho metabólico das células cultivadas. Fabricado com água de grau de cultura celular e filtrado esterilizado, o produto garante qualidade consistente e reprodutibilidade nos fluxos de trabalho de pesquisa.
Utilização e compatibilidade
A concentração final recomendada para a maioria das aplicações de cultura celular é de 1 mM de piruvato de sódio, obtida pela diluição da solução estoque de 100 mM em 1:100 em meio de cultura completo. A solução é compatível com uma ampla gama de meios basais e linhas celulares de mamíferos. Armazene a +2 °C a +8 °C e proteja contra contaminação para manter a estabilidade do produto.
Apenas para uso em investigação. Não deve ser utilizado em procedimentos de diagnóstico ou terapêuticos. Não deve ser utilizado em seres humanos ou animais.
Volume: 100 ml Armazenamento: ≤-15°C Esterilidade: Estéril-filtrado
A Solução Antibiótica/Antimicótica (100x) é um concentrado estéril, pronto a usar, concebido para reduzir os riscos de contaminação microbiana em culturas celulares e aplicações laboratoriais relacionadas. Esta solução 100x contém uma combinação bem estabelecida de penicilina, estreptomicina e anfotericina B, proporcionando uma atividade antimicrobiana de largo espetro contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, leveduras e fungos filamentosos. A formulação é adequada para utilização em culturas de células eucarióticas, meios bacterianos e outros sistemas sensíveis à contaminação, apoiando operações laboratoriais limpas e consistentes.
Aplicação e benefícios Optimizada para protocolos de investigação de rotina, esta solução é amplamente utilizada para manter condições assépticas em fluxos de trabalho de cultura de células. Oferece um desempenho fiável em ambientes sensíveis à contaminação, ajudando os investigadores a reduzir o risco de crescimento microbiano excessivo sem comprometer a saúde das células ou a reprodutibilidade experimental. A formulação estéril-filtrada elimina a necessidade de etapas adicionais de solubilização, apoiando a preparação simplificada de meios e reduzindo a variabilidade nos procedimentos laboratoriais diários.
Utilização e compatibilidade Para obter concentrações de trabalho padrão, diluir a solução 1:100 no seu meio de cultura completo. O produto é compatível com uma vasta gama de linhas celulares de mamíferos e meios basais. Com uma disponibilidade de stock consistente, os investigadores beneficiam de uma continuidade de fornecimento fiável e de um planeamento logístico simplificado. A solução deve ser armazenada a ≤ -15 °C e protegida de ciclos repetidos de congelamento e descongelamento para manter a estabilidade. Apenas para uso em investigação. Não se destina a ser utilizado em procedimentos de diagnóstico ou terapêuticos. Não se destina a ser utilizado em seres humanos ou animais.
Volume: 100 ml Armazenamento: +2°C a +8°C Esterilidade: Estéril-filtrado
MEM Non-Essential Amino Acids (100x) é um suplemento estéril concebido para melhorar o crescimento e a viabilidade celular em sistemas de cultura de células de mamíferos. A formulação corresponde a um concentrado de 100x dos aminoácidos não essenciais encontrados no Meio Essencial Mínimo (MEM) padrão, permitindo a suplementação direta do meio basal com uma preparação mínima.
Aplicação e benefícios Este suplemento fornece um conjunto adicional de aminoácidos para células em rápida proliferação ou para linhas celulares que perderam a capacidade de sintetizar aminoácidos não essenciais de novo. Ao aliviar a carga metabólica da biossíntese, suporta uma cinética de crescimento melhorada, viabilidade prolongada e maior consistência experimental
- especialmente em culturas sensíveis a nutrientes ou de alta densidade.
Composição e utilização A solução inclui glicina, L-alanina, L-asparagina, ácido L-aspártico, ácido L-glutâmico, L-prolina e L-serina. É compatível com MEM e com a maioria dos outros meios padrão. Para utilizar, diluir 1:100 no meio de cultura final. Este produto é filtrado de forma estéril e está pronto a utilizar sem etapas de manuseamento adicionais. Apenas para uso em investigação. Não se destina a ser utilizado em procedimentos de diagnóstico ou terapêuticos. Não se destina a ser utilizado em seres humanos ou animais.
Accutase é uma solução de desprendimento celular pronta a usar e filtrada esterilizada, concebida como uma alternativa suave à tripsina/EDTA para a dissociação de células de mamíferos aderentes de material plástico padrão para cultura de tecidos e superfícies revestidas para adesão. Combina atividade enzimática proteolítica e colagenolítica numa solução salina equilibrada para proporcionar uma dissociação eficaz, mas controlada, preservando as proteínas da superfície celular e favorecendo uma elevada viabilidade pós-passagem e uma rápida readesão.
A formulação do Accutase baseia-se na solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco (DPBS) com EDTA e vermelho de fenol como indicador visual de pH. As enzimas são de origem não mamífera e não bacteriana, tornando o Accutase particularmente adequado para a investigação com células estaminais, fluxos de trabalho de vacinas e qualquer aplicação em que seja necessário minimizar os contaminantes de origem animal ou microbiana. A solução autoinibe-se a 37 °C, pelo que não é necessário qualquer reagente neutralizante ou meio contendo soro após a dissociação – as células podem ser transferidas diretamente para um meio fresco.
Características principais
Líquido 1x pronto a usar e filtrado esterilizado – não requer diluição nem reconstituição
Atividade enzimática proteolítica e colagenolítica combinada para uma dissociação suave
Cada lote padronizado para uma atividade de dissociação definida, garantindo a consistência entre lotes
Enzimas de origem não mamífera e não bacteriana
Autoinibe-se a 37 °C – não é necessária solução neutralizante
Formulado em PBS de Dulbecco com EDTA
Fenol vermelho incluído como indicador visual de pH
pH 6,8 – 7,8
Aplicações típicas
O Accutase dissocia suavemente uma ampla variedade de tipos de células aderentes e sensíveis, incluindo células estaminais embrionárias humanas (hESCs), células estaminais pluripotentes induzidas humanas (iPSCs), células estaminais neurais, neurónios primários e linhas aderentes cultivadas rotineiramente, tais como HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 e A549. Casos de utilização típicos incluem:
Subcultura e passagem de rotina de células mamíferas aderentes
Dissociação suave de células individuais de hESCs, iPSCs e outras linhas sensíveis
Preparação de amostras para citometria de fluxo e análise FACS
Análise de marcadores da superfície celular em que a integridade do epítopo é importante
Ensaios de migração, proliferação e apoptose celular
Ensaios de quiescência por privação de soro e estudos de transfecção de oncogenes
Ensaios de migração de células tumorais e de crista neural
Aumento da escala de produção em fluxos de trabalho com biorreatores
Para trabalhos de rotina, aplique aproximadamente 10 ml de Accutase por 75 cm² de superfície de cultura e incube durante 5–10 minutos à temperatura ambiente. O tempo de incubação ideal deve ser determinado para cada linha celular e não deve exceder uma hora. Antes da adição, lave a camada celular com uma solução salina isenta de Ca²⁺/Mg²⁺, como DPBS sem cálcio e magnésio, para remover soro residual e catiões divalentes.
Manuseamento e armazenamento
Armazene o frasco fechado congelado a -15 °C ou abaixo. Descongele à temperatura ambiente ou durante a noite a +2 °C a +8 °C. Não descongele o Accutase num banho-maria a 37 °C, uma vez que as temperaturas elevadas reduzem a atividade enzimática. Após a descongelação, a solução pode ser armazenada por um período de até 2 meses a +2 °C a +8 °C; não armazene à temperatura ambiente. Não pré-aqueça o reagente a 37 °C antes da aplicação – adicione-o diretamente às células lavadas à temperatura ambiente. Para uma vida útil prolongada, recomenda-se a divisão em alíquotas de uso único para evitar ciclos de descongelação repetidos. Trabalhe sempre em condições assépticas.
Qualidade
Fabricado sob rigorosos padrões de qualidade. Cada lote de Accutase é filtrado em estéril e testado quanto à esterilidade, pH, aspeto e atividade de dissociação para garantir um desempenho consistente e reprodutível de lote para lote.
Especificações do produto
Especificação
Detalhe
Tipo de produtoReagente de desprendimento/dissociação celular
FormatoLíquido filtrado esterilizado, pronto a usar
Volume100 ml
Concentração de trabalho1x (pronto a usar)
Atividade enzimáticaProteolítica e colagenolítica combinadas
Origem enzimáticaNão mamífera e não bacteriana
Sistema tampãoPBS de Dulbecco com EDTA
Indicador de pHVermelho de fenol
Intervalo de pH6,8 – 7,8
AspectoSolução límpida, de cor vermelho-pálido a laranja
Temperatura de armazenamento-15 °C ou inferior
Estabilidade após descongelaçãoAté 2 meses a +2 °C a +8 °C
Volume de utilização recomendado~10 ml por 75 cm² de superfície de cultura
Tempo de incubação típico5 – 10 minutos à temperatura ambiente
Condições de envioCongelado em gelo seco
Utilização previstaApenas para uso em investigação e fabrico posterior
Formulação (Composição por litro)
Componente
Concentração (mg/L)
Sais inorgânicos
Cloreto de sódio (NaCl)8000,00
Hidrogenofosfato dissódico (Na₂HPO₄)1150,00
Cloreto de potássio (KCl)200,00
Dihidrogenofosfato de potássio (KH₂PO₄)200,00
Outros componentes
EDTA · 4Na (EDTA tetrassódico)220,00
Vermelho de fenol3,00
Mistura enzimática patenteada (atividade proteolítica e colagenolítica)1x
Accutase é uma marca registada da Innovative Cell Technologies, Inc.
Esta formulação líquida pronta a usar e filtrada esterilizada é suplementada com Solução Salina Equilibrada de Earle (EBSS), 2 mM de L-glutamina, D-glicose (1,0 g/L) e 2,2 g/L de bicarbonato de sódio (NaHCO3), tornando-a adequada para utilização numa atmosfera de incubadora com controlo de CO2 (normalmente 5 % de CO2). O vermelho de fenol incluído atua como indicador de pH, permitindo uma monitorização visual conveniente do estado do meio durante a cultura celular.
Características principais
Formulação clássica do MEM de Eagle com Solução Salina Equilibrada de Earle (EBSS)
2 mM de L-glutamina incluída – pronto para utilização imediata
2,2 g/L de bicarbonato de sódio – tamponado para incubação com 5 % de CO₂
Com D-glicose (1,0 g/L) como fonte primária de carbono
Com vermelho de fenol como indicador de pH
Sem HEPES e sem piruvato de sódio
Meio líquido filtrado esterilizado, pronto a usar
pH 7,0 – 7,6
Aplicações típicas
O EMEM suporta o cultivo de uma ampla variedade de linhas celulares de mamíferos, incluindo HeLa, HEK 293, Vero, MRC-5, L-929, BHK-21 e muitas células primárias. As aplicações comuns incluem:
Manutenção de rotina e expansão de linhas celulares aderentes
Fluxos de trabalho de propagação de vírus e produção de vacinas
Aplicações de citotoxicidade e bioensaios
Estudos de transfecção e expressão de proteínas
Investigação fundamental em biologia celular e biologia molecular
Para um crescimento celular ideal, o EMEM é normalmente suplementado com 5–10 % de soro fetal bovino (FBS) e, dependendo da linha celular, com aminoácidos não essenciais (NEAA) e antibióticos, tais como penicilina/estreptomicina.
Manuseamento e armazenamento
Armazene o frasco fechado a uma temperatura entre +2 °C e +8 °C, protegido da luz. Após a abertura, utilize em condições assépticas. A L-glutamina em solução está sujeita a degradação gradual – recomendamos utilizar o meio no prazo de 4 semanas após a abertura para obter o melhor desempenho, ou suplementar com L-glutamina fresca antes da utilização, caso seja armazenado por períodos mais longos. Deixe o meio aquecer até 37 °C antes de o adicionar às células.
Qualidade
Fabricado de acordo com rigorosos padrões de qualidade. Cada lote é testado quanto à esterilidade, pH, osmolalidade e níveis de endotoxinas para garantir um desempenho consistente em aplicações de cultura celular.
Especificações do produto
Especificação
Detalhe
Tipo de produtoMEM
Categoria do produtoMeios de cultura celular
FormatoLíquido
EstérilSim
Tamanho500 ml
L-glutaminaCom L-glutamina (2 mM)
GlicoseCom glicose (1,0 g/L)
Bicarbonato de sódioCom NaHCO3 (2,2 g/L)
HEPESSem HEPES
Piruvato de sódioSem piruvato de sódio
Vermelho de fenolCom vermelho de fenol
Solução salinaSolução Salina Equilibrada de Earle (EBSS)
pH7,0 – 7,6
Teor de endotoxinasNão especificado
Armazenamento+2 °C a +8 °C
Formulação (Composição por litro)
Componente
Concentração (mg/L)
Sais inorgânicos
Cloreto de cálcio · 2H₂O265,00
Sulfato de magnésio97,72
Cloreto de potássio400,00
Cloreto de sódio6.800,00
Dihidrogenofosfato de sódio, anidro122,00
Bicarbonato de sódio (NaHCO3)2.200,00
Aminoácidos
L-Arginina · HCl126,00
L-Cistina · 2HCl31,30
L-Glutamina292,00
L-Histidina · HCl · H₂O42,00
L-Isoleucina52,00
L-Leucina52,00
L-Lisina · HCl72,50
L-metionina15,00
L-fenilalanina32,00
L-treonina48,00
L-Triptofano10,00
L-tirosina · 2Na · 2H2O51,90
L-valina46,00
Vitaminas
Pantotenato de cálcio D1,00
Cloreto de colina1,00
Ácido fólico1,00
Mio-inositol2,00
Nicotinamida1,00
Piridoxal · HCl1,00
Riboflavina0,10
Tiamina · HCl1,00
Outros componentes
D(+)-Glicose1.000,00
Vermelho de fenol10,00
As principais caraterísticas do Freeze Medium CM-1 incluem:
Ampla compatibilidade: Eficaz para uma vasta gama de tipos de células, incluindo células primárias, células estaminais e linhas celulares estabelecidas.
Alta Viabilidade: Optimizado para maximizar a recuperação e a viabilidade das células pós-descongelamento, garantindo resultados experimentais fiáveis.
Pronto a utilizar: Convenientemente preparado e esterilizado para aplicação imediata, reduzindo o tempo de preparação e o risco de contaminação.
Estabilidade melhorada: Mantém um desempenho consistente sob condições padrão de criopreservação, garantindo resultados reprodutíveis.
Longo prazo de validade: O CM-1 é um meio de criopreservação pronto a utilizar que contém soro e que pode ser armazenado no frigorífico até um ano.
Utilização do CM-1 para congelação de células
Para utilizar o CM-1 para congelar células aderentes e em suspensão, siga estes passos
Para células aderentes, lavar e dissociar as células do substrato de cultura. No caso das células em suspensão, avançar diretamente para o passo seguinte.
Contar as células para garantir que estão na concentração correta.
Centrifugar as células para as pelletar e, em seguida, ressuspender em meio de congelação CM-1.
Transferir as células ressuspensas para frascos criogénicos.
Utilize um método de congelação lenta antes de transferir as células para armazenamento a longo prazo
Método
Descrição
Passos
❄️
Congelação manual
Um método passo a passo que envolve a redução gradual da temperatura para garantir a viabilidade das células
1️⃣ Colocar as células em meio de congelação num congelador a 4°C durante 40 minutos.
2️⃣ Transferir para um congelador a -80°C durante 24 horas.
3️⃣ Armazenar as células em azoto líquido para preservação a longo prazo
❄️
Utilização do Mr. Frosty
Um dispositivo conveniente que permite taxas de congelação controladas sem energia eléctrica
1️⃣ Preparar as células em frascos criogénicos com meio de congelação.
2️⃣ Colocar os frascos criogénicos no recipiente Mr. Frosty.
3️⃣ Armazenar a -80°C durante 24 horas antes de transferir para azoto líquido
❄️
Congelador de velocidade controlada
Um congelador de alta precisão da Thermo Fisher ou de outros fabricantes, concebido para a redução controlada da temperatura
1️⃣ Programar o dispositivo para diminuir gradualmente a temperatura.
2️⃣ Colocar as células preparadas no congelador.
3️⃣ Após o ciclo de congelação, transferir as células para azoto líquido
Armazenar os frascos criogénicos a temperaturas inferiores a -130°C ou em azoto líquido para preservação a longo prazo.
Ingredientes
Contém FBS, DMSO, Glucose, Sais
Capacidade tampão: pH = 7,2 a 7,6
O Freeze Medium CM-1 da Cytion oferece uma solução fiável para a criopreservação, garantindo uma elevada viabilidade celular e funcionalidade pós-descongelamento para uma vasta gama de aplicações de investigação.
O meio Ham's F-12K (Kaighn's) é cuidadosamente formulado para otimizar as condições de cultura de células. Apresenta uma composição enriquecida, fornecendo níveis elevados de componentes essenciais, tais como aminoácidos e piruvato de sódio, bem como elementos adicionais, incluindo putrescina, timidina, hipoxantina e zinco. Estas adições permitem aos investigadores suplementar o meio com um mínimo de soro ou componentes definidos para tipos de células específicos, facilitando condições experimentais precisas.
Em particular, o meio Ham's F-12K (Kaighn's) não contém proteínas ou factores de crescimento. Consequentemente, a suplementação com factores de crescimento e Soro Fetal Bovino (FBS) é frequentemente necessária, permitindo aos investigadores adaptar o meio aos requisitos das suas linhas celulares específicas. Para um desempenho ótimo, a concentração de FBS deve ser cuidadosamente optimizada para cada linha celular, assegurando um crescimento e funcionalidade óptimos.
Para manter o pH fisiológico, o meio Ham's F-12K (Kaighn's) emprega um sistema tampão de bicarbonato de sódio (2,5 g/L), necessitando de um ambiente controlado de 5-10% de CO2 durante o cultivo. Isto assegura que o pH do meio se mantém dentro do intervalo ideal para o crescimento e viabilidade das células
Controlo de qualidade
pH = 7,2 +/
- 0,02 a 20-25°C.
Cada lote foi testado quanto à esterilidade e ausência de micoplasma e bactérias.
Manutenção
Manter refrigerado a uma temperatura entre +2°C e +8°C, ao abrigo da luz. O congelamento e o aquecimento até +37°C minimizam a qualidade do produto.
Não aquecer o meio a mais de 37°C ou utilizar fontes de calor incontroláveis (por exemplo, aparelhos de micro-ondas).
Se apenas uma parte do meio for utilizada, retire essa quantidade do frasco e aqueça-a à temperatura ambiente.
O prazo de validade de qualquer meio, exceto o meio básico, é de 8 semanas a partir da data de fabrico.
Composição
Componentes
mg/L
Sais inorgânicos
Cloreto de cálcio x 2H2O
135,24
Sulfato de cobre(II) x 5H2O
0,00
Sulfato de ferro (II) x 7H2O
0,83
Cloreto de magnésio x 6H2O
105,72
Sulfato de magnésio x 7H2O
394,49
Cloreto de potássio
283,29
Di-hidrogenofosfato de potássio
58,52
Cloreto de sódio
7597,20
hidrogenofosfato de di-sódioanidro
115,02
Sulfato de zinco x 7H2O
0,14
Outros componentes
D(+)-Glucose anidra
1260,00
Hipoxantina
4,08
Ácido DL-α-lipóico
0,21
Vermelho de fenol
3,00
Putrescina x 2HCl
0,32
Piruvato de sódio
220,00
NaHCO3
2500,00
Timidina
0,73
Aminoácidos
L-Alanina
17,82
L-Arginina x HCl
421,40
L-Asparagina x H2O
30,02
Ácido L-aspártico
26,62
L-cisteína x HCl x H2O
70,24
L-Glutamina
292,20
Ácido L-Glutâmico
29,42
Glicina
15,01
L-Histidina x HCl x H2O
41,92
L-Isoleucina
7,87
L-Leucina
26,24
L-Lisina x HCl
73,04
L-Metionina
8,95
L-fenilalanina
9,91
L-Prolina
69,06
L-Serina
21,02
L-Treonina
23,82
L-Triptofano
4,08
L-tirosina
10,87
L-Valina
23,42
Vitaminas
D(+)-Biotina
0,07
D-Pantotenato de cálcio
0,48
Cloreto de colina
13,96
Ácido fólico
1,32
myo-Inositol
18,02
Nicotinamida
0,04
Piridoxina x HCl
0,06
Riboflavina
0,04
Tiamina x HCl
0,34
Vitamina B12
1,36
A solução salina tamponada com fosfato (PBS) é uma solução tampão amplamente utilizada na investigação biológica e química. Desempenha um papel crucial na manutenção do equilíbrio do pH e da osmolaridade durante vários procedimentos experimentais, incluindo o processamento de tecidos e a cultura de células. A nossa solução PBS é meticulosamente formulada com ingredientes de elevada pureza para garantir estabilidade e fiabilidade em todas as experiências. A osmolaridade e as concentrações de iões do nosso PBS imitam de perto as do corpo humano, tornando-o isotónico e não tóxico para a maioria das células.
Composição da nossa solução PBS
A nossa solução PBS é uma mistura com pH ajustado de tampões de fosfato de grau ultrapuro e soluções salinas. Numa concentração de trabalho 1X, contém
8000 mg/L de cloreto de sódio (NaCl)
200 mg/L de cloreto de potássio (KCl)
1150 mg/L Fosfato de sódio dibásico anidro (Na2HPO4)
200 mg/L Fosfato de potássio monobásico anidro (KH2PO4)
Esta composição assegura um pH e um equilíbrio iónico óptimos, adequados a uma vasta gama de aplicações biológicas.
Aplicações da nossa solução PBS
A nossa solução PBS é ideal para várias aplicações na investigação biológica. As suas propriedades isotónicas e não tóxicas tornam-na adequada para a diluição de substâncias e lavagem de recipientes de células. As soluções PBS que contêm EDTA são eficazes para desprender células ligadas e aglomeradas. No entanto, os metais divalentes, como o zinco, não devem ser adicionados ao PBS, uma vez que podem causar precipitação. Nestes casos, recomenda-se a utilização de tampões Good's. Além disso, a nossa solução de PBS é uma alternativa aceitável ao meio de transporte viral para o transporte e armazenamento de vírus de ARN, incluindo o SARS-CoV-2.
Controlo de qualidade
Estéril-filtrado
Armazenamento e prazo de validade
Armazenar entre +2°C e +25°C, protegido da luz.
Depois de aberto, conservar a uma temperatura entre 2°C e 25°C e utilizar no prazo de 24 meses.
Condições de transporte
Temperatura ambiente
Manutenção
Manter refrigerado a uma temperatura entre +2°C e +8°C, ao abrigo da luz. Evitar o congelamento e o aquecimento frequente a +37°C, uma vez que reduz a qualidade do produto.
Não aquecer o meio para além de 37°C nem utilizar fontes de calor não controladas, tais como aparelhos de micro-ondas.
Se apenas uma parte do meio for utilizada, retirar a quantidade necessária e aquecê-la à temperatura ambiente antes de a utilizar.
Composição
Categoria
Componentes
Concentração (mg/L)
Sais
Cloreto de potássio
200
Fosfato de potássio monobásico anidro
200
Cloreto de sódio
8000
Fosfato de sódio dibásico anidro
1150
Inicialmente concebido para suportar o crescimento de células leucémicas humanas em culturas em suspensão e em monocamada, o meio RPMI 1640 evoluiu através de modificações efectuadas por investigadores e fornecedores comerciais para se tornar adequado a uma gama diversificada de células de mamíferos. É excecionalmente compatível com linhas celulares como HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrócitos e carcinomas.
O meio RPMI 1640 distingue-se de outros meios de cultura de células devido à sua composição única. Contém uma quantidade substancial de fosfato, aminoácidos e vitaminas. Nomeadamente, inclui biotina, vitamina B12 e PABA, ausentes no Eagle's Minimal Essential Medium ou no Dulbecco's Modified Eagle Medium. Além disso, o meio RPMI 1640 apresenta concentrações significativamente elevadas de vitaminas inositol e colina. No entanto, não contém proteínas, lípidos ou factores de crescimento. Consequentemente, a suplementação com 10% de Soro Fetal Bovino (FBS) é normalmente necessária para proporcionar condições óptimas para o crescimento celular.
O sistema tampão do meio RPMI 1640 baseia-se no bicarbonato de sódio e necessita de um ambiente com 5-10% de CO2 para manter um pH fisiologicamente adequado. A inclusão do agente redutor glutatião distingue ainda mais este meio dos outros.
Controlo de qualidade
Estéril-filtrado
Armazenamento e prazo de validade
Armazenar entre +2°C e +8°C, protegido da luz.
Depois de aberto, conservar a 4°C e utilizar no prazo de 6-8 semanas.
Condições de transporte
Temperatura ambiente
Manutenção
Manter refrigerado a uma temperatura entre +2°C e +8°C, ao abrigo da luz. Evitar a congelação e o aquecimento frequente a +37°C, uma vez que reduz a qualidade do produto.
Não aquecer o meio para além de 37°C nem utilizar fontes de calor não controladas, tais como aparelhos de micro-ondas.
Se apenas uma parte do meio for utilizada, retirar a quantidade necessária e aquecê-la à temperatura ambiente antes de a utilizar.
Composição
Categoria
Componentes
Concentração (mg/L)
Aminoácidos
Glicina
10.00
L-Alanil-L-Glutamina
434.40
L-Arginina
200.00
L-Asparagina H2O
56.82
Ácido L-aspártico
20.00
L-Cistina 2HCl
65.20
Ácido L-Glutâmico
20.00
L-Histidina HCl H2O
20.27
L-hidroxi-L-prolina
20.00
L-Isoleucina
50.00
L-Leucina
50.00
L-Lisina HCl
40.00
L-Metionina
15.00
L-fenilalanina
15.00
L-Prolina
20.00
L-Serina
30.00
L-Treonina
20.00
L-Triptofano
5.00
L-tirosina 2Na 2H2O
28.83
L-Valina
20.00
Vitaminas
ácido p-amino-benzoico
1.00
D-Biotina
0.20
Cloreto de colina
3.00
D-pantotenato de cálcio
0.25
Ácido fólico
1.00
myo-Inositol
35.00
Nicotinamida
1.00
Piridoxina HCl
1.00
Riboflavina
0.20
Tiamina HCl
1.00
Vitamina B12
0.005
Sais inorgânicos
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Outros componentes
D-Glucose
2000.00
L-Glutatião reduzido
1.00
Sal de sódio de vermelho de fenol
5.30
Esta formulação única combina o Meio Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM) e o Ham's F-12 (Mistura de Nutrientes F-12 de Ham) numa proporção precisa de 1:1. A adição de L-glutamina melhora ainda mais a sua composição.
O DMEM, derivado do Meio Essencial Mínimo de Eagle (EMEM), oferece uma concentração aumentada de aminoácidos e vitaminas em comparação com o seu antecessor. Em contrapartida, o Ham's F-12 baseia-se no meio Ham's F-10, fornecendo um conjunto complementar de componentes essenciais.
Para apoiar o crescimento celular ideal, é prática comum suplementar o DMEM:Ham's F12 com FBS numa concentração típica de 5-10%. Esta adição é necessária, uma vez que o meio carece de hormonas de crescimento, lípidos e proteínas cruciais para o desenvolvimento celular.
O DMEM:Ham's F12 incorpora um sistema tampão de pH e é frequentemente suplementado com vermelho de fenol, um indicador de pH. As células cultivadas em DMEM:Ham's F12, ou em qualquer meio que utilize o sistema tampão de bicarbonato, requerem um ambiente com CO₂ controlado de 5-10% para manter níveis de pH adequados.
Controlo de Qualidade
Filtrado esterilizado
Armazenamento e Prazo de Validade
Armazenar a +2 °C a +8 °C, protegido da luz.
Depois de aberto, armazenar a 4 °C e utilizar no prazo de 6 a 8 semanas.
Condições de envio
Temperatura ambiente
Manutenção
Mantenha refrigerado a +2 °C a +8 °C, no escuro. Evite o congelamento e o aquecimento frequente a +37 °C, pois isso reduz a qualidade do produto.
Não aqueça o meio para além de 37 °C nem utilize fontes de calor não controladas, tais como aparelhos de micro-ondas.
Se apenas parte do meio for utilizada, retire a quantidade necessária e aqueça-a até à temperatura ambiente antes da utilização.
Composição
Categoria
Componentes
Concentração (mg/L)
Aminoácidos
Glicina
18,75
L-alanina
4,45
L-arginina HCl
147,50
L-Asparagina H₂O
7,50
Ácido L-aspártico
6,65
L-Cisteína HCl H₂O
17,56
L-cistina 2 HCl
31,29
Ácido L-glutâmico
7,35
L-glutamina
365,00
L-histidina HCl H₂O
31,48
L-isoleucina
54,47
L-Leucina
59,05
L-Lisina HCl
91,25
L-metionina
17,24
L-fenilalanina
35,48
L-Prolina
17,25
L-serina
26,25
L-treonina
53,45
L-Triptofano
9,02
L-tirosina 2 Na 2 H2O
55,79
L-valina
52,85
Vitaminas
D-Biotina
0,0035
Cloreto de colina
8,98
Pantotenato de cálcio D
2,24
Ácido fólico
2,66
Mio-inositol
12,60
Nicotinamida
2,02
Cloridrato de piridoxina
0,031
Cloridrato de piridoxal
2,00
Riboflavina
0,219
Cloridrato de tiamina
2,17
Vitamina B12
0,68
Sais inorgânicos
CaCl₂ 2 H₂O
154,50
CuSO4 5 H2O
0,0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0,05
FeSO4 7 H2O
0,417
KCl
311,80
MgCl₂ 6 H₂O
61,20
MgSO4 7 H2O
100,00
NaCl
6996,00
NaHCO3
1200,00
Na₂HPO₄
71,02
NaH₂PO₄ 2 H₂O
70,87
ZnSO4 7 H2O
0,432
Outros componentes
D-Glicose
3151,00
Hipoxantina
2,40
HEPES
3574,50
Ácido linoleico
0,042
Ácido lipóico
0,105
Sal de sódio do vermelho de fenol
8,63
Putrescina 2 HCl
0,081
Piruvato de sódio
55,00
Timidina
0,365
- 0,02 a 20-25 °C. Cada lote foi testado quanto à esterilidade e ausência de micoplasma e bactérias. Manutenção Manter refrigerado entre +2 °C e +8 °C, ao abrigo da luz. A congelação e o aquecimento até +37 °C minimizam a qualidade do produto. Não aqueça o meio a mais de 37 °C nem utilize fontes de calor incontroláveis (por exemplo, aparelhos de micro-ondas). Se apenas uma parte do meio for utilizada, retire essa quantidade do frasco e aqueça-a à temperatura ambiente. O prazo de validade de qualquer meio, exceto o meio básico, é de 6 a 8 semanas a partir da data de abertura. Composição Componentes mg/L Sais inorgânicosCloreto de cálcio x 2H2O132,00 Sulfato de magnésio97,67 Cloreto de potássio400 Cloreto de sódio6.460,00 Hidrogenofosfato dissódico (anidro)504,00 Outros componentesD(+)-Glicose (anidro)3.000,00 Glutationa (reduzida)0,5 Peptona de carne600,00 Sal de sódio do vermelho fenol11 AminoácidosL-alanina13,36 L-arginina x HCl42,14 L-Asparagina x H2O45,03 Ácido L-aspártico19,97 L-Cisteína x HCl x H2O31,75 L-glutamina (estável)219,15 Ácido L-glutâmico22,07 Glicina7,51 L-histidina x HCl x H2O20,96 L-hidroxiprolina19,67 L-isoleucina39,36 L-leucina39,36 L-Lisina x HCl36,54 L-Metionina14,92 L-fenilalanina16,52 L-Prolina17,27 L-Serina26,28 L-treonina17,87 L-triptofano3,06 Sal dissódico de L-tirosina26,10 L-Valina17,57 VitaminasÁcido p-aminobenzóico1,0 Ácido ascórbico0,56 D(+)-Biotina0,20 D-Pantotenato de cálcio0,20 Cloreto de colina5,0 Ácido fólico10,0 Mio-inositol36,00 Nicotinamida0,50 Ácido nicotínico0,5 Cloridrato de piridoxal0,50 Cloridrato de piridoxina0,50 Riboflavina0,20 Cloridrato de tiamina0,20 Vitamina B122,0
O Medium 199 oferece uma gama de aplicações no terreno. Pode manter eficazmente o complexo cumulus-oócito (COC) e apoiar a maturação in vitro de oócitos. Além disso, é utilizado na lavagem de linhas de aspiração durante a recolha de óvulos de vacas Holstein alemãs. Além disso, o meio 199 é um excelente meio para a cultura de células endoteliais cardíacas derivadas de ratos. Estas aplicações demonstram a versatilidade e adaptabilidade do Medium 199 a várias necessidades experimentais.
Historial
O desenvolvimento do Medium 199 na década de 1950 marcou um avanço significativo nos meios de cultura de tecidos. Antes da sua introdução, muitos meios de cultura baseavam-se em produtos derivados de animais e extractos de tecidos. No entanto, Morgan e colegas revolucionaram o campo ao formularem uma fonte nutricional completamente definida para culturas de células. Através das suas experiências envolvendo diferentes combinações de vitaminas, aminoácidos e outros factores, descobriram as excepcionais propriedades promotoras de crescimento do Meio 199.
Controlo de qualidade
pH = 7,2 +/
- 0,02 a 20-25°C.
Cada lote foi testado para esterilidade e ausência de micoplasma e bactérias.
Manutenção
Manter refrigerado a uma temperatura entre +2°C e +8°C, ao abrigo da luz. O congelamento e o aquecimento até +37° C minimizam a qualidade do produto.
Não aquecer o meio a mais de 37° C nem utilizar fontes de calor incontroláveis (por exemplo, aparelhos de micro-ondas).
Se apenas uma parte do meio for utilizada, retirar essa quantidade do frasco e aquecê-la à temperatura ambiente.
O prazo de validade de qualquer meio, com exceção do meio básico, é de 8 semanas a partir da data de fabrico.
Composição
Componentes
mg/L
Sais inorgânicos
Cloreto de cálcio x 2H2O
264,92
Nitrato de ferro (III) x 9H2O
0,72
Sulfato de magnésio
97,67
Cloreto de potássio
400,00
Acetato de sódio x 3H2O
82,95
Cloreto de sódio
6,800.00
Di-hidrogenofosfato de sódio x H2O
140,00
Outros componentes
Sulfato de adenina
10,00
AMP
0,20
ATP
1,00
Colesterol
0,20
2'-Desoxirribose
0,50
D(+)-Glucose anidra
1,000.00
Glutatião (vermelho)
0,05
Guanina x HCl
0,30
Hipoxantina
0,30
Vermelho de fenol
10,00
D-Ribose
0,50
Timina
0,30
Tween 80
4,90
Uracilo
0,30
Xantina
0,30
NaHCO3
2,200.00
Aminoácidos
L-Alanina
25,00
L-Arginina x HCl
70,00
Ácido L-aspártico
30,00
L-cisteína x HCl x H2O
0,10
L-Cistina
20,00
L-Glutamina estável
149,00
Ácido L-Glutâmico
67,00
Glicina
50,00
L-Histidina x HCl x H2O
21,88
L-hidroxiprolina
10,00
L-Isoleucina
20,00
L-Leucina
60,00
L-Lisina x HCl
70,00
L-Metionina
15,00
L-fenilalanina
25,00
L-Prolina
40,00
L-Serina
25,00
L-Treonina
30,00
L-Triptofano
10,00
L-tirosina
40,00
L-Valina
25,00
Vitaminas
ácido 4-amino-benzoico
0,05
Ácido ascórbico
0,05
D(+)-Biotina
0,01
Calciferol
0,10
D-Pantotenato de cálcio
0,01
Cloreto de colina
0,50
Ácido fólico
0,01
myo-Inositol
0,05
Menadiona
0,01
Ácido nicotínico
0.025
Nicotinamida
0.025
Piridoxal x HCl
0.025
Piridoxol x HCl
0.025
Riboflavina
0,01
Sal dissódico do fosfato de DL-α-tocoferol
0,01
Tiamina x HCl
0,01
Acetato de vitamina A
0,14
O IMDM é adequado para culturas de células de alta densidade e de rápida proliferação, incluindo células Jurkat, COS-7 e macrófagos. As várias modificações de IMDM disponíveis para uma gama de aplicações de cultura de células podem ser encontradas utilizando a ferramenta de seleção de meios. Os meios líquidos fornecem nutrientes essenciais para todas as aplicações de cultura de células. Cada um dos nossos meios de cultura celular de alta qualidade é fabricado de acordo com a fórmula inicialmente publicada ou com as modificações necessárias para o desempenho consistente e a estabilidade do meio de cultura.
IMDM vs. DMEM
O IMDM contém nitrato de potássio em vez de nitrato férrico e HEPES e piruvato de sódio. Os componentes adicionais no IMDM tornam-no mais adequado para tipos de células especializadas e aplicações específicas do que o DMEM.
IMDM vs. RPMI
O IMDM e o RPMI têm formulações diferentes que podem ser relevantes para a estimulação com PMA/ionomicina. Uma diferença significativa é a concentração de Ca2+. Enquanto o RPMI contém 0,42 mM de Ca2+, o IMDM contém 1,49 mM.
Controlo de qualidade
pH = 7,2 +/
- 0,02 a 20-25°C.
Cada lote foi testado quanto à esterilidade e ausência de micoplasma e bactérias.
Manutenção
Manter refrigerado a uma temperatura entre +2°C e +8°C, ao abrigo da luz. O congelamento e o aquecimento até +37° C minimizam a qualidade do produto.
Não aquecer o meio a mais de 37° C ou utilizar fontes de calor incontroláveis (por exemplo, aparelhos de micro-ondas).
Se apenas uma parte do meio for utilizada, retirar essa quantidade do frasco e aquecê-la à temperatura ambiente.
O prazo de validade de qualquer meio, com exceção do meio básico, é de 8 semanas a partir da data de fabrico.
Composição
Componentes
mg/L
Sais inorgânicos
Cloreto de cálcio x 2 H2O
219,00
Cloreto de potássio
330,00
Nitrato de potássio
0.076
Sulfato de magnésio anidro
97,73
Cloreto de sódio
4,505.00
Dihidrogenofosfato de sódio anidro
109,00
Selenito de sódio
0,02
Outros componentes
D(+)-Glucose anidra
4,500.00
HEPES
5,958.00
Piruvato de sódio
110,00
Vermelho de fenol
15,00
Aminoácidos
L-Alanina
25,00
L-Arginina x HCl
84,00
L-Asparagina x H2O
25,00
Ácido L-aspártico
30,00
L-Cistina x 2HCl
91,24
L-Glutamina
584,00
Ácido L-Glutâmico
75,00
Glicina
30,00
L-Histidina x HCl x H2O
42,00
L-Isoleucina
104,80
L-Leucina
104,80
L-Lisina x HCl
146,20
L-Metionina
30,00
L-fenilalanina
66,00
L-Prolina
40,00
L-Serina
42,00
L-Treonina
95,20
L-Triptofano
16,00
L-Tirosina x 2Na
104,20
L-Valina
93,60
Vitaminas
D(+)-Biotina
0.013
D-Pantotenato de cálcio
4,00
Cloreto de colina
4,00
Ácido fólico
4,00
myo-Inositol
7,20
Meios de cultura celular: uma visão geral
No domínio das ciências da vida, uma das metodologias mais importantes é a cultura celular. A remoção de células, tecidos ou órgãos de um animal ou planta e a subsequente implantação dessas células, tecidos ou órgãos num ambiente artificial favorável à sua sobrevivência e/ou crescimento é o que se entende por «cultura celular». As necessidades ambientais fundamentais para o desenvolvimento celular ideal são a temperatura controlada, um substrato para a adesão celular, um meio de crescimento adequado e uma incubadora que mantenha o pH e a osmolalidade ideais. As células necessitam destas condições para crescerem até ao seu pleno potencial.
A seleção de um meio de crescimento adequado para o cultivo in vitro é a etapa da cultura celular que é simultaneamente a mais crítica e a mais vital. Um meio de crescimento, também conhecido como meio de cultura, é um líquido ou gel formulado para estimular o desenvolvimento de organismos à escala microscópica, celular ou vegetal. O meio utilizado para cultivar células contém frequentemente um fornecimento adequado de energia e substâncias que controlam o ciclo celular. Os principais componentes de um meio de cultura incluem aminoácidos, vitaminas, sais inorgânicos, glicose e soro. O soro é adicionado ao meio porque atua como fonte de fatores de crescimento, hormonas e fatores de adesão. Além de fornecer nutrientes, o meio também contribui para a manutenção dos níveis de pH e osmolalidade.
Tipos de meio utilizados na cultura celular
Tanto as células humanas como as animais podem ser cultivadas num meio artificial ou sintético, ou num meio inteiramente natural, suplementado com elementos naturais. A seguir, apresentamos uma visão geral dos diferentes tipos de meios atualmente disponíveis.
Meios naturais
Nos meios naturais, só se encontram fluidos biológicos que existem no seu estado natural. Os meios naturais são muito úteis e fáceis de utilizar para o cultivo de uma ampla variedade de tipos de células animais. A falta de conhecimento sobre os componentes exatos que constituem os meios naturais é o principal fator que contribui para a baixa repetibilidade dos resultados obtidos com a utilização destes meios.
Meios artificiais
A preparação de meios artificiais ou sintéticos envolve a adição de nutrientes (tanto orgânicos como inorgânicos), proteínas séricas, hidratos de carbono, cofatores, vitaminas e sais, bem como as fases gasosas de O₂ e CO₂ [1].
Foram desenvolvidos vários tipos de meios artificiais com o objetivo de cumprir uma ou mais das seguintes funções: 1) Sobrevivência imediata (uma solução salina equilibrada com um pH e uma pressão osmótica precisos). 2) Sobrevivência prolongada (uma solução salina equilibrada suplementada com diferentes formulações de compostos orgânicos e/ou soro). 3) Desenvolvimento por tempo indeterminado. 4) Funções especializadas.
Existem quatro classificações distintas para os meios artificiais:
Meios contendo soro
O tipo de suplemento mais frequente encontrado nos meios utilizados para o crescimento de células animais é o soro fetal bovino. É adicionado ao meio de cultura como um suplemento de baixo custo, a fim de alcançar as melhores condições de crescimento possíveis. Para além de atuar como transportador ou quelante de nutrientes instáveis ou insolúveis em água, hormonas e fatores de crescimento, inibidores de proteases e outras substâncias, o soro também se liga a moléculas nocivas e neutraliza-as.
Meio sem soro
A presença de soro nos meios de cultura apresenta várias desvantagens e tem o potencial de causar erros graves na interpretação da investigação imunológica [2, 3]. Foram criados diversos meios de cultura isentos de soro [4, 5]. Estes meios são geralmente formulados especificamente para suportar a cultura de um único tipo de célula, tais como o Knockout Serum Replacement e o Knockout DMEM da Thermo Fisher Scientific, e o meio mTESR da Stem Cell Technologies [6], para células estaminais [7].
Além disso, estes meios incorporam quantidades definidas de fatores de crescimento purificados, lipoproteínas e outras proteínas, que, de outra forma, seriam normalmente fornecidas pelo soro [8]. Estes meios são frequentemente designados por «meios de cultura definidos», uma vez que os componentes que os constituem são bem conhecidos.
Meios quimicamente definidos
Estes meios incluem componentes inorgânicos e orgânicos ultrapuros que não foram afetados por qualquer tipo de contaminação. Podem também incluir adições de proteínas puras, tais como fatores de crescimento.
A modificação genética de bactérias ou leveduras, juntamente com a adição de ácidos gordos específicos, vitaminas, colesterol e aminoácidos, resulta na produção dos seus componentes [9].
Meios isentos de proteínas
Os meios isentos de proteínas são aqueles que não incluem qualquer proteína e, em vez disso, incluem apenas elementos não proteicos. Quando comparados com meios com soro adicionado, a utilização de meios sem proteínas adicionadas promove uma maior proliferação celular e expressão proteica e facilita a purificação de qualquer produto gerado num processo a jusante [10-12]. A proteína não está incluída em formulações como o MEM e o RPMI-1640. No entanto, pode ser administrado um suplemento proteico, caso seja necessário.
Meios de cultura e os seus componentes básicos
Os meios de cultura comerciais podem ser adquiridos na forma de pó ou líquido e incluem frequentemente uma variedade de nutrientes, tais como aminoácidos, glicose, sais, vitaminas e outros suplementos alimentares.
As necessidades destes componentes variam consoante a linha celular, e estas variações são responsáveis pela grande diversidade de formulações de meios de cultura. Cada componente desempenha uma determinada função, que será descrita nos parágrafos seguintes:
Sistemas tampão
Para manter condições de crescimento ideais, o pH deve ser controlado, o que é frequentemente feito por um de dois sistemas tampão:
Sistema tampão natural
A proporção de CO₂/H₂CO₃ na atmosfera é igual à do meio, criando um mecanismo tampão natural. Para preservar este mecanismo tampão natural, as culturas devem ser mantidas num ambiente com 5-10% de CO₂, o que é frequentemente conseguido através da utilização de uma incubadora de CO₂. Uma das principais vantagens da utilização de um tampão natural é o facto de ser económico e seguro.
HEPES
A tamponagem química utilizando o zwitterião HEPES apresenta uma maior capacidade de tamponagem na faixa de pH de 7,2 a 7,4 e não requer um ambiente gasoso regulado. Para determinados tipos de células, uma dose mais elevada de HEPES pode ser prejudicial. Os meios que contêm HEPES são, da mesma forma, muito mais suscetíveis aos efeitos fototóxicos da luz fluorescente [13].
Vermelho de fenol
O indicador de pH vermelho de fenol é frequentemente incluído em meios de cultura disponíveis no mercado, permitindo a monitorização contínua do pH. À medida que as células se multiplicam, os metabolitos por elas produzidos provocam uma alteração no pH e, consequentemente, uma mudança de cor do meio. O vermelho de fenol tem um efeito duplo na cor do meio, tornando-o amarelo em pH ácido e roxo em pH alcalino. O pH 7,4, o valor ideal para a cultura celular, faz com que o meio apresente uma cor vermelha fluorescente.
No entanto, o vermelho de fenol apresenta algumas desvantagens: em primeiro lugar, é capaz de simular a ação de várias hormonas esteróides, principalmente o estrogénio [14]. Por conseguinte, ao estudar células sensíveis ao estrogénio, como o tecido mamário, recomenda-se a utilização de um meio isento de vermelho de fenol. O equilíbrio sódio-potássio é perturbado pela presença de vermelho de fenol em várias formulações sem soro. A adição de soro ou de hormona hipofisária bovina aos meios pode contrariar este efeito [15]. Em terceiro lugar, a deteção em experiências de citometria de fluxo é dificultada pela presença de vermelho de fenol.
Sais inorgânicos
Os meios que contêm sais inorgânicos, tais como iões de sódio, potássio e cálcio, ajudam a manter o equilíbrio osmótico e a regular o potencial de membrana.
Aminoácidos
Uma vez que os aminoácidos são os componentes fundamentais das proteínas, constituem um componente essencial de todos os meios de crescimento celular alguma vez concebidos. Como as células são incapazes de produzir determinados aminoácidos por si próprias, é importante que o meio de cultura inclua aminoácidos essenciais. São necessários para a proliferação celular, e a concentração em que se encontram determina a densidade celular máxima que pode ser atingida. Em particular, a L-glutamina, um aminoácido essencial, é especialmente crucial.
A L-glutamina funciona como fonte secundária de energia para o metabolismo e fornece azoto para a produção de NAD, NADPH e nucleótidos. Dado que a L-glutamina é um aminoácido instável que, com o tempo, se transforma numa forma que as células não conseguem utilizar, deve ser adicionada ao meio de cultura.
Além disso, os aminoácidos não essenciais podem ser fornecidos ao meio de cultura, a fim de repor aqueles que foram consumidos ao longo do processo de crescimento. O crescimento das células é estimulado e a sua viabilidade é aumentada quando o meio de cultura é suplementado com aminoácidos não essenciais.
Hidratos de carbono
Os hidratos de carbono sob a forma de açúcares são a principal fonte de energia. Muitos dos meios incluem também maltose e frutose, para além dos açúcares mais comuns, como a glicose e a galactose.
Proteínas e péptidos
A albumina, a transferrina e a fibronectina são as proteínas e os péptidos mais frequentemente utilizados. São especialmente importantes em meios que não incluem soro. A albumina, a transferrina, a aprotinina, a fetuína e a fibronectina são algumas das proteínas que podem ser encontradas no soro, que constitui uma fonte rica em proteínas.
A albumina é a principal proteína presente no sangue e a sua função consiste em ligar e transportar várias substâncias — incluindo água, sais, ácidos gordos livres, hormonas e vitaminas — entre diferentes órgãos e células. A capacidade da albumina de se ligar a substâncias químicas torna-a uma candidata eficaz para remover compostos nocivos do meio em que as células são cultivadas.
A aprotinina é um agente protetor em sistemas de cultura celular, uma vez que é estável em pH neutro e ácido, bem como resistente a altas temperaturas e à destruição que pode ser causada por enzimas proteolíticas. É capaz de inibir várias proteases de serina, incluindo a tripsina, entre outras.
A fetuína é uma glicoproteína que pode ser detetada em quantidades mais elevadas no soro de fetos e recém-nascidos, em comparação com o soro de adultos. Além disso, atua como inibidor de proteases de serina. A proteína fibronectina é um componente essencial no processo de adesão celular. A transferrina é uma proteína que transporta ferro e é responsável pelo fornecimento de ferro às membranas celulares.
Ácidos gordos e lípidos
Desempenham um papel crucial em meios sem soro, quando este está ausente.
Vitaminas
São necessárias inúmeras vitaminas para o desenvolvimento e a proliferação celular. As vitaminas não podem ser produzidas em quantidades adequadas pelas células, sendo, por isso, essenciais na cultura de tecidos como suplementos alimentares.
Na cultura celular, o soro é a principal fonte de vitaminas; no entanto, os meios também são enriquecidos com várias vitaminas para se adequarem a um tipo específico de célula. Normalmente, as vitaminas do grupo B são utilizadas para estimular o crescimento.
Oligoelementos
Elementos químicos como o cobre, o zinco, o selénio e os intermediários do ácido tricarboxílico são conhecidos como oligoelementos. Os oligoelementos são frequentemente adicionados a meios que não incluem soro, a fim de substituir aqueles que estão normalmente presentes no soro. Estes elementos são componentes químicos importantes, necessários para o desenvolvimento saudável das células. Muitas reações bioquímicas dependem de determinados micronutrientes, como a atividade enzimática.
Suplementos para meios de cultura
O meio de crescimento completo recomendado para determinadas linhas celulares necessita de componentes adicionais que estão ausentes dos meios de base e do soro. Estes suplementos alimentares apoiam o crescimento celular e o funcionamento metabólico adequado.
Embora as hormonas, os fatores de crescimento e as moléculas de sinalização sejam essenciais para a proliferação adequada de determinadas linhas celulares, devem ser sempre tomadas as seguintes precauções: uma vez que a adição de suplementos pode alterar a osmolalidade do meio de crescimento completo, o que pode inibir o desenvolvimento celular, é sempre aconselhável verificar a osmolalidade após a adição dos suplementos. Para a maioria das linhas celulares, a osmolalidade ideal situa-se entre 260 e 320 mOSM/kg.
Antibióticos
Os antibióticos são frequentemente utilizados para inibir o desenvolvimento de contaminantes bacterianos e fúngicos [16], embora não sejam essenciais para o crescimento celular. Uma vez que os antibióticos podem ocultar a contaminação por micoplasmas e bactérias resistentes, a sua utilização de rotina não é recomendada para a cultura celular [17, 18].
Além disso, os antibióticos podem perturbar o metabolismo de células hipersensíveis. São frequentemente utilizadas as combinações de penicilina e estreptomicina fabricadas pela MilliporeSigma e pela Life Technologies. A plasmocina tem sido utilizada na cultura das linhas celulares de glioma TS603, TS516 e BT260 [19], tendo-se revelado eficaz na remoção da contaminação por micoplasma (20).
Soro
O soro contém albuminas, fatores de crescimento e inibidores de crescimento. O soro é um dos componentes mais importantes do meio de cultura celular, pois fornece aminoácidos, proteínas, vitaminas (especialmente vitaminas lipossolúveis, como A, D, E e K), hidratos de carbono, lípidos, hormonas, fatores de crescimento, minerais e oligoelementos.
O soro de origem fetal e de vitelo bovino é frequentemente utilizado para promover o desenvolvimento de células em cultura. O soro fetal é uma fonte abundante de fatores de crescimento e é adequado para a clonagem celular e o desenvolvimento de células sensíveis. Devido às suas capacidades reduzidas de promoção do crescimento, o soro de vitelo é utilizado em experiências de inibição por contacto. Os meios de crescimento normais incluem frequentemente 2% a 10% de soro. A adição de soro ao meio de cultura tem os seguintes objetivos [21]:
-
O soro fornece os nutrientes essenciais às células (tanto em solução como ligados a proteínas).
-
O soro contém vários fatores de crescimento e hormonas envolvidos na promoção do crescimento e na atividade celular especializada.
-
Fornece muitas proteínas de ligação, como a albumina e a transferrina, que transportam outras substâncias químicas para o interior da célula. Por exemplo, a albumina transporta gorduras, vitaminas, hormonas, etc., para as células.
-
Fornece também proteínas, como a fibronectina, que aumentam a adesão celular ao substrato. Além disso, produz elementos de espalhamento que auxiliam na expansão celular antes da divisão.
-
Fornece inibidores de proteases que impedem a proteólise nas células.
-
Contém ainda minerais como Na+, K+, Zn2+ e Fe2+.
-
Aumenta a viscosidade do meio, protegendo assim as células de lesões mecânicas durante a agitação da cultura em suspensão.
-
Funciona também como tampão.
Referências
[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Nutrição de células animais em cultura de tecidos; estudos iniciais sobre um meio sintético. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8
[2] Kerbel R, Blakeslee D. Adsorção rápida de um componente do soro fetal bovino por células de mamíferos em cultura. Uma fonte potencial de artefactos em estudos de antisoros contra antigénios específicos de células. Immunology. 1976;31:881-91
[3] Sula K, Draber P, Nouza K. A adição de soro ao meio utilizado na preparação de suspensões celulares como possível fonte de artefactos em reações mediadas por células estudadas através do teste do linfonodo poplíteo. J Immunogenet. 1980;7:483-9
[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Meios comerciais isentos de soro: crescimento de hibridomas e produção de anticorpos monoclonais. J Immunol Methods. 1991;145:175-83
[5] Barnes D, Sato G. Métodos para o crescimento de células em cultura em meio sem soro. Anal Biochem. 1980;102:255-70
[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O, et al. As proteínas chaperonas HSP70 transportam a TDP-43, isenta de ARN, para invólucros esféricos líquidos intranucleares anisotrópicos. Science. 2021;371:
[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J, et al. A senescência induzida pela síndrome de Down perturba a arquitetura nuclear dos progenitores neurais. Cell Stem Cell. 2022;29:116-130.e7
[8] Iscove N, Melchers F. Substituição completa do soro por albumina, transferrina e lípidos de soja em culturas de linfócitos B reativos ao lipopolissacarídeo. J Exp Med. 1978;147:923-33
[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Melhoria sistemática de um meio quimicamente definido e isento de proteínas para o crescimento de hibridomas e a produção de anticorpos monoclonais. J Biotechnol. 1996;45:111-23
[10] Darfler F. Um meio isento de proteínas para o crescimento de hibridomas e outras células do sistema imunitário. In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769-78
[11] Barnes D, Sato G. Cultura celular sem soro: uma abordagem unificadora. Cell. 1980;22:649-55
[12] Hamilton W, Ham R. Crescimento clonal de linhas celulares de hamster chinês em meios isentos de proteínas. In Vitro. 1977;13:537-47
[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Análise dos efeitos citotóxicos de um meio de cultura contendo HEPES exposto à luz. In Vitro Cell Dev Biol. 1985;21:282-7
[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. O vermelho de fenol nos meios de cultura de tecidos é um estrogénio fraco: implicações para o estudo de células sensíveis ao estrogénio em cultura. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496-500
[15] Karmiol S. Desenvolvimento de meios sem soro. Em: Master JRW, editor. Animal Cell culture, 3.ª ed. Oxford: Oxford University Press; 2000.
[16] Perlman D. Utilização de antibióticos em meios de cultura celular. Methods Enzymol. 1979;58:110-6
[17] McGarrity G. Propagação e controlo da infeção por micoplasmas em culturas celulares. In Vitro. 1976;12:643-8
[18] Masters J, Stacey G. Substituição do meio e passagem de linhas celulares. Nat Protoc. 2007;2:2276-84
[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M, et al. A desmetilase de histonas KDM6A deteta diretamente o oxigénio para controlar a cromatina e o destino celular. Science. 2019;363:1217-1222
[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M, et al. Eficácia do Plasmocin™ em várias linhas celulares de mamíferos infetadas por mollicutes, em comparação com antibióticos habitualmente utilizados em cultura celular: uma experiência local. Cytotechnology. 2011;63:609-20
[21] Kragh Hansen U. Aspectos moleculares da ligação de ligantes à albumina sérica. Pharmacol Rev. 1981;33:17-53