HT22 šūnu līnija
HT22 ir peles neironu šūnu līnija, ko bieži izmanto neirozinātnes pētījumos. Tā ir noderīga neirodeģeneratīvo traucējumu izpētei un potenciālu neiroprotektīvu terapiju vai ārstēšanas metožu testēšanai. Turklāt HT22 šūnas ir jutīgas pret glutamātu, tādēļ tās izmanto, lai pētītu glutamāta izraisītu toksicitāti vai neironu bojājumus.
- Augšanas barotne
- HT22 šūnu kultivēšanai izmanto DMEM barotni. Lai nodrošinātu optimālu šūnu augšanu, tai pievieno 10 % FBS, 4,5 g/l glikozes, 4 mM L-glutamīna, 1,5 g/l NaHCO3 un 1,0 mM nātrija piruvāta.
- Dubultošanās laiks
- HT22 šūnu dubultošanās laiks ir aptuveni 15 stundas.
- Augšanas veids
- HT22 šūnas ir adhezīvas.
- Bioloģiskās drošības līmenis
- BSL-1
- Piegādātājs
- Cytion — Pasūtīt HT22
Šajā rakstā ir izcelti HT22 šūnu būtiskākie aspekti, kas var palīdzēt jūsu pētnieciskajā darbā. Tajā galvenokārt tiks apspriesti:
- HT22 šūnu vispārīgās īpašības un izcelsmi
- HT22 šūnu līnijas kultivēšanas informācija
- HT22 šūnu līnijas priekšrocības un trūkumi
- HT22 šūnu līnijas izmantošana pētniecībā
- Pētniecības publikācijas par HT22 šūnām
- Resursi par HT22 šūnām: protokoli, video un cits
HT22 šūnu vispārējās īpašības un izcelsme
Šajā raksta sadaļā tiks izskaidrots HT22 šūnu izcelsme un vispārējās īpašības. Pirms sākt darbu ar šo šūnu līniju, ir nepieciešams iepazīties ar šo informāciju. Šeit jūs uzzināsiet: Kas ir HT22 šūnas? Kāda ir HT22 hipokampa šūnu morfoloģija? Kāds ir HT22 šūnu izmērs?
HT22 ir nepārtraukta šūnu līnija, kas iegūta no peles smadzeņu hipokampa reģiona. Tā ir vecāko HT-4 šūnu līnijas subklons, kas izstrādāts, imortalizējot peles neironu audus ar temperatūras jutīgu poliomavīrusa simian vīrusa 40 (SV40) T antigēnu.
Šīs šūnas atšķiras no nobriedušām hipokampa šūnām, jo tām trūkst glutamāta un holīnerģisko receptoru, kādi ir nobriedušiem neironiem, kas cēlušies no hipokampa. Tādējādi tās nav piemērotas ar atmiņu saistītiem pētījumiem [1].
HT22 šūnas izskatās kā epitēlija šūnas.
Informācija par HT22 šūnu līnijas kultivēšanu
HT22 šūnas tiek izmantotas neirozinātnes pētniecības laboratorijās. Pirms šo šūnu kultivēšanas pētnieki meklē būtisku informāciju par šūnu kultivēšanu, kas padara viņu darbu vieglāku un efektīvāku. Šajā sadaļā ir aprakstīti visi galvenie punkti par HT22 šūnu kultivēšanu. Jūs uzzināsiet: kāds ir HT22 šūnu dubultošanās laiks? Kā kultivēt HT22 šūnas? Kāds ir HT22 šūnu kultivēšanas protokols? Kāda ir HT22 šūnu barotne?
HT22 šūnu kultivēšanas galvenie punkti
Dubultošanās laiks:
HT22 šūnu dubultošanās laiks ir aptuveni 15 stundas.
Pielipušas vai suspensijā:
HT22 šūnas ir adhezīvas.
Subkultivācijas attiecība:
HT22 hipokampusa šūnu subkultivācijas attiecība ir no 1:3 līdz 1:6. Īsumā, barotne tiek noņemta, un adhezīvās šūnas tiek noskalotas ar 1 x PBS. Kolbā pievieno Accutase disociācijas šķīdumu, un šūnas inkubē 8 līdz 10 minūtes istabas temperatūrā. Pēc tam pievieno svaigu kultūras barotni, un šūnas savāc flakonā centrifugēšanai. Iegūto šūnu nogulsni uzmanīgi atkārtoti suspendē, un šūnas ievieto kultūras kolbā augšanai.
Augšanas barotne:
HT22 šūnu kultivēšanai izmanto DMEM barotni. Lai nodrošinātu optimālu šūnu augšanu, to papildina ar 10 % FBS, 4,5 g/l glikozes, 4 mM L-glutamīna, 1,5 g/l NaHCO3 un 1,0 mM nātrija piruvāta.
Augšanas apstākļi:
HT22 šūnu kultūras tiek turētas mitrinātā inkubatorā (37 °C temperatūrā) ar 5 % CO2 pievadi.
Uzglabāšana:
Sasaldētas HT22 šūnas var uzglabāt ilgtermiņā temperatūrā zem -150 °C vai nu šķidrā slāpekļa tvaika fāzē, vai arī ultra-zemas temperatūras elektriskajā saldētavā.
Sasaldēšanas process un barotne:
HT22 šūnas var sasaldēt CM-1 vai CM-ACF barotnēs, izmantojot lēnas sasaldēšanas metodi. Šis process ļauj parauga temperatūru pazemināt tikai par 1 °C minūtē, aizsargā šūnas no šoka un palīdz saglabāt to dzīvotspēju.
Atkausēšanas process:
Šūnas atkausē 37 °C ūdens vannā 40–60 sekundes, līdz paliek neliels ledus gabaliņš. Pēc tam šūnām pievieno kultūras vidi un tās centrifugē, lai atbrīvotos no sasaldēšanas vides sastāvdaļām. Šūnu nogulsnes atkārtoti suspendē un šūnas ielej jaunā kolbā, kas satur kultūras vidi. Pēc tam šūnas inkubē 37 °C temperatūrā inkubatorā vismaz 24 stundas.
Bioloģiskās drošības līmenis:
HT22 šūnu kultivēšanai ir obligāti nepieciešami 1. bioloģiskās drošības līmeņa laboratorijas apstākļi.
HT22 šūnu līnijas priekšrocības un trūkumi
HT22 hipokampusa šūnām ir dažas priekšrocības un trūkumi, kas tās atšķir no citām neironu šūnu līnijām. Šeit ir minētas dažas nozīmīgas šīs šūnu līnijas priekšrocības un trūkumi.
Priekšrocības
HT22 peles neironu šūnu līnijas priekšrocības ir šādas:
-
Ātrs augšanas temps
HT22 šūnu dubultošanās laiks ir 15 stundas, kas ļauj veikt ātru un efektīvu eksperimentēšanu un palīdz savlaicīgi iegūt pētījumu rezultātus.
-
Imortalizācija
HT22 ir nemirstīga šūnu līnija, kas nodrošina nepārtrauktu augšanu ilgā laika periodā. Tas nodrošina pastāvīgu šūnu pieejamību, samazina laiku un izmaksas, kā arī atvieglo ilgtermiņa eksperimentus ar stabiliem rezultātiem.
Trūkumi
HT22 šūnu trūkumi ir šādi:
-
Peles izcelsme
HT22 šūnu līnija ir iegūta no peles smadzeņu hipokampa audiem, kas var pilnībā neatspoguļot cilvēka neironu šūnu fizioloģijas un uzvedības sarežģītību, ierobežojot to translacionālo nozīmi.
4. HT22 šūnu līnijas izmantošana pētniecībā
HT22 šūnas plaši izmanto neirobioloģijas pētījumos. Šajā raksta sadaļā aprakstīti daži daudzsološi šīs šūnu līnijas pielietojumi:
- Neirozinātnes pētījumi: HT22 šūnas plaši izmanto neirodeģeneratīvo slimību, t. i., Alcheimera un Parkinsona slimības, pētījumos. Tās tiek uzskatītas par vērtīgu pētniecības instrumentu, lai pētītu ar šīm slimībām saistītos neirotoksicitātes un oksidatīvā stresa mehānismus. 2020. gadā veiktajā pētījumā tika atklāts, ka PI3K/AKT/CREB ceļš ir iesaistīts hiperglikēmijas izraisītā neirotoksicitātē HT22 šūnās [2]. Līdzīgi, nesenā pētījumā tika izvirzīts pieņēmums, ka Nrf2/HO-1 ceļš un NF-κB signālu ass spēlē nozīmīgu lomu HT22 amiloīda beta toksicitātē [3].
- Zāļu skrīninga: HT22 šūnas plaši izmanto zāļu testēšanai un skrīningam. Tās palīdz pētniekiem identificēt potenciālos terapeitiskos līdzekļus, kam piemīt neiroprotektīva iedarbība cīņā pret neirodeģeneratīvām slimībām. 2019. gadā veiktajā pētījumā tika pētīts tetrahidrokurkumīna savienojuma neiroprotektīvais potenciāls ar glutamātu apstrādātās HT22 hipokampusa šūnās. Šajā gadījumā glutamāts izraisa oksidatīvo stresu HT22 šūnās un izraisa šūnu nāvi, aktivizējot mitogēnu aktivētās proteīnu kināzes [4].
5. Zinātniskie raksti par HT22 šūnām
Šeit ir daži interesanti pētījumi, kuros izmantota HT22 šūnu līnija:
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā International Journal of Molecular Medicine (2019), tika izvirzīta hipotēze par krociņa, kas ir no Crocus sativus L. izdalīts savienojums, neiroprotektīvo potenciālu L-glutamāta bojātās HT22 šūnās.
Jauni oksindola atvasinājumi novērš oksidatīvā stresa izraisītu šūnu nāvi peles hipokampa HT22 šūnās
Šajā publikācijā žurnālā Neuropharmacology (2018) ziņots, ka oksindola atvasinājumi aizsargā pret oksidatīvā stresa izraisītu HT22 šūnu nāvi.
Ginsenosīds Rb2 nomāc glutamāta izraisītu oksidatīvo stresu un neironu šūnu nāvi HT22 šūnās
Šis pētījums tika publicēts žurnālā „Journal of Ginseng Research” 2019. gadā. Šajā pētījumā tika pētīta dabiskā produkta ginsenosīda Rb2 neiroprotektīvā iedarbība, izmantojot HT22 šūnu līniju. Pētījumā tika konstatēts, ka ginsenosīds Rb2 efektīvi samazināja glutamāta izraisīto oksidatīvo stresu un šūnu nāvi peles hipokampa šūnās HT22.
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā „Ecotoxicology and Environmental Safety” (2021), tika novērtēts sudraba nanodaļiņu citotoksiskais potenciāls HT22 šūnu līnijā.
Ferrostatīns-1 aizsargā HT-22 šūnas no oksidatīvās toksicitātes
Šis pētījuma raksts tika publicēts 2020. gadā žurnālā Neural regeneration research. Tajā tika izvirzīts pieņēmums, ka ferrostatin-1, ferroptozes inhibitors, novērš oksidatīvo toksicitāti HT22 hipokampa šūnās.
Resursi par HT22 šūnām: protokoli, video un cits
Daži tiešsaistes resursi par HT22 šūnām izskaidro to transfekcijas, diferenciācijas un šūnu kultūras protokolus:
- HT22 transfekcija: Šis dokuments satur optimizētu protokolu HT22 transfekcijai 24 un 96-bedrīšu šūnu kultūras platēs.
- HT22 šūnu diferenciācija: Šis raksts sniegs visaptverošu informāciju par HT22 diferenciācijas protokolu.
Šajā saitē ir HT22 šūnu kultivēšanas protokols:
- HT22 šūnu subkultivēšana: Šī saite palīdzēs jums iepazīties ar HT22 šūnu līnijas subkultivēšanas protokolu. Turklāt tā palīdzēs jums iepazīties ar protokolu neirotoksicitātes indukcijai šūnās.
- HT22 hipokampa šūnas: Šajā tīmekļa vietnē ir daudz noderīgas informācijas par HT22 šūnu dubultošanās laiku, barotnēm un šūnu kultūras protokoliem.
Atsauces
- He, M., et al., Diferencēšanās rada uzņēmību pret eksitotoksicitāti HT22 neironos. Neural Regen Res, 2013. 8(14): 1297–306. lpp.
- Zhang, S., et al., Fisetīns novērš HT22 šūnu augsta glikozes līmeņa izraisītu neirotoksicitāti, izmantojot PI3K/Akt/CREB signālceļu. Frontiers in Neuroscience, 2020. 14: 241. lpp.
- Zhang, R.-l., et al., Berberīna aizsargājošā iedarbība pret β-amiloīda izraisītu neirotoksicitāti HT22 šūnās, izmantojot Nrf2/HO‐1 ceļu. Bioorganic Chemistry, 2023. 133: 106.–210. lpp.
- Park, C.-H., et al., Tetrahidrokurkumīna neiroprotektīvā iedarbība pret glutamāta izraisītu oksidatīvo stresu hipokampusa HT22 šūnās. Molecules, 2019. 25(1): 144. lpp.