Hep3B šūnas: pētījumi un atklājumi par aknu šūnu karcinomu
HEP3B ir imortalizēta cilvēka izcelsmes hepatocitārās karcinomas šūnu līnija. To plaši izmanto hepatotoksicitātes un zāļu metabolisma pētījumos. HEP3B transfekcijas efektivitāte ir ievērojama; tādēļ šīs šūnas parasti izmanto aknu vēža attīstības, progresēšanas un terapeitisko intervenču pētījumos. Šis raksts aptver visu nepieciešamo informāciju par HEP3B šūnu līniju, lai palīdzētu jums strādāt ar to. Galvenokārt tajā tiks iekļauts:
- Augšanas barotne
- HEP3B šūnu kultivēšanai izmanto EMEM barotni, kas satur 10 % FBS, 2,2 g/l NaHCO3, 2 mM L-glutamīnu un Earle's Balanced Salt Solution (EBSS).
- Dubultošanās laiks
- HEP3B šūnu dubultošanās laiks ir aptuveni 36 stundas.
- Augšanas tips
- Šī hepatomas šūnu līnija ir adhezīva.
- Bioloģiskās drošības līmenis
- BSL-1
- Piegādātājs
- Cytion — Pasūtīt HEP3B
- HEP3B šūnu vispārīgās īpašības un izcelsme
- Informācija par HEP3B šūnu līnijas kultivēšanu
- HEP3B šūnu līnija: priekšrocības un ierobežojumi
- HEP3B šūnu pielietojums pētniecībā
- Publikācijas par HEP3B šūnu līniju
- Resursi par HEP3B šūnu līniju: protokoli, video un citi materiāli
- HEP3B šūnu vispārīgās īpašības un izcelsme
- Informācija par HEP3B šūnu līnijas kultivēšanu
- HEP3B šūnu līnija: priekšrocības un ierobežojumi
- HEP3B šūnu pielietojums pētniecībā
- 5. Publikācijas par HEP3B šūnu līniju
- Resursi par HEP3B šūnu līniju: protokoli, video un citi materiāli
- Bieži uzdotie jautājumi
HEP3B šūnu vispārējās īpašības un izcelsme
Galvenā informācija, kas jums nepieciešama par šūnu līniju, ir tās izcelsme un vispārējās īpašības. Tā var palīdzēt jums izlemt par tās izmantošanu pētniecībā un palīdzēt jums rīkoties ar to. Šajā raksta sadaļā ir apkopota visa būtiskā informācija par HEP3B izcelsmi un īpašībām. Šeit jūs uzzināsiet: Kas ir Hep 3B šūnu līnijas? Kāda ir Hep3B šūnu izcelsme? Kāda ir HEP3B šūnu morfoloģija?
- HEP3B ir nepārtraukta cilvēka hepatomas šūnu līnija, kas iegūta no 8 gadus veca Āfrikas zēna aknu audiem, kuram bija hepatocelulāra karcinoma (HCC). To 1979. gadā izveidoja Aden un kolēģi Barbara B. Knowles laboratorijā, Wistar Institute, Filadelfijā, ASV [1].
- HEP3B šūnās hromosomā ir integrēts B hepatīta vīrusa (HBV) genoms.
- Šīs hepatocītu karcinomas šūnas izrāda epitēlija morfoloģiju.
- HEP3B šūnu hromosomu skaits ir 60. Atšķirībā no HepG2 tām nav pārkārtota 1. hromosoma.
Kāda ir atšķirība starp HepG2 un Hep3B?
HepG2 un HEP3B atšķiras ar hromosomu skaitu vienā šūnā. HEP3B satur 60 hromosomas, bet HepG2 šūnām vidēji ir 55 hromosomas. Turklāt HepG2 nav tumorogēnas un ir negatīvas attiecībā uz B hepatītu, savukārt HEP3B ir tumorogēnas un HBV pozitīvas.
Informācija par HEP3B šūnu līnijas kultivēšanu
Zināšanas par šūnu līnijas kultivēšanu var atvieglot darbu ar to. Šajā sadaļā ir aprakstīti visi galvenie punkti par HEP3B HBV šūnu līnijas kultivēšanu, tostarp: Kāds ir Hep3B šūnu dubultošanās laiks? Kādi ir HEP3B kultivēšanas apstākļi? Kā kultivēt HEP3B HCC šūnas?
Galvenie punkti par HEP3B šūnu kultivēšanu
Dubultošanās laiks:
HEP3B šūnu dubultošanās laiks ir aptuveni 36 stundas.
Pielipušas vai suspensijā:
Šī hepatomas šūnu līnija ir adhezīva.
Dalīšanās attiecība:
HEP3B šūnas tiek subkultivētas attiecībā no 1:2 līdz 1:4. Adherentās HEP3B šūnas tiek skalotas ar 1 x PBS un pēc tam inkubētas ar Accutase disociācijas šķīdumu. Pēc 8–10 minūtēm pievieno svaigu barotni un šūnas centrifugē. Pēc tam ievāktās šūnas uzmanīgi atkārtoti suspendē un ielej kolbās, kas satur kultūras barotni, ieteicamajā sadalīšanas attiecībā.
Augšanas barotne:
HEP3B šūnu kultivēšanai izmanto EMEM barotni, kas satur 10 % FBS, 2,2 g/l NaHCO3, 2 mM L-glutamīnu un Earle's Balanced Salt Solution (EBSS).
Augšanas apstākļi:
HEP3B šūnas kultivē 37 °C mitrinātā inkubatorā ar nepārtrauktu 5 % CO2 pievadi.
Uzglabāšana:
Sasaldētas HEP3B šūnas uzglabā temperatūrā zem -150 °C elektriskajā saldētavā vai šķidrā slāpekļa tvaika fāzē.
Sasaldēšanas process un barotne:
HEP3B šūnām ieteicamā sasaldēšanas vide ir CM-1 vai CM-ACF. Šūnas tiek sasaldētas, izmantojot lēnu sasaldēšanas procesu, kas ļauj temperatūrai pazemināties tikai par 1 °C minūtē, lai saglabātu šūnu dzīvotspēju.
Atkausēšanas process:
Sasaldētās šūnas atkausē ūdens vannā, kas iepriekš iestatīta uz 37 °C, 40–60 sekundes. Pēc tam šīs šūnas pievieno svaigai augšanas barotnei un centrifugē, lai atbrīvotos no sasaldēšanas barotnes elementiem. Savāktās šūnas atkārtoti suspendē un izdalīta jaunās kolbās augšanai.
Bioloģiskās drošības līmenis:
HEP3B šūnu kultivēšanai ir nepieciešama 1. bioloģiskās drošības līmeņa laboratorija.
HEP3B šūnu līnija: priekšrocības un ierobežojumi
HEP3B ir plaši izmantota hepatocelulārās karcinomas šūnu līnija. Šajā sadaļā tiks aplūkotas dažas galvenās šo hepatomas šūnu priekšrocības un ierobežojumi.
Priekšrocības
HEP3B šūnu galvenās priekšrocības ir šādas:
Viegli kultivējamas
HEP3B šūnām nav sarežģītas kultivēšanas prasības, tādēļ tās ir viegli apstrādāt un uzturēt pētniecības laboratorijā. Tas vienkāršo eksperimentālās procedūras.
Augsta transfekcijas efektivitāte
HEP3B šūnas izceļas ar ievērojamu transfekcijas efektivitāti, tādēļ tās plaši izmanto ģenētiskās manipulācijas un gēnu ekspresijas pētījumos.
Tumorigenitāte
HEP3B ir tumorogēna hepatocelulārā karcinoma šūnu līnija, kas spēj veidot audzējus, ja to injicē imūndeficītām pelēm. Tas palīdz pētīt vēža progresēšanu un attīstību, izmantojot HEP3B ksenotransplantātu modeļus.
HEP3B P53 statuss
HEP3B šūnām piemīt P53 gēna mutācija, kas ir līdzīga hepatocelulārajai karcinomai (HCC) un citiem vēža veidiem, tādēļ tās ir piemērotas P53 mutācijas ietekmes uz vēža augšanu, attīstību un progresēšanu pētīšanai.
Ierobežojumi
Ar HEP3B šūnu līniju saistītais ierobežojums ir:
In vitro šūnu modelis
HEP3B šūnu līnija kalpo kā in vitro modelis hepatocelulārās karcinomas (HCC) šūnām. Tomēr tā var pilnībā neatspoguļot HCC sarežģītību, kāda tā ir dzīvos organismos. Tāpēc eksperimentālie rezultāti in vitro var atšķirties no tiem, kas novēroti in vivo.
HEP3B šūnu pielietojums pētniecībā
HEP3B šūnu līnija piedāvā vairākus pētniecības pielietojumus biomedicīniskajos pētījumos. Daži no galvenajiem HEP3B šūnu pētniecības pielietojumiem ir:
- Vēža bioloģija: HEP3B ir cilvēka hepatocelulārās karcinomas šūnu līnija. Tā ir nenovērtējams šūnu modelis, lai pētītu šūnu un molekulāros mehānismus, kas ir HCC attīstības un progresēšanas pamatā. Pētnieki izmanto šīs šūnas, lai pētītu ģenētiskās mutācijas, šūnu procesus un šūnu signālu ceļus, kas saistīti ar aknu vēzi. Piemēram, vienā pētījumā, kurā tika izmantotas HEP3B šūnas, tika atklāts, ka mikroRNA-223-3p regulē NLRP3 inflammasoma komponentus, inhibē proliferāciju un pastiprina HEP3B hepatocelulārā karcinoma šūnu apoptozi [2].
- Zāļu skrīninga un izstrāde: HEP3B šūnu līnija tiek izmantota arī, lai testētu, skrīningotu un izstrādātu jaunus terapeitiskos līdzekļus pret aknu karcinomu. Turklāt to izmanto, lai novērtētu dažādu pretvēža zāļu un ārstēšanas metožu toksicitāti un efektivitāti. Pētnieki izmantoja šīs hepatomas šūnas arī zāļu metabolisma pētīšanai. Pētnieki izmantoja HEP3B šūnas un novērtēja Cotinus coggygria augu ekstrakta citotoksisko potenci uz HEP3B hepatocītu karcinomas šūnām [3].
- Vīrusu infekcijas: HEP3B ir B hepatīta vīrusa pozitīva šūnu līnija; tādēļ to izmanto, lai pētītu vīrusu infekcijas, kas var izraisīt aknu vēža attīstību, t.i., HBV un HCV. Tas var palīdzēt labāk izprast vīrusu infekcijas un izstrādāt potenciālas pretvīrusu ārstēšanas metodes. Piemēram, vienā pētījumā tika izmantotas HEP3B hepatocītu vēža šūnas un pētīta ubikvitinācijas nozīme hepatīta C vīrusa izplatībā. Rezultāti liecināja, ka ubikvitīna specifiskā proteāze 15 (USP15) ir iesaistīta HCV izplatībā, regulējot hepatocītu specifiskas funkcijas, tostarp lipīdu pilieniņu veidošanos un HCV RNS translāciju [4].
5. Publikācijas par HEP3B šūnu līniju
Šajā raksta sadaļā tiks apskatītas dažas interesantas pētījumu publikācijas par HEP3B šūnām.
Apoptozes un autofāgijas regulēšana ar luteolīnu cilvēka aknu šūnu vēža Hep3B šūnās
Šajā publikācijā žurnālā Biochemical and Biophysical Research Communications (2019) tika izvirzīts pieņēmums, ka luteolīna savienojuma izraisītais endoplazmatiskā tīkla stresa stāvoklis var izraisīt pretvēža iedarbību P53-nulles HEP3B šūnās P53-neatkarīgā veidā.
Hep3B aknu vēža šūnu potenciāla mērķēšana ar lupeolu, kas izdalīts no Avicennia marina
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā „Archiv der Pharmazie” (2021), tika ierosināts pentaciklisks triterpenoīds lupeols kā potenciāls pretvēža līdzeklis pret HEP3B šūnām.
Šis raksts publicēts žurnālā Molecular Medicine Reports (2017). Pētījuma rezultāti liecina, ka Cnidium monnieri (L.) Cusson etanola ekstrakts izraisa šūnu nāvi (apoptozi) un šūnu cikla apstāšanos hepatokarcinomas šūnās HepG2 un HEP3B, regulējot p53 un Akt/GSK-3β signālceļu.
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā Biomolecules and Therapeutics (2020), tika izvirzīts pieņēmums, ka auranofīnam piemīt sinerģiska iedarbība un tas veicina sulforafāna mediētu HEP3B šūnu apoptozi, aktivizējot PI3K/AKT ceļu.
Cirkulārajai RNS-0072309 ir pretvēža ietekme uz Hep3B šūnu līniju, iedarbojoties uz mikroRNS-665
Šajā pētījuma rakstā, kas publicēts žurnālā BioFactors (2023), tiek izvirzīts pieņēmums, ka cirkulārā RNS-0072309 izraisa pretvēža iedarbību uz aknu šūnu karcinomas šūnām HEP3B, iedarbojoties uz miRNA-665.
Resursi par HEP3B šūnu līniju: protokoli, video un citi materiāli
Tālāk ir uzskaitīti daži resursi, kas pieejami par HEP3B šūnām:
- HEP3B transfekcija: Šajā videoklipā ir izskaidrots transfekcijas protokols HEP3B šūnām.
- HEP3B transfekcijas efektivitāte: Šī saite palīdzēs jums uzzināt par HEP3B DMEM barotnes sastāvu, šūnu pasāžēšanu un transfekcijas protokolu HEP3B šūnām. Turklāt tajā ir sniegta informācija par HEP3B lipofektamīna 3000 reaģenta optimizēšanu jūsu transfekcijas protokolā.
Šajā saitē ir atrodams HEP3B šūnu kultivēšanas protokols:
- HEP3B kultivēšanas apstākļi: Šī saite palīdzēs jums iepazīties ar Huh7 un HEP3B kultūru apstrādes un uzturēšanas protokolu.
- HEP3B šūnas: Šajā tīmekļa vietnē ir daudz informācijas par HEP3B šūnām, tostarp par HEP3B barotnēm, šūnu sadalīšanas, atkausēšanas un proliferatīvo un kriokonservēto kultūru apstrādes protokolu.
Atsauces
- Puttahanumantharayappa, L.D., et al., Aknu šūnu karcinomas šūnu līniju izcelsme un īpašības. Japanese J Gastroenterol Res, 2021. 1(8): 1040. lpp.
- Wan, L., et al., miRNA-223-3p regulē NLRP3, lai veicinātu apoptozi un inhibētu Hep3B šūnu proliferāciju. Experimental and therapeutic medicine, 2018. 15(3): 2429–2435. lpp.
- Danjolli-Hashani, D. un S. Selen-Isbilir, Cotinus coggygria ekstrakta citotoksiskā iedarbība uz Hep3B vēža šūnu līniju. Natural Product Research, 2022: 1.–4. lpp.
- Kusakabe, S., et al., USP15 piedalās C hepatīta vīrusa izplatībā, regulējot vīrusu RNS translāciju un lipīdu pilienu veidošanos. Journal of Virology, 2019. 93(6): 10.1128/jvi. 01708-18.