DLD-1 šūnas: DLD-1 šūnu pielietojums un atziņas kolorektālā vēža pētniecībā
DLD-1 ir cilvēka kolorektālās karcinomas šūnu līnija, ko bieži izmanto vēža pētījumos. Tā ir vērtīgs instruments dažādu resnās zarnas vēža aspektu izpētē, tostarp audzēja attīstībā, progresēšanā, pamatā esošajos molekulārajos mehānismos un reakcijā uz terapeitiskajiem līdzekļiem. Tādējādi DLD-1 ir izcila palīdzība slimības izpratnē un potenciālu ārstēšanas stratēģiju izstrādē.
- Augšanas barotne
- DLD-1 šūnu kultivēšanai izmanto RPMI 1640 ar barotnes piedevām, tostarp 10 % teļa seruma (FBS), 2,1 mM stabilu glutamīnu un 2,0 g/l NaHCO3. Barotni jāmaina 2–3 reizes nedēļā.
- Dubultošanās laiks
- DLD-1 dubultošanās laiks ir aptuveni 15 stundas.
- Augšanas veids
- DLD-1 ir adhezīva cilvēka resnās zarnas vēža šūnu līnija. Šūnas aug monoslānī.
- Bioloģiskās drošības līmenis
- BSL-1
- Piegādātājs
- Cytion — Pasūtīt DLD-1
- DLD-1 šūnu vispārīgās īpašības un izcelsme
- DLD-1 šūnu līnijas kultivēšanas informācija
- DLD-1 šūnu līnija: priekšrocības un ierobežojumi
- DLD-1 šūnu līnijas izmantošana pētniecībā
- 5. Pētnieciskās publikācijas par DLD-1 šūnām
- Resursi par DLD-1 šūnu līniju: protokoli, video un citi materiāli
- Bieži uzdotie jautājumi
DLD-1 šūnu vispārīgās īpašības un izcelsme
Pirms sākt darbu ar šūnu līniju, pētniekam vispirms jāizvērtē tās izcelsme un vispārējās īpašības. Šī raksta sadaļa ir detalizēts ievads par DLD-1 šūnu līniju. Tajā tiks aplūkoti šādi bieži uzdotie jautājumi: Kas ir DLD-1 šūnas? Kas ir DLD-1 vēža šūnu līnija? Kādas ir DLD-1 šūnu līnijas mutācijas? Kāds ir DLD-1 šūnas izmērs? Kāda ir DLD-1 šūnu morfoloģija?
- DLD-1, resnās zarnas vēža šūnu līnija, ir iegūta no 67 gadus veca vīrieša resnās zarnas, kuram bija kolorektālais adenokarcinoms. To izolēja D.L. Dexter un kolēģi laika posmā no 1977. līdz 1979. gadam. Šai šūnu līnijai ir tāds pats izcelsmes avots kā HCT-8, HCT-15 un HRT-18 šūnu līnijām.
- Tāpat kā kolorektālais vēzis, DLD-1 šūnām piemīt mikrosatelītu nestabilitātes fenotips [1].
- DLD-1 mutācijas ietver KRAS, P53, BRAF, BRCA1 un BRCA2. DLD-1 P53 statusa, DLD-1 BRCA, DLD-1 BRCA2 un DLD-1 KRAS mutācijas dēļ šīs šūnas tiek uzskatītas par ideālām vēža pētījumiem.
- Šīm šūnām piemīt epitēlija tipa morfoloģija.
- DLD-1 šūnu līnijas izmērs ir aptuveni 15 µm.
- Cilvēka kolorektālā vēža šūnu līnijai DLD-1 piemīt pseidodiploīds kariotips. Aptuveni 86 % šūnu modalais hromosomu skaits ir 46. Tomēr 17,1 % šūnu populācijas var būt arī poliploīdija.
Informācija par DLD-1 šūnu līnijas kultivēšanu
Pirms jebkuras šūnu līnijas kultivēšanas ir jāzina tās pamatprasības šūnu kultivēšanai. Šajā sadaļā tiks izcelti svarīgākie punkti, kas jāapgūst, pirms sākt darbu ar DLD-1 šūnu līniju. Tas ietver: Kas ir DLD-1 dubultošanās laiks? Kas ir DLD-1 kultivēšanas barotne? Kāda ir DLD-1 šūnu sēšanas blīvums? Kā kultivēt DLD-1 šūnas?
Svarīgākie punkti DLD-1 šūnu kultivēšanā
Dubultošanās laiks:
DLD-1 dubultošanās laiks ir aptuveni 15 stundas.
Adherenta vai suspensijā:
DLD-1 ir adhezīva cilvēka resnās zarnas vēža šūnu līnija. Šūnas aug monoslānī.
Sēšanas blīvums:
DLD-1 šūnas tiek sētas ar blīvumu 1 līdz 2 x 104 šūnas/cm2. Adherentās šūnas tiek mazgātas ar 1x fosfāta buferšķīdumu (PBS) un inkubētas ar pasāžēšanas šķīdumu (Accutase) istabas temperatūrā. Pēc 8–10 minūšu inkubācijas atdalītās šūnas pievieno kultūras barotnei un centrifugē. Pēc tam šūnu nogulsnes uzmanīgi atkārtoti suspendē, un šūnas ielej jaunās kultūras traukos, kas satur augšanas barotni.
Augšanas barotne:
DLD-1 šūnu kultivēšanai izmanto RPMI 1640 ar barotnes piedevām, tostarp 10 % embriju liellopu serumu (FBS), 2,1 mM stabilu glutamīnu un 2,0 g/l NaHCO3. Barotni jāmaina 2–3 reizes nedēļā.
Augšanas apstākļi:
DLD-1 kultūras tiek uzturētas 37 °C mitrinātā inkubatorā ar 5 % CO2 pievadi.
Uzglabāšana:
DLD-1 šūnas uzglabā šķidrā slāpekļa tvaika fāzē vai elektriskā ultra-zemas temperatūras saldētavā (temperatūrā zem -150 °C).
Sasaldēšanas process un barotne:
DLD-1 šūnu sasaldēšanai var izmantot CM-1 vai CM-ACF sasaldēšanas vidi. Vienmēr ieteicams izmantot lēnu sasaldēšanas procesu, ļaujot temperatūrai pakāpeniski pazemināties par 1 °C, tādējādi novēršot šoku šūnām un aizsargājot to dzīvotspēju.
Atkausēšanas process:
Sasaldētās šūnas atkausē ūdens vannā, kas iepriekš iestatīta uz 37 °C temperatūru, 40 līdz 60 sekundes, līdz paliek neliels ledus gabaliņš. Pēc tam šūnas pievieno svaigai barotnei un centrifugē. Šis solis ir nepieciešams, lai no šūnām izdalītu sasaldēšanas barotnes sastāvdaļas. Savāktās šūnas atkārtoti suspendē augšanas barotnē un ievada kolbā augšanai.
Bioloģiskās drošības līmenis:
DLD-1 šūnu līnija tiek uzturēta 1. bioloģiskās drošības līmeņa laboratorijās.
DLD-1 šūnu līnija: priekšrocības un ierobežojumi
Šajā raksta sadaļā mēs apskatīsim DLD-1 resnās zarnas vēža šūnu līnijas priekšrocības un ierobežojumus.
Priekšrocības
DLD-1 šūnu līnijas galvenās priekšrocības ir šādas:
Kolorektālā vēža modelis
DLD-1 šūnās ir mutācijas, kas bieži sastopamas kolorektālā vēža pacientiem, piemēram, DLD-1 KRAS mutācija, DLD-1 BRCA un DLD-1 BRCA2. Šī saistība padara tās par klīniski piemērotu šūnu modeli šīs slimības izpētei.
Tumorogēna šūnu līnija
DLD-1 šūnas ir tumorogēnas. Tās var izraisīt audzēju veidošanos, ja tiek injicētas kailām pelēm. Tāpēc pētnieki izmanto šīs šūnas, lai izstrādātu ksenotransplantātu audzēju modeļus, kas palīdz pētīt audzēju veidošanos, attīstību un progresēšanu in vivo.
Ierobežojumi
Ar DLD-1 šūnām saistītie ierobežojumi ir šādi:
Heterogenitāte
DLD-1 resnās zarnas vēža šūnu populācijas izrāda ģenētisko un fenotipisko heterogenitāti. Tas var ietekmēt pētījumu rezultātu vispārināmību.
DLD-1 šūnu līnijas izmantošana pētniecībā
DLD-1 šūnu līnija piedāvā virkni pielietojumu vēža pētniecībā. Šajā sadaļā tiek apspriesti daži nozīmīgākie pielietojumi.
- Vēža pētījumi: DLD-1 šūnas kalpo kā vērtīgs in vitro modelis, lai izprastu molekulāros mehānismus, kas ir pamatā kolorektālā vēža augšanai, attīstībai un progresēšanai. Turklāt tās tiek izmantotas gēnu ekspresijas, signālu ceļu un konkrētu ģenētisko mutāciju ietekmes uz vēža šūnu uzvedību pētīšanai. 2022. gadā veiktajā pētījumā tika novērots, ka PI3K/Akt/YAP signālceļu kaskāde regulē DLD-1 kolorektālā vēža šūnu līnijas migrāciju un invāziju [2].
- Zāļu attīstība: Pētnieki izmanto DLD-1 šūnu līniju, lai pārbaudītu pretvēža zāļu efektivitāti un novērtētu to potenciālu resnās zarnas vēža ārstēšanā. Tas palīdz zāļu attīstībā un efektīvā cīņā pret slimību. 2022. gadā veiktajā pētījumā tika izmantota DLD-1 vēža šūnu līnija un pētīta silīcija ftalocianīnu, ķīmiski sintēto savienojumu, pretvēža aktivitāte. Pētījuma rezultāti liecināja, ka šie savienojumi ir spēcīgi pretvēža līdzekļi [3]. Interesanti, ka citā pētījumā, izmantojot DLD-1 šūnas, tika atklāts no probiotiskām vielām iegūtā P8 proteīna pretvēža potenciāls [4].
5. Zinātniskie raksti par DLD-1 šūnām
Šajā sadaļā tiks izcelti daži interesanti un bieži citēti publikāciju, kurās aprakstīta DLD-1 resnās zarnas vēža šūnu līnija.
Šī publikācija ir publicēta žurnālā „Journal of Biologically Active Products from Nature” (2022). Pētījumā tika konstatēts, ka flavonoīds diosmins izraisīja šūnu nāvi DLD-1 šūnās, kā arī izraisīja šūnu cikla apstāšanos; tādējādi tas var būt potenciāls pretvēža līdzeklis.
Bromelaina efektīvi nomāc Kras mutācijas kolorektālo vēzi, stimulējot ferroptozi
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā „Animal Cells and Systems” (2018), tika izvirzīts pieņēmums, ka ferments bromelāns nomāc DLD-1 KRAS mutāciju un izraisa spēcīgu citotoksisku iedarbību.
Šis pētījuma raksts tika publicēts 2019. gadā žurnālā “Environmental Toxicology”. Pētījumā tika izpētīta dabiskā savienojuma bergaptēna pretvēža iedarbība, izmantojot DLD-1 kolorektālo šūnu līniju.
Šis pētījums, kas publicēts žurnālā „Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials” (2023), atklāja, ka kurkumīna/dzelzs oksīda nanokompozīti ir ļoti efektīvi pret DLD-1 kolorektālā vēža šūnām.
Šis pētījuma raksts tika publicēts 2020. gadā žurnālā „Turkish Journal of Biology”. Pētījumā tika izvirzīta hipotēze, ka dabiskais produkts epibrassinolīds, aktivizējot AKT DLD-1 šūnās, stimulē autofāgiju, kas saistīta ar poliamīniem.
Resursi par DLD-1 šūnu līniju: protokoli, video un citi materiāli
Tālāk ir uzskaitīti daži resursi par DLD-1 šūnām:
- DLD-1 transfekcija: Šis video pamācības materiāls ir visaptverošs ceļvedis par DLD-1 in vitro transfekcijas protokolu.
- DLD-1 šūnas: Šis pētījums īsumā apraksta DLD-1 šūnu kultivēšanas prasības, tostarp barotnes un kultivēšanas apstākļus. Turklāt tas var palīdzēt jums apgūt transfekcijas protokolu, ko izmanto DLD-1 šūnām.
Šajās saitēs ir atrodams protokols par DLD-1, cilvēka izcelsmes resnās zarnas vēža šūnu, kultivēšanu.
- DLD-1 šūnu līnija: Šī tīmekļa vietne sniedz pamatinformāciju par DLD-1 šūnu līniju. Tā palīdzēs jums iepazīties ar dažādiem DLD-1 šūnu kultivēšanas protokoliem, tostarp subkultivēšanu un kriokonservētu un proliferējošu kultūru apstrādi.
Atsauces
- Gavrilas, L.I., et al., Proapoptotiskie gēni kā jauni mērķi vienkāršai un kombinētai ārstēšanai ar resveratrolu un kurkumīnu kolorektālajā vēzī. Food & function, 2019. 10(6): 3717.–3726. lpp.
- Takeda, T., et al., PI3K/Akt/YAP signālu pārraide veicina DLD‑1 kolorektālā vēža šūnu migrāciju un invāziju. Oncology Letters, 2022. 23(4): 1.–9. lpp.
- Farajzadeh, N., et al., Jauno silīcija ftalocianīnu pretvēža aktivitāte pret kolorektālās adenokarcinomas šūnu līniju (DLD-1). New Journal of Chemistry, 2022. 46(41): 19863.–19873. lpp.
- An, B.C., et al., Probiotiskas izcelsmes P8 proteīna pretvēža loma kolorektālā vēža šūnu līnijā DLD-1. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(12): 9857. lpp.