Padomi par drošu šūnu uzglabāšanu ar šķidro slāpekli

Šūnu kultūru laboratorijās šķidrais slāpeklis ir būtisks vērtīgu šūnu līniju ilgtermiņa uzglabāšanai un saglabāšanai. Uzņēmumā Cytion mēs par prioritāti izvirzām gan savu šūnu līniju kvalitāti, gan laboratorijas personāla, kas strādā ar kriogēniem materiāliem, drošību. Šajā visaptverošajā rokasgrāmatā izklāstīti būtiski drošības pasākumi un labākā prakse darbam ar šķidro slāpekli šūnu uzglabāšanā.

Svarīgākie individuālie aizsardzības līdzekļi (IAL) darbam ar šķidro slāpekli

Strādājot ar šķidro slāpekli šūnu līniju, piemēram, HeLa šūnu vai MCF-7 šūnu, saglabāšanai, ir obligāti jāizmanto atbilstoši individuālie aizsardzības līdzekļi. Lai pasargātu no šļakatām un tvaikiem, kas var nopietni bojāt acis un sejas audus, obligāti ir jābūt pilnam sejas aizsegam. Termiski izolētiem kriogēnajiem cimdiem ir jāsniedzas līdz apakšdelmam, jo standarta laboratorijas cimdi nepietiekami aizsargā pret ārkārtēju aukstumu. Kā ārējais aizsargslānis jāvalkā laboratorijas mēteli, ko vislabāk papildināt ar pret šļakatām drošu plastmasas priekšautu, lai nodrošinātu papildu aizsardzību pret nejaušām noplūdēm. Pārnesot šūnas no mūsu sasaldēšanas barotnes CM-1 uz šķidrā slāpekļa krātuvi, pārliecinieties, ka jūsu individuālie aizsardzības līdzekļi ir labā stāvoklī, bez nolietojuma vai bojājumu pazīmēm. Atcerieties, ka pat neliela šķidrā slāpekļa iedarbība var izraisīt tūlītējus audu bojājumus, tāpēc visaptveroši IAL ir būtiski ikvienā saskarsmē ar LN2 glabāšanas sistēmām.

Ventilācijas prasības un skābekļa monitorings

Pareiza ventilācija ir ļoti svarīga, uzglabājot tādus vērtīgus pētniecības materiālus kā U937 šūnas un RAJI šūnas šķidrā slāpeklī. LN2 iztvaikojot, tas strauji izplešas - viens litrs šķidrā slāpekļa rada aptuveni 700 litru slāpekļa gāzes, kas slēgtās telpās var ātri izspiest skābekli. Šķidrā slāpekļa uzglabāšanas telpai jābūt aprīkotai ar mehāniskās ventilācijas sistēmām un skābekļa monitoringa ierīcēm. Iekārtās, kurās tiek uzglabātas vairākas šūnu līnijas un lieli daudzumi sasaldēšanas barotnes CM-1 - 500 ml, mēs iesakām uzstādīt pastāvīgus skābekļa monitorus ar skaņas signalizāciju, kas iestatīta tā, lai iedarbotos, ja skābekļa koncentrācija ir 18 %. Uzglabāšanas zonā jābūt augsta līmeņa ventilācijas punktiem, jo sasilusi slāpekļa gāze ir nedaudz vieglāka par gaisu. Nekad nepaļaujieties tikai uz dabisko ventilāciju - mehāniskās ventilācijas sistēmas regulāri jāpārbauda un jāuztur atbilstoši ražotāja specifikācijām, lai nodrošinātu vienmērīgu gaisa apmaiņas ātrumu.

Drošības protokols divām personām

Strādājot ar šķidro slāpekli jutīgu šūnu līniju, piemēram, HUVEC šūnu vai cilvēka mezenhimālo cilmes šūnu - kaulu smadzeņu, krioprezervēšanai, vienmēr strādājiet divatā. Šī draugu sistēma ir īpaši svarīga, veicot galvenās darbības, piemēram, pārvietojot paraugus glabāšanā, uzpildot kriogēnos traukus vai apstrādājot lielus sasaldēšanas barotnes CM-1 apjomus. Otrs cilvēks kalpo kā drošības novērotājs un var nekavējoties reaģēt ārkārtas situācijās, piemēram, noplūdes, skābekļa izsmelšanas vai personas traumas gadījumā. Viņiem jāatrodas netālu no izejas no laboratorijas, uzturot vizuālu kontaktu un vienlaikus neatrodoties tiešā darba zonā. Abiem komandas locekļiem jābūt pilnībā apmācītiem par avārijas procedūrām un jāzina drošības aprīkojuma atrašanās vieta. Plānojiet šķidrā slāpekļa apstrādes operācijas regulārā darba laikā, kad ir pieejams palīgpersonāls, un nekad nemēģiniet veikt kriogēnās darbības ārpus darba laika vai nedēļas nogalēs.

Obligātās apmācības prasības darbam ar LN2

Pirms darbības ar šķidrā slāpekļa glabāšanas sistēmām, kurās ir vērtīgi paraugi, piemēram, HeLa šūnas, vai pirms darbības ar sasaldēšanas barotni CM-ACF bez seruma, ir obligāta visaptveroša apmācība. Šajās mācībās jāietver pareiza apiešanās tehnika, izpratne par kriogēnajiem apdraudējumiem un avārijas reaģēšanas procedūrām. Personālam, kas strādā ar mūsu šūnu līnijām, ir jāapliecina kompetence par drošām uzpildes procedūrām, pareizu individuālo aizsardzības līdzekļu lietošanu un izpratne par skābekļa noplicināšanas riskiem. Apmācībā jāiekļauj praktiska prakse ar mazāku daudzumu uzraudzībā, pirms sākt strādāt ar lielākiem daudzumiem. Jāuztur dokumentācija par apmācību pabeigšanu un regulāri jāplāno atkārtotas apmācības. Jaunajiem darbiniekiem pirms patstāvīga darba komandā jāseko pieredzējušam personālam vismaz trīs pilnas LN2 apstrādes procedūras. Atcerieties, ka pat pieredzējušam personālam ir nepieciešama periodiska pārkvalifikācija, lai nodrošinātu, ka drošības protokoli ir svaigi un aktuāli.

Skābekļa monitoringa un signalizācijas sistēmas

Uzglabājot kritiski svarīgus pētniecības materiālus, piemēram, cilvēka mezenhimālās cilmes šūnas - taukaudu un cilvēka mezenhimālās cilmes šūnas - Whartons Jelly šķidrā slāpeklī, uzticamas skābekļa monitoringa sistēmas ir obligāti nepieciešamas. Jāuzstāda stacionārie skābekļa monitori ar signalizāciju, kas iestatīta tā, lai tā iedarbotos pie 18 % skābekļa koncentrācijas (v/v). Šīm sistēmām nepieciešama stratēģiska izvietošana: tuvu grīdas līmenim, kur sākotnēji uzkrājas par gaisu smagākas gāzes, darba augstumā un netālu no LN2 uzglabāšanas tvertnēm. Uzglabājot paraugus sasaldēšanas vidē CM-ACF - bez seruma - 500 ml, pārliecinieties, ka uzglabāšanas zonas ir aprīkotas gan ar skaņas, gan vizuālo signalizāciju, kas ir atpazīstama virs laboratorijas fona trokšņiem. Ieviest ikmēneša testēšanas grafiku visām skābekļa monitoringa sistēmām, uzturēt kalibrēšanas ierakstus un noteikt skaidras evakuācijas procedūras, kad iedarbojas trauksmes signāli. Personāls nekad nedrīkst mēģināt atcelt vai atslēgt šīs drošības sistēmas neatkarīgi no plānotā darba ar šķidro slāpekli ilguma.