Publicēts: 2023. gads | Pēdējā pārskatīšana: 2026. gada maijs

Šūnu kultūru disociācijas metodes

Šūnu kultūras disociācija ir būtisks solis šūnu kultūras uzturēšanā. Tā ietver šūnu atdalīšanu no to augšanas virsmas, lai nodrošinātu subkultivēšanu vai ieguvi. Šajā sadaļā ir aprakstītas divas galvenās metodes: izmantojot bezenzīmu disociācijas buferus un izmantojot enzīmu reaģentus.

Šūnu disociācijas buferu bez fermentiem izmantošana

Šī metode ir maiga un saglabā šūnu integritāti, neizmantojot fermentus:

1. Sagatavošana
   • Pirms lietošanas pārliecinieties, ka visi reaģenti ir uzsildīti līdz 37 °C, lai izvairītos no šoka šūnām.
2. Augšanas vides noņemšana:
   • Izlejiet veco augšanas vidi no kultūras trauka.
3. Skalošana
   • Noskalojiet šūnu monoslāņus ar 5 ml kalcija un magnija nesaturoša PBS uz katru T75 kolbu vai 100 mm šķīvi.
   • Viegli sakratiet trauku 30–60 sekundes istabas temperatūrā.
   • Aspirējiet un izlejiet skalošanas šķīdumu.
   • Atkārtojiet šo skalošanas posmu vēl vienu reizi.
4. Disociācija
   • Ielejiet traukā aptuveni 5 ml fermentu nesaturoša šūnu disociācijas bufera.
   • Viegli sakratiet istabas temperatūrā 1–2 minūtes un pārbaudiet disociāciju zem mikroskopa.
   • Vajadzības gadījumā viegli piesitiet kolbu vai trauku pret plaukstu, lai atbrīvotu šūnas.
   • Ja šūnas ir piekļāvušās, ļaujiet tām atrasties istabas temperatūrā vēl 2–5 minūtes un, ja nepieciešams, atkal piesitiet, izmantojot vairāk disociācijas bufera.
   • Kad šūnas ir atdalītas, pievienojiet vismaz 5 ml pilnvērtīgas augšanas vides, lai neitralizētu disociācijas buferu un atkārtoti suspendētu šūnas.
5. Dzīvotspējas pārbaude
   • Subkultivēšanas laikā uzraugiet šūnu dzīvotspēju, nodrošinot, ka tā saglabājas virs 90 %.

Citu reaģentu izmantošana disociācijai

Šī metode ļauj izmantot dažādus disociācijas reaģentus:

1. Izmantotā barotnes noņemšana
   • Izmetiet veco barotni no kultūras trauka.
2. Šūnu mazgāšana
   • Mazgājiet šūnas ar līdzsvarotu sāls šķīdumu, kas nesatur kalciju un magniju, vai izmantojiet EDTA.
   • Maigi pievienojiet mazgāšanas šķīdumu pusē, kas atrodas pretī šūnām, un 1–2 minūtes sakratiet trauku, pirms izlejiet mazgāšanas šķīdumu.
3. Disociācija
   • Uzklājiet 2–3 ml izvēlētā disociācijas šķīduma uz 25 cm² audzēšanas virsmas, nodrošinot šūnu slāņa pārklājumu.
   • Inkubējiet trauku 37 °C temperatūrā un viegli sakratiet. Disociācija parasti notiek 5–15 minūšu laikā, atkarībā no šūnu līnijas.
   • Ja šūnas ir grūti atdalāmas, trauka viegla pieskāriena var paātrināt procesu.
   • Uzmanīgi novērojiet šūnas, lai novērstu pārmērīgu iedarbību un iespējamos bojājumus.
4. Šūnu ievākšana
   • Kad šūnas ir pilnībā atdalījušās, ļaujiet tām savākties trauka dibenā, novietojot to vertikāli.
   • Pievienojiet pilnvērtīgu barotni, pēc tam izkliedējiet un savāciet šūnas, pipetējot virs šūnu slāņa.
   • Saskaitiet šūnas un turpiniet subkultivēšanu.

Abās metodēs ir svarīgi empīriski novērojot noteikt optimālos apstākļus katrai šūnu līnijai. Procesā jāievēro šūnu dzīvotspēja, kas subkultivēšanas laikā regulāri jāpārbauda, lai tā pārsniegtu 90 %. Šīs procedūras nodrošina pamatu pētniekiem, lai tos pielāgotu atbilstoši savu šūnu līniju specifiskajām prasībām un īpašībām.

Pārskats par adhezīvo šūnu subkultivēšanas metodēm

Lai efektīvi veiktu adhezīvo šūnu subkultivēšanu, tās ir jāatdalī no kultūras trauka. Tiek izmantotas dažādas metodes, katra piemērota atšķirīgiem šūnu tipiem un apstākļiem. Izvēloties disociācijas metodi, ir ļoti svarīgi ņemt vērā šūnu līnijas specifiskās vajadzības un eksperimenta mērķus. Regulāra šūnu dzīvotspējas uzraudzība, lai subkultivēšanas brīdī tā pārsniegtu 90 %, ir būtiska kultūras ilgstošai veselībai un produktivitātei. Šeit ir šo procedūru pārskats: