Publisert: 2023 | Sist revidert: mai 2026
Jurkat E6.1-cellelinje
Jurkat E6.1 er en klon av Jurkat-cellelinjen, en immortalisert human T-lymfocyttcellelinje avledet fra perifert blod. Den ble først etablert i 1977 og brukes i forskning knyttet til T-cellereseptorsignalering, adoptiv terapi med T-celler og andre lymfocytter mot kreft, forskning på blodrelaterte protoonkogener, celleoverlevelse og celledifferensiering.
I denne artikkelen vil vi ta for oss all informasjon og alle forutsetninger du trenger å forstå før du starter arbeidet ditt med Jurkat E6.1-klonede cellelinjer, herunder:
- Opprinnelse, historie og generell informasjon
- Kjennetegn ved cellekulturen
- Anvendelser av Jurkat E6.1-cellelinjer
- Forskningspublikasjoner
- Fordeler og begrensninger
- Ressurser: Protokoller, videoer og mer
1. Opprinnelse, historie og generell informasjon
Her finner du all nødvendig informasjon om historien, opprinnelsen og de generelle egenskapene til Jurkat E6.1-cellelinjen samt håndtering av den i cellekultur.
- Jurkat E6.1 er en immortalisert human T-lymfocyttcellelinje. Denne klonede cellelinjen er et derivat av Jurkat-cellelinjen, hentet fra perifert blod fra en 14 år gammel gutt som led av akutt lymfoblastisk leukemi i 1976. Etter isolering fra blodet ble denne cellelinjen opprinnelig kalt JM, da JM og Jurkat indikerer at disse cellelinjene er isolert fra samme pasient. Jurkat E6.1-cellelinjen ble klonet fra cellederivater kjent som Jurkat-FHCRC.
- E6.1-cellelinjer stammer fra leukemi; disse cellelinjene brukes til å øke ekspresjonen av IL-2 gjennom stimulering med monoklonale antistoffer eller lektin. De uttrykker T-celleantigenreseptorer; derfor kan disse cellelinjene brukes i studier av immunsystemforstyrrelser og i immunonkologisk forskning.
- Cellemorfologi hos Jurkat E6.1-celler: Jurkat E6.1-celler ble isolert fra en leukemipasient og har endret morfologi sammenlignet med T-lymfocytter, noe som gjør dem til udødelige cellelinjer. Lymfoblastcellen dannes når naive lymfocytter aktiveres ved antigenpresentasjon fra antigenpresenterende celler. Dette resulterer i økt vekst i kjernen, cytoplasmaet, mRNA og proteiner.
- Cellestørrelse: Jurkat E6.1-cellelinjer er klonede og immortalisert, og har vanligvis en diameter på mellom 10 og 16 μm (diameteren kan variere avhengig av suspensjonstypen). Disse cellelinjene har en svært sfærisk celleform.
- Genom og kromosomtall: Disse cellelinjene er pseudodiploide cellelinjer av humane T-lymfocytter, med et modalt kromosomtall på 46. Det viser seg også at det modale kromosomtall forekommer hos ca. 74 % av cellene, og at polyploidifrekvensen er ca. 5,3 %. Karyotypestudiene viste en karyotype med 46, X, Y, -2, -18, del (2) (p21p23), del (18) (p11.2). X- og Y-kromosomene har vanligvis en normal kopi i de fleste cellelinjer.
- Jurkat-cellelinjer vs. E6.1 Jurkat-cellelinjer: Jurkat-cellelinjer er de primære stamcellelinjene som først ble isolert fra en pasient med akutt lymfoblastisk leukemi. E6.1 Jurkat-cellelinjene er imidlertid klonede avledninger av Jurkat-FHCRC-cellelinjene.
Egenskaper ved cellekulturen
Viktige punkter ved dyrking av B16-celler
Populasjonens doblingstid
Populasjonsfordoblingstiden for Jurkat-cellelinjer er omtrent 20,7 timer, noe som muliggjør relativt rask celleutvikling.
Adherent eller ikke-adherent
E6.1 Jurkat-cellelinjer vokser i en ikke-adhererende modus, og eksisterer i suspensjon enten som enkeltlagsvekst eller som frittflytende klumper.
Utsåingstetthet
Den anbefalte utsåingstettheten for E6.1 Jurkat-cellelinjer er 1,0–2,0 × 10⁵ levedyktige celler/ml for å sikre sunn vedheft og optimal cellevekst.
Vekstmedium
Det nødvendige vekstmediet for E6.1 Jurkat-cellelinjer er ATCC-formulert RPMI-1640-medium (ATCC 30-2001). Det komplette mediet tilberedes ved å tilsette de angitte komponentene, inkludert føtalt bovint serum (ATCC 30–2002), for å oppnå en sluttkonsentrasjon på 10 %.
Vekstbetingelser
E6.1 Jurkat-cellelinjer kan dyrkes i en egnet inkubator med 5 % luft og CO₂ ved bruk av RPMI-1640-medium og føtalt bovint serum.
Oppbevaringsbetingelser
Langtidslagring av Jurkat-cellelinjer i frossen tilstand bør skje ved -130 grader Celsius eller i flytende nitrogen i dampfase. Lagring ved -70 grader Celsius kan føre til tap av cellelevbarhet.
Frysing
En alikvot på ca. 0,5–1,0 ml av cellelinjesuspensjonen oppbevares i kryorør for å bevare cellelinjene. Disse rørene plasseres deretter i en kryolagringsbeholder ved -70 grader Celsius. Rørene overføres til en flytende nitrogentank og oppbevares i dampfasen dagen etter.
Tining
For å tine Jurkat-cellelinjene skal ampullene med cellesuspensjonen plasseres i et vannbad ved 37 grader Celsius. Suspensjonen kan tines i 2 minutter under forsiktig omrøring. Det er viktig å holde ampullens lokk utenfor vannbadet for å forhindre kontaminering av cellelinjene.
Biosikkerhetsnivå
Dyrking av Jurkat-cellelinjer krever et biosikkerhetsnivå på BSL-1 i laboratoriemiljøet, noe som sikrer at grunnleggende sikkerhetstiltak følges.
Publisert: 2023 | Sist oppdatert: mai 2026
Anvendelser av Jurkat E6.1-cellelinjer
Jurkat E6.1-cellelinjen brukes hovedsakelig i forskning og studier av sykdommer knyttet til immunsystemet og tilhørende kreftformer. Videre har den vist seg egnet for studier av enkelte komplekse forhold knyttet til HIV-infeksjon, ettersom CD4-T-cellereseptoren er nødvendig for retroviralt inntrengning.
Noen sentrale områder der disse cellelinjene benyttes, er omtalt nedenfor:
Modellsystem for T-cellesignalering og apoptotiske signalveier: Denne cellelinjen, som stammer fra T-celle-leukemi, brukes i stor utstrekning i forskning som omhandler TCR-signalkaskaden. Jurkat E6.1 frigjør mer IL-2 og IL-8, som deretter bidrar til T-celleaktivering og utløser inflammatoriske signalveier. Denne cellelinjen er også kjent for sin hyperfosforylerte Pyk2 og økt produksjon av Vav1, som har avgjørende innflytelse på omorganisering av aktin-cytoskelettet i T-celler. TCR-segregering i Jurkat-cellelinjen E6-1 kan også forbedres ved kraftig ekspresjon av LFA-1, noe som følgelig forsterker TCR-signalering og IL-2-ekspresjon. Studier av celleproliferasjon og cellesyklus gjennomføres også i Jurkat E6.1-cellelinjer. Disse har vært foretrukket i studier av apoptotiske signalveier og induksjon av DNA-skade ved hjelp av forbindelser avledet fra marine og plantebaserte kilder. En studie fra 2013 vurderte virkningen av epigonalt kondisjonert medium fra hai på humane celler ved bruk av disse cellelinjene. Tilsvarende ble den hemmende virkningen av det planteavledede stoffet hirsutin på celleproliferasjon studert i Jurkat E6.1-cellelinjer. Ofte benytter også kreftforskning Jurkat E6.1 for å evaluere utvalgte målmolekyler. Virkningen av marine nevrotoksiner som brevetoksiner (PbTx) har også blitt undersøkt i disse cellelinjene.
HIV-studier: En av de viktigste anvendelsene av Jurkat E6.1-cellelinjer er deres evne til å fungere som en egnet modell for HIV-studier, takket være deres evne til å utløse ulike signalhendelser som induserer TCA. Jurkat E6.1-cellelinjer har ikke bare blitt brukt til å forstå HIV-aktivering, men også til å analysere mekanismene bak HIV-latens. HIV-replikasjon og -infeksjon har blitt grundig studert i disse cellelinjene, der cellene kan utsettes for genredigering og genknockout, slik det ble gjort i en studie i 2021. Virkningen av legemiddeladministrasjon på HIV-infeksjon, for eksempel langtidsvirkende efavirenz (Efa)–enfuvirtide (Enf)-samlastede polymer–lipid-hybridnanopartikler (PLN) på virusinntrengning, ble undersøkt ved bruk av Jurkat E6.1-cellelinjer. CRISPR/Cas9-modifiserte Jurkat E6.1-celler har blitt brukt flere ganger til å studere mekanismer knyttet til HIV-inntrengning, replikasjon og infeksjon.
Forskningspublikasjoner
Her er noen få bemerkelsesverdige eksempler fra den store samlingen av forskning, inkludert Jurkat E6.1-cellelinjer.
Ved bruk av Jurkat E6.1, inkubert i ulike selenforbindelser for å studere liganduttrykk og overflateuttrykk av MICA/B.
Forståelse av karakasinsyre-indusert cytotoksisitet i humane T-cellelinjer som Jurkat E6.1 og HL-60.
Brukte Jurkat E6.1 inkubert over lang tid med AZT-legemidlet for å studere azidotymidin (AZT)-resistens hos HIV-1-infiserte pasienter.
Studier av Jurkat E6.1-cellelinjen angående effekten av enkelte bioindoler på membranfluiditeten
Denne forskningen benyttet et polarisert fluorescensanalysesystem for å forstå virkningen av bioindoler, inkludert serotonin, tryptofan og melatonin, på cellemembranfluiditeten i Jurkat E6.1-cellelinjer.
Alkaloidekstrakt fra Tribulus terrestris induserte apoptose i Jurkat E6.1-celler for å forstå den underliggende virkningsmekanismen.
T-cellereseptorsignalering i Jurkat E6.1-celler ble forbedret ved kraftig å øke LFA-1-ekspresjonen.
Fordeler og begrensninger
I likhet med andre cellelinjer har Jurkat E6.1 sine fordeler og begrensninger.
Fordeler
Det er mange grunner til at den foretrekkes i disse anvendelsene:
-
Vekstmåte
Jurkat E6.1 er en suspensjons- og ikke-adhererende cellelinje, noe som betyr at den vokser i suspensjon og ikke fester seg til kulturoverflaten.
-
Genuttrykk
Jurkat E6.1-cellelinjen uttrykker gener som koder for interleukin-2 (IL‑2) og CD3. Ved stimulering med monoklonale antistoffer, lektiner eller forbolestere mot det T3-antigene komplekset, har disse cellene vist seg å produsere forsterket IL-2.
-
Ekspresjon av antigener
Jurkat E6.1-cellelinjen uttrykker CD3-antigenet, som er assosiert med T-celleaktivering og signalering.
-
Ekspresjonsmarkører
Cellelinjen uttrykker T-celleantigenreseptor (TCR)-markører, som er avgjørende for T-cellegjenkjenning og immunrespons.
-
Egnethet for transfeksjon
Jurkat-klonen E6.1 er egnet for transfeksjonsforsøk, noe som gjør det mulig å innføre eksogent genetisk materiale i cellene for ulike forskningsformål.
Begrensninger
Etter fordelene, la oss gå gjennom begrensningene knyttet til bruken av Jurkat E6.1-cellelinjer:
-
Celle-transfeksjon med viral vektor
Transfeksjon av Jurkat E6.1-celler er utfordrende på grunn av deres T-celleopprinnelse. Vanligvis kreves det kostbare og tidkrevende virale vektorer for genetisk modifisering. Ikke-virale vektorer har vist lav transfeksjonseffektivitet og betydelig toksisitet i Jurkat-celler.
-
Bakteriell kontaminering
Jurkat E6.1-cellekulturer bør overvåkes for potensiell bakteriell kontaminering for å sikre integriteten til eksperimentelle resultater.
-
Virale kontaminasjoner
Jurkat E6.1-cellelinjer uttrykker ulike kjemokinreseptorer og lave nivåer av CD4, noe som letter virusets inntrengning. Dette gjør dem mottakelige for virus som infiserer T-celler, slik som HTLV og HIV.
6. Ressurser: Protokoller, videoer og mer
Denne delen vil omhandle metoder og protokoller for cellekultur og transfeksjon, samt opplæringsvideoer knyttet til denne cellelinjen:
Protokoller for cellekultur
Her er noen grunnleggende dyrkingsprosedyrer som skal følges for denne cellelinjen:
- SOP for cellekultur, forplantning av Jurkat: University of California har også lagt ut en metode på sin USCS Genome-nettleser for dyrking av Jurkat-klon E6-1.
- Jurkat, klon E6-1 – dyrking og håndtering: Elabscience har inkludert en protokoll for håndtering av dyrkningen på sin produktbeskrivelsesside.
Transfeksjonsprotokoller
Her er en liste over ulike transfeksjonsprotokoller som er tilgjengelige:
- Transfeksjonsprotokoll for Jurkat-celler med Lipofectamine LTX-reagens: En transfeksjonsprotokoll for Jurkat-celler ved bruk av Lipofectamine LTX-reagens fra ThermoFisher.
- Amaxa™ 4D-Nucleofector™-protokoll for Jurkat-klon E6.1 [ATCC®]: Lonza Group AG har levert transfeksjonsprotokollen for Jurkat-klon E6.1 fra ATCC ved bruk av 4D-Nucleofector® X-enheten.
Videoer om Jurkat E6.1
Det finnes flere utmerkede videoer som dekker begreper innen cellekultur, prosedyrer, proliferasjon, utplating og andre emner.
- Passering av celler: Grunnleggende om cellekultur: Dette er en flott video med en grunnleggende veiledning i passering av humane cellelinjer fra ThermoFisher.
- Tining av celler: Grunnleggende om cellekultur: Denne videoen gir grunnleggende instruksjoner om cellekultur og tining fra ThermoFisher.
- Protokoll for transfeksjon av plasmid-DNA: Denne videoen fokuserer på protokollen for transfeksjon av plasmid-DNA med Lipofectamine® LTX og Plus™-reagens, fra ThermoFisher.
- Måling av apoptose ved bruk av Jurkat-celler i suspensjon behandlet med 3 mikromolar staurosporin: Denne videoen viser hvordan man utfører en apoptoseanalyse på Celigo-bildecytometeret ved bruk av Hoechst- og caspase 3/7-reagenser fra Nexcelom Bioscience.
