Hep3B šūnas: Hepatocelulārās karcinomas izpēte un atklāšana
HEP3B ir imortizēta no cilvēka atvasināta hepatocītu karcinomas šūnu līnija. To plaši izmanto hepatotoksicitātes un zāļu metabolisma pētījumos. HEP3B transfekcijas efektivitāte ir ievērojama, tāpēc šīs šūnas parasti izmanto, lai pētītu aknu vēža attīstību, progresēšanu un terapeitisko iejaukšanos. Šajā rakstā ir sniegta visa nepieciešamā informācija par HEP3B šūnu līniju, lai palīdzētu jums darbā ar to. Galvenokārt tas ietvers:
- HEP3B šūnu vispārīgās īpašības un izcelsme
- Informācija par HEP3B šūnu līnijas kultivēšanu
- HEP3B šūnu līnija: Priekšrocības un ierobežojumi
- HEP3B šūnu lietojumi pētniecībā
- Publikācijas par HEP3B šūnu līniju
- HEP3B šūnu līnijas resursi: Protokoli, videomateriāli un citi resursi
1.hEP3B šūnu vispārīgās īpašības un izcelsme
Galvenā nepieciešamā informācija par šūnu līniju ir tās izcelsme un vispārīgās īpašības. Tas var palīdzēt jums izlemt par tās izmantošanu pētniecībā un palīdzēt darbā ar to. Šajā rakstu sadaļā ir sniegta visa būtiskākā informācija par HEP3B izcelsmi un īpašībām. Šeit jūs uzzināsiet: Kas ir Hep 3B šūnu līnijas? Kāda ir Hep3B šūnu izcelsme? Kāda ir HEP3B šūnu morfoloģija?
- HEP3B ir nepārtraukta cilvēka hepatomas šūnu līnija, kas iegūta no 8 gadus veca afrikāņu zēna ar hepatocelulāro karcinomu (HCC) aknu audiem. To izveidoja Adens un kolēģi 1979. gadā Barbaras B. Knowles laboratorijā, Wistar Institute, Filadelfijā, ASV [1].
- HEP3B šūnās hromosomā ir integrēts B hepatīta vīrusa (HBV) genoms.
- Šīm hepatocītu karcinomas šūnām ir epitēlija morfoloģija.
- HEP3B šūnām ir 60 hromosomu modālais skaits. Atšķirībā no HepG2 tām nav pārkārtotas 1. hromosomas.
Kāda ir atšķirība starp HepG2 un Hep3B?
HepG2 un HEP3B atšķiras ar hromosomu skaitu šūnā. HEP3B satur 60 hromosomas, bet HepG2 šūnās ir vidēji 55 hromosomas. Turklāt HepG2 nav tumorogēna un ir negatīva pret B hepatītu, bet HEP3B ir tumorogēna un HBV pozitīva.
2.informācija par HEP3B šūnu līnijas kultivēšanu
Zināšanas par šūnu līnijas kultivēšanas informāciju var atvieglot tās izmantošanu. Šajā sadaļā ir aprakstīti visi galvenie punkti par HEP3B HBV šūnu līnijas kultivēšanu, tostarp: Kāds ir Hep3B šūnu dubultošanās laiks? Kādi ir HEP3B kultivēšanas apstākļi? Kā kultivēt HEP3B HCC šūnas?
HEP3B šūnu kultivēšanas galvenie punkti
|
Dubultošanās laiks: |
HEP3B šūnu dubultošanās laiks ir aptuveni 36 stundas. |
|
Adhēzijas vai suspensijas veidā: |
Šī hepatomas šūnu līnija ir adherenta. |
|
Sadalījuma attiecība: |
HEP3B šūnas tiek subkultivētas proporcijā no 1:2 līdz 1:4. Adherētās HEP3B šūnas skalo ar 1 x PBS un pēc tam inkubē ar Accutase disociācijas šķīdumu. Pēc 8 līdz 10 min pievieno svaigu barotni un šūnas centrifugē. Pēc tam savāktās šūnas uzmanīgi resuspendē un ielej kolbās ar barotni ieteicamajā sadalīšanas proporcijā. |
|
Augšanas barotne: |
HEP3B šūnu kultivēšanai izmanto EMEM barotni, kas satur 10 % FBS, 2,2 g/l NaHCO3, 2 mM L-glutamīna un Earla sabalansētu sāls šķīdumu (EBSS). |
|
Augšanas apstākļi: |
HEP3B šūnas kultivē 37 °C mitrinātā inkubatorā ar nepārtrauktu 5 % CO2 padevi. |
|
Uzglabāšana: |
HEP3B šūnas uzglabā zem -150 °C temperatūrā elektriskā saldētavā vai šķidrā slāpekļa tvaika fāzē. |
|
Sasaldēšanas process un barotne: |
HEP3B šūnām ieteicamā sasaldēšanas vide ir CM-1 vai CM-ACF. Šūnas sasaldē, izmantojot lēnu sasaldēšanas procesu, kas ļauj samazināt temperatūru tikai par 1 °C minūtē, lai aizsargātu šūnu dzīvotspēju. |
|
Atkausēšanas process: |
Šūnas atkausē ūdens vannā, kas iepriekš iestatīta 37 °C temperatūrā, 40 līdz 60 sekundes. Vēlāk šīs šūnas pievieno svaigai barotnei un centrifugē, lai atdalītu sasalšanas barotnes elementus. Savāktās šūnas resuspendē un iepilda jaunās kolbās audzēšanai. |
|
Bioloģiskās drošības līmenis: |
HEP3B šūnu kultivēšanai nepieciešama 1. bioloģiskās drošības līmeņa laboratorija. |
3.hEP3B šūnu līnija: Priekšrocības un ierobežojumi
HEP3B ir plaši izmantota hepatocelulārās karcinomas šūnu līnija. Šajā iedaļā uzmanība tiks pievērsta dažām galvenajām šo hepatomas šūnu priekšrocībām un ierobežojumiem.
Priekšrocības
HEP3B šūnu galvenās priekšrocības ir šādas:
|
Viegli kultivējamas |
HEP3B šūnām nav sarežģītu šūnu kultivēšanas prasību, tāpēc tās ir viegli apstrādājamas un uzturējamas pētniecības laboratorijā. Tas vienkāršo eksperimentālās procedūras. |
|
Augsta transfekcijas efektivitāte |
HEP3B šūnām piemīt ievērojama transfekcijas efektivitāte, tāpēc tās plaši izmanto ģenētisko manipulāciju un ar gēnu ekspresiju saistītos pētījumos. |
|
Tumorigenitāte |
HEP3B ir tumorigēna hepatocelulārās karcinomas šūnu līnija, kas, injicējot imūnkompromitētām pelēm, spēj veidot audzējus. Tas palīdz pētīt vēža progresēšanu un attīstību, izmantojot HEP3B ksenotransplantātu modeļus. |
|
HEP3B P53 statuss |
HEP3B šūnām ir P53 gēna mutācija, kas ir līdzīga hepatocelulārās karcinomas (HCC) un citu vēža veidu mutācijām, tāpēc tās ir piemērotas P53 mutācijas ietekmes uz vēža augšanu, attīstību un progresēšanu pētījumiem. |
Ierobežojumi
Ar HEP3B šūnu līniju saistītie ierobežojumi ir šādi:
|
In vitro šūnu modelis |
HEP3B šūnu līnija kalpo kā hepatocelulārās karcinomas (HCC) šūnu in vitro modelis. Tomēr tā var pilnībā neatspoguļot dzīvos organismos sastopamo HCC sarežģītību. Līdz ar to eksperimentu rezultāti in vitro var atšķirties no rezultātiem, kas novēroti in vivo. |
4.hEP3B šūnu pielietojums pētniecībā
HEP3B šūnu līnija biomedicīniskajos pētījumos piedāvā vairākus pielietojumus. Daži no galvenajiem HEP3B šūnu lietojumiem pētniecībā ir šādi:
- HEP3B ir cilvēka hepatocelulārās karcinomas šūnu līnija. Tas ir nenovērtējams šūnu modelis, lai pētītu šūnu un molekulāros mehānismus, kas ir HCC attīstības un progresēšanas pamatā. Pētnieki izmanto šīs šūnas, lai pētītu ģenētiskās mutācijas, šūnu procesus un šūnu signalizācijas ceļus, kas saistīti ar aknu vēzi. Piemēram, pētījumā tika izmantotas HEP3B šūnas un konstatēts, ka mikroRNS-223-3p regulē NLRP3 inflammasomasomas komponentus, kavē HEP3B hepatokarcinomas šūnu proliferāciju un pastiprina to apoptozi [2].
- Zāļu skrīnings un izstrāde: HEP3B šūnu līniju izmanto arī, lai testētu, pārbaudītu un izstrādātu jaunas terapijas pret aknu karcinomu. Turklāt to izmanto, lai novērtētu dažādu pretvēža zāļu toksicitāti un efektivitāti un ārstēšanu. Pētnieki šīs hepatomas šūnas izmantoja arī zāļu metabolisma izpētei. Pētnieki izmantoja HEP3B šūnas un novērtēja Cotinus coggygria augu ekstrakta citotoksisko potenciālu uz HEP3B hepatocītu karcinomas šūnām [3].
- Vīrusu infekcijas: HEP3B ir hepatīta B vīrusa pozitīva šūnu līnija, tāpēc to izmanto, lai pētītu vīrusu infekcijas, kas var izraisīt aknu vēža attīstību, t. i., HBV un HCV. Tas var palīdzēt labāk izprast vīrusu infekcijas un izstrādāt potenciālu pretvīrusu ārstēšanu. Piemēram, pētījumā tika izmantotas HEP3B hepatocītu vēža šūnas un pētīta ubikvitinācijas nozīme c hepatīta vīrusa izplatībā. Iegūtie rezultāti liecināja, ka ubikvitīnam specifiskā proteāze 15 (USP15) ir iesaistīta HCV pavairošanā, regulējot hepatocītu specifiskās funkcijas, tostarp lipīdu pilienu veidošanos un HCV RNS translāciju [4].
5.publikācijas par HEP3B šūnu līniju
Šajā raksta sadaļā tiks apskatītas dažas interesantas pētnieciskas publikācijas par HEP3B šūnām.
Apoptozes un autofāgijas regulēšana ar luteolīnu cilvēka hepatocelulārā vēža Hep3B šūnās
Šajā publikācijā Biochemical and Biophysical Research Communications (2019) ierosināts, ka luteolīna savienojuma izraisītais endoplazmas retikuluma stress var radīt pretvēža iedarbību P53-null HEP3B šūnās no P53 neatkarīgā veidā.
No Avicennia marina izdalītā lupeola potenciālā iedarbība uz Hep3B aknu vēža šūnām
Šajā pētījumā, kas publicēts Archiv der Pharmazie (2021), ierosināts, ka pentacikliskais triterpenoīds lupeols ir potenciāls pretvēža līdzeklis pret HEP3B šūnām.
Šis raksts publicēts žurnālā Molecular Medicine Reports (2017). Pētījuma rezultāti liecina, ka Cnidium monnieri (L.) Cusson etanola ekstrakts izraisa šūnu nāvi (apoptozi) un šūnu cikla apstāšanos hepatokarcinomas HepG2 un HEP3B šūnās, regulējot p53 un Akt/GSK-3β signalizācijas ceļu.
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā Biomolecules and Therapeutics (2020), ierosināts, ka auranofīnam piemīt sinerģiska aktivitāte un tas veicina sulforafāna mediēto HEP3B šūnu apoptozi, aktivizējot PI3K/AKT ceļu.
Cirkulārajai RNS-0072309 ir pretvēža iedarbība uz Hep3B šūnu līniju, mērķējot uz mikroRNS-665
BioFactors (2023) publicētajā pētījumā ierosināts, ka cirkulārā RNS-0072309 iedarbojas pretvēža iedarbībā uz hepatocelulārās karcinomas HEP3B šūnām, mērķējot uz miRNA-665.
6.hEP3B šūnu līnijas resursi: HEPB3P resursu avoti: protokoli, videoklipi un citi resursi
Turpmāk ir sniegti daži resursi par HEP3B šūnām:
- HEP3B transfekcija: Šajā videoklipā ir izskaidrots HEP3B šūnu transfekcijas protokols.
- HEP3B transfekcijas efektivitāte: Šī saite palīdzēs jums uzzināt HEP3B DMEM barotnes sastāvu, šūnu pasāžu un HEP3B šūnu transfekcijas protokolu. Turklāt tā sniedz informāciju par HEP3B lipofectamine 3000 reaģenta optimizāciju jūsu transfekcijas protokolā.
Šajā saitē ir ietverts HEP3B šūnu kultūras protokols:
- HEP3B kultivēšanas nosacījumi: Šī saite palīdzēs apgūt Huh7 un HEP3B kultūru apstrādes un uzturēšanas protokolu.
- HEP3B šūnas: Šajā tīmekļa vietnē ir daudz informācijas par HEP3B šūnām, tostarp par HEP3B barotnēm, šūnu sadalīšanas protokolu, atkausēšanu un proliferatīvo un kriokonservēto kultūru apstrādi.
Atsauces
- Puttahanumantharayappa, L.D., et al., Hepatocelulārās karcinomas šūnu līniju izcelsme un īpašības. Japanese J Gastroenterol Res, 2021. 1(8): p. 1040.
- Wan, L., et al., miRNA-223-3p regulē NLRP3, lai veicinātu apoptozi un kavētu hep3B šūnu proliferāciju. Experimental and therapeutic medicine, 2018. 15(3): p. 2429-2435.
- Danjolli-Hashani, D. and S. Selen-Isbilir, Cytotoxic effect of Cotinus coggygria extract on Hep3B cancer cell line. Natural Product Research, 2022: p. 1-4.
- Kusakabe, S. un citi, USP15 piedalās C hepatīta vīrusa pavairošanā, regulējot vīrusa RNS translāciju un lipīdu pilienu veidošanos. Journal of Virology, 2019. 93(6): p. 10.1128/jvi. 01708-18.