P19-celler - forskning på embryonalt karsinom ved bruk av P19-celler
P19 er en embryonal karsinomcellelinje fra mus. Den er mye brukt i biomedisinsk forskning, hovedsakelig for å studere utviklingsbiologi, stamcellebiologi, celledifferensiering og screening av legemidler. Ettersom P19-celler har differensieringsevne, kan de være nyttige i undersøkelser av komplekse biologiske prosesser som vevsdannelse og tidlig embryonalutvikling. I denne artikkelen vil vi ta for oss det grunnleggende om P19-celler fra mus.
Generelle egenskaper og opprinnelse til P19-celler
Det er viktig å kjenne til en cellelinjes generelle egenskaper og opprinnelse før du begynner å jobbe med den. Denne delen vil dekke følgende: Hva er en P19-cellelinje? Hva er størrelsen på P19-cellen? Hva er opprinnelsen til P19-celler?
- P19 er en type pluripotente embryonale karsinomceller som opprinnelig stammer fra teratokarsinom utviklet i en C3H/He-mus. Cellelinjen ble først etablert i 1982 av McBurney og Rogers.
- P19-celler kan vokse kontinuerlig i et serumtilført dyrkningsmedium. De kan differensieres til andre celletyper når de eksponeres for ikke-toksiske stoffer som retinsyre og dimetylsulfoksid (DMSO) [1].
- Disse musekarsinomcellene har en epitel-lignende morfologi.
- P19-cellelinjen har en euploid mannlig karyotype (n=40; XY).
Informasjon om dyrking av P19-celler
P19-cellelinjen dyrkes mye i forskningslaboratorier på grunn av sine unike egenskaper. Det er enkelt og overkommelig å dyrke den. Denne delen har nevnt all nøkkelinformasjonen du trenger for å vedlikeholde og dyrke P19-cellekultur. Vi vil vite det: Hva er doblingstiden for P19-celler? Hvordan dyrker du P19-cellelinjen? Er P19 en adherente cellelinje?
Nøkkelpunkter for dyrking av P19-celler
|
Doblingstid: |
Doblingstiden som er rapportert for P19-cellelinjen er omtrent 2 til 3 dager. |
|
Adherent eller i suspensjon: |
P19 embryonal karsinomcellelinje er adherent. |
|
Forhold mellom subkulturer: |
P19-celler bør subkultiveres hver 48. time, og et delingsforhold på 1:10 bør opprettholdes for disse cellene. Adherente celler vaskes med 1 X fosfatbuffersaltløsning og inkuberes med Accutase til cellene dissosierer. Cellene tilsettes dyrkingsmedium og høstes gjennom sentrifugering. De oppsamlede cellene resuspenderes forsiktig og fordeles i nye kolber. |
|
Vekstmedium: |
DMEM/Ham's F12-medium som inneholder 5 % føtalt bovint serum, 3,1 g/l glukose, 1,6 mM L-glutamin, 1,0 mM natriumpyruvat, 15 mM HEPES og 1,2 g/l NaHCO3, brukes til dyrking av P19-celler. |
|
Vekstbetingelser: |
En befuktet inkubator innstilt på 37 °C med 5 % CO2-tilførsel er avgjørende for dyrking av P19 embryonal karsinomcellelinje. |
|
Oppbevaring: |
Frosne P19-celleglass bør oppbevares ved en temperatur på under -150 °C i en fryser eller i dampfasen av flytende nitrogen for å opprettholde cellenes levedyktighet på lengre sikt. |
|
Fryseprosess og medium: |
CM-1- eller CM-ACF-medium kan brukes til å fryse P19-celler ved hjelp av en langsom nedfrysingsmetode som beskytter cellene mot sjokk og bevarer levedyktigheten. |
|
Tineprosess: |
Frosne P19-celler kan tines i et vannbad på 37 °C ved å røre raskt rundt i et hetteglass i 40 til 60 sekunder. Cellene tilsettes ferskt medium og sentrifugeres for å fjerne elementer fra frysemediet. Cellepallen resuspenderes igjen, og cellene helles over i den nye kolben for vekst. |
|
Biosikkerhetsnivå: |
For P19-cellelinjen kreves det laboratorieinnstillinger på biosikkerhetsnivå 1. |
P19 cellelinje: Fordeler og ulemper
I dette avsnittet diskuterer vi fordelene og ulempene ved P19-cellelinjen.
Fordeler og ulemper
- Differensieringspotensial: P19-celler kan differensiere til ulike celletyper, inkludert kardiomyocytter, nevroner og mikrogliaceller. De krever ikke-toksiske stoffer for differensiering, som retinsyre og dimetylsulfoksid (DMSO). Retinsyre induserer utviklingen av nevroner, mikroglia og astroglia, mens DMSO setter i gang utviklingen av bankende kardiomyocytter og glatte muskelceller. P19-celler er derfor nyttige for å studere celledifferensiering og utviklingsprosesser
- Modellsystem: Den pluripotente embryonale karsinomcellelinjen P19 er en verdifull modell for å studere tidlig embryonal utvikling. Forskere bruker P19-celler til å belyse cellesignalveier og de cellulære og molekylære mekanismene som er involvert i disse prosessene
Ulemper
- Murin opprinnelse: P19 er en murin embryonal karsinomcellelinje. Derfor er det ikke sikkert at funnene fra studier som bruker disse cellene, kan overføres fullt ut til human biologi og prosesser
Forskningsmessige anvendelser av P19-celler
P19-celler har flere bruksområder innen forskning på grunn av deres differensieringsevne og relevans for utviklingsbiologi og stamcelleforskning. Noen av de viktigste bruksområdene for P19-embryonale karsinomceller er blant annet
- Studier av celledifferensiering: Som vi vet, kan P19-celler differensieres til nevroner, mikrogliale celler, glatte muskelceller og kardiomyocytter, og brukes derfor mye til å studere celledifferensieringsprosesser. I tillegg bidrar de til å undersøke utviklingen av nerve- og hjerteceller og de underliggende mekanismene. En studie utført i 2018 fant at reaktive oksygenarter (ROS) styrer differensieringen av P19-celler til spesifikke celletyper og forhindrer induksjon av andre [3]. En annen studie utforsket den retinsyre-medierte nevrale differensieringsprosessen og fant at PI3K/Akt/GSK3β-signalveien var involvert [4].
- Utviklingsbiologi: P19-celler er en uvurderlig modell for å studere tidlig embryonal utvikling. De hjelper forskere med å forstå komplekse biologiske prosesser, som vevsdannelse under embryoutviklingen. Forskningen brukte P19-celler og studerte medvirkende molekylære faktorer for dannelse av ventrikkelseptumdefekt (VSD). Funnene viste at et langt ikke-kodende RNA, SNHG6, bidrar til VSD ved å regulere miRNA-101 negativt og aktivere Wnt/β-catenin-banen [5].
- Testing av legemidler: P19-cellelinjen fra embryonalt karsinom hos mus brukes også til å screene potensielle legemiddelkandidater. I en studie ble det brukt differensierte P19-celler og undersøkt de nevrobeskyttende acetylkolinesterasehemmende effektene av syntetisk L-Dopa og vandig ekstrakt av Mucuna pruriens-frø. Resultatene viste at planteekstraktet ga lovende resultater sammenlignet med L-Dopa [6].
Kjøp din P19-cellelinje i dag
P19-celler: Forskningspublikasjoner
I denne delen av artikkelen vil vi ta for oss noen interessante forskningspublikasjoner som omhandler P19-celler.
Denne artikkelen ble publisert i Oncology Reports i 2017. Studien foreslår at kjønnshormoner i hypofysen styrer adhesjon, spredning og migrasjon hos teratokarsinomcellelinjer, inkludert P19-celler.
Det lange ikke-kodende RNA-et uc. 4 påvirker celledifferensiering gjennom TGF-beta-signalveien
I denne publikasjonen i tidsskriftet Experimental & Molecular Medicine (2018) brukte forskerne P19-celler og studerte funksjonen til det lange ikke-kodende RNA-et uc.4. Funnene viste at uc.4 påvirker celledifferensiering via modulering av TGF-beta-signalveien.
Denne forskningsartikkelen ble publisert i 2018 i Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. Studien fant at naturlig hjernevevsekstrakt og 3D-cellekultur kan fremskynde differensieringen av P19 embryonale karsinomceller til nevrale celler.
Denne studien ble publisert i Journal of Ethnopharmacology i 2020. Studien foreslo at Cichorium int ybus L. bladekstrakt kan indusere differensiering i P19 embryonale karsinomceller til insulinproduserende pankreatiske β-celler.
Denne forskningen ble publisert i Molecules (2022). Denne studien utforsket de nevrobeskyttende og acetylkolinesterasehemmende effektene av Mucuna pruriens frøekstrakt på P19-celle-nevroner.
Ressurser for P19-cellelinje: Protokoller, videoer og mer
Følgende er noen få ressurser om P19-celler.
- Protokoll for nevronal differensiering av P19-celler: Denne artikkelen inneholder P19-cellers nevrale differensieringsprotokoll og annen nyttig informasjon om P19-celledifferensiering.
- Transfeksjon av P19-celler: Denne lenken vil hjelpe deg med å lære P19-celletransfeksjonsprotokollen.
Følgende lenke inneholder p19-cellekulturprotokollen.
- P19-celler: Dette nettstedet inneholder all nyttig informasjon om P19-cellelinjen, inkludert dens kulturtilstand, P19-cellemedia, celledeling og mye mer.
Utforskning av P19-cellelinjen: Ofte stilte spørsmål
Referanser
- McBurney, M.W., P19 embryonale karsinomceller. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): p. 135-40.
- Bressler, J., et al., P19 Embryonic Carcinoma Cell Line: En modell for å studere gen-miljø-interaksjoner. Cell Culture Techniques, 2011: s. 223-240.
- Pashkovskaia, N., U. Gey og G. Rödel, Mitochondrial ROS direct the differentiation of murine pluripotent P19 cells. Stem Cell Research, 2018. 30: p. 180-191.
- Fu, F., et al., All-trans-retinoid acid induserer differensieringen av P19-celler til nevroner som er involvert i PI3K/Akt/GSK3β-signalveien. Journal of Cellular Biochemistry, 2020. 121(11): p. 4386-4396.
- Jiang, Y., et al., Langt ikke-kodende RNA SNHG6 bidrar til dannelse av ventrikkelseptumdefekt via negativ regulering av miR-101 og aktivering av Wnt/β-catenin-banen. Die Pharmazie - Et internasjonalt tidsskrift for farmasøytisk vitenskap, 2019. 74(1): p. 23-28.
- Kamkaen, N., et al., Mucuna pruriens frø vandig ekstrakt forbedret nevrobeskyttende og acetylkolinesterasehemmende effekter sammenlignet med syntetisk L-dopa. Molekyler, 2022. 27(10): p. 3131.