HK-2 šūnas – nieru funkcijas un patoloģijas izpēte ar HK-2 šūnu palīdzību nieru pētījumos
HK-2 ir nemirstīga cilvēka nieru epitēlija šūnu līnija, ko parasti izmanto toksikoloģijas pētījumos. Pētnieki novērtē vides toksīnu ietekmi uz šīm nieru šūnām. Turklāt viņi izmanto HK-2 šūnas, lai pētītu nieru slimības un to pamatmehānismus.
- Augšanas barotne
- Ideāls HK-2 šūnu barotne ir keratinocītu šūnu līnijas barotne, kas satur 10 % embriju liellopu serumu, 0,05 mg/ml liellopu hipofīzes ekstraktu (BPE) un 5 ng/ml epidermālo augšanas faktoru (EGF). Barotni jāmaina reizi 2–3 dienās nedēļā.
- Dubultošanās laiks
- HK-2 šūnu dubultošanās laiks ir no 47,3 h līdz 61,7 h.
- Augšanas tips
- HK-2 nieru epitēlija šūnu līnija ir adhezīva.
- Bioloģiskās drošības līmenis
- BSL-2
- Piegādātājs
- Cytion — Pasūtīt HK-2
- HK-2 šūnas: izcelsme un vispārējās īpašības
- HK-2 šūnu līnija: Informācija par kultivēšanu
- HK-2 šūnu priekšrocības un ierobežojumi
- HK-2 šūnu līnijas pielietojums pētniecībā
- 5. HK-2 šūnas: pētniecības publikācijas
- Resursi par HK-2 šūnu līniju: protokoli, video un citi materiāli
- Bieži uzdotie jautājumi
HK-2 šūnas: izcelsme un vispārējās īpašības
Lai pareizi rīkotos ar šūnu līniju, to uzturētu un izmantotu, ir svarīgi zināt tās izcelsmi un vispārīgās īpašības. Šajā raksta sadaļā tiks aplūkoti šādi jautājumi: Kas ir HK-2 šūnas cilvēka nierē 2? Kāda ir HK2 loma? Kas ir HK2 šūnas? Kāda ir HK-2 šūnu līnijas izcelsme? Kāds ir HK-2 šūnu izmērs un morfoloģija?
- Cilvēka nieres 2 (HK-2) šūnas ir proksimālo kanāliņu šūnu veids, kas iegūtas no Eiropas pieaugušā normāla nieru auda. HK-2 šūnu līnija tika izveidota, transfekcijot nieru šūnas ar rekombinantu retrovīrusu, kas satur cilvēka papilomas vīrusa 16. tipa E6/E7 gēnus. Šis eksperiments izraisīja nemirstības iegūšanu un nepārtraukti augošas HK-2 nieru epitēlija šūnu līnijas izveidi.
- HK-2 šūnas uzrāda epitēlija morfoloģiju.
- HK-2 šūnu diametrs ir no 17,4 līdz 18,6 µm. Vidējais diametrs ir 18,2 µm [1].
HK-2 šūnu līnija: informācija par kultivēšanu
Informācija par cilvēka nieru 2 šūnu līnijas kultivēšanu var būt ļoti noderīga, pirms sākat ar to strādāt. Šajā raksta sadaļā ir minēta būtiska informācija par HK-2 šūnu kultūru. Jūs uzzināsiet: vai HK-2 šūnas ir adhezīvas? Kāds ir HK-2 šūnu dubultošanās laiks? Kādu barotni izmanto HK-2 šūnu kultivēšanai?
Galvenie punkti HK-2 šūnu kultivēšanai
Populācijas dubultošanās laiks:
HK-2 šūnu dubultošanās laiks ir no 47,3 stundām līdz 61,7 stundām.
Adhēzijas vai suspensijas:
HK-2 nieru epitēlija šūnu līnija ir adhezīva.
Subkultivācijas attiecība:
HK-2 šūnas tiek subkultivētas attiecībā no 1:2 līdz 1:4. Adhēzijas HK-2 šūnas tiek mazgātas ar 1 x PBS un inkubētas istabas temperatūrā 8 līdz 10 minūtes pēc Accutase šķīduma pievienošanas. Kultivācijas barotne tiek pievienota disociētajām šūnām un centrifugēta. Savāktās šūnas tiek rūpīgi atkārtoti suspendētas un ielietas jaunās kolbās kultivēšanai.
Augšanas barotne:
Ideāls HK-2 šūnu barotne ir keratinocītu šūnu līnijas barotne, kas satur 10 % embriju liellopu serumu, 0,05 mg/ml liellopu hipofīzes ekstraktu (BPE) un 5 ng/ml epidermālo augšanas faktoru (EGF). Barotni jāmaina reizi 2–3 dienās nedēļā.
Augšanas apstākļi:
Cilvēka nieru 2 šūnu līnijas kultūras tiek turētas mitrinātā inkubatorā ar 5 % CO2 pievadi 37 °C temperatūrā.
Uzglabāšana:
Sasaldētās šūnas uzglabā šķidrā slāpekļa tvaika fāzē vai temperatūrā zem -150 °C ultra-zemas temperatūras saldētavā.
Sasaldēšanas process un barotne:
CM-1 vai CM-ACF sasaldēšanas barotnes ir ideāli piemērotas HK-2 šūnu sasaldēšanai. Īsumā, tiek izvēlēta lēna sasaldēšanas metode, kas ļauj temperatūrai pazemināties tikai par 1 grādu Celsija minūtē un aizsargā šūnas no jebkāda šoka.
Atkausēšanas process:
Sasaldētās šūnas atkausē ūdens vannā, kuras temperatūra ir 37 grādi pēc Celsija. Šīm šūnām pievieno svaigu kultūras vidi un tās atkārtoti suspendē. Pēc tam šūnas pārnes jaunā kolbā, kas satur augšanas vidi. Pēc 24 stundām vidi nomaina, lai noņemtu sasaldēšanas vides sastāvdaļas.
Bioloģiskās drošības līmenis:
HK-2 šūnu kultūras tiek uzturētas 1. bioloģiskās drošības līmeņa laboratorijās.
HK-2 šūnu priekšrocības un ierobežojumi
HK-2 ir plaši izmantota cilvēka proksimālo kanāliņu epitēlija šūnu līnija. Tāpat kā citas šūnu līnijas, arī tai ir savas priekšrocības un ierobežojumi. Šajā sadaļā tiks apspriestas dažas galvenās cilvēka nieru 2 šūnu līnijas priekšrocības un trūkumi.
Priekšrocības
HK-2 šūnu līnijas galvenās priekšrocības ir šādas:
Labi raksturota
HK-2 šūnu līnija ir plaši raksturota attiecībā uz tās morfoloģiju, izmēru un genomu. Par šīm normālajām nieru šūnām ir veikti daudzi pētījumi.
Imortalizēta
HK-2 ir nepārtraukta šūnu līnija ar pagarinātu dzīves ilgumu, kas ļauj to pavairot vairākās paaudzēs. Šī īpašība nodrošina nepārtrauktu šūnu piegādi laboratorijas eksperimentiem.
Proksimālo kanāliņu epitēlija īpašības
HK-2 šūnas uzrāda labi diferencētu fenotipu, kas raksturīgs proksimālo kanāliņu šūnām (PTC), kuras atrodamas cilvēka nierēs. Šī unikālā īpašība padara HK-2 šūnas par vērtīgu in vitro modeli nieru fizioloģijas, šūnu procesu un reakciju uz dažādiem stimuliem pētīšanai.
Ierobežojumi
Šeit ir daži HK-2 šūnu līnijas ierobežojumi:
In vitro modelis
HK-2 kalpo kā in vitro modelis normālām nieru šūnām, jo īpaši izrādot proksimālo kanāliņu epitēlija šūnu īpašības. Tomēr tas var pilnībā neatspoguļot cilvēka nieru audu un in vivo sastopamās mikroaprites sarežģītību.
HK-2 šūnu līnijas pielietojumi pētniecībā
HK-2 šūnu līnijai ir daudzveidīgs pielietojums toksikoloģijas pētījumos. Šeit mēs esam apsprieduši dažus konkrētus un nozīmīgus šīs cilvēka proksimālo kanāliņu šūnu līnijas izmantošanas veidus pētniecībā.
- Nieru fizioloģija: HK-2 šūnas parasti izmanto normālas nieru fizioloģijas un funkciju pētīšanai. Pētnieki izmanto šīs proksimālo kanāliņu epitēlija šūnas, lai pētītu jonu kanālus, transporta procesus un citus šūnu mehānismus, kas regulē nieru homeostāzi. Piemēram, pētnieki pētīja Transient Receptor Potential Channel 6 (TRPC6) kanālu lomu (+)-Conocarpan (CNCP), neolignāna, izraisītā šūnu nāvē nieru epitēlija šūnās, HK-2 [2].
- Nieru slimības: Cilvēka nieru 2 šūnu līnija tiek izmantota, lai pētītu dažādas nieru slimības, piemēram, akūtu nieru bojājumu un diabētisko nefropātiju, kā arī to pamatā esošos šūnu un molekulāros mehānismus. Pētījumos tika atklāts, ka klotho proteīna metilācijas līmenis ir saistīts ar nieru bojājumiem. Klotho gēna promotora metilācijas samazināšana var pastiprināt tā ekspresiju un mazināt nieru bojājumus, kas izraisīti diabēta db/db peles modeļos un ar augstu glikozes līmeni apstrādātās HK-2 šūnās [3].
- Toksikoloģijas pētījumi: HK-2 šūnas ir lielisks pētniecības instruments, lai novērtētu dažādu zāļu, ķīmisko vielu un vides piesārņotāju potenciālo ietekmi. Pētījumi var palīdzēt pētniekiem novērtēt zāļu drošību un blakusparādības uz nieru šūnām. Piemēram, 2022. gadā publicētajā pētījumā tika novērtēta dabīgā auga Polygonatumkingianum (PK) polisaharīdu un ūdens ekstrakta potenciālā ietekme uz urāna izraisītu nefrotoksicitāti HK-2 šūnās. Tika konstatēts, ka PK rada aizsargājošu iedarbību un novērš urāna saindēšanos nieru šūnās [4].
5. HK-2 šūnas: zinātniskās publikācijas
Tālāk ir minētas dažas interesantas pētniecības publikācijas, kurās aprakstītas HK-2 nieru epitēlija šūnas.
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā „Diabetes, Metabolic Syndrome, and Obesity” (2022), tika izvirzīts pieņēmums, ka cirkulārā RNS HIPK3 var mazināt augsta glikozes līmeņa toksicitātes izraisīto HK-2 šūnu proliferācijas inhibīciju. Turklāt tā var kavēt šūnu nāvi, regulējot miR-326/miR-487a-3p/SIRT1 kaskādi.
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā Nanomedicine (2020), tika novērtēti dažādi zelta nanodaļiņu (AuNPs) toksicitātes mehānismi 786-0 vēža šūnās un HK-2 proksimālo kanāliņu epitēlija šūnās.
Augsta glikozes līmeņa izraisīto toksicitāti HK-2 šūnās var mazināt, inhibējot miRNA-320c
Šis raksts tika publicēts žurnālā Renal Failure (2022). Pētījuma rezultāti liecina, ka mikroRNA-320c var samazināt augsta glikozes līmeņa izraisīto toksicitāti nieru šūnās (HK-2), iedarbojoties uz PTEN un inhibējot PI3K/AKT signālu pārraidi.
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā Tissue Engineering Part A (2022), izvirzīts pieņēmums, ka no mezenhālajām cilmes šūnām iegūtie eksosomi novērš HK-2 nieru šūnu epitēlija-mezenhālās pārejas procesu.
Žurnāla „Journal of Pharmacy and Pharmacology” (2019) rakstā norādīts, ka lncRNA TapSAKI pastiprina HK-2 iekaisuma reakciju un šūnu nāvi, regulējot mikroRNA-22/PTEN/TLR4/NF-κB signālceļu.
Resursi par HK-2 šūnu līniju: protokoli, video un citi materiāli
HK-2 ir pazīstama šūnu līnija. Šeit ir daži resursi, kuros aprakstīts HK-2 šūnu kultūras protokols.
- HK-2 šūnu kultūra: Šī tīmekļa vietne ir bagātināta ar informāciju par HK-2 šūnu kultūru. Tajā ir sniegta HK-2 šūnu barotnes recepte, pasāžēšanas protokols, kā arī protokols par proliferatīvo un kriokonservēto kultūru apstrādi un uzturēšanu.
- Šūnu pasāžēšana: Šis video palīdzēs jums apgūt vispārēju sadalīšanas vai pasāžēšanas protokolu adhezīvām šūnu līnijām.
Atsauces
- Handl, J., et al., Atkārtotas pasāžēšanas ietekme uz cilvēka proksimālo kanāliņu HK-2 šūnu jutību pret toksiskām vielām. Physiological Research, 2020. 69(4): 731. lpp.
- Yang, G., et al., TRPC6 kanālu aktivācija veicina (+)-konokarpāna izraisītu apoptozes šūnu nāvi HK-2 šūnās. Food and Chemical Toxicology, 2019. 129: 281.–290. lpp.
- Yang, X.H., et al., EGCG mīkstina nieru bojājumus, atgriežot klotho hipermetilāciju diabēta db/db pelēm un HK-2 šūnām. Oksidatīvā medicīna un šūnu ilgmūžība, 2020. 2020.
- Li, W., et al., Polygonatum kingianum polisaharīdu un ūdens ekstrakta aizsargājošā iedarbība uz urāna izraisītu toksicitāti cilvēka nieru (HK-2) šūnās. International Journal of Biological Macromolecules, 2022. 202: 68.–79. lpp.