DLD-1 šūnas: DLD-1 šūnu lietojumi un ieskats kolorektālā vēža pētniecībā
DLD-1 ir cilvēka kolorektālās karcinomas šūnu līnija, ko parasti izmanto vēža pētījumos. Tā ir vērtīgs rīks dažādu resnās zarnas vēža aspektu, tostarp audzēja attīstības, progresēšanas, pamatā esošo molekulāro mehānismu un atbildes reakcijas uz terapeitiskiem līdzekļiem, izpētei. Tādējādi DLD-1 ir izcila, lai izprastu slimību un izstrādātu iespējamās ārstēšanas stratēģijas.
Šajā rakstā sniegta svarīga informācija par DLD-1 šūnu līniju, kas jums jāzina pirms darba ar to. Tajā tiks aplūkoti šādi jautājumi:
- DLD-1 šūnu vispārīgās īpašības un izcelsme
- Informācija par DLD-1 šūnu līnijas kultivēšanu
- DLD-1 šūnu līnija: Priekšrocības un ierobežojumi
- DLD-1 šūnu līnijas izmantošana pētniecībā
- Pētniecības publikācijas par DLD-1 šūnām
- DLD-1 šūnu līnijas resursi: Protokoli, videomateriāli un citi resursi
1. DLD-1 šūnu vispārīgās īpašības un izcelsme
Pirms darba ar šūnu līniju pētnieks vispirms pievērš uzmanību tās izcelsmei un vispārējām īpašībām. Šī raksta sadaļa ir detalizēts ievads par DLD-1 šūnu līniju. Tajā tiks aplūkoti šādi bieži uzdoti jautājumi: Kas ir DLD-1 šūnas? Kas ir DLD-1 vēža šūnu līnija? Kādas ir DLD-1 šūnu līnijas mutācijas? Kāds ir DLD-1 šūnas izmērs? Kāda ir DLD-1 šūnu morfoloģija?
- DLD-1 ir resnās zarnas vēža šūnu līnija, kas iegūta no resnās zarnas 67 gadus vecam vīrietim ar kolorektālo adenokarcinomu. To 1977.-1979. gadā izolēja D. L. Deksters un kolēģi. Šai šūnu līnijai ir tāda pati izcelsme kā HCT-8, HCT-15 un HRT-18 šūnu līnijām.
- DLD-1 šūnām, tāpat kā kolorektālajam vēzim, ir mikrosatelītu nestabilitātes fenotips [1].
- DLD-1 mutācijas ietver KRAS, P53, BRAF, BRCA1 un BRCA2. DLD-1 P53 statusa, DLD-1 BRCA, DLD-1 BRCA2 un DLD-1 KRAS mutācijas dēļ šīs šūnas tiek uzskatītas par ideālām vēža pētījumiem.
- Šīm šūnām piemīt epitēlijam līdzīga morfoloģija.
- DLD-1 šūnu līnijas izmērs ir aptuveni 15 µm.
- Cilvēka kolorektālā vēža šūnu līnijai DLD-1 piemīt pseidodiploīds kariotips. Aptuveni 86 % šūnu ir 46 hromosomu modālais skaits. Tomēr 17,1 % šūnu populācijas var būt arī poliploīdija.
2.informācija par DLD-1 šūnu līnijas kultivēšanu
Pirms jebkuras šūnu līnijas kultivēšanas jāzina tās pamatprasības šūnu kultūrai. Šajā iedaļā tiks izcelti svarīgākie punkti, kas jāapgūst pirms darba uzsākšanas ar DLD-1 šūnu līniju. Tas ietver: Kāds ir DLD-1 dubultošanās laiks? Kas ir DLD-1 barotne? Kāds ir DLD-1 šūnu izsējas blīvums? Kā kultivēt DLD-1 šūnas?
DLD-1 šūnu kultivēšanas galvenie punkti
|
Dubultošanās laiks: |
DLD-1 dubultošanās laiks ir aptuveni 15 stundas. |
|
Adhēzijas vai suspensijas veidā: |
DLD-1 ir adherēta cilvēka resnās zarnas vēža šūnu līnija. Šūnas aug monoslānī. |
|
Sēšanas blīvums: |
DLD-1 šūnas izsēj ar blīvumu 1 līdz 2 x104 šūnas/cm2. Adherētās šūnas mazgā ar 1x fosfātu buferšķīdumu (PBS) un inkubē ar pasāžas šķīdumu (Accutase) istabas temperatūrā. Pēc 8 līdz 10 minūšu inkubācijas atdalītās šūnas pievieno barotnei un centrifugē. Pēc tam šūnu granulas uzmanīgi resuspendē, un šūnas ielej jaunos barotnēs ar barotni. |
|
Augšanas barotne: |
DLD-1 šūnu kultivēšanai izmanto RPMI 1640 ar barotnes piedevām, tostarp 10 % liellopu fetālā seruma FBS, 2,1 mM stabilā glutamīna un 2,0 g/l NaHCO3. Barotne jāmaina 2-3 reizes nedēļā. |
|
Augšanas apstākļi: |
DLD-1 kultūras tiek uzturētas 37 °C mitrinātā inkubatorā ar 5 % CO2 pieplūdi. |
|
Uzglabāšana: |
DLD-1 šūnas uzglabā šķidrā slāpekļa tvaika fāzē vai elektriskajā saldētavā ar ļoti zemu temperatūru (temperatūrā zem -150 °C). |
|
Saldēšanas process un vide: |
DLD-1 šūnu sasaldēšanai var izmantot CM-1 vai CM-ACF sasaldēšanas barotni. Vienmēr ieteicams lēns sasaldēšanas process, kas ļauj pakāpeniski pazemināt temperatūru par 1 °C, tādējādi novēršot šūnu šoku un aizsargājot to dzīvotspēju. |
|
Atkausēšanas process: |
Atkausē sasaldētās šūnas ūdens vannā, kas iepriekš iestatīta 37 °C temperatūrā, 40 līdz 60 sekundes, līdz paliek neliels ledus gabaliņš. Pēc tam šūnas pievieno svaigai barotnei un centrifugē. Šis solis ir nepieciešams, lai no šūnām atdalītu sasaldēšanas barotnes sastāvdaļas. Savāktās šūnas resuspendē augšanas barotnē un iepilda kolbā augšanai. |
|
Bioloģiskās drošības līmenis: |
DLD-1 šūnu līniju uztur 1. bioloģiskās drošības līmeņa laboratorijās. |
3.dLD-1 šūnu līnija: Priekšrocības un ierobežojumi
Šajā raksta sadaļā mēs apskatīsim DLD-1 resnās zarnas vēža šūnu līnijas priekšrocības un ierobežojumus.
Priekšrocības
DLD-1 šūnu līnijas galvenās priekšrocības ir šādas:
|
Kolorektālā vēža modelis |
DLD-1 šūnām piemīt mutācijas, kas bieži sastopamas kolorektālā vēža pacientiem, piemēram, DLD-1 KRAS mutācija, DLD-1 BRCA un DLD-1 BRCA2. Šī atbilstība padara tās par klīniski piemērotu šūnu modeli šīs slimības izpētei. |
|
Audzēju šūnu līnija |
DLD-1 šūnas ir tumorigēnas. Tās var izraisīt audzējus, injicējot nude pelēm. Tāpēc pētnieki izmanto šīs šūnas, lai izstrādātu ksenogrāfta audzēju modeļus, kas palīdz pētīt audzēju veidošanos, attīstību un progresēšanu in vivo. |
Ierobežojumi
Ar DLD-1 šūnām saistītie ierobežojumi ir šādi:
|
Heterogenitāte |
DLD-1 resnās zarnas vēža šūnu populācijām piemīt ģenētiska un fenotipiska heterogenitāte. Tas var ietekmēt pētījumu rezultātu vispārināmību. |
4.dLD-1 šūnu līnijas izmantošana pētniecībā
DLD-1 šūnu līniju var dažādi izmantot vēža pētījumos. Šajā iedaļā ir aplūkoti daži nozīmīgākie lietojumi.
- Vēža pētījumi: DLD-1 šūnas kalpo kā vērtīgs in vitro modelis, lai izprastu molekulāros mehānismus, kas ir kolorektālā vēža augšanas, attīstības un progresēšanas pamatā. Turklāt tās izmanto gēnu ekspresijas, signalizācijas ceļu un specifisku ģenētisko mutāciju ietekmes uz vēža šūnu uzvedību izpētei. Pētījumos, kas veikti 2022. gadā, novērots, ka PI3K/Akt/YAP signālu kaskāde regulē DLD-1 kolorektālā vēža šūnu līnijas migrāciju un invazi [2].
- Zāļu izstrāde: Pētnieki izmanto DLD-1 šūnu līniju, lai pārbaudītu pretvēža zāļu efektivitāti un novērtētu to potenciālu resnās zarnas vēža ārstēšanā. Tas palīdz zāļu izstrādē un efektīvā slimības apkarošanā. Pētījumā, kas veikts 2022. gadā, tika izmantota DLD-1 vēža šūnu līnija un pētīta ķīmiski sintezētu savienojumu - silīcija ftalocianīnu - pretvēža aktivitāte. Pētījuma rezultāti liecināja, ka šie savienojumi ir spēcīgi pretvēža līdzekļi [3]. Interesanti, ka citā pētījumā, izmantojot DLD-1 šūnas, tika konstatēts no probiotikām iegūta P8 proteīna pretvēža potenciāls [4].
5.pētniecības publikācijas par DLD-1 šūnām
Šajā sadaļā tiks izceltas dažas interesantas un bieži citētas publikācijas par DLD-1 resnās zarnas karcinomas šūnu līniju.
Šī publikācija publicēta žurnālā Journal of Biologically Active Products from Nature (2022). Pētījumā konstatēts, ka flavonoīds diosmins izraisa šūnu nāvi DLD-1 šūnās un izraisa arī šūnu cikla apstāšanos; tādējādi tas var būt potenciāls pretvēža līdzeklis.
Bromelaīns efektīvi nomāc Kras-mutantu kolorektālo vēzi, stimulējot feroptozi
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā Animal Cells and Systems (2018), ierosināts, ka enzīms bromelaīns nomāc DLD-1 KRAS mutāciju un iedarbojas spēcīgi citotoksiski.
Šis pētnieciskais raksts tika publicēts 2019. gadā žurnālā "Environmental Toxicology". Pētījumā tika pētīta dabiskā savienojuma Bergapten pretvēža iedarbība, izmantojot DLD-1 kolorektālo šūnu līniju.
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials (2023), konstatēts, ka kurkumīna un dzelzs oksīda nanokompozīti ir ļoti efektīvi pret DLD-1 kolorektālā vēža šūnām.
Šis pētnieciskais raksts tika publicēts 2020. gadā žurnālā Turkish Journal of Biology. Pētījumā tika ierosināts, ka dabiskais produkts, epibrassinolida mediētā AKT aktivizācija DLD-1 šūnās stimulē ar poliamīniem saistītu autofāziju.
6.dLD-1 šūnu līnijas resursi: D DLD DL-1 resursu avoti: protokoli, videoklipi un citi resursi
Tālāk ir sniegti daži resursi par DLD-1 šūnām:
- DLD-1 transfekcija: Šis video pamācības materiāls ir visaptverošs ceļvedis par DLD-1 in vitro transfekcijas protokolu.
- DLD-1 šūnas: Šajā pētījumā īsi aprakstītas DLD-1 šūnu audzēšanas prasības, tostarp barotnes un audzēšanas apstākļi. Turklāt tas var palīdzēt apgūt DLD-1 šūnu transfekcijas protokolu.
Šajās saitēs sniegts DLD-1, no cilvēka iegūtu resnās zarnas vēža šūnu, kultivēšanas protokols.
- DLD-1 šūnu līnija: Šī tīmekļa vietne sniedz pamatinformāciju par DLD-1 šūnu līniju. Tā palīdzēs apgūt dažādus DLD-1 šūnu kultivēšanas protokolus, tostarp subkultivēšanu un rīcību ar kriokonservētām un proliferējošām kultūrām.
Atsauces
- Gavrilas, L.I., et al., Proapoptozes gēni kā jauni mērķi atsevišķai un kombinētai ārstēšanai ar resveratrolu un kurkumīnu kolorektālā vēža gadījumā. Food & function, 2019. 10(6): p. 3717-3726.
- Takeda, T., et al., PI3K/Akt/YAP signalizācija veicinaDLD-1kolorektālā vēža šūnu migrāciju un invāziju. Oncology Letters, 2022. 23(4): p. 1-9.
- Farajzadeh, N., et al., Anticancer activity of novel silicon phthalocyanines against the colorectal adenocarcinoma cell line (DLD-1). New Journal of Chemistry, 2022. 46(41): p. 19863-19873.
- An, B.C., et al., Anti-Cancer Roles of Probiotic-Derived P8 Protein in Colorectal Cancer Cell Line DLD-1. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(12): p. 9857.