Vero-celler: Banebrytende innen virusstudier og vaksineinnovasjon

Vero-cellelinjen, en udødeliggjort pattedyrcellemodell avledet fra nyreepitelceller fra den afrikanske grønne apen, står i spissen for forskning innen virologi, mikrobiologi og celle- og molekylærbiologi. De brukes i stor utstrekning til vaksineutvikling, farmasøytisk screening og utforskning av virus- og parasittbiologi, tumorimmunologi og immunterapeutiske strategier.

Opprinnelse og viktige egenskaper ved Vero-celler

Når man dykker ned i en cellelinje som Vero, dukker det opp flere spørsmål: Hva er egentlig Vero-celler? Hvordan ble Vero-cellelinjen etablert? Hva er historien bak navnet "Vero"? I dette avsnittet skal vi belyse Vero-cellenes opprinnelse og primære egenskaper.

Vero-cellelinjen ble etablert i 1962, og stammer fra nyreepitelceller fra den afrikanske grønne apen. Denne linjen ble dyrket av Y. Kawakita og Yasumura ved Chiba University i Japan. Begrepet "Vero" er avledet av "Verda reno" på esperanto, som kan oversettes til "grønn nyre", selv om "Vero" også gir assosiasjoner til begrepet "sannhet"

Vero-celler danner vanligvis monolag, men kan også tilpasses til suspensjonskulturer med en epitellignende struktur. Disse cellene kjennetegnes av sin avrundede til langstrakte form og en gjennomsnittlig diameter på ca. 17 µm. Vero-celler har et hypodiploid kromosomtall, med et kromosomtall på 58 i omtrent 66 % av cellepopulasjonen, selv om det finnes variasjoner med høyere ploiditet i en liten andel av cellene (1,7 %).

Vero-cellekloner og deres unike egenskaper

Kloner avledet fra Vero-cellelinjen har unike egenskaper som skiller dem fra den opprinnelige linjen. Blant disse er to bemerkelsesverdige Vero-cellekloner:

• Vero E6-cellelinjen: Denne klonen, også kjent som Vero C1008, stammer fra Vero 76-celler og ble isolert i 1979 av P.J. Price ved hjelp av en fortynningsteknikk på mikrotiterplater. Vero E6-celler er spesielt godt egnet for dyrking av virus som replikerer sakte.

• Vero 76-celler: Disse cellene stammer fra nyrene til en afrikansk grønn ape i 1968, og har den epiteliale morfologien som er karakteristisk for Vero-celler.

Disse variantene av Vero-celler, ved siden av foreldrelinjen, fortsetter å spille en viktig rolle i utviklingen av virologisk forskning og medisinske intervensjoner, noe som markerer deres betydning i det vitenskapelige samfunnet.

Informasjon om dyrking

Dyrking av Vero-celler, en cellelinje fra aper, krever kjennskap til spesifikke parametere som fordoblingstid, såingstetthet og egnet vekstmedium.

• Populasjonsdoblingstid: Fordoblingstiden for Vero-celler er rundt 24 timer.

• Adhesjon: Vero-celler fester seg til overflater og danner vanligvis monolag når de dyrkes.

• Utsåingstetthet: Det anbefales å starte med en såingstetthet på 1 x 10^4 celler/cm^2. For å dyrke adherente Vero-celler, vask dem med PBS og behandle dem med Accutase for å løsne dem. Etter at du har løsnet dem, sentrifugerer du cellene, resuspenderer dem i nytt medium og overfører dem til nye dyrkingsflasker.

• Vekstmedium: Både Ham's F12 og DMEM er egnede medier for dyrking av Vero-celler. Disse bør suppleres med 2,5 mM L-glutamin og 5 % føtalt bovint serum (FBS) for å sikre optimal vekst. Mediet bør fornyes to til tre ganger i uken.

• Vekstbetingelser: Vero-celler trives ved en temperatur på 37 °C i en luftfuktig atmosfære tilsatt 5 % CO2.

• Oppbevaring: For langtidsoppbevaring bør Vero-celler oppbevares ved temperaturer under -150 °C, enten i en fryser med ultralave temperaturer eller i dampfasen av flytende nitrogen.

• Fryseprosess og medium: Ved kryopreservering brukes CM-1 eller CM-ACF, eller vekstmedium med FBS og DMSO, som frysemedium. Bruk en langsom fryseteknikk, og senk temperaturen gradvis med 1 °C per minutt.

• Prosess for tining: Tine Vero-celler ved å senke beholderen ned i et 37 °C varmt vannbad og røre den forsiktig i 40-60 sekunder. Fortynn deretter cellene i nytt medium, sentrifuger for å fjerne kryobeskyttelsesmiddelet, resuspender dem i nytt vekstmedium, og plasser dem i en ny kolbe for å gjenopprette og vokse.

• Biosikkerhetsnivå: Vero-celler skal håndteres i et laboratorium som oppfyller kravene til biosikkerhetsnivå 1.

Bruksområder for Vero-cellelinjen i forskning

Vero-cellelinjen har mange bruksområder innen forskning på cellebiologi og virologi. Her har vi tatt for oss noen spesifikke bruksområder.

Vero-celler i virusforskning og vaksineproduksjon

Vero-celler, som stammer fra nyreceller fra afrikansk grønn ape, har blitt en viktig del av bioprosessutviklingen av vaksiner mot ulike virus, inkludert poliovirus og japansk encefalittvirus. Cellenes tilpasningsevne i både adherente kulturer og suspensjonskulturer og deres brede evne til å støtte virus, inkludert patogener som des petits ruminants-viruset, understreker deres betydning for virusisolasjon og vaksineutvikling.

En rekke studier har benyttet Vero-celler til produksjon av humane vaksiner. For eksempel viste en bemerkelsesverdig studie publisert i 2019 at Vero-celler ble brukt i utviklingen av en inaktivert vaksine mot gulfeberviruset [2].

Veroceller brukes ofte i studier av virusinfeksjoner, for eksempel i en studie fra 2020 der Veroceller ble infisert med ulike isolater av SARS-CoV-2-viruset for å studere virusets vekstegenskaper [4]. En annen studie undersøkte cellereaksjoner på SARS-CoV-2-infeksjon ved hjelp av Vero-cellekultur [5].

Verocellenes rolle i vevsteknikk og oppstrøms bioprosessutvikling

I tillegg til vaksineproduksjon bidrar Vero-celler til vevsteknikk og det bredere feltet bioprosessutvikling, noe som understreker behovet for kontinuerlig forskning på cellens egenskaper og bruksområder. Valg av egnede Vero-celleunderlinjer er nøkkelen til å maksimere potensialet i bioteknologi- og farmasøytisk industri.

Bruk av Vero-celler i testing av legemidlers effekt og sikkerhet

Vero-celler brukes ofte i legemiddeltesting for å vurdere effektiviteten og sikkerheten til farmasøytiske forbindelser. Disse cellene regnes ofte som en standardmodell for normale nyreceller i studier der man undersøker de cytotoksiske effektene av ulike legemidler og terapeutiske midler. For eksempel viste forskning som sammenlignet virkningen av rotekstrakter fra Terminalia avicennioides på både HepG2, en cellelinje for leverkreft, og Vero-celler, som er avledet fra apenyreepitel, at ekstraktene var mer skadelige for kreftcellene enn for de normale cellene.

Begrensninger ved Vero-celler

Selv om Vero-celler er mye brukt, har de sine begrensninger, for eksempel produksjon av Vero-toksin og genomiske endringer som kan påvirke visse bruksområder. Det er viktig å forstå de spesifikke sublinjene og genomiske egenskapene til Vero-celler, inkludert Vero-linjen F6, for å kunne optimalisere bruken av dem i ulike bioprosesser.

Utforsk våre Vero-celler og derivater for banebrytende forskningsapplikasjoner

Forskningspublikasjoner

Her følger noen av de nyeste og mest siterte forskningspublikasjonene som omhandler Vero-celler.

Tilpasning av Vero-celler til vekst i suspensjon for produksjon av rabiesvirus i ulike serumfrie medier

Denne studien, som ble publisert i Vaccine Journal (2019), tilpasset Vero-celler til å vokse i suspensjonskulturer for å produsere rabiesvirus med høy titer ved bruk av ulike serumfrie medier.

Toxoplasma gondiis mottakelighet for etanolisk ekstrakt av Tinospora crispa i Vero-celler

Denne artikkelen ble publisert i tidsskriftet Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine i 2019. Studien viste at etanolisk ekstrakt av planten Tinospora crispa har en skadelig effekt på Toxoplasma gondii-parasitten. Det er imidlertid trygt for vertscellene (Vero-cellelinjen).

Effekter av Colchicum baytopiorum-bladekstrakt på cytotoksisitet og celledød i C-4 I- og Vero-cellelinjer

Denne artikkelen ble publisert av Journal of the Balkan Union of Oncology i 2021. I denne artikkelen undersøkte Ozlem Dagdeviren Ozsoylemez og Gul Ozcan den cytotoksiske effekten av Colchicum baytopiorum bladekstrakt på C-4I og Vero cellelinjer.

Resveratrol hemmer replikasjonen av alvorlig akutt respiratorisk syndrom coronavirus 2 (SARS-CoV-2) i dyrkede Vero-celler

Denne studien i Phytotherapy Research (2021) brukte SARS-CoV-2-infiserte Vero-celler for å undersøke den terapeutiske effekten av resveratrol på virusreplikasjon.

Lipofile statiner hemmer produksjonen av zikavirus i Vero-celler

Denne artikkelen i Nature Scientific Reports (2019) foreslår at lipofile statiner, dvs. cerivastatin, lovastatin, fuvastatin, simvastatin og mevastatin, kan hindre produksjonen av zikavirus i Vero-celler.

Ressurser for Vero-celler: Protokoller, videoer og mer

• Transfeksjon av Vero-celler: Denne lenken vil veilede deg gjennom en transfeksjonsprotokoll for Vero-celler.
• Transfeksjon av Vero-cellelinje: Denne videoen forklarer en transfeksjonsprotokoll for Vero-cellelinjen.
• Subkultur av Vero-celler: Denne videoen beskriver generelle anbefalinger for subkulturering av adherente cellelinjer.

Protokoller for celledyrking

• Dyrking av Vero-celler: Dette nettstedet inneholder en godt forklart protokoll for dyrking av Vero-celler.
• Dyrking av Vero-celler: Dette dokumentet kan hjelpe deg med å lære protokollen for formering, vedlikehold og frysing av Vero-celler.

Referanser

1. Ammerman, N.C., M. Beier-Sexton og A.F. Azad, Growth and maintenance of Vero cell lines. Current protocols in microbiology, 2008. 11(1): s. A. 4E. 1-A. 4E. 7.
2. Pato, T.P., et al., Rensing av gulfebervirus produsert i Vero-celler for produksjon av inaktivert vaks ine. Vaccine, 2019. 37(24): p. 3214-3220.
3. Aliyu-Amoo, H., et al., Antiproliferativ effekt av ekstrakter og fraksjoner av roten til Terminalia avicennioides (Combretaceae) Guill og Perr. på HepG2- og Vero-cellelinjer. Clinical Phytoscience, 2021, 7(1): s. 1-7.
4. Yao, P., et al., Isolering og vekstegenskaper av SARS-CoV-2 i Vero-celler. Virologica Sinica, 2020. 35(3): p. 348-350.
5. Park, B.K., et al., Differensiell signalering og virusproduksjon i Calu-3-celler og Vero-celler ved SARS-CoV-2-infeksjon. Biomolekyler og terapi, 2021. 29(3): p. 273.