HEK293T šūnas: transfekcijas pētījumu potenciāla izmantošana
HEK293T šūnas ir cilvēka embriju nieru šūnas, kuras plaši izmanto rūpnieciskajā biotehnoloģijā, toksikoloģijā un vēža pētniecībā. Šīs nemirstīgās šūnas izmanto arī dažādu terapeitisko proteīnu un vīrusu ražošanai.
- Augšanas barotne
- HEK293T šūnas kultivē EMEM (Eagle's minimal essential medium) vidē, kas satur 1,0 g/l L-glikozes, 2,2 g/l NaHCO3, 2,0 mM L-glutamīna un 10 % embriju liellopu seruma. Barotni jāmaina divas reizes nedēļā.
- Dubultošanās laiks
- HEK293T šūnu dubultošanās laiks ir 30 stundas.
- Augšanas tips
- HEK293T ir adhezīva šūnu līnija.
- Bioloģiskās drošības līmenis
- BSL-1
- Piegādātājs
- Cytion — Pasūtīt HEK293T
- HEK293T šūnu vispārīgās īpašības un izcelsme
- HEK293T šūnu šūnu tehnoloģijas un biomedicīniskie pielietojumi
- HEK293T šūnu līnijas izmantošana pētniecībā
- Šūnu terapijas inovācijas, izmantojot HEK293T šūnas
- Inovatīvas metodes HEK293T šūnu kultivēšanā
- HEK293 šūnu iegāde pētniecības vajadzībām
- Informācija par HEK293T šūnu līnijas kultivēšanu
- HEK293T šūnu līnija: priekšrocības un ierobežojumi
- Bieži uzdotie jautājumi par HEK293T šūnu kultūru un tās pielietojumiem
- HEK293T šūnas: pētniecības publikācijas
- Resursi par HEK293T šūnu līniju: protokoli, video un cits
- Atsauces
- Bieži uzdotie jautājumi
HEK293T šūnu vispārīgās īpašības un izcelsme
Šajā raksta sadaļā tiks aplūkota HEK293T šūnu līnijas izcelsme un vispārīga informācija par to.
- HEK293T šūnu līnija cēlusies no primārām cilvēka embriju nieru šūnām, kas kultivētas laboratorijā. Pētnieki izstrādāja šīs šūnas 20. gadsimta 70. gadu sākumā, transfekcijot embriju nieru šūnas ar sadalītiem adenovīrusa 5. tipa DNS fragmentiem. Pētnieki izveidoja HEK293T šūnu līniju, ievadot pērtiķu vīrusa 40 (SV40) lielo T-antigēnu HEK293 šūnu genomā. Šī modifikācija ļāva pētniekiem viegli transfekcijot 293 šūnas un padarīja tās piemērotas proteīnu ražošanai un gēnu ekspresijas pētījumiem [1].
- HEK293T šūnām ir epitēlija tipa morfoloģija. Tām ir iegarena un saplacināta forma ar skaidri izteiktu šūnu robežu.
- HEK293T šūnu diametrs ir no 11 līdz 15 µm.
- SV40 lielajam T-antigēnam HEK293T šūnas piemīt sarežģīts kariotips. Šīs šūnas ir hipotriploīdas, tās satur 3 reizes mazāk hromosomu nekā haploīda gameta, un to modālais hromosomu skaits ir 64.
Kāda ir atšķirība starp HEK293T un HEK293?
Gan HEK293, gan HEK293T šūnu līnijas ir cilvēka izcelsmes. HEK293T ir populārs HEK293 šūnu līnijas atvasinājums. Zinātnieki izstrādāja šīs šūnas no sākotnējām cilvēka embrija nieres 293 šūnām, transfekcijot tās ar SV40 lielā T antigēnu, savukārt nemirstīgās HEK293 šūnas tika izveidotas, transformējot un kultivējot cilvēka embrija nieres šūnas ar sadalītiem cilvēka adenovīrusa 5 DNS fragmentiem.
Šūnu tehnoloģijas un HEK293T šūnu pielietojumi biomedicīnā
Šūnu kultivēšana un uzglabāšana HEK293T pētījumos
HEK293T šūnas, kas ir iegūtas no cilvēka embrija nieres 293 šūnām, tiek plaši izmantotas šūnu kultūrās to spēcīgās augšanas un vieglas transfekcijas dēļ. Lai strādātu ar šīm šūnām, pētniekiem ir jāpievērš prioritāra uzmanība šūnu banku izveidei, kas ietver šūnu uzglabāšanu turpmākai pētniecībai un terapeitiskai izmantošanai. Viņiem ir jāizmanto pakāpeniska šūnu banku izveides pieeja, lai saglabātu šūnu īpašības un nodrošinātu to ilgtermiņa dzīvotspēju. Šūnu banku izveidei ir jāievēro labas ražošanas prakses noteikumi, lai nodrošinātu šūnu dzīvotspēju un integritāti terapeitiskai izmantošanai.
Labas ražošanas prakses ir ļoti svarīgas HEK293T šūnu banku izveidē, kas ir pamats gan pētniecībai, gan terapeitiskai lietošanai. Galvenā šūnu banka kalpo kā atsauces punkts visiem turpmākiem šūnu produktiem. Šo šūnu ražošana terapeitiskām vajadzībām, piemēram, lentivīrusu ražošana gēnu terapijai, notiek saskaņā ar stingriem regulatīviem standartiem, lai nodrošinātu galaproduktu drošību un efektivitāti.
Protokoli un analīzes, izmantojot HEK293T
Citotehnoloģijā ir izstrādāti īpaši protokoli un analīzes, lai novērtētu HEK293T šūnu īpašības. Tie ietver gēnu terapijas vektoru efektivitātes novērtēšanu un šūnu mijiedarbību ar ekstracelulāro matricu šūnu kultūras traukā vai suspensijas kultūrā. Lai saglabātu HEK293T šūnu integritāti, pētnieki precīzi izvēlas transfekcijas reaģentus un pakļauj izejmateriālus stingriem kvalitātes kontroles testiem.
HEK293T šūnu līnijas izmantošana pētniecībā
- Vakcīnu izstrāde: HEK293T šūnu līnija ir izmantota vīrusu pētīšanai un vīrusu vektoru vakcīnu ražošanai, lai cīnītos pret dažādām vīrusu infekcijām. Vienā pētījumā šī embrionālo nieru šūnu līnija tika izmantota, lai izpētītu COVID-19 vīrusa iekļūšanas cilvēka organismā caur angiotenzīnu konvertējošo enzīmu 2 (ACE2) strukturālo un funkcionālo pamatu [3]. Turklāt nesenā pētījumā HEK93T šūnas tika izmantotas, lai radītu SARS-CoV-2 smailei līdzīgas lentivīrusa daļiņas [4].
- Toksikoloģijas pētījumi: Šo cilvēka embrionālo nieru šūnu līniju plaši izmanto zāļu toksicitātes un efektivitātes pārbaudēm. 2022. gadā veiktajā pētījumā HEK293T tika izmantota kā normāla cilvēka šūnu līnija, lai validētu Caladium lindenii ekstraktu citotoksisko potenciālu pret aknu vēža šūnu līniju HepG2 [5].
- Gēnu ekspresijas pētījumi: SV40 lielā T antigēna HEK293T šūnu līnija ir ļoti piemērota transfekcijai, tādējādi tā ir piemērota gēnu ekspresijas pētījumiem. Vienā pētījumā HEK293T šūnas tika izmantotas, lai pētītu garās nekodējošās RNS SNHG16 lomu trofoblastu funkciju regulēšanā. Pētījums atklāja, ka LncRNA SNHG16 mijiedarbojas ar miR-218-5p/LASP1 asi, lai mediētu šos efektus [6].
Šūnu terapijas inovācijas, izmantojot HEK293T šūnas
Sasniegumi šūnu terapijā ar HEK293T
HEK293T šūnas ievērojami veicina šūnu terapijas attīstību, jo īpaši ģenētiskās terapijas vīrusu vektoru radīšanā. Šīs šūnas ir būtiskas ražošanas procesos, kas atbilst labas ražošanas prakses noteikumiem, jo tās nodrošina augstas kvalitātes ģenētiskās terapijas produktu ražošanu. Ražošanas personāla apmācība ir vērsta arī uz HEK293T šūnu unikālo īpašību apguvi un augstu standartu uzturēšanu attiecībā uz no šīm šūnām iegūtajiem zālēm.
HEK293T šūnas klīniskajos pētījumos un gēnu terapijā
HEK293T šūnu līnija spēlē izšķirošu lomu gēnu terapijas produktu attīstībā un ir neatņemama klīnisko pētījumu sastāvdaļa, kuru mērķis ir ieviest tirgū jaunas šūnu terapijas metodes. Tas ietver šīs šūnu līnijas augstās transfektivitātes izmantošanu gēnu piegādei, izmantojot vektorus, piemēram, lentivīrusu iepakošanas vektorus, kur integrāzes D64V mutācija ir bijusi ievērojams sasniegums drošības palielināšanā.
Inovatīvas metodes HEK293T šūnu kultūrā
HEK293T šūnu daudzpusība atbalsta inovatīvas metodes gan divdimensionālās, gan sarežģītākās dimensiju šūnu kultūrās. Šī pielāgojamība ir būtiska, pētot šūnu produktus dažāda veida biomedicīniskajos pētījumos, tostarp vēža pētījumos, kur šīs šūnas tiek izmantotas, lai pētītu audzēju veidošanās procesus un testētu zāles. Turklāt HEK293T līnija ir nozīmīga lentivīrusu daļiņu ražošanā, kas ir būtiskas gan pētniecības, gan terapeitisko vektoru ražošanas procesos.
Iegādājieties HEK293 šūnas saviem pētījumiem
Uzlabojiet savus pētījumus ar mūsu HEK293 šūnām, kas ir pazīstamas ar savu pielāgojamību gēnu ekspresijas pētījumos un vakcīnu ražošanā. Mūsu piedāvājumā ir daudzveidīgi atvasinājumi, piemēram, HEK293T, HEK293 suspensijai pielāgota līnija, HEK293T/17, AAV-293 un 2V6.11. Izpētiet mūsu plašo izvēli, lai atbalstītu un veicinātu savu eksperimentālo darbu.
Informācija par HEK293T šūnu līnijas kultivēšanu
HEK293T šūnas tiek plaši kultivētas pētniecības laboratorijās. Pirms HEK293T šūnu kultūras izveides jums jāzina: kāds ir HEK293T šūnu dubultošanās laiks? Kas ir HEK293T barotne? Kāda ir HEK293T sēšanas blīvums?
Galvenie punkti HEK293T šūnu kultivēšanai
Dubultošanās laiks:
HEK293T šūnu dubultošanās laiks ir 30 stundas.
Adhēzijas vai suspensijas:
HEK293T ir adhezīva šūnu līnija.
Sēšanas blīvums:
HEK293T šūnas tiek sētas ar blīvumu 1 x 104 šūnas/cm2. Pie šāda sēšanas blīvuma šūnas var veidot konfluentu monoslāni aptuveni 4 dienu laikā. Sēšanai adhezīvās šūnas atdalās, izmantojot Accutase disociācijas šķīdumu. Atdalītās šūnas tiek centrifugētas un pēc tam uzmanīgi atkārtoti suspendētas, izmantojot augšanas vidi. Pēc tam šūnas tiek izdalītas jaunās kolbās kultivēšanai.
Augšanas barotne:
HEK293T šūnas kultivē EMEM (Eagle's minimal essential medium) vidē, kas satur 1,0 g/l L-glikozes, 2,2 g/l NaHCO3, 2,0 mM L-glutamīna un 10 % embriju liellopu seruma. Barotni jāmaina divas reizes nedēļā.
Augšanas apstākļi:
HEK293T šūnu kultūras tiek turētas 37 °C mitrinātā inkubatorā ar 5 % CO2 pievadi.
Uzglabāšana:
Cilvēka embrionālās nieres HEK293T šūnas uzglabā šķidrā slāpekļa tvaika fāzē vai ilgākā laika posmā temperatūrā zem -150 °C.
Sasaldēšanas process un barotne:
HEK293 šūnas var sasaldēt CM-1 vai CM-ACF sasaldēšanas vidē. Lai saglabātu HEK293T šūnu dzīvotspēju, ieteicams izmantot lēnu sasaldēšanas procesu, kas ļauj temperatūrai pakāpeniski pazemināties par 1 °C.
Atkausēšanas process:
Sasaldēto šūnu flakonu ātri sakrata ūdens vannā (37 °C), līdz paliek neliels ledus gabaliņš. Šūnas atkārtoti suspendē vidē un centrifugē, lai atbrīvotos no sasaldēšanas vides sastāvdaļām. Atgūtās šūnas pēc tam kultivē jaunās kolbās, kas satur augšanas vidi.
Bioloģiskās drošības līmenis:
HEK293T šūnu kultūru apstrādei un uzturēšanai ir nepieciešama 1. bioloģiskās drošības līmeņa laboratorija.
HEK293T šūnu līnija: priekšrocības un ierobežojumi
Cilvēka embrija nieru 293T šūnām piemīt unikāla priekšrocību un ierobežojumu kombinācija. Šeit mēs apskatīsim dažas galvenās šīs šūnu līnijas priekšrocības un trūkumus.
HEK293T šūnu priekšrocības un trūkumi
HEK293T šūnu nozīmīgās priekšrocības ietver to augsto transfektivitāti, kur šūnu līnija parāda ievērojamu efektivitāti svešas DNS uzņemšanā un bagātīgu proteīnu ražošanā. Šī īpašība padara tās plaši iecienītas gan pārejošos, gan stabilos transfekcijas pētījumos. Turklāt HEK293T šūnu kultūras ir pazīstamas ar to vieglo uzturēšanu, kas padara tās par lielisku izvēli dažādiem laboratorijas eksperimentiem, pateicoties to izturībai un vienkāršajām apstrādes prasībām.
Tomēr HEK293T šūnu kultūrām ir arī ierobežojumi. Viena no galvenajām bažām ir mikrobiālās kontaminācijas risks, kas var būtiski ietekmēt šūnu morfoloģiju, gēnu ekspresiju un citas kritiskas īpašības, potenciāli izraisot neprecīzus eksperimentu rezultātus. Turklāt, lai gan HEK293T šūnas ir piemērotas ilgtermiņa eksperimentiem, ilgstoša kultivēšana var apdraudēt šūnu veselību. Tas var ietekmēt to transfekcijas efektivitāti un augšanas ātrumu, tāpēc parasti tiek ieteikts ierobežot to pasāžu skaitu līdz 20 vai mazāk, lai saglabātu šūnu integritāti.
Biežāk uzdotie jautājumi par HEK293T šūnu kultūru un lietojumiem
HEK293T šūnas: Pētījumu publikācijas
Šajā sadaļā esam minējuši dažas daudzsološas pētniecības publikācijas, kurās aprakstītas HEK293T šūnas.
SARS-CoV-2 mRNA vakcīnu izstrāde, kas kodē smaile N-terminālo un receptoru saistīšanās domēnus
Šī publikācija tiks publicēta BioRxiv 2022. gadā. Šajā pētījumā tika izmantotas HEK293T šūnas, lai izstrādātu COVID-19 vīrusa mRNA vakcīnas, kas kodē spike gēna N-terminālo un RBD (receptoru saistīšanās domēnu) domēnus.
Cirkulārā HER2 RNA pozitīvais trīskārši negatīvais krūts vēzis ir jutīgs pret pertuzumabu
Šis pētījums ir publicēts žurnālā Molecular Cancer 2020. gadā. Pētījumā tika izvirzīta hipotēze, ka cirkulārā HER2 RNS ekspresija trīskārši negatīvās krūts vēža šūnās padara to jutīgu pret ārstēšanu ar zāļu preparātu Pertuzumab. Šajā pētījumā pētnieki izmantoja HEK293 šūnas lentivīrusa ražošanai un cirkulārā HER2 gēna transfekcijai.
IFITM3 pretvīrusu loma prototipa putu vīrusa infekcijā
Šis raksts tika publicēts žurnālā „Virology Journal” 2022. gadā. Šajā pētījumā tika izmantotas HEK293T šūnas, lai izpētītu IFITM3 (interferona indukta transmembrānas proteīna 3) pretvīrusu iedarbību prototipa putu vīrusa (PFV) infekcijā.
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā „Nature Scientific Reports” (2017), tika izmantotas HEK293T šūnas un pētīts, ka miRNA-21 mediē metformīna izraisīto antiangiogēno iedarbību, regulējot PI3K/AKT signālceļu un SMAD7 un PTEN gēnu ekspresiju.
MicroRNA-608 inhibē urīnpūšļa vēža proliferāciju, iedarbojoties uz AKT/FOXO3a signālceļu
Šis pētījums tika publicēts žurnālā Molecular Cancer 2017. gadā. Šajā pētījumā tika izmantotas HEK293 šūnas, lai izpētītu miRNA-608 antiproliferatīvo potenciālu pret urīnpūšļa vēzi.
Resursi par HEK293T šūnu līniju: protokoli, video un citi materiāli
Tālāk ir uzskaitīti daži resursi par HEK293T šūnām:
- HEK293T šūnu transfekcija.
- HEK šūnu transfekcija: Šis video parāda vispārējo transfekcijas protokolu cilvēka embrionālo nieru šūnu līnijai HEK293.
- Šūnu pasāžēšana: Šajā videoklipā ir izskaidrots adhezīvo šūnu sadalīšanas vai subkultivēšanas process.
Šūnu kultivēšanas protokoli
Šeit ir uzskaitīti šūnu kultivēšanas protokoli HEK293T šūnām.
- HEK293T šūnu sadalīšana: Šajā vietnē ir sniegta detalizēta soli pa solim izstrādāta instrukcija par HEK293 šūnu subkultivēšanu.
- Cilvēka embrionālo nieru šūnu kultivēšana: Šī saite sniedz HEK293T šūnu kultivēšanas protokolu.
Atsauces
- Tan, E., et al., HEK293 šūnu līnija kā platforma rekombinantā proteīna un vīrusu vektoru ražošanai. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology, 2021, 9.
- Kim, M.J., et al., AMPKα1 regulē plaušu un krūts vēža progresēšanu, regulējot TLR4-mediēto TRAF6-BECN1 signālu asi. Cancers (Basel), 2020, 12(11).
- Wang, Q., et al., SARS-CoV-2 iekļūšanas strukturālais un funkcionālais pamats, izmantojot cilvēka ACE2. Cell, 2020. 181(4): 894.–904. lpp.
- Gale, E.C., et al., Uz hidrogēlu balstīta lēnās atbrīvošanas vakcīna ar receptoru saistošo domēnu subvienību izraisa neitralizējošu antivielu reakciju pret SARS-CoV-2. bioRxiv, 2021.
- Kalsoom, A., et al., Caladium lindenii ekstraktu citotoksiskā potenciāla in vitro novērtējums uz cilvēka hepatokarcinomas HepG2 un normālajām HEK293T šūnu līnijām. Biomed Res Int, 2022, 1279961. lpp.
- Yu, Z., et al., LncRNA SNHG16 regulē trofoblastu funkcijas ar miR-218-5p/LASP1 asi. J Mol Histol, 2021. 52(5): 1021–1033. lpp.