Ramos-celler - forskning på B-cellelymfom: Betydningen av Ramos-celler
Ramos-celler er en cellelinje av B-lymfocytter som brukes mye i biomedisinsk forskning. De brukes særlig innen immunologi og kreftstudier. Forskere bruker disse cellene til å evaluere cytotoksiske legemidler og studere B-celleoverflateantigener, mutasjoner og apoptotiske mekanismer.
Ramos-cellenes opprinnelse og generelle egenskaper s
Forståelsen av en cellelinjes opprinnelse og essensielle egenskaper spiller en avgjørende rolle når det gjelder å avgjøre om den er egnet for forskningen din. Derfor er det lurt å sette seg grundig inn i denne informasjonen før man begynner å arbeide med den. Denne delen dekker følgende ofte stilte spørsmål: Hva er Ramos-kreftcellelinjen? Hva er Ramos-cellelinje CD19? Hva er Ramos-cellelinje CD20? Hva er Ramos-cellenes opprinnelse? Hva er markørene på Ramos-cellelinjen? Hva er Ramos-cellestørrelsen? Hva er morfologien til Ramos cellelinje?
- Ramos-cellelinjen ble etablert i 1972. Disse cellene ble avledet fra ascitisk væske fra en 3 år gammel kaukasisk gutt med Burkitt-lymfom av amerikansk type [1].
- De uttrykker viktige B-cellemarkører, inkludert immunoglobulin M (IgM), CD19, CD20 og CD22.
- Ramos-celler er Epstein Bar-virusnegative celler. De kan imidlertid permanent omdannes til Epstein-Barr-virus-positive celler.
- Disse B-lymfoblastcellene har en rund morfologi.
Ramos blå celler vs. Ramos B-celler
Ramos blå celler og Ramos B-celler er begge humane Burkitt-lymfomceller. Begge er negative for Epstein Bar-virus. Forskjellen mellom disse cellene er at Ramos blå celler uttrykker et NF-κB/AP-1-inducerbart reportergen kalt SEAP (secreted embryonic alkaline phosphate), mens hvite Ramos-celler ikke gjør det.
Dyrking av Ramos-celler
Denne delen av artikkelen er dedikert til å hjelpe deg med å lære viktig informasjon om Ramos-celler. Her vil du få vite mer: Hva er cellelinjens fordoblingstid? Hva er det anbefalte mediet? Hvordan dyrker du Ramos-celler?
Viktige punkter for dyrking av Ramos-celler
|
Fordoblingstid: |
Ramos-cellenes fordoblingstid er omtrent 20,4 ± 1,5 timer. Den kan imidlertid avvike avhengig av de gitte cellekulturforholdene. |
|
Adherent eller i suspensjon: |
Ramos-cellene vokser i suspensjon. |
|
Celletetthet: |
Den optimale celletettheten for Ramos-cellelinjen er 3 x105 celler/ml . For subkulturering samles de suspenderte cellene opp gjennom sentrifugering. Cellene tilsettes nytt medium og resuspenderes forsiktig. Deretter helles cellene over i en ny kolbe med en tetthet på 3 til 9 x105 celler/ml . |
|
Vekstmedium: |
RPMI 1640 supplert med 10 % føtalt bovint serum, 2,1 mM stabil glutamin og 2,0 g/L NaHCO3 brukes til å dyrke Ramos-celler. mediet bør skiftes ut to ganger per uke. |
|
Vekstbetingelser: |
Den humane Burkitt-lymfomcellelinjen (Ramos) oppbevares i en fuktet inkubator ved 5 % CO2 og 37 °C temperatur. |
|
Oppbevaring: |
Frosne Ramos-celler oppbevares ved temperaturer under -150 °C eller i dampfasen av flytende nitrogen for å beskytte cellenes levedyktighet over lengre tid. |
|
Fryseprosess og medium: |
CM-1 eller CM-ACF frysemedium anbefales for Ramos-celler. Det brukes en langsom fryseprosess som tillater en gradvis temperaturreduksjon på 1 grad Celsius per minutt. Denne langsomme nedfrysingen beskytter cellene mot sjokk og forbedrer deres levedyktighet. |
|
Tineprosess: |
For å tine opp de frosne celleneholdes de i et forvarmet vannbad ved 37 °C i 40 til 60 sekunder til det er igjen en liten isklump. Deretter tilsettes nytt medium, og cellene sentrifugeres for å fjerne elementer fra frysemediet. Pelleten resuspenderes igjen, og cellene fordeles i en ny kolbe som inneholder dyrkingsmedium. |
|
Biosikkerhetsnivå: |
Laboratoriet på biosikkerhetsnivå 1 er avgjørende for å opprettholde Epstein-Barr-virusnegative Ramos-cellekulturer. Biosikkerhetsnivået flyttes imidlertid til nivå 2 når Ramos-celler permanent blir Epstein-Barr-viruspositive. |
Ramos: Fordeler og begrensninger
I likhet med andre cellelinjer har Ramos-celler også klare fordeler og begrensninger. I dette avsnittet skal vi se nærmere på noen av de viktigste fordelene og begrensningene som kan ha stor betydning for bruken av dem i forskning.
Fordeler og begrensninger
- Cellemodell for Burkitt-lymfom: Ramos-celler ble utviklet fra en pasient med Burkitts lymfom, noe som gjør dem til en relevant cellemodell for studier av lymfoide maligniteter
- Enkel dyrking: Ramos-celler er enkle å dyrke og vedlikeholde i laboratoriet. De har enkle krav og betingelser for celledyrking
Begrensninger
- In vitro-modell: Ramos-celler representerer kanskje ikke fullstendig den genetiske kompleksiteten i pasienttumorer, noe som begrenser deres anvendelighet. Videre er det ikke sikkert at resultatene fra eksperimenter med Ramos-cellelinjen gjenspeiler in vivo-forhold fullt ut, noe som kan føre til translasjonelle utfordringer
anvendelser av Ramos-celler i forskning
Ramos har lovende bruksområder innen biomedisin. Noen av de viktigste bruksområdene for Ramos-celler i forskning er blant annet
- Lymfom-biologi: Ramos-celler brukes i stor grad til å studere lymfomets biologi. De brukes til å utforske genetiske og molekylære faktorer som ligger til grunn for lymfoide maligniteter. Dessuten får forskere innsikt i sykdomsinitiering, progresjon og heterogenitet ved hjelp av disse Burkitt-lymfomcellene. Genetiske mutasjoner og signalveier blir også undersøkt, noe som potensielt kan føre til utvikling av mer presise diagnostiske og terapeutiske tilnærminger. En studie utført i 2019 viste at GCN5 (General control non-depressible 5) histonacetyltransferasehemming reduserer tumorigenisiteten til humane Burkitt-lymfomceller (Ramos) ved å forstyrre BCR-signalering. GCN5 er derfor foreslått som et mulig mål for utvikling av medikamentell lymfombehandling [2].
- Screening og testing av legemidler: Ramos-cellelinjen er mye brukt i screening og testing av legemidler. Forskere evaluerer effekten av potensielle terapeutiske forbindelser når det gjelder å hemme celleproliferasjon og -vekst og indusere celledød i lymfomceller. Dette bidrar til å identifisere lovende legemiddelkandidater, noe som gjør det lettere å utvikle målrettede behandlinger for lymfompasienter. Forskningen viste at metanolisk ekstrakt av Annona-fruktens hud, fruktkjøtt og frø hadde moderat effekt på proliferasjonen av Ramos-celler, mens kloroformekstrakt hadde robust effekt på proliferasjonen. Studien foreslo dermed at Annona-frukt kan vise seg å være effektiv i forebygging og behandling av lymfekreft [3].
Ramos-celler til din forskning
Publikasjoner med Ramos-celler
Denne delen av artikkelen inneholder noen interessante forskningspublikasjoner som omhandler Ramos-cellelinjen:
Denne forskningen ble publisert i EMBO-tidsskriftet i 2018. Studien viste at Ramos B-celler krever uttrykk av Ramos-cellenes CD19- og CD79b-markører (BCR-signaleringskomponent Igβ) for å være i stand til å vokse og konkurrere.
Denne studien publisert i Neoplasia (2021) benyttet Ramos-celler og foreslo at mixed lineage kinase domain (MLKL) er epigenetisk regulert i Burkitts lymfomceller (Ramos). Dermed er det en lovende prognostisk markør for behandlingssuksess med nekroptoserelaterte terapier.
Fosforylering av PBK/TOPK Tyr74 ved hjelp av JAK2 fremmer tumorvekst i Burkitt-lymfom
Denne forskningsartikkelen i Cancer Letters (2022) antyder at JAK2/TOPK/histon H3-signalaksen spiller en avgjørende rolle i proliferasjonen av B-lymfomcellelinjer in vitro.
Verotoksin-1-indusert ER-stress utløser apoptose eller overlevelse i Burkitt-lymfomceller
Denne artikkelen ble publisert i 2020 i Toxins. Studien foreslår at behandling med verotoksin-1 induserer endoplasmatisk retikulum (ER)-stress i Ramos B-celler. Dette fører til initiering av apoptotisk signalering eller overlevelsessignalering i lymfomcellelinjer.
Silymarin hemmer genuttrykk av Toll-like reseptor 8 og apoptose i Ramos kreftcellelinje
Denne studien i Avicenna Journal of Phytomedicine (2020) rapporterte at en naturlig forbindelse, silymarin, undertrykker TLR8 (Toll-lignende reseptor 8)-uttrykk og apoptose i Ramos-cellelinjen.
Ressurser for Ramos cellelinje: Protokoller, videoer og mer
Her følger noen nettressurser om Ramos-celler:
- Ramos-celletransfeksjon: Dette dokumentet hjelper deg med å lære protokollen for transfeksjon av Ramos-cellelinjen.
Følgende lenke inneholder Ramos-cellekulturprotokollen:
- Ramos-celler: Dette nettstedet inneholder grunnleggende informasjon om Ramos-cellelinjen. Den inneholder også en protokoll for subkulturering av Ramos-celler og håndtering av prolifererende og kryopreserverte kulturer. I tillegg finnes det informasjon om Ramos-cellemedier, fordoblingstid og celletetthet.
Nøkkelinformasjon om Ramos-celler: Ofte stilte spørsmål
Referanser
- Kerntke, C.G., Analysis of the organization and signaling capacity of the membrane IgE during its interaction with CD19 and CD23 in B lymphocytes. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
- Farria, A.T., et al., GCN5 HAT-inhibering reduserer overlevelsen av humane Burkitt-lymfomceller gjennom reduksjon av MYC-målgenuttrykk og hindring av BCR-signalveier. Oncotarget, 2019. 10(56): p. 5847.
- Al-Shaya, H.M., et al., Fytokjemisk profil og antioksidasjonsaktivitet av annona-frukt og dens effekt på lymfomcelleproliferasjon. Matvitenskap og ernæring, 2020. 8(1): p. 58-68.