Neuro-2a-cellelinje
Neuro-2a er en musebasert nevral cellelinje som er mye brukt i nevrovitenskapelig forskning. Disse cellene brukes hovedsakelig til å studere nevral utvikling, differensiering, nevrotoksisitet, cellesignalveier og aksonal vekst. I tillegg brukes de til legemiddelutvikling og screening.
Denne artikkelen fokuserer på viktige aspekter ved Neuro-2a-neuroblastomceller som kan være nyttige før du begynner å arbeide med dem. Den vil hovedsakelig omhandle:
- Generelle egenskaper og opprinnelse til Neuro-2a-celler
- Informasjon om dyrking av Neuro-2a-cellelinjen
- Fordeler og ulemper ved Neuro-2a-cellelinjen
- Forskningsanvendelser av Neuro-2a-cellelinjen
- Forskningspublikasjoner om Neuro-2a-celler
- Ressurser for Neuro-2a-celler: Protokoller, videoer og mer
Generelle egenskaper og opprinnelse til Neuro-2a-celler
Denne delen av artikkelen vil omhandle bakgrunnen og de grunnleggende egenskapene til Neuro-2a-cellelinjen som det er viktig å kjenne til før man arbeider med den. Her vil du lære: Hva er Neuro-2a-cellelinjen? Hva er opprinnelsen til Neuro-2a -cellelinjen? Hva er differensiering av Neuro-2a-celler? Hvor stor er en Neuro-2a-celle? Hva er morfologien til Neuro-2a-celler?
- Neuro-2a-celler stammer fra en spontan svulst (neuroblastom) hos en albino-mus (stamme A). Cellelinjen ble etablert av R.J. Klebe og F.H. Ruddle.
- Neuro-2a-neuroblastomcellene har en morfologi som er karakteristisk for både nevroner og amøboide stamceller.
- Neuro-2a-cellene er 12 mikrometer høye [1].
- Kromosomtallene til Neuro-2a-celler kan variere fra 59 til 193, med et modalt tall på 95. Karyotypen til disse neuroblastomcellene er ustabil innenfor et område på 94 til 98 kromosomer.
Informasjon om dyrking av Neuro-2a-cellelinjen
Neuro-2a-celler brukes mye i forskningslaboratorier innen nevrovitenskap. Før du begynner å arbeide med disse cellene, bør du sette deg inn i den viktige informasjonen om cellekultur som er nevnt nedenfor. Dette kan gjøre det enklere for deg. Du vil lære: Hva er et Neuro-2a cellekulturmedium? Hvordan dyrker man Neuro-2a-celler? Hva er doblingstiden for Neuro-2a-celler? Hva er utsåingstettheten for Neuro-2a ? Hva er protokollen for dyrking av Neuro-2a-celler? Hva er dyrkingsmediet for Neuro-2a-celler?
Viktige punkter for dyrking av Neuro-2a-celler
Fordoblingstid:
Fordoblingstiden for Neuro-2a-celler er omtrent 70 timer.
Adhærent eller i suspensjon:
Neuro-2a er en vedheftende cellelinje.
Utsåingstetthet:
Den optimaliserte utsåingstettheten for Neuro-2a-cellelinjen er 1 x 10⁴ celler/cm². Før utsåing vaskes cellene med magnesium- og kalsiumfri fosfatbuffersaltløsning (1x). Deretter tilsettes en passasjeløsning (Accutase), og cellene inkuberes i 8 til 10 minutter ved romtemperatur. Etter celledissociasjon tilsettes ferskt medium, og cellene sentrifugeres. Den høstede cellepelleten resuspenderes forsiktig, og cellene helles over i et dyrkningskar for vekst.
Vekstmedium:
EMEM brukes til dyrking av Neuro-2a-celler. Det inneholder 10 % FBS, 2 mM L-glutamin, 1,5 g/L NaHCO₃, EBSS, 1 mM natriumpyruvat og NEAA for optimal cellevekst. Mediet bør skiftes ut 1 til 2 ganger per uke.
Vekstbetingelser:
Neuro-2a-kulturer oppbevares i en fuktet inkubator ved 37 °C, koblet til en 5 % CO₂-tilførsel.
Oppbevaring:
Cellene bør oppbevares ved temperaturer under -150 °C i en elektrisk fryser med ultralav temperatur eller i dampfasen av flytende nitrogen for langvarig oppbevaring.
Fryseprosess og medium:
CM-1- eller CM-ACF-medier brukes til å fryse Neuro-2a-celler. Cellene fryses gjennom en langsom fryseprosess som tillater et temperaturfall på kun 1 °C per minutt. Dette beskytter cellene mot sjokk og opprettholder deres levedyktighet.
Tineprosess:
For å tine frosne kulturer plasseres hetteglasset i et vannbad ved 37 °C i 40 til 60 sekunder, til det kun gjenstår en liten isklump. Deretter tilsettes dyrkingsmedium, og cellene sentrifugeres. Dette trinnet bidrar til å fjerne komponenter fra frysemediet. Cellepelleten resuspenderes deretter, og cellene overføres til en ny kolbe fylt med dyrkingsmedium. Etterpå plasseres cellene i en inkubator ved 37 °C i minst 24 timer.
Biosikkerhetsnivå:
Det er obligatorisk å bruke laboratoriefasiliteter på biosikkerhetsnivå 1 for håndtering og vedlikehold av Neuro-2a-kulturer.
- Fordeler og ulemper ved Neuro-2a-cellelinjen
- Forskningsanvendelser av Neuro-2a-cellelinjen
- Informasjon om dyrking av Neuro-2a-cellelinjen
- Generelle egenskaper og opprinnelse til Neuro-2a-celler
- 5. Forskningspublikasjoner om Neuro-2a-celler
- Ressurser for Neuro-2a-celler: Protokoller, videoer og mer
- Ofte stilte spørsmål
Fordeler og ulemper ved Neuro-2a-cellelinjen
Neuro-2a-celler har noen fordeler og ulemper som skiller dem fra andre nevronale cellelinjer. Noen viktige fordeler og ulemper ved disse cellene er oppført her.
Fordeler
Fordelene med den murine neuroblastomcellelinjen Neuro-2a er:
-
Enkel å vedlikeholde:
Neuro-2a-cellelinjen krever ikke komplekse eller innviklede cellekulturprosedyrer. De er enkle å dyrke og vedlikeholde i forskningslaboratorier.
-
In vitro-nevronmodell:
Neuro-2a er en praktisk nevronmodell som er mye brukt av forskere i studier av nevronutvikling og -differensiering.
Ulemper
Ulempene ved Neuro-2a-celler er:
-
Musebasert opprinnelse:
Neuro-2a stammer fra mus, og forskere bør utvise forsiktighet når de ekstrapolerer resultater fra studier basert på mus til menneskers helse og sykdommer, da biologien hos mus og mennesker kan variere betydelig.
Forskningsanvendelser av Neuro-2a-cellelinjen
Neuro-2a-celler har mange anvendelsesområder innen nevrovitenskapelig forskning. Her diskuteres noen lovende bruksområder for denne cellelinjen:
- Nevral utvikling: Neuro-2a er en in vitro-nevronmodell som er mye brukt til å studere nevronutvikling og relaterte prosesser som differensiering, aksonal vekst og synapsedannelse. En studie gjennomført i 2020 benyttet Neuro-2a-celler for å undersøke rollen til mikroRNA-124 i retinsyreindusert nevronaldifferensiering [2]. En annen studie undersøkte uttrykket av retinsyre-reseptor gamma (RARG) og miRNA-124 i nevroblastomcellelinjen (N2A). Denne studien antydet at RARG er et mål for miR-124 og hemmer nevrittutvekst [3].
- Nevrotoksisitet: Neuro-2a brukes også til å vurdere de toksiske effektene av legemidler, kjemikalier eller miljøfaktorer på nerveceller. For eksempel undersøkte en studie utført av Zhihong Yin og kolleger nevrotoksisiteten til bisfenol A (BPA), et miljøkjemikalie, ved hjelp av Neuro-2a-celler. De observerte at BPA hemmer nevroncelledifferensiering og -proliferasjon ved å forstyrre cellenes og synapsenes integritet [4].
- Legemiddelscreening: Neuro-2a-celler brukes også til å evaluere den terapeutiske virkningen av ulike legemidler, forbindelser og naturprodukter. For eksempel ble Neuro-2a-celler brukt i en studie for å undersøke det antioksidative potensialet til planteekstrakt fra Ginkgo biloba. Videre antydet forskningen at det fører til en reduksjon i Aβ-aggregering og kan være en potensiell behandling for Alzheimers sykdom [5].
5. Forskningspublikasjoner som omhandler Neuro-2a-celler
Her er noen interessante forskningsartikler om Neuro-2a-cellelinjen.
Denne studien, publisert i Journal of Natural Medicines i 2018, undersøkte de terapeutiske effektene av alkamider isolert fra hvit pepper (P. nigrum) på Neuro-2a-nevronceller.
Nkx2.1-nedregulering er involvert i hjerneavvik forårsaket av overskudd av retinsyre
Denne forskningen, publisert i Acta Biochimica et Biophysica Sinica i 2020, antydet at Nkx2.1-genet spiller en viktig rolle i utviklingen av musens hjerne ved å regulere Shh-signalkaskaden.
Denne artikkelen ble publisert i «Toxicology and Industrial Health» (2023) og foreslo at miljøkjemikaliet bisfenol A utløser nevrotoksisitet i neuro-2a-celler og forstyrrer deres synaptiske og cytoskeletale funksjon.
Denne artikkelen i tidsskriftet Pharmaceuticals (2021) foreslo at legemidlet heksarelin modulerer PI3K/AKT- og MAPK-kaskaden i nevroblastomceller (Neuro-2a) og hemmer hydrogenperoksid-indusert apoptose i Neuro-2a-celler.
Denne forskningsartikkelen i Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2021) foreslår at fruktekstrakt fra Emblica officinalis demper nevroinflammasjon i Neuro-2a-celler og dermed kan være gunstig ved nevroinflammatoriske sykdommer.
Ressurser for Neuro-2a-celler: Protokoller, videoer og mer
Følgende er de tilgjengelige nettressursene om Neuro-2a-cellene. De inkluderer protokoll for dyrking og transfeksjon av Neuro-2a-celler.
- Transfeksjonsprotokoll for Neuro-2a: Neuro-2a er en egnet transfeksjonsvert. Denne lenken vil veilede deg gjennom transfeksjonsprotokollen for cellelinjen. Transfeksjonseffektiviteten for Neuro-2a varierer fra reagens til reagens.
Følgende lenke inneholder protokollen for dyrking av Neuro-2a-celler.
- Protokoll for dyrking av Neuro-2a-celler: Denne lenken vil hjelpe deg med å lære protokollen for subkultivering av Neuro-2a-celler.
- Neuro-2a-celler: Nettstedet inneholder omfattende kunnskap om Neuro-2a-cellemedier, utsåingstetthet og protokoller for subkultivering og håndtering av kryokonserverte og proliferative kulturer.
Referanser
- Lulevich, V., et al., Enkeltcellemekanikk gir et følsomt og kvantitativt verktøy for å undersøke interaksjoner mellom amyloid-beta-peptid og nevronale celler. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): s. 13872–7.
- You, Q., et al., miR-124s rolle i reguleringen av retinsyreindusert differensiering av Neuro-2A-celler. Neural Regen Res, 2020. 15(6): s. 1133–1139.
- Su, X., et al., Retinsyre-reseptor gamma er mål for mikroRNA-124 og hemmer nevrittutvekst. Neuropharmacology, 2020. 163: s. 107657.
- Yin, Z., m.fl., Eksponering for bisfenol-A induserte nevrotoksisitet og var assosiert med synapser og cytoskelettet i Neuro-2A-celler. Toxicology in Vitro, 2020. 67: s. 104911.
- Chen, L., et al., Ginkgo biloba-ekstrakt (EGb) hemmer oksidativt stress i Neuro-2A-celler med overekspresjon av APPsw. BioMed Research International, 2019. 2019.