Jurkat E6.1-cellelinje

Jurkat E6.1 er en klon av Jurkat-cellelinjen, en udødeliggjort human T-lymfocyttcellelinje som stammer fra perifert blod. De ble først etablert i 1977 og brukes i forskning knyttet til T-cellereseptorsignalering, T-celler og andre lymfocyttadoptiv terapi mot kreft, forskning på blodrelaterte proto-onkogener, celleoverlevelse og celledifferensiering.

I denne artikkelen vil vi ta med all informasjon og alle forutsetninger du trenger å forstå før du starter arbeidet med Jurkat E6.1 klonede cellelinjer, som inkluderer:

1. Opprinnelse, historie og generell informasjon
2. Kjennetegn ved cellekultur
3. Anvendelser av Jurkat E6.1-cellelinjer
4. Forskningspublikasjoner
5. Fordeler og begrensninger
6. Ressurser: Protokoller, videoer og mer

1. opprinnelse,historie oggenerell informasjon

Her finner du all nødvendig informasjon om historien, opprinnelsen og de generelle egenskapene til Jurkat E6.1-cellelinjen og hvordan den håndteres i cellekultur.

• Jurkat E6.1 er en udødeliggjort human T-lymfocyttcellelinje. Denne klonede cellelinjen er et derivat av Jurkat-cellelinjen som ble tatt fra perifert blod fra en 14 år gammel gutt som led av akutt lymfoblastisk leukemi i 1976. Etter at cellelinjen ble isolert fra blodet, ble den opprinnelig kalt JM, ettersom JM og Jurkat indikerer at disse cellelinjene er isolert fra samme pasient. Jurkat E6.1-cellelinjen ble klonet fra cellederivater kjent som Jurkat-FHCRC.
• E6.1-cellelinjene er avledet fra leukemi. Disse cellelinjene brukes til å øke uttrykket av IL-2 via simulering med monoklonale antistoffer eller lektin. De uttrykker T-celleantigenreseptorer, og disse cellelinjene kan derfor brukes i studier av immunsystemforstyrrelser og immunonkologisk forskning.
• Cellemorfologi av Jurkat E6.1-celler: Jurkat E6.1-celler ble isolert fra en leukemipasient og har en endret morfologi sammenlignet med T-lymfocytter, noe som gjør dem til udødelige cellelinjer. Lymfoblastcellen dannes når naive lymfocytter aktiveres av antigenpresentasjon fra antigenpresenterende celler. Dette resulterer i økt vekst i kjernen, cytoplasma, mRNA og proteiner.
• Cellestørrelse: Jurkat E6.1-cellelinjer er klonet udødeliggjort med en diameter på 10-16 μm (diameteren kan variere avhengig av suspensjonstypen). Disse cellelinjene har en svært sfærisk celleform.
• Genom- og kromosomnummer: Disse cellelinjene er pseudodiploide cellelinjer av humane T-lymfocytter, med modellkromosomet kromosom 46. Disse viser også at modellkromosomet er til stede i ca. 74 % og viser en polyploidirate på ca. 5,3 %. Karyotypestudiene viste en karyotype med 46, X, Y, -2, -18, del (2) (p21p23), del (18) (p11.2). X- og Y-kromosomene har vanligvis en vanlig kopi i de fleste cellelinjer.
• Jurkat-cellelinjer vs E6.1 Jurkat-cellelinjer: Jurkat-cellelinjer er de primære cellelinjene som først ble isolert fra pasienter med akutt lymfoblastisk leukemi. E6.1 Jurkat-cellelinjene er imidlertid klonede derivater av Jurkat-FHCRC-cellelinjer.

3. bruksområder for Jurkat E6.1-cellelinjer

Jurkat E6.1-cellelinjen er mest brukt i forskning og studier av sykdommer knyttet til immunsystemet og tilhørende kreftformer. Den har også vært egnet til å studere kompleksiteten knyttet til HIV-infeksjon, siden CD4 T-cellereseptoren er nødvendig for at retrovirale virus skal komme inn i cellen.

Nedenfor beskrives noen av de viktigste områdene der disse cellelinjene brukes:

Modellsystem for T-cellesignalering og apoptotiske veier: Denne cellelinjen fra T-celle-leukemi brukes i stor utstrekning i forskning som involverer TCR-signalkaskaden. Jurkat E6.1 frigjør mer IL-2 og IL-8, som deretter bidrar til aktivering av T-celler og utløser de inflammatoriske signalveiene. Denne cellelinjen er også kjent for hyperfosforylering av Pyk2 og økt produksjon av Vav1, som har avgjørende betydning for omorganiseringen av aktin-cytoskjelettet i T-celler. TCR-segregering i Jurkat-cellelinje E6-1 kan også forbedres ved kraftig ekspresjon av LFA-1, som følgelig forbedrer TCR-signalering og IL-2-ekspresjon . Studier av celleproliferasjon og cellesyklus utføres også i Jurkat E6.1-cellelinjer. De har vært foretrukket for å studere apoptoseveier og induksjon av DNA-skader ved hjelp av stoffer fra marine og vegetabilske kilder. En studie fra 2013 evaluerte virkningen av haiepigonalt kondisjonert media på humaneceller ved hjelp av disse cellelinjene. På samme måte ble den undertrykkende effekten av plantebasert hirsutin på celleproliferasjon studert i Jurkat E6.1-cellelinjer. I studier mot kreft brukes ofte Jurkat E6.1 til å evaluere de utvalgte målene. Påvirkningen av marine nevrotoksiner som Brevetoxins (PbTx) har også blitt studert i disse cellelinjene.

HIV-studier: En av de viktigste anvendelsene av Jurkat E6.1-cellelinjene er deres evne til å fungere som en egnet modell for HIV-studier på grunn av deres egenskap til å velge ulike signalhendelser som induserer TCA. Jurkat E6.1-cellelinjer har ikke bare blitt brukt til å forstå hiv-aktivering, men også til å dissekere mekanismene bak hiv-latens . Hiv-replikasjon og -infeksjon har i stor grad blitt studert i disse cellelinjene, der de kan utsettes for genredigering og genknockout, slik det ble gjort i en studie i 2021. Effekten av medikamentlevering på HIV-infeksjon, for eksempel langtidsvirkende efavirenz (Efa)-enfuvirtid (Enf) Co-loaded polymer-lipid hybrid nanopartikler (PLN) på viral inntreden benyttet Jurkat E6.1 cellelinjer. CRISPR/Cas9-teknisk modifiserte Jurkat E6.1 har blitt brukt flere ganger for å studere mekanismer som er involvert i HIV-virusets inntreden, replikasjon og infeksjon.

4. forskningspublikasjoner

Her er noen bemerkelsesverdige eksempler fra den store samlingen av forskning, inkludert Jurkat E6.1-cellelinjer.

Selenmetabolitten metylselenol regulerer uttrykket av ligander som utløser immunaktivering gjennom lymfocyttreseptoren NKG2D

Ved hjelp av Jurkat E6.1, inkubert i ulike selenforbindelser, ble liganduttrykk og overflateuttrykk av MICA/B studert.

Karakassinsyre, en ent-3,4-seco-kauren, fremmer apoptose og celledifferensiering gjennom hemming av NFkB-signalveien i leukemiceller.

Forståelse av karakassinsyreindusert cytotoksisitet i humane T-cellelinjer som Jurkat E6.1 og HL-60.

Bevis på in vitro-utvikling av resistens mot azidothymidin i T-lymfocytiske leukemicellelinjer (Jurkat E6-1/AZT-100) og hos pediatriske pasienter med HIV-1-infeksjon

Jurkat E6.1 ble langtidsinkubert med AZT for å studere resistens mot azidotymidin (AZT) hos HIV-1-infiserte pasienter.

Studier av Jurkat E6.1-cellelinjen med hensyn til effekten av noen bioindoler på membranens fluiditet

Denne forskningen benyttet et polarisert fluorescensanalysesystem for å forstå virkningen av bioindoler, inkludert serotonin, tryptofan og melatonin, på cellemembranens fluiditet i Jurkat E6.1-cellelinjer.

Molekylær mekanisme for induksjon av apoptose i Jurkat E6-1-celler ved hjelp av Tribulus terrestris-alkaloidekstrakt

Tribulus terristris-avledet alkaloidekstrakt induserte apoptose i Jurkat E6.1-celler for å forstå den underliggende virkningsmekanismen.

Økt LFA-1-uttrykk forbedrer immunsynapsearkitekturen og T-cellereseptorsignalering i Jurkat E6.1-celler

T-cellereseptorsignalering i Jurkat E6.1-celler ble forsterket ved å øke LFA-1-ekspresjonen kraftig.

5. fordeler og begrensninger

I likhet med andre cellelinjer har Jurkat E6.1 sine fordeler og begrensninger.

Fordeler og begrensninger

Det er mange grunner til at den foretrekkes i disse bruksområdene:

• Vekstmåte

  Jurkat E6.1 er en suspensjonscellelinje som ikke fester seg til kulturoverflaten, noe som betyr at den vokser i suspensjon og ikke fester seg til kulturoverflaten.

• Uttrykk av gener

  Jurkat E6.1-cellelinjen uttrykker gener som koder for interleukin-2 (IL-2) og CD3. Ved stimulering med monoklonale antistoffer, lektiner eller phorbolestere mot T3-antigenkomplekset har disse cellene vist seg å produsere amplifisert IL-2.

• Uttrykk av antigener

  Jurkat E6.1-cellelinjen uttrykker CD3-antigenet, som er assosiert med T-celleaktivering og -signalering.

• Uttrykksmarkører

  Cellelinjen uttrykker T-celleantigenreseptormarkørene (TCR), som er avgjørende for T-cellegjenkjenning og immunrespons.

• Anvendelighet for transfeksjon

  Jurkat klon E6.1-cellelinjen er egnet for vertstransfeksjonseksperimenter, noe som gjør det mulig å innføre eksogent genetisk materiale i cellene for ulike forskningsformål.

Begrensninger

Etter fordelene, la oss gå gjennom begrensningene forbundet med bruk av Jurkat E6.1-cellelinjer:

• Celletransfeksjon med virusvektor

  Transfeksjon av Jurkat E6.1-celler er utfordrende på grunn av deres T-celleopprinnelse. Vanligvis kreves det dyre og tidkrevende virale vektorer for genetisk modifisering. Ikke-virale vektorer har vist lav transfeksjonseffektivitet og betydelig toksisitet i Jurkat-celler.

• Bakteriell kontaminering

  Jurkat E6.1-cellekulturer bør overvåkes for potensiell bakteriell kontaminering for å sikre integriteten til de eksperimentelle resultatene.

• Viral kontaminering

  Jurkat E6.1-cellelinjer uttrykker ulike kjemokinreseptorer og lave nivåer av CD4, noe som gjør det lettere for virus å trenge inn i cellene. Dette gjør dem mottakelige for T-celleinfiserende virus som HTLV og HIV.

6.ressurser: Protokoller, videoer og mer

Denne delen inneholder metoder og protokoller for celledyrking og transfeksjon, samt opplæringsvideoer relatert til denne cellelinjen:

Protokoller for celledyrking

Her er noen grunnleggende dyrkingsprosedyrer som skal følges for denne cellelinjen:

• Cell Culture SOP, Propagation of Jurkat: University of California har også lagt ut en metode for dyrking av Jurkat-klonen E6-1 på sin USCS Genome browser.
• Jurkat, klon E6-1 Dyrking og håndtering: Elabscience har inkludert en protokoll for håndtering av dyrking på produktbeskrivelsessiden.

Protokoller for transfeksjon

Her er en liste over ulike transfeksjonsprotokoller som er tilgjengelige:

• Transfeksjonsprotokoll for Jurkat-celler Lipofectamine LTX-reagens: En transfeksjonsprotokoll for Jurkat-celler ved bruk av Lipofectamine LTX Reagent, fra ThermoFisher.
• Amaxa™ 4D-Nucleofector™-protokoll for Jurkat klon E6.1 [ATCC®]: Lonza Group AG leverte transfeksjonsprotokollen for Jurkat klon E6.1 fra ATCC ved bruk av 4D-Nucleofector® X Unit.

Videoer om Jurkat E6.1

Det finnes flere utmerkede videoer som dekker cellekulturkonsepter, prosedyrer, proliferasjon, plating og andre emner.

• Passering av celler:Grunnleggende om cellekultur: Dette er en flott video med grunnleggende veiledning for passering av humane cellelinjer fra ThermoFisher.
• Tining av celler: Grunnleggende om cellekultur: Denne videoen gir grunnleggende instruksjoner om celledyrking og tining av ThermoFisher-celler.
• Protokoll for transfeksjon av plasmid-DNA: Denne videoen fokuserer på protokollen for transfeksjon av plasmid-DNA med Lipofectamine® LTX og Plus™ Reagent, fra ThermoFisher.
• Måling av apoptose ved bruk av suspenderte Jurkat-celler behandlet med 3 mikromolar Staurosporin: Denne videoen viser hvordan du utfører en apoptoseanalyse på Celigo bildecytometeret ved hjelp av Hoechst og caspase 3/7-reagenser fra Nexcelom Bioscience.