HT22 šūnu līnija
HT22 ir neironu neironu šūnu līnija, ko parasti izmanto neirozinātnes pētījumos. Tā ir vērtīga neirogeneratīvo traucējumu izpētei un potenciālo neiroprotektīvo terapiju vai ārstēšanas metožu testēšanai. Turklāt HT22 šūnas ir jutīgas pret glutamātu, tāpēc tās izmanto, lai pētītu glutamāta izraisītu toksicitāti vai neironu bojājumus.
Šajā rakstā ir izcelti svarīgākie HT22 šūnu aspekti, kas var palīdzēt jūsu pētniecības darbā. Tajā galvenokārt tiks aplūkoti:
- HT22 šūnu vispārīgās īpašības un izcelsme
- Informācija par HT22 šūnu līnijas kultivēšanu
- HT22 šūnu līnijas priekšrocības un trūkumi
- HT22 šūnu līnijas izmantošana pētniecībā
- Pētniecības publikācijas, kurās izmantotas HT22 šūnas
- Resursi par HT22 šūnām: Protokoli, videomateriāli un citi resursi
1. HT22 šūnu vispārīgās īpašības un izcelsme
Šajā raksta sadaļā tiks sniegta informācija par HT22 šūnu izcelsmi un vispārējām īpašībām. Šīs informācijas zināšana par šūnu līniju ir nepieciešama pirms darba uzsākšanas ar to. Šeit jūs uzzināsiet: Kas ir HT22 šūnas? Kāda ir HT22 hipokampa šūnu morfoloģija? Kāds ir HT22 šūnu izmērs?
HT22 ir nepārtraukta šūnu līnija, kas iegūta no peļu smadzeņu hipokampa reģiona. Tas ir vecāku HT-4 šūnu līnijas subklons, kas izveidots, imortalizējot peļu neironu audus ar temperatūras jutīga poliomavīrusa Siman vīrusa 40 (SV40) T antigēna palīdzību.
Šīs šūnas atšķiras no nobriedušām hipokampa šūnām, jo tām trūkst glutamāta un holīnerģisko receptoru kā nobriedušiem hipokampa izcelsmes neironiem. Tāpēc tās nav piemērotas ar atmiņu saistītiem pētījumiem [1].
HT22 šūnām ir epitēlijšūnām līdzīgs izskats.
2. HT22 šūnu līnijas kultivēšanas informācija
HT22 šūnas tiek izmantotas neirozinātnes pētniecības laboratorijās. Pirms šo šūnu kultivēšanas pētnieki meklē būtisku informāciju par šūnu kultūrām, kas atvieglo un padara viņu darbu efektīvu. Šajā iedaļā aplūkoti visi svarīgākie jautājumi par HT22 šūnu kultivēšanu. Jūs uzzināsiet: Kāds ir HT22 šūnu dubultošanās laiks? Kā kultivēt HT22 šūnas? Kāds ir HT22 šūnu kultivēšanas protokols? Kas ir HT22 šūnu barotne?
Galvenie punkti HT22 šūnu kultivēšanai
|
Dubultošanās laiks: |
HT22 šūnu dubultošanās laiks ir aptuveni 15 stundas. |
|
Adhēzijas vai suspensijas veidā: |
HT22 šūnas ir adherentas. |
|
Subkultivēšanas attiecība: |
HT22 hipokampa šūnu subkultivēšanas attiecība ir 1:3 līdz 1:6. Īsumā noņem barotni un adherētās šūnas skalo ar 1 x PBS. Kolbā pievieno akutāzes disociācijas šķīdumu, un šūnas inkubē 8 līdz 10 minūtes apkārtējā temperatūrā. Pēc tam pievieno svaigu barotni, un šūnas savāc flakonā centrifugēšanai. Iegūto šūnu granulu rūpīgi resuspendē, un šūnas iepilda audzēšanas kolbā. |
|
Augšanas barotne: |
HT22 šūnu kultivēšanai izmanto DMEM barotni. To papildina ar 10 % FBS, 4,5 g/l glikozes, 4 mM L-glutamīna, 1,5 g/l NaHCO3 un 1,0 mM nātrija piruvāta šūnu optimālai augšanai. |
|
Augšanas apstākļi: |
HT22 šūnu kultūras tiek turētas mitrinātā inkubatorā (37 °C temperatūra) ar 5 %CO2 pieplūdi . |
|
Uzglabāšana: |
HT22 šūnas var ilgstoši uzglabāt temperatūrā, kas zemāka par -150 °C, vai nu šķidrā slāpekļa tvaika fāzē, vai ļoti zemas temperatūras elektriskā saldētavā. |
|
Saldēšanas process un vide: |
HT22 šūnas var sasaldēt CM-1 vai CM-ACF barotnē, izmantojot lēnās sasaldēšanas metodi. Šis process ļauj samazināt parauga temperatūru tikai par 1 °C minūtē, pasargā šūnas no šoka un palīdz saglabāt to dzīvotspēju. |
|
Atkausēšanas process: |
Šūnas atkausē 37 °C ūdens vannā 40 līdz 60 sekundes, līdz paliek neliels ledus gabaliņš. Pēc tam šūnām pievieno barotni, un tās centrifugē, lai likvidētu sasalstošās barotnes sastāvdaļas. Šūnu granulas resuspendē un šūnas ielej jaunā kolbā ar barotni. Pēc tam šūnas vismaz 24 stundas inkubē inkubatorā 37 °C temperatūrā. |
|
Bioloģiskās drošības līmenis: |
HT22 šūnu kultivēšanai obligāti jāizmanto 1. bioloģiskās drošības līmeņa laboratorijas apstākļi. |
3. HT22 šūnu līnijas priekšrocības un trūkumi
HT22 hipokampa šūnas ir saistītas ar dažiem plusiem un mīnusiem, kas tās atšķir no citām neironu šūnu līnijām. Šeit ir minētas dažas ievērojamas šūnu līnijas priekšrocības un trūkumi.
Priekšrocības
HT22 žurku neironu šūnu līnijas priekšrocības ir šādas:
-
Ātrs augšanas ātrums
HT22 šūnu dubultošanās laiks ir 15 stundas, kas ļauj ātri un efektīvi veikt eksperimentus un palīdz savlaicīgi iegūt pētījumu rezultātus.
-
Immortalizācija
HT22 ir imortalizēta šūnu līnija, kas nodrošina nepārtrauktu augšanu ilgāku laiku. Tas nodrošina pastāvīgu šūnu pieejamību, samazina laiku un izmaksas, kā arī atvieglo ilgtermiņa eksperimentus ar konsekventiem rezultātiem.
Trūkumi
HT22 šūnu trūkumi ir šādi:
-
Murīnu izcelsme
HT22 šūnu līnija ir iegūta no peļu smadzeņu hipokampa audiem, kas var pilnībā neatspoguļot cilvēka neironu šūnu fizioloģijas un uzvedības sarežģītību, tādējādi ierobežojot to pielietojumu.
4. HT22 šūnu līnijas izmantošana pētniecībā
HT22 šūnas tiek plaši izmantotas neirobioloģijas pētījumos. Šajā raksta sadaļā ir aplūkoti daži daudzsološi šīs šūnu līnijas lietojumi:
- Neirozinātnes pētījumi: HT22 šūnas plaši izmanto neirodeģeneratīvo slimību, t. i., Alcheimera un Parkinsona slimības, pētījumos. Tās tiek uzskatītas par vērtīgu pētniecības instrumentu, lai pētītu ar šīm slimībām saistīto neirotoksicitāti un oksidatīvā stresa mehānismus. Pētījumos, kas veikti 2020. gadā, tika konstatēts, ka PI3K/AKT/CREB ceļš ir iesaistīts hiperglikēmijas izraisītā nervu toksicitātē HT22 šūnās [2]. Tāpat nesen veiktā pētījumā ierosināts, ka Nrf2/HO-1 ceļam un NF- κB signalizācijas asij ir nozīmīga loma HT22 beta amiloīda toksicitātē [3].
- Zāļu skrīnings: HT22 šūnas plaši izmanto zāļu testēšanai un skrīningam. Tās palīdz pētniekiem identificēt potenciālos terapeitiskos līdzekļus ar neiroprotektīvu iedarbību neirodeģeneratīvo slimību apkarošanai. Pētījumā, kas veikts 2019. gadā, tika pētīts tetrahidrokurkumīna savienojuma neiroprotektīvais potenciāls ar glutamātu apstrādātās HT22 hipokampa šūnās. Šajā pētījumā glutamāts izraisa oksidatīvo stresu HT22 šūnās un izraisa šūnu nāvi, aktivizējot mitogēnu aktivētās proteīnkināzes [4].
5. Pētniecības publikācijas ar HT22 šūnām
Šeit ir daži interesanti pētījumi, kuros izmantota HT22 šūnu līnija:
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā International Journal of Molecular Medicine (2019), tika ierosināts no Crocus sativus L. izolēta savienojuma krocīna neiroprotektīvais potenciāls no L-glutamātabojātāmHT22 šūnām.
Jauni oksindola atvasinājumi novērš oksidatīvā stresa izraisītu šūnu nāvi peļu hipokampa HT22 šūnās
Šajā publikācijā Neuropharmacology (2018) ziņots, ka oksindola atvasinājumi aizsargā pret oksidatīvā stresa izraisītu HT22 šūnu nāvi.
Ginsenozīds Rb2 nomāc glutamāta izraisītu oksidatīvo stresu un neironu šūnu nāvi HT22 šūnās
Šis pētnieciskais darbs tika publicēts žurnālā Journal of Ginseng Research 2019. gadā. Šajā pētījumā tika pētīta dabīgā produkta - žeņšeņozīda Rb2 - neiroprotektīvā iedarbība, izmantojot HT22 šūnu līniju. Pētījumā tika konstatēts, ka ginsenozīds rb2 efektīvi mazina glutamāta izraisītu oksidatīvo stresu un šūnu nāvi žurku hipokampa šūnās HT22.
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā Ecotoxicology and Environmental Safety (2021), novērtēts sudraba nanodaļiņu citotoksiskais potenciāls HT22 šūnu līnijā.
Ferostatīns-1 aizsargā HT-22 šūnas no oksidatīvās toksicitātes
Šis pētnieciskais raksts tika publicēts 2020. gadā izdevumā Neural regeneration research. Tajā tika ierosināts, ka ferrostatīns-1, feroptozes inhibitors, novērš oksidatīvo toksicitāti HT22 hipokampa šūnās.
6. Resursi par HT22 šūnām: Rādītāji: protokoli, videoklipi un citi resursi
Daži tiešsaistes resursi par HT22 šūnām izskaidro to transfekcijas, diferenciācijas un šūnu kultūru protokolus:
- HT22 transfekcija: Šajā dokumentā ir iekļauts optimizēts protokols HT22 transfekcijai 24 un 96 iedobju šūnu kultūru plates.
- HT22 šūnu diferenciācija: Šajā rakstā sniegtas izsmeļošas norādes par HT22 diferenciācijas protokolu.
Šajā saitē ir iekļauts HT22 šūnu kultūras protokols:
- HT22 šūnu subkulturēšana: Šī saite palīdzēs apgūt HT22 šūnu līnijas subkultivēšanas protokolu. Turklāt tā palīdzēs jums apgūt protokolu neirotoksicitātes izraisīšanai šūnās.
- HT22 hipokampa šūnas: Šajā tīmekļa vietnē ir daudz noderīgas informācijas par HT22 šūnu dubultošanās laiku, barotnēm un šūnu kultūras protokoliem.
Atsauces
- He, M., et al., Differentiation renders susceptibility to excitotoxicity in HT22 neirons. Neural Regen Res, 2013. 8(14): p. 1297-306.
- Zhang, S., et al., Fisetin preventents HT22 cells from high glucose-induced neurotoxicity via PI3K/Akt/CREB signaling pathway. Frontiers in Neuroscience, 2020. 14: p. 241.
- Zhang, R.-l., et al., Protective effects of berberine against β-amyloid-induced neurotoxicity in HT22 cells via the Nrf2/HO-1 pathway. Bioorganic Chemistry, 2023. 133: p. 106-210.
- Park, C.-H., et al., Tetrahidrokurkumīna neiroprotektīvā iedarbība pret glutamāta izraisītu oksidatīvo stresu hipokampa HT22 šūnās. Molecules, 2019. 25(1): p. 144.